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重组人白细胞介素21的制备及免疫学活性分析
1
作者 刘明军 孙秀芳 +1 位作者 钱冬萌 王斌 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期72-75,共4页
目的:纯化制备rhIL-21,并分析其免疫学活性。方法:在含重组质粒pGEX4T-2/IL-21的大肠杆菌DH5α中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。用MTT法研究rhIL-21对T细胞增殖、NK细胞杀伤活性的影... 目的:纯化制备rhIL-21,并分析其免疫学活性。方法:在含重组质粒pGEX4T-2/IL-21的大肠杆菌DH5α中,经IPTG诱导表达出GST-融合蛋白,蛋白经过一系列的纯化,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度。用MTT法研究rhIL-21对T细胞增殖、NK细胞杀伤活性的影响。结果:表达出了可溶性融合蛋白,纯化后的rhIL-21纯度达95%。rhIL-21能促进T细胞增殖,能增强NK细胞杀伤活性。结论:成功制备了rhIL-21,其在体外具有一定的免疫学活性,为其大量制备和体内的生物学活性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素21 大肠杆菌 表达 纯化 活性
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基因重组人白细胞介素21体外对NK细胞活性的影响
2
作者 钱冬萌 王斌 +3 位作者 丁守怡 王静 宋旭霞 闫志勇 《药品评价》 CAS 2005年第5期345-348,共4页
目的在原核系统中表达基因重组人IL-21,研究其在体外对NK细胞杀伤活性的影响。方法利用基因工程技术,获得人IL-21的编码基因,重组于表达载体pGEX4T-2中,转化E.coliDH5α进行诱导表达,纯化获得重组人IL-21,分别将0、10、20、40μg/L的IL... 目的在原核系统中表达基因重组人IL-21,研究其在体外对NK细胞杀伤活性的影响。方法利用基因工程技术,获得人IL-21的编码基因,重组于表达载体pGEX4T-2中,转化E.coliDH5α进行诱导表达,纯化获得重组人IL-21,分别将0、10、20、40μg/L的IL-21与健康人外周血单核细胞共同孵育,改良的MTT法检测NK细胞对靶细胞K562的杀伤活性。结果在原核表达系统中成功表达了GST-IL-21的融合蛋白,一定剂量的纯化后IL-21(40μg/L)在体外具有增强NK细胞杀伤活性的作用。结论在大肠杆菌中表达的基因重组人IL-21在体外可增强NK细胞杀伤活性,为系统研究新型的免疫调节因子IL-21奠定基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素21 原核表达 NK细胞 杀细胞活性
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重组人白细胞介素21表达条件的探讨 被引量：1
3
作者 郑瑞 许晓群 +6 位作者 张彩 刘金生 张建华 余德荣 牛家峰 王义平 王郡甫 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2007年第5期294-296,共3页
目的探讨重组人白细胞介素21工程菌诱导表达的最佳条件。方法用摇瓶发酵的方法探索不同诱导条件(诱导温度、诱导时间、接种量I、PTG浓度等)对目的蛋白质表达的影响。结果该工程菌表达目的蛋白质的最佳温度是42℃;高密度接种更有利于目... 目的探讨重组人白细胞介素21工程菌诱导表达的最佳条件。方法用摇瓶发酵的方法探索不同诱导条件(诱导温度、诱导时间、接种量I、PTG浓度等)对目的蛋白质表达的影响。结果该工程菌表达目的蛋白质的最佳温度是42℃;高密度接种更有利于目的蛋白质的表达。结论建立了BL21/pET-30a(+)-IL21工程菌最佳诱导表达条件,为重组人白细胞介素21的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 基因工程菌 重组人白细胞介素21 发酵 表达
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重组人白细胞介素21真核表达载体的构建及体外药效学研究 被引量：1
4
作者 饶桂荣 朱梅 +4 位作者 杨妙青 杨富强 王洪敏 吴庆洲 陈光明 《华南国防医学杂志》 CAS 2010年第6期431-434,共4页
目的构建人的真核表达载体pVAX/IL-21,并进行体外细胞转染实验的鉴定研究。方法采用PCR扩增技术扩增含有白细胞介素21(interleukin21,IL-21)的基因,亚克隆于真核表达载体pVAX1,并进行酶切和测序分析;将所构建的质粒转染COS-7细胞检测其... 目的构建人的真核表达载体pVAX/IL-21,并进行体外细胞转染实验的鉴定研究。方法采用PCR扩增技术扩增含有白细胞介素21(interleukin21,IL-21)的基因,亚克隆于真核表达载体pVAX1,并进行酶切和测序分析;将所构建的质粒转染COS-7细胞检测其表达情况。结果酶谱和测序分析表明,构建的质粒pVAX/IL-21(pIL-21)基因片段的方向、序列完全正确;ELISA法定量检测双质粒转染COS-7细胞后24h、48h、72h、96h均检测到目的基因的蛋白表达,其中转染48h的表达水平较高,达到45ng/ml。结论成功构建了人IL-21的整合表达质粒pIL-21,并具有较强的体外细胞转染活性,为进一步研究IL-21的生物学功能如抗肿瘤活性等提供了实验基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素21 构建 转染 基因表达
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重组人白细胞介素-21的原核表达及其复性与纯化
5
作者 郑瑞 许晓群 +4 位作者 张建华 张彩 刘金生 苏庆红 王郡甫 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2008年第4期233-236,共4页
目的构建工程菌BL21/pET30a(+)-IL-21表达体系,表达并纯化出具有生物学活性的目的蛋白质。方法用基因工程方法构建表达质粒pET30a(+)-IL-21;在BL21大肠杆菌中诱导表达基因重组人白细胞介素-21(rhIL-21);提取包涵体并建立复性条件;用Ni-... 目的构建工程菌BL21/pET30a(+)-IL-21表达体系,表达并纯化出具有生物学活性的目的蛋白质。方法用基因工程方法构建表达质粒pET30a(+)-IL-21;在BL21大肠杆菌中诱导表达基因重组人白细胞介素-21(rhIL-21);提取包涵体并建立复性条件;用Ni-NTA凝胶纯化出rhIL-21;以NK92为效应细胞,观察rhIL-21对NK92的生物学作用,以此检测其活性。结果构建了重组质粒pET30a(+)-IL-21,工程菌BL21/pET30a(+)-IL-21能大量表达目的蛋白质;经复性和纯化得到具有生物学活性的rhIL-21。结论成功建立了人IL-21的原核表达体系,得到了有生物学活性的rhIL-21蛋白质。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-21 表达 复性 蛋白纯化
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重组人IL-21对人外周血淋巴细胞的活化作用 被引量：1
6
作者 刘勇 陈军浩 吴超 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期544-546,共3页
目的观察重组人白细胞介素21(IL-21)对健康人外周血淋巴细胞的活化作用,检测IL-21对外周血B细胞表面抗原提呈相关分子的表达及对淋巴细胞亚群的影响。方法重组人IL-21与健康人外周血单个核细胞(PBMC)共培养48h,用流式细胞技术检测T、B... 目的观察重组人白细胞介素21(IL-21)对健康人外周血淋巴细胞的活化作用,检测IL-21对外周血B细胞表面抗原提呈相关分子的表达及对淋巴细胞亚群的影响。方法重组人IL-21与健康人外周血单个核细胞(PBMC)共培养48h,用流式细胞技术检测T、B淋巴细胞表面CD69的表达,并与未加IL-21组进行比较;同时用流式细胞术检测B细胞表面主要组织相容性复合体Ⅰ及Ⅱ类分子(MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ)、CD80及CD86的表达量。细胞培养96h后检测淋巴细胞亚群的变化。结果重组人IL-21能显著提高T、B淋巴细胞表面CD69的表达量,与未加IL-21组相比差异有统计学意义(P<0.05),但却不能提高B细胞表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、CD80及CD86的表达量。经IL-21刺激后人淋巴细胞亚群中自然杀伤细胞(NK)细胞及自然杀伤T细胞(NKT)细胞比例明显增加。结论重组人IL-21可以活化人的T、B淋巴细胞,同时IL-21刺激后人淋巴细胞亚群中自然杀伤细胞(NK)细胞及NKT细胞比例明显增加。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素21 淋巴细胞
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重组人IL-21基因对肝癌细胞的生长抑制作用的研究
7
作者 饶桂荣 朱梅 +4 位作者 杨妙青 杨富强 王洪敏 吴庆洲 陈光明 《华南国防医学杂志》 CAS 2011年第5期367-369,共3页
目的研究重组人白细胞介素21(interleukin 21,IL-21)基因,对肝癌细胞HepG2的生长的影响。方法采用电击转染技术将质粒pIL21转染到肝癌HepG2细胞,继续培养24 h、48 h、72 h,按四甲基偶氮唑蓝比色法(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)检... 目的研究重组人白细胞介素21(interleukin 21,IL-21)基因,对肝癌细胞HepG2的生长的影响。方法采用电击转染技术将质粒pIL21转染到肝癌HepG2细胞,继续培养24 h、48 h、72 h,按四甲基偶氮唑蓝比色法(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞生长增殖情况,反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reac-tion,RT-PCR)检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达情况,酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测48h的IL-21的表达水平,同时设空白和阴性对照。结果质粒pIL21转染HepG2细胞后继续培养24 h,细胞生长出现抑制现象,48、72 h后出现显著抑制现象。在48 h检测到VEGF基因和IL-21蛋白的低表达。结论重组人IL-21基因可显著抑制肝癌细胞的生长和增殖,这可能与调控VEGF基因的表达相关,提示IL-21具有显著的抗肿瘤活性等生物学功能。 展开更多
关键词 重组质粒 人白细胞介素21 电转染 生长抑制
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重组人IL-21融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性形式表达、纯化及体外对T细胞增殖的影响
8
作者 刘明军 鲁晓晴 +1 位作者 王斌 钱冬萌 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第26期3-5,共3页
目的为重组人白细胞介素-21(rhIL-21)的生物学活性和功能研究奠定基础。方法构建重组表达质粒pGEX4T-2/IL-21,通过降低培养温度等优化条件于大肠杆菌中表达出可溶性形式的rhIL-21融合蛋白,纯化后以不同质量浓度作用于T细胞,观察其对T细... 目的为重组人白细胞介素-21(rhIL-21)的生物学活性和功能研究奠定基础。方法构建重组表达质粒pGEX4T-2/IL-21,通过降低培养温度等优化条件于大肠杆菌中表达出可溶性形式的rhIL-21融合蛋白,纯化后以不同质量浓度作用于T细胞,观察其对T细胞增殖的影响。结果大肠杆菌表达出可溶性形式的rhIL-21融合蛋白,纯化纯度达95%;纯化后的rhIL-21蛋白作用后T细胞增殖增加,且随rhIL-21蛋白质量浓度的增加,T细胞增殖率升高。结论大肠杆菌中获得rhIL-21的可溶性表达形式,纯化后的蛋白对T细胞增殖有促进作用;此为rhIL-21的生物活性及功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素-21 大肠杆菌 可溶性表达 纯化
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RhIL-21对NK-92MI细胞生物学活性的影响
9
作者 郑瑞 陈葆国 +3 位作者 颜卫华 李伯利 章卫国 干灵红 《医学研究杂志》 2012年第3期120-124,共5页
目的探讨rhIL-21对NK-92MI细胞免疫功能的影响。方法以不同浓度(25～100ng/ml)的rhIL-21培养NK-92MI细胞24～72h,观察NK-92MI细胞的增殖。以50ng/ml的rhIL-21处理NK-92MI不同时间后,FACS检测NK-92MI细胞的凋亡,NK-92MI细胞表面NKG2D受... 目的探讨rhIL-21对NK-92MI细胞免疫功能的影响。方法以不同浓度(25～100ng/ml)的rhIL-21培养NK-92MI细胞24～72h,观察NK-92MI细胞的增殖。以50ng/ml的rhIL-21处理NK-92MI不同时间后,FACS检测NK-92MI细胞的凋亡,NK-92MI细胞表面NKG2D受体及胞内颗粒酶-B蛋白的表达;细胞杀伤试剂盒检测NK-92MI细胞对靶细胞K-562的细胞毒效应;RT-PCR检测NK-92MI受体NKG2D,效应分子颗粒酶-B、穿孔素及细胞因子IFN-γ基因mRNA的表达;ELISA检测其分泌IFN-γ的水平。结果 RhIL-21虽能抑制NK-92 MI细胞的增殖(P<0.05),但不会促进细胞的凋亡(P<0.05)。RhIL-21能促进NK-92MI细胞穿孔素、IFN-γ、颗粒酶-B、NKG2D受体基因及相应蛋白质的表达上调(P<0.05)。rhIL-21预处理组NK-92MI对K-562细胞的细胞毒效应也明显增强(P<0.05)。结论 RhIL-21能增强NK-92 MI细胞的细胞毒效应,IL-21在肿瘤的免疫治疗中有潜在临床应用价值。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-21 NK-92MI细胞 干扰素-Γ NKG2D 颗粒酶 穿孔素
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GST-IL-21融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性测定
10
作者 钱冬萌 王斌 +1 位作者 丁守怡 王静 《生物技术通讯》 CAS 2006年第2期177-179,共3页
目的:克隆人白细胞介素21(IL-21)编码区的cDNA,在大肠杆菌中得以表达,并检测其促进人外周血单核细胞(PBMC)增殖的生物学活性。方法:利用基因工程技术,以植物血凝素(PHA)刺激的人扁桃体细胞cDNA文库为模板,经PCR扩增获得IL-21的编码基因... 目的:克隆人白细胞介素21(IL-21)编码区的cDNA,在大肠杆菌中得以表达,并检测其促进人外周血单核细胞(PBMC)增殖的生物学活性。方法:利用基因工程技术,以植物血凝素(PHA)刺激的人扁桃体细胞cDNA文库为模板,经PCR扩增获得IL-21的编码基因,并将其重组于表达载体pGEX4T-2中,转化大肠杆菌DH5α进行诱导表达,纯化得到GST-IL-21重组融合蛋白;MTT法检测其对促进PBMC增殖的功能。结果:获得了IL-21编码区的cDNA克隆;SDS-PAGE显示经IPTG诱导表达的该融合蛋白相对分子质量为41000;纯化后的GST-IL-21融合蛋白在体外具有显著的促进PBMC增殖的作用。结论:GST-IL-21融合蛋白在原核表达系统中可以有效表达,并具有较好的生物学活性。 展开更多
关键词 人白细胞介素21 原核表达 生物学活性
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