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应用iTRAQ定量蛋白质组学技术筛选无乳链球菌鱼源株与人源株差异表达蛋白 被引量:3
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作者 郭长明 袁橙 +4 位作者 武彩红 朱善元 刘广锦 陆承平 刘永杰 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期442-451,共10页
以斑马鱼和巨噬细胞作为体内、外感染模型,比较无乳链球菌鱼源株GD201008-001与人源株A909的致病性差异,利用iTRAQ技术和质谱分析技术进行差异表达蛋白鉴定,以期为揭示无乳链球菌不同宿主来源株致病机制提供新思路。实验通过测定菌株GD2... 以斑马鱼和巨噬细胞作为体内、外感染模型,比较无乳链球菌鱼源株GD201008-001与人源株A909的致病性差异,利用iTRAQ技术和质谱分析技术进行差异表达蛋白鉴定,以期为揭示无乳链球菌不同宿主来源株致病机制提供新思路。实验通过测定菌株GD201008-001、A909的斑马鱼半数致死量和巨噬细胞吞噬率,比较二者致病性差异;提取全菌蛋白,经iTRAQ试剂标记后进行质谱鉴定,质谱数据用软件Mascot 2.2和Proteome Discoverer 1.4进行查库(Uni Prot数据库)鉴定及定量分析,并对差异蛋白进行GO功能注释和KEGG通路分析。结果显示,GD201008-001毒力显著高于A909;通过iTRAQ分析两株菌差异表达蛋白,发现差异蛋白涉及的生物学功能较为广泛,在鉴定出的368个差异表达蛋白中,GD201008-001中上调表达蛋白193个(比值>1.5),下调表达蛋白175个(比值<0.667)。生物信息学分析预测这些蛋白主要涉及26个生物学功能,14个通路,推测Clp X、Glm S和Cps IVK可能在两株菌致病性差异中发挥重要作用。本研究为阐明无乳链球菌不同宿主来源株致病性差异奠定了基础。 展开更多
关键词 无乳链球菌 人源株 ITRAQ 蛋白质组学
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浙江省首例14型猪链球菌人源分离株鉴定及分子特征分析 被引量:4
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作者 朱水荣 李萍 +3 位作者 吕沈聪 杨章女 吴蓓蓓 张严峻 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期115-123,共9页
目的对浙江省首例14型猪链球菌菌株进行综合鉴定与分子分型特征研究。方法对目标菌株进行镜检、生化、血清学玻片凝集试验、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定,同时利用聚合酶链(PCR)技术检测该菌株链球菌属(tuf)、... 目的对浙江省首例14型猪链球菌菌株进行综合鉴定与分子分型特征研究。方法对目标菌株进行镜检、生化、血清学玻片凝集试验、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定,同时利用聚合酶链(PCR)技术检测该菌株链球菌属(tuf)、猪链球菌种(16S rRNA)、猪链球菌血清型基因以及毒力基因,另采用脉冲场凝胶电泳技术(pulsed-fieId gel electrophoresis,PFGE)、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)以及最小核心基因组群(minimum core genome groups,MCG群)方法分别对菌株进行分子分型检测。结果传统细菌学方法和质谱鉴定技术以及核酸检测均将这株人源分离株鉴定为14型猪链球菌;25种毒力基因检测,除salKR与89K PAI基因检测为阴性,其它均为阳性;分子分型检测该菌株为高致病性ST1及MCG Group1型,PFGE检测结果表明此菌株同浙江省主要流行毒力株在同一主分支,相似性达94.95%。结论本次检出14型人源猪链球菌强毒力株,属高致病基因型ST1/MCG Group1型菌株,属浙江省首次报道,今后应密切关注省内该型别菌株流行趋势。 展开更多
关键词 14型猪链球菌 散发人源分离 鉴定 毒力基因 耐药基因 分子分型
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伪狂犬病病毒荧光标签毒株构建及其在抗病毒药物筛选中的初步应用
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作者 呙会会 张浩 +5 位作者 杨丹 旷燕 李亚菲 刘绍蒙 刘青芸 王湘如 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3600-3611,共12页
为筛选针对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的有效抗病毒药物,本研究以PRV人源分离毒株hSD-1/2019和经典猪源流行毒株Ea为亲本病毒,采用同源重组技术将mCherry报告基因插入到PRV的UL 35基因终止子之前位点,构建了表达红色荧光蛋白... 为筛选针对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的有效抗病毒药物,本研究以PRV人源分离毒株hSD-1/2019和经典猪源流行毒株Ea为亲本病毒,采用同源重组技术将mCherry报告基因插入到PRV的UL 35基因终止子之前位点,构建了表达红色荧光蛋白mCherry的荧光标签毒株PRV-mCherry。基于构建的荧光标签病毒,以荧光强度为指标,建立高通量药物筛选平台,对天然产物库中1621种化合物进行抗病毒药物筛选,并初步探索药物特性。结果表明,mCherry标签插入位置正确且稳定遗传,荧光标签毒株PRV-mCherry与亲本毒株在PK-15细胞上的增殖曲线趋势一致,且荧光强度可反映病毒增殖情况。使用PRV-mCherry从天然产物库中成功筛选出3种可在体外有效抑制PRV增殖的药物,根据测定的50%细胞毒性浓度和50%抑制浓度,计算出3种药物的选择指数范围为203.63~564.58μmol·L^(-1),表明其具有良好的成药性。本研究为临床防治PRV感染的抗病毒药物发掘提供了新的策略和思路。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 人源分离 荧光标签毒 抗病毒药物
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iTRAQ技术分析无乳链球菌牛源株与人源株差异表达蛋白 被引量:5
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作者 郭长明 袁橙 +6 位作者 朱善元 王安平 吴双 王永娟 左伟勇 洪伟鸣 秦枫 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1119-1125,共7页
为了分析无乳链球菌牛源株ATCC13813与人源株A909差异蛋白质组,提取ATCC13813与A909全菌蛋白,iTRAQ技术标记后,进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)鉴定和定量,质谱数据通过Mascot2.2和Proteome discoverer 1.4软件分析,并对差异... 为了分析无乳链球菌牛源株ATCC13813与人源株A909差异蛋白质组,提取ATCC13813与A909全菌蛋白,iTRAQ技术标记后,进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)鉴定和定量,质谱数据通过Mascot2.2和Proteome discoverer 1.4软件分析,并对差异蛋白进行GO功能注释和KEGG pathway通路分析。结果显示,共鉴定出差异表达蛋白350个(P〈0.05),与ATCC13813相比,在A909中上调表达蛋白174个(比值〉1.5),下调表达蛋白176个(比值〈0.667)。生物信息学分析预测这些蛋白主要涵盖28个生物学功能,14个通路。本研究为阐明不同宿主来源株无乳链球菌致病性差畀奠定基础。 展开更多
关键词 无乳链球菌 人源株 ITRAQ 差异蛋白质组
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新疆检出肠出血性大肠埃希菌O157∶H7感染的人源株 被引量:2
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作者 高涛 王吉亮 +6 位作者 张明理 马建民 顾本思 木合亚提 杜平 李红 徐红萍 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期645-645,共1页
关键词 新疆 肠出血性大肠埃希菌 O157:H7 感染 人源株
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浙江省猪链球菌人源感染株的耐药检测分析
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作者 朱水荣 杨章女 +4 位作者 姚文武 吴卓颖 王凌波 吴蓓蓓 张严峻 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 2023年第10期662-668,共7页
目的了解浙江省猪链球菌人源感染株在体外对抗菌药物的耐药性和耐药基因携带状况。方法收集2005年至2021年浙江省31株猪链球菌人源感染散发株,通过微量稀释法测定15种抗菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度,利用聚合酶链反应检测四环素类、... 目的了解浙江省猪链球菌人源感染株在体外对抗菌药物的耐药性和耐药基因携带状况。方法收集2005年至2021年浙江省31株猪链球菌人源感染散发株,通过微量稀释法测定15种抗菌药物对所有菌株的最低抑菌浓度,利用聚合酶链反应检测四环素类、大环内酯类和氨基糖苷类等70种耐药基因。结果31株菌株对头孢吡肟、头孢噻肟、头孢曲松、氯霉素、达托霉素、厄他培南、左氧氟沙星、利奈唑胺、美罗培南、青霉素、万古霉素11种抗菌药物均敏感,敏感率达到96.8%及以上,对四环素、克林霉素、阿奇霉素、红霉素均耐药,特别是对四环素的耐药率达93.5%(29/31),多重耐药株共14株(45.2%)。70种耐药基因检测中,共检出14种(20.0%)耐药基因。耐药基因检出率高的主要为耐四环素类基因,依次是tet(O)[58.1%(18/31)]、tet(M)[48.4%(15/31)]、tet(40)[35.5%(11/31)];其次是耐大环内酯类ermB基因[41.9%(13/31)];14株(45.2%)同时检出3种以上耐药基因,其中8株(25.8%)检出10种耐药基因。耐药基因结果与序列分型结合分析显示,tet(M)+ST7占35.5%(11/31),tet(O)+tet(40)+ermB+mef(A)+mef(A/E)+msrD+Ant(6)-Ⅰb+aph(3′)-Ⅲa+aadB+sat4+ST7占25.8%(8/31)。结论浙江省猪链球菌人源感染散发株的抗菌药物耐药情况及耐药基因携带状况均呈地方性特征,主要流行2种特征型的耐药基因遗传克隆。 展开更多
关键词 猪链球菌 人源散发 抗菌药物 耐药 耐药基因
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浙江省猪链球菌2型人源分离株分子分型特征 被引量:1
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作者 朱水荣 陈建才 +3 位作者 吴卓颖 张云怡 方磊 张严峻 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 2022年第8期483-489,共7页
目的了解浙江省猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)的分子分型特征。方法对浙江省2005年1月至2021年7月29株散发SS2人源分离株进行基因分型检测,采用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)、多位点序列分型(m... 目的了解浙江省猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)的分子分型特征。方法对浙江省2005年1月至2021年7月29株散发SS2人源分离株进行基因分型检测,采用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)、多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST),以及最小核心基因组(minimum core genome,MCG)群方法,分别进行分型检测。结果29株菌株经PFGE得到10种PFGE图谱带型,3个主要分支簇群,其中21株(72.41%)被分成2个主要分支群,8株(27.59%)呈遗传多样性,相似性为49.7%~94.7%。29株菌株经MLST得到3种序列型,其中ST7型25株(86.21%),ST1型3株(10.34%),ST25型1株(3.45%)。29株菌株得到3个MCG基因型,其中E型12株(41.38%),Group1型16株(55.17%),Group4型1株(3.45%)。结论浙江省SS2主要流行两大克隆群高致病株,少数菌株传播过程中可能存在遗传变异,进化分析呈遗传多样性。 展开更多
关键词 猪链球菌 多位点序列分型 散发人源分离 分子分型 电泳 凝胶 脉冲场 最小核心基因组
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人源中国Ⅲ型刚地弓形虫分离株在终末宿主内的发育研究 被引量:2
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作者 赵桂华 代莉莎 +7 位作者 朱进进 张丽新 徐超 徐昊志 肖婷 沈继龙 余莉 尹昆 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第2期174-179,共6页
目的建立人源中国Ⅲ型弓形虫LHG株体外感染猫肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)体系及体内感染开启有性生殖实验动物模型,观察其在不同感染条件下在终末宿主细胞内的发育情况。方法人源中国Ⅲ型LHG弓形虫分离株经口感染昆... 目的建立人源中国Ⅲ型弓形虫LHG株体外感染猫肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IECs)体系及体内感染开启有性生殖实验动物模型,观察其在不同感染条件下在终末宿主细胞内的发育情况。方法人源中国Ⅲ型LHG弓形虫分离株经口感染昆明KM小鼠42d成囊后,采用Percoll梯度离心法纯化脑组织包囊,经0.25%m/v胰酶消化释放缓殖子后体外感染猫IECs(1∶10,虫株:IECs)。取含有弓形虫包囊的KM鼠脑组织显微镜下计数,按600个包囊/只经口感染5只3月龄健康家猫,每天收集猫粪便,分别采用镜检及PCR扩增弓形虫特异性529bp重复序列及B1基因检测弓形虫卵囊排泄情况,采用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和免疫荧光(immunofluorescence assay,IFA)鉴定感染猫小肠内裂殖子的发育,分析中国Ⅲ型虫株的体内有性生殖规律。结果LHG弓形虫分离株缓殖子在体外条件下可成功黏附、入侵猫IECs,在细胞内形成“玫瑰花”样结构,4~5d细胞破裂释放虫体,完成无性生殖过程,但未检测到与有性生殖相关的裂殖体、雌雄配子体及合子,且其体外黏附入侵宿主细胞效率显著低于Ⅰ型RH株;但其感染5只猫后,4~6d猫粪便内均检测到弓形虫卵囊,其小肠经IHC和IFA检测在IECs内均出现裂殖体样结构,说明成功开启了有性生殖过程,且效率高于自然条件下的既往报道数据。结论成功建立了中国Ⅲ型弓形虫LHG株体外感染猫IECs体系及高效开启有性生殖实验动物模型,证实该虫株是我国猫科动物的易感虫株,为研究弓形虫有性生殖机制及研制阻断弓形虫卵囊排泄传播药物及疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 弓形虫 人源中国Ⅲ型弓形虫分离 猫IECs 生长发育 卵囊排泄
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