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人白细胞介素12双亚基共表达载体的构建及表达 被引量:3
1
作者 羊东晔 卢放根 +3 位作者 汤熙翔 赵水平 吴小平 刘小伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期79-82,共4页
目的 :为了基因治疗研究的需要构建人白细胞介素 12 (hIL 12 )双亚基基因共表达质粒 [(P(+) IL 12 ) ],比较它与单个亚基基因表达质粒 [P(+) P4 0 和P(- ) P35]1∶1共同转染肝癌细胞HepG2后 4 8小时表达结果。方法 :分别克隆hIL 12P4... 目的 :为了基因治疗研究的需要构建人白细胞介素 12 (hIL 12 )双亚基基因共表达质粒 [(P(+) IL 12 ) ],比较它与单个亚基基因表达质粒 [P(+) P4 0 和P(- ) P35]1∶1共同转染肝癌细胞HepG2后 4 8小时表达结果。方法 :分别克隆hIL 12P4 0 、P35亚基cDNA全长至pcDNA3 1(± )中构建P(+) P4 0 和P(- ) P35,再将两者串联克隆至pcDNA3 1(+)中构建P(+) IL 12。脂质体转染 3种质粒至肝癌细胞HepG2 ,4 8小时后抽取细胞总RNA做半定量RT PCR ,同时取细胞上清做ELISA及Western杂交 ,结果进行比较分析。结果 :两种转染方式均可以表达hIL 12蛋白质且半定量RT PCR显示较未转染组hIL 12的mRNA水平均增加 ;转染后 4 8小时P(+) IL 12组细胞培养上清hIL 12表达量较 [P(+) P4 0 和P(- ) P35]按 1∶1比例共同转染组显著增高(P <0 0 5 )。结论 :人白细胞介素 12双亚基基因串联共表达质粒 [P(+) IL 12 ]能够转入HepG2并表达hIL 12蛋白质 ,并且转染后 4 8小时hIL 12表达量较单个亚基基因表达质粒 [P(+) P4 0 、P(- ) P35]1∶1共转染者显著高。 展开更多
关键词 人白细胞介素12 真核表达载体pcDNA3.1(±) HEPG2细胞 表达
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人白细胞介素12双亚基共表达真核载体的构建 被引量:2
2
作者 羊东晔 卢放根 +3 位作者 赵水平 汤熙翔 刘小伟 吴小平 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期338-342,共5页
目的 :为满足基因治疗的需要构建人白细胞介素 12 (hIL 12 )双亚基共表达质粒。方法 :先从人胚肾组织的逆转录产物中用PCR方法扩增出它的两个亚基P4 0 和P3 5的cDNA全长 ,分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+/ )中构建单亚基质粒———P(... 目的 :为满足基因治疗的需要构建人白细胞介素 12 (hIL 12 )双亚基共表达质粒。方法 :先从人胚肾组织的逆转录产物中用PCR方法扩增出它的两个亚基P4 0 和P3 5的cDNA全长 ,分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+/ )中构建单亚基质粒———P(+) /P4 0 和P( ) /P3 5,然后再将二者串联克隆入真核表达载体 pcDNA3.1(+)中得到P(+) /IL 12质粒。脂质体转染HepG2后 2 4,48hELISA检测细胞培养上清内hIL 12蛋白质表达。结果 :P(+) /IL 12质粒经酶切和测序证明两亚基连接方向正确 ,序列无突变 ;ELISA检测细胞上清结果证实可表达hIL 12蛋白质。结论 :成功构建P4 0 和P3 5双亚基真核共表达质粒———P(+) /IL 12 ,为模拟hIL 12生理表达方式 ,简化hIL 12基因治疗操作奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素12 双亚基 表达 真核载体 克隆
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自然杀伤实验检测人白细胞介素12的生物学活性 被引量:3
3
作者 龙建秋 高军 +1 位作者 李茂 曹敏 《海军医学杂志》 2001年第4期301-303,共3页
目的 :评价前期已构建的含有重组人白细胞介素 12基因的真核载体的表达能力。方法 :重组IL 12真核表达载体体外转染 2 93细胞后 ,收集 72h培养上清 ,用LDH法检测上清对自然杀伤活性的增强作用 ,并用标准品进行对比分析。结果 :实验前期... 目的 :评价前期已构建的含有重组人白细胞介素 12基因的真核载体的表达能力。方法 :重组IL 12真核表达载体体外转染 2 93细胞后 ,收集 72h培养上清 ,用LDH法检测上清对自然杀伤活性的增强作用 ,并用标准品进行对比分析。结果 :实验前期所构建的表达载体可真核表达IL 12蛋白 ,其含量在 2 .5~ 5 .0ng/ml之间。 结论 :可直接测得IL 12的生物活性 ,并能由此对所构建的载体的表达能力进行分析。 展开更多
关键词 人白细胞介素12 乳酸脱氢酶 自然杀伤实验
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靶向基因药物分子构形和大小与表达量关系的体外研究——人白细胞介素12靶向治疗肝癌的临床前研究
4
作者 羊东晔 吴晓英 《胃肠病学》 2002年第B11期29-29,共1页
关键词 靶向基因药物 分子构形 表达量关系 体外研究 人白细胞介素12 靶向治疗 肝癌 临床前研究
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重组腺伴随病毒载体表达人白细胞介素12的研究 被引量:1
5
作者 郝晓萌 吴小兵 +2 位作者 伍志坚 舒斯云 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期52-56,共5页
白细胞介素 12 (IL - 12 )具有广谱抗肿瘤、抗感染的作用 ,是由两个亚单位 40kD(p40 )和 35kD(p35 )通过二硫键构成的杂合体 ,有可能通过分别表达亚单位的方式来表达有功能活性的IL - 12。该实验尝试利用重组腺伴随病毒 (rAAV)载体进行... 白细胞介素 12 (IL - 12 )具有广谱抗肿瘤、抗感染的作用 ,是由两个亚单位 40kD(p40 )和 35kD(p35 )通过二硫键构成的杂合体 ,有可能通过分别表达亚单位的方式来表达有功能活性的IL - 12。该实验尝试利用重组腺伴随病毒 (rAAV)载体进行人IL - 12 (hIL - 12 )双亚基共表达 ,将hIL - 12的两个亚基分别克隆到AAV载体质粒pSNAV中 ,构建成 pSNAV -IL12 - p35和pSNAV -IL12 - p40质粒 ,经转染、G418筛选后建立了rAAV载体细胞株。采用先前建立的rAAV的生产方法 ,获得了rAAV -IL12 -p35和rAAV -IL12 - p40 ,在体外将两种rAAV共同感染BHK - 2 1细胞 ,48h后收集细胞培养上清进行免疫学和生物学活性检测。经ELISA检测 ,产生的hIL - 12 p70的含量为 10 185 pg/ml;在体外促进IFN -γ分泌实验中 ,加入hIL - 12的PBMC分泌的IFN -γ含量为 37 2mg/ml。实验结果说明 :采用两个AAV载体分别表达亚单位的方法可以表达具有功能活性的hIL - 12 ,为IL - 展开更多
关键词 人白细胞介素12 重组腺伴随病毒 载体 基因治疗 表达
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慢病毒介导人白细胞介素12转染鼠骨髓间充质干细胞可抑制CT26瘤体的生长 被引量:1
6
作者 何杨 林晨 +2 位作者 高琴 宋京翔 涂小煌 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2018年第25期3944-3949,共6页
背景:白细胞介素12作为最具潜力的抑瘤因子一直是研究的热点,但其在结直肠癌方面的研究相对较少。目的:构建稳定表达人白细胞介素12的大鼠骨髓间充质干细胞株(h IL-12-BMSCs),观察其对大鼠结肠癌模型的影响。方法:设计并合成引物,PCR扩... 背景:白细胞介素12作为最具潜力的抑瘤因子一直是研究的热点,但其在结直肠癌方面的研究相对较少。目的:构建稳定表达人白细胞介素12的大鼠骨髓间充质干细胞株(h IL-12-BMSCs),观察其对大鼠结肠癌模型的影响。方法:设计并合成引物,PCR扩增并回收纯化后的p40和p35基因片段,行Overlap-ping PCR连接获得h IL-12的单链双亚基表达融合基因,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,构建慢病毒过表达重组体,再转染大鼠骨髓间充质干细胞,药物筛选培育出稳转株。32只裸鼠皮下注射CT26细胞悬液造模成功后,随机分为4组:瘤周分别注射0.2 m L h IL-12-BMSCs(h IL-12-BMSCs组)、0.2 m L PBS溶液(PBS组)、0.2 m L骨髓间充质干细胞(骨髓间充质干细胞组)、0.2 m L表达IL-12的慢病毒液(LV-IL-12组),统计并分析各组瘤体生长情况。结果与结论:(1)观察期内PBS组与骨髓间充质干细胞组肿瘤体积差异无显著性意义(P>0.05),表明骨髓间充质干细胞本身对CT26瘤体生长无明显促进或抑制作用;(2)注射7 d后h IL-12-BMSCs组与PBS组、PBS组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异均有显著性意义(P<0.01),表明白细胞介素12对CT26瘤体生长有明显抑制作用;(3)注射10 d后h IL-12-BMSCs组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异有显著性意义(P<0.05),表明h IL-12-BMSCs抑制CT26生长优于LV-IL-12;(4)结果表明,h IL-12-BMSCs对裸鼠CT26移植瘤体生长有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 结直肠癌 人白细胞介素12 鼠骨髓间充质干细胞 慢病毒载体 细胞 福建省自然科学基金 结直肠肿瘤 白细胞介素12 骨髓 间质干细胞 慢病毒感染 组织工程
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重组人白细胞介素12对健康人外周血单个核细胞产生γ干扰素影响的研究 被引量:1
7
作者 段祥 王翠玲 +7 位作者 王增松 谢飞群 揭燕 夏书奇 曾振飞 李茹冰 傅泳航 张宜俊 《检验医学》 CAS 北大核心 2009年第8期586-590,共5页
目的建立重组人白细胞介素12(rhIL-12)的生物活性检测方法,观察rhIL-12诱导健康人外周血单个核细胞(PBMC)产生γ干扰素(IFN-γ)的水平与剂量和时间之间的关系,揭示其变化规律。方法rhIL-12供试品刺激健康人PBMC分泌IFN-γ,经国际标准品... 目的建立重组人白细胞介素12(rhIL-12)的生物活性检测方法,观察rhIL-12诱导健康人外周血单个核细胞(PBMC)产生γ干扰素(IFN-γ)的水平与剂量和时间之间的关系,揭示其变化规律。方法rhIL-12供试品刺激健康人PBMC分泌IFN-γ,经国际标准品校正,建立rhIL-12生物活性测定方法。以1 ng/mL浓度rhIL-12诱导健康人PBMC,分别于24、48、72、96和120 h 5个时间点用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定培养上清的IFN-γ水平。测定0.1、0.5和2.5 ng/mL 3个浓度rhIL-12诱导人PBMC 72 h后培养上清的IFN-γ水平,用Prism 5.0统计软件的重复测量方差分析法对所得数据进行统计学处理。结果rhIL-12供试品的生物活性曲线呈典型S型,IFN-γ含量为最大浓度一半时的供试品浓度(ED50)为(1.008±0.238)ng/mL,供试品rhIL-12效价为7 938 IU/mL。测定1ng/mL浓度rhIL-12刺激健康人PBMC后5个时间点培养上清中IFN-γ显示,不同个体高峰出现时间有所不同,在高峰出现前均呈现递增趋势。高、中、低3个浓度rhIL-12分别诱导健康人PBMC产生的IFN-γ水平与浓度之间呈显著量效关系,且在0.1 ng/mL的极低浓度即可诱生高水平IFN-γ。结论rhIL-12供试品生物活性良好,与国际标准品比对基本一致,不同人群对rhIL-12的应答高峰存在个体差异,以诱生IFN-γ作为评价rhIL-12生物活性的指标具有明显的量效关系。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素12 Γ干扰素 细胞免疫
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人白细胞介素12基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达(英文) 被引量:4
8
作者 陈新华 敖敬群 +3 位作者 杨林 龙綮新 王珣章 陈曲侯 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期423-427,共5页
人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同... 人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同源交换分别插入酵母基因组AOX1区域 ,构建成含hIL 12双亚基基因的酵母工程菌PichiapastorisX33 p4 0 p35 .经 0 .5 %甲醇诱导 ,p4 0和p35两亚基在同一酵母细胞中得到了表达 ,并组装成具有生物学活性的hIL 展开更多
关键词 人白细胞介素-12基因 巴斯德毕赤酵母细胞 LiCl二次转化 活性表达
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重组人白细胞介素12的纯化与鉴定
9
作者 张宝定 程民 +5 位作者 肖祥 何海辉 刘文涛 费保珍 田志刚 魏海明 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期14-17,共4页
目的探索重组人白细胞介素12(rhIL-12)的纯化与鉴定方法。方法采用Millipore超滤浓缩系统对含rhIL-12的无血清培养上清进行浓缩,用阴离子交换色谱柱,阳离子交换色谱柱和尺寸排阻色谱柱纯化出rhIL-12;并对rhIL-12的纯度、活性及氨基酸序... 目的探索重组人白细胞介素12(rhIL-12)的纯化与鉴定方法。方法采用Millipore超滤浓缩系统对含rhIL-12的无血清培养上清进行浓缩,用阴离子交换色谱柱,阳离子交换色谱柱和尺寸排阻色谱柱纯化出rhIL-12;并对rhIL-12的纯度、活性及氨基酸序列进行检测。结果纯化后产物经Western blot鉴定(P35、P40)为rhIL-12,毛细管电泳法测得其纯度在98%以上;生物学活性达8.0×106IU/mg,且氨基酸序列与已报道的序列相一致。结论建立了获得高纯度、高生物活性的rhIL-12的纯化与鉴定方法。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素12 纯化 鉴定
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应用重组PCR技术构建人单链白细胞介素12融合基因 被引量:11
10
作者 张梅 司履生 王一理 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期22-26,共5页
目的构建人单链白细胞介素 12 (hsc IL- 12 )融合基因并在真核细胞中进行表达 ,为进一步研究 hsc IL- 12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组 PCR技术将 h IL - 12 p40和 p35亚单位两段编码序列的 c DNA通过一疏水性多肽接头 (G... 目的构建人单链白细胞介素 12 (hsc IL- 12 )融合基因并在真核细胞中进行表达 ,为进一步研究 hsc IL- 12融合蛋白的生物学活性奠定基础。方法应用重组 PCR技术将 h IL - 12 p40和 p35亚单位两段编码序列的 c DNA通过一疏水性多肽接头 (Gly4Ser) 3碱基序列进行前后拼接 (IL- 12 p40 -多肽接头 - p35 ) ,构建 hsc IL- 12融合基因 ,并进行核苷酸序列测定 ,进一步将 hsc IL - 12融合基因插入 pc DNA3.1真核表达载体中 ,转染 COS- 7细胞表达 hsc IL - 12融合蛋白 ,并行 Western blot分析。结果该融合基因经 DNA序列分析表明 :p40、p35、linker的连接顺序、方向及序列完全正确 ,融合基因可在 COS- 7细胞中表达hsc IL- 12融合蛋白。Western blot显示该融合蛋白分子量为 70 0 0 0 u,可与鼠抗人 IL- 12 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论重组 PCR技术是十分有效。 展开更多
关键词 重组PCR 人白细胞介素12 人单链白细胞介素 融合基因
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正交试验优化注射用重组人白细胞介素12处方
11
作者 李平 叶英传 +4 位作者 汤俊荣 李水生 张宜俊 王翠玲 陈志良 《中国药房》 CAS CSCD 2012年第25期2355-2357,共3页
目的:优化注射用重组人白细胞介素12的处方。方法:采用正交试验设计,以甘露醇含量(A)、人血白蛋白含量(B)和pH值(C)为因素,活性、水分和外观的综合评分为指标优化处方,制备3批优化处方制剂并测定其活性、水分、pH值等。结果:优化处方为... 目的:优化注射用重组人白细胞介素12的处方。方法:采用正交试验设计,以甘露醇含量(A)、人血白蛋白含量(B)和pH值(C)为因素,活性、水分和外观的综合评分为指标优化处方,制备3批优化处方制剂并测定其活性、水分、pH值等。结果:优化处方为A4%、B0.5%、C7.4;3批制剂冻干后活性约为8400、8111、8511u.μg-1,水分<3%,pH值约为7.35~7.42,均符合质量标准要求(批间比较P>0.05)。结论:以优化处方制备的注射用重组人白细胞介素12活性较高,工艺重现性好。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素12 处方 正交试验 活性
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人白细胞介素-12的纯化及鉴定 被引量:2
12
作者 黄进 罗果 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第14期6353-6355,共3页
[目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸... [目的]利用人白细胞介素-12(human interleukin 12,hIL-12)转基因马铃薯,探讨hIL-12的纯化条件。[方法]提取转基因马铃薯中的总蛋白,hIL-12的分离纯化步骤包括超滤、MKF-AIW阴离子交换层析、MKF-CIC阳离子交换层析。在阴离子交换层析吸附过程中采用试管法选择最佳吸附pH值,选择洗脱过程最佳洗脱pH值;选择阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值;ELISA法测定各纯化阶段收集的上清液或洗脱峰中的hIL-12的含量;非还原SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;Western Blot检测纯化的hIL-12。[结果]阴离子交换层析吸附过程最佳吸附pH值为7.5,洗脱过程最佳洗脱pH值为7,阳离子交换层析洗脱过程最佳洗脱pH值为6.5。纯化的hIL-12经非还原SDS-PAGE分析蛋白纯度为91%。Western Blot分析结果表明,在40 kD处有特异的蛋白条带出现。[结论]hIL-12转基因马铃薯经总蛋白提取,超滤,阴离子交换层析,阳离子交换层析纯化,获得了高纯度的hIL-12。 展开更多
关键词 人白细胞介素-12 纯化 转基因马铃薯
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马铃薯块茎特异性启动子驱动的人白细胞介素-12的遗传转化研究 被引量:2
13
作者 杨加伟 程小玲 龙朝康 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期220-225,共6页
为获得高效表达人白细胞介素-12(h IL-12)蛋白的转基因马铃薯植株,利用根瘤农杆菌侵染法将前期构建的马铃薯块茎特异性启动子Ppatatin驱动的h IL-12植物表达载体导入马铃薯,通过共培养、筛选、分化等过程获得转基因植株,并结合PCR、RT-... 为获得高效表达人白细胞介素-12(h IL-12)蛋白的转基因马铃薯植株,利用根瘤农杆菌侵染法将前期构建的马铃薯块茎特异性启动子Ppatatin驱动的h IL-12植物表达载体导入马铃薯,通过共培养、筛选、分化等过程获得转基因植株,并结合PCR、RT-PCR、GUS染色及ELISA分析对转基因植株进行鉴定。结果显示,获得12个马铃薯转基因株系,PCR检测表明其中的10个株系目的基因已导入马铃薯基因组,转基因阳性率为83%;RT-PCR分析表明其中的7个株系外源基因在转录水平成功获得表达,ELISA分析表明其中的5个株系有明显的蛋白水平表达。对这7个株系后代的检测表明外源基因成功表达且具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 Ppatatin启动子 人白细胞介素-12 转基因马铃薯 植物生物反应器
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从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析 被引量:1
14
作者 黄进 罗果 葛正龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第16期7334-7334,7347,共2页
[目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12... [目的]研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。[方法]MTT法检测纯化的hIL-12体外抗肿瘤作用。[结果]纯化的hIL-12在体外对NK敏感肿瘤细胞K562有杀伤作用,而野生对照组无作用。[结论]试验中从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。 展开更多
关键词 人白细胞介素-12 纯化 生物学活性 转基因马铃薯
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从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析 被引量:3
15
作者 黄进 陈佳瑜 +1 位作者 罗果 葛正龙 《遵义医学院学报》 2008年第6期571-572,共2页
目的研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。方法ELISA法测定纯化的hIL-12诱使外周血单个核细胞产生IFN-γ的量。结果纯化的hIL-12在体外能刺激PBMC产生IFN-γ,而野生对照组无作用。结论本实验室从转hI... 目的研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。方法ELISA法测定纯化的hIL-12诱使外周血单个核细胞产生IFN-γ的量。结果纯化的hIL-12在体外能刺激PBMC产生IFN-γ,而野生对照组无作用。结论本实验室从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。 展开更多
关键词 人白细胞介素-12 纯化 生物学海性 转基因马铃薯
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抗重组人白细胞介素-12单克隆抗体的制备及初步应用
16
作者 李俐 马颖哲 +1 位作者 张家颖 张桂荣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第8期705-707,共3页
目的制备抗重组人白细胞介素-12(rhIL-12)单克隆抗体(McAb),并建立检测IL-12的双抗体夹心ELISA方法。方法以纯化的rhIL-12(p70)免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测胃癌患者术前、术后血清IL-12水平的变化。结果... 目的制备抗重组人白细胞介素-12(rhIL-12)单克隆抗体(McAb),并建立检测IL-12的双抗体夹心ELISA方法。方法以纯化的rhIL-12(p70)免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测胃癌患者术前、术后血清IL-12水平的变化。结果筛选出3株稳定分泌抗rhIL-12的单抗杂交瘤细胞株,纯化后单抗纯度达95%以上。免疫球蛋白亚类2株为IgG1,1株为IgG2a,轻链属!型,相对亲和力依次为EM5>EM6>EV9。Western blot及ELISA交叉试验表明,单抗具有良好的特异性。建立的双抗体夹心ELISA方法检测rhIL-12的最低检出限为20pg/ml,线性范围为25~3200pg/ml。应用此法检测胃癌患者术前血清IL-12水平较正常对照组明显降低,术后10d明显升高。术后给予免疫增强型NE组IL-12水平较未给予组明显升高。结论制备的抗rhIL-12单克隆抗体,能够用于IL-12的体内外免疫学检测,为IL-12的研究、检测及临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-12 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA 胃癌
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^(125)I示踪法研究重组人白细胞介素-12在大鼠体内各组织中的分布
17
作者 孙丽丽 刘运龙 +2 位作者 刘若瑞 程远国 刘学龙 《延边大学农学学报》 2010年第1期30-33,共4页
试验采用125I同位素示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法来测定各主要组织器官的总放射性浓度和酸沉部分放射性浓度,从而获得rhIL-12在动物(SD大鼠)体内的吸收、分布数据.结果表明,在SD大鼠皮下注射标记药物0~120 h之间,测定大鼠的器官、组... 试验采用125I同位素示踪法结合三氯醋酸(TCA)沉淀法来测定各主要组织器官的总放射性浓度和酸沉部分放射性浓度,从而获得rhIL-12在动物(SD大鼠)体内的吸收、分布数据.结果表明,在SD大鼠皮下注射标记药物0~120 h之间,测定大鼠的器官、组织和体液中均有该药物的存在,但在泌尿系统中的含量最高,在各组织器官中12 h达到高峰,以后逐渐下降. 展开更多
关键词 125I示踪法 重组人白细胞介素-12 组织分布
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人白介素12亚基p40和p35基因串联在毕赤酵母中的表达及表达产物活性分析
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作者 周鹤峰 邵敏 +3 位作者 孙伟 刘银花 李官成 葛正龙 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期20-24,共5页
利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导... 利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导,hscIL-12在酵母中获得分泌表达,表达产物经Western blot检测,显示该蛋白相对分子质量为70kDa,可与鼠抗人IL-12单克隆抗体特异性结合;定量分析结果表明,重组酵母培养上清中hscIL-12约占总蛋白的26%,表达量约为60mg/L;生物学活性实验表明,重组蛋白能促进人外周血淋巴细胞增殖。为利用rhscIL-12进行基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素12 毕赤酵母 分泌表达 活性分析
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rhIL-12联合HBsAg刺激健康人外周血单核细胞对IL-12R的影响
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作者 李茹冰 李若冰 +3 位作者 王翠玲 张宜俊 李超 傅泳航 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期524-527,共4页
目的确认重组人白细胞介素12(rhIL-12)联合乙型肝炎表面抗原(HBsAg)可增强健康人外周血单核细胞(PBMC)产生特异性细胞免疫应答,并分析其细胞来源,及对IL-12R的影响,探讨hIL-12联合HBsAg作为治疗型乙型肝炎疫苗的应用前景。方法 8名健康... 目的确认重组人白细胞介素12(rhIL-12)联合乙型肝炎表面抗原(HBsAg)可增强健康人外周血单核细胞(PBMC)产生特异性细胞免疫应答,并分析其细胞来源,及对IL-12R的影响,探讨hIL-12联合HBsAg作为治疗型乙型肝炎疫苗的应用前景。方法 8名健康人PBMC分别与rhIL-12(1 ng/mL)、rHBsAg(500 ng/mL)和rhIL-12(1ng/mL)+rHBsAg(500 ng/mL)体外孵育,采用流式细胞术检测CD4+IFN-γ(γ-干扰素)+T细胞、CD8+IFN-γ+T细胞及CD56+IFN-γ+NK细胞百分比,并测定表达IL-12Rβ1、IL-12Rβ2的细胞百分比。结果 rhIL-12与rHBsAg联合组CD8+IFN-γ+T细胞及CD56+IFN-γ+NK细胞百分比均较对照组明显升高,且有非常显著差异(P<0.01),联合组CD8+IL-12Rβ1和CD56+IL-12Rβ1与单用rhIL-12或rHBsAg组比较均显著升高。结论提示rhIL-12联合rHBsAg诱生的IFN-γ主要来自CD56+NK细胞、CD8+T细胞,其次是CD4+T细胞;rhIL-12和rHBsAg单独均能上调健康人PBMCs表面IL-12R的表达,rhIL-12与rHBsAg联合具有增强作用。 展开更多
关键词 乙型肝炎表面抗原 重组人白细胞介素12 外周血单个核细胞 Γ干扰素 IL-12R
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结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗的构建及其联合人IL-12表达质粒诱导的小鼠细胞免疫应答观察 被引量:5
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作者 丁珍珍 杜先智 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期15-19,共5页
目的:构建编码结核分枝杆菌Ag85A分泌蛋白重组真核表达质粒,研究其与hIL-12联合免疫小鼠后的细胞免疫应答。方法:(1)构建质粒:采用PCR法从H37Rv菌株中扩增Ag85A编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体PMD20-T中,经酶切鉴定与序列... 目的:构建编码结核分枝杆菌Ag85A分泌蛋白重组真核表达质粒,研究其与hIL-12联合免疫小鼠后的细胞免疫应答。方法:(1)构建质粒:采用PCR法从H37Rv菌株中扩增Ag85A编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体PMD20-T中,经酶切鉴定与序列测定证实后,以亚克隆法构建于真核表达载体PCDNA3.1的相应酶切位点。(2)动物实验:50只C57BL/6N小鼠随机分为:①Ag85A基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组);②重组Ag85A基因疫苗组;③卡介苗BCG组(阳性对照);④空载体组(阴性对照);⑤PBS组(空白对照)。基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106CFU BCG免疫1次,约0.3 ml/只。第三次免疫小鼠后28天,处死各组小鼠,分离脾细胞,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFNγ-、IL-2、IL-4水平;乳酸脱氢酶释放法检测脾细胞杀伤活性;分离的脾细胞经TB-PPD刺激后,XTT比色法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果:(1)成功构建结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗。(2)联合免疫组能诱导较强烈的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-r和IL-2水平显著高于Ag85A基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少;特异性CTL杀伤活性明显增强;淋巴细胞增殖活性也明显高于其他组别。结论:hlL-12表达质粒能够增强结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗所诱导的小鼠免疫应答。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 Ag85A基因 DNA基因疫苗 人白细胞介素12质粒 联合免疫
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