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杜仲桃叶珊瑚苷对人神经母细胞瘤细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的作用
1
作者 刘国华 杨苏芳 +3 位作者 肖勋立 王非非 张媛 黄志强 《药品评价》 CAS 2024年第7期825-829,共5页
目的研究杜仲桃叶珊瑚苷(AUC)对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞增殖、迁移、凋亡和自噬的影响,并进一步探究其作用机制。方法利用SH-SY5Y细胞构建氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,设立浓度梯度,研究AUC保护OGD/R后SH-SY5Y细胞的最佳浓度。实验... 目的研究杜仲桃叶珊瑚苷(AUC)对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞增殖、迁移、凋亡和自噬的影响,并进一步探究其作用机制。方法利用SH-SY5Y细胞构建氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型,设立浓度梯度,研究AUC保护OGD/R后SH-SY5Y细胞的最佳浓度。实验分为对照(Con)组、OGD/R组、AUC+OGD/R组和AUC+OGD/R+自噬激活剂(RAPA)组。光学显微镜下,观察细胞形态变化;细胞增殖检测试剂盒(CCK8)测定增殖活力;划痕愈合实验检测细胞迁移率;流式细胞术测定细胞凋亡率和Western Blot检测Beclin 1蛋白表达。结果(1)AUC的浓度确定:经低、中、高三个浓度(1μM、10μM、100μM)AUC处理OGD/R后的SH-SY5Y细胞,存活率明显升高,10μM时细胞活性最高(P<0.05),遂选取10μM的AUC进行后续实验。(2)细胞迁移能力:经AUC含药血清干预后,与OGD/R组相比,划痕的愈合率显著增加(P<0.01)。(3)细胞凋亡率:与Con组相比,OGD/R组的细胞凋亡水平显著增高(P<0.01);与OGD/R组相比,AUC+OGD/R组细胞凋亡水平显著降低(P<0.01);与AUC+OGD/R组相比,AUC+OGD/R+RAPA组细胞凋亡水平显著升高(P<0.05)。(4)Beclin 1蛋白表达:与Con组相比,OGD/R组的Beclin 1蛋白水平显著增高(P<0.01);与OGD/R组相比,AUC+OGD/R组的Beclin 1蛋白水平显著降低(P<0.01);与AUC+OGD/R组相比,AUC+OGD/R+RAPA组的Beclin 1蛋白水平显著增高(P<0.05)。结论AUC能够提高OGD/R后SH-SY5Y细胞的增殖活力和迁移愈合能力,降低凋亡率,并且对凋亡的作用可能是通过抑制自噬完成的。 展开更多
关键词 桃叶珊瑚苷 人神经母细胞瘤细胞 增殖 迁移 凋亡 自噬
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地榆皂苷Ⅱ逆转人神经母细胞瘤细胞对顺铂耐药的影响及机制研究
2
作者 耿国庆 高廷 +2 位作者 鹿洪亭 李庆浩 徐永涛 《中药材》 CAS 北大核心 2023年第11期2844-2850,共7页
目的:观察地榆皂苷Ⅱ逆转人神经母细胞瘤细胞对顺铂耐药的作用并探讨其机制。方法:建立对顺铂耐药的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP,采用CCK-8法测定地榆皂苷Ⅱ对细胞增殖的直接抑制作用及对SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP耐药性... 目的:观察地榆皂苷Ⅱ逆转人神经母细胞瘤细胞对顺铂耐药的作用并探讨其机制。方法:建立对顺铂耐药的人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP,采用CCK-8法测定地榆皂苷Ⅱ对细胞增殖的直接抑制作用及对SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP耐药性的逆转作用,Transwell小室实验和划痕试验检测地榆皂苷Ⅱ对细胞侵袭和迁移能力的影响,流式细胞术测定地榆皂苷Ⅱ对细胞周期和细胞凋亡的影响,qRT-PCR和Western Blot测定地榆皂苷Ⅱ对细胞中Cdc2和AKT/PI3K信号通路mRNA和蛋白表达的影响。结果:地榆皂苷Ⅱ可浓度依赖性地抑制SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP增殖,改善顺铂对耐药人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y/DDP和KELLY/DDP增殖的抑制作用,并抑制其侵袭、迁移能力,促进其发生G_(2)/M期阻滞及凋亡,降低其p-Cdc2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白和Cdc2、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达。结论:地榆皂苷Ⅱ可逆转人神经母细胞瘤对顺铂的耐药,其作用机制可能与抑制细胞侵袭和迁移,促进G_(2)/M期阻滞和细胞凋亡,抑制调控细胞周期蛋白Cdc2和PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 地榆皂苷Ⅱ 人神经母细胞瘤 耐药 细胞周期 细胞凋亡 CDC2 PI3K/AKT信号通路
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莪术醇对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖的影响及机制研究 被引量：1
3
作者 谭雪瑛 田仁富 潘轲 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2023年第6期375-381,共7页
目的观察莪术醇对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖的影响,并初步探讨其机制。方法对数期人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,噻唑兰(MTT)法检测不同莪术醇干预浓度下细胞生长曲线;另分为对照组、A组、B组、C组、P组,每组3个复孔,A、B、C组... 目的观察莪术醇对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖的影响,并初步探讨其机制。方法对数期人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,噻唑兰(MTT)法检测不同莪术醇干预浓度下细胞生长曲线;另分为对照组、A组、B组、C组、P组,每组3个复孔,A、B、C组分别用终浓度分别为2.5、5、10mg·mL^(-1)的莪术醇干预;P组给予5μmol·L^(-1)顺铂。观察干预48 h后细胞形态学变化;采用台盼蓝染色法检测干预48 h后细胞计数及细胞群体倍增时间(TD);采用MTT法检测并对比A、B、C组及P组干预24、48、72 h时细胞增殖抑制率,平皿克隆形成实验观察各组细胞生长情况;分别采用实时荧光定量聚合酶链反应法和蛋白印迹法检测并对比干预48 h时增殖细胞抗原(PCNA)和细胞周期蛋白激酶抑制因子(p27)mRNA和蛋白表达情况。结果2.5~10mg·mL^(-1)的莪术醇干预下细胞增殖抑制率呈升高改变,但20~80mg·mL^(-1)的莪术醇干预下细胞增殖抑制率无明显变化;倒置相差显微镜下观察,对照组细胞形态、贴壁生长状况均正常,A、B、C组及P组细胞明显团缩,细胞间隙增大,贴壁细胞不同程度脱落,C组脱落最为明显;A、B、C组及P组细胞内空泡增多,部分可见细胞质染色加深,细胞核浓缩深染呈凋亡形态,C组最严重。48 h细胞计数及TD比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,A、B、C组及P组48 h细胞计数均较少,TD均延长(P<0.05);与A组相比,B、C组及P组48 h细胞计数均较少,TD均延长(P<0.05);与B组相比,C组48 h细胞计数较少(P<0.05),TD延长(P<0.05),P组与B组差异均无统计学意义(P>0.05)。24 h细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05),48h、72h组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且C组>B组/P组>A组,各组细胞增殖抑制率均随着时间的延长呈增高趋势(P<0.05);平皿克隆形成实验显示C组细胞克隆数目明显少于其余各组(P<0.05),且莪术醇对细胞的半数抑制浓度(IC50)值为9.85mg·mL^(-1);PCNA、p27 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,A、B、C组及P组PCNA mRNA和蛋白相对表达量较低(P<0.05),p27 mRNA和蛋白相对表达量较高(P<0.05);与A组相比,B、C组及P组PCNA mRNA和蛋白相对表达量较低(P<0.05),p27 mRNA和蛋白相对表达量较高(P<0.05);与B组相比,C组PCNA mRNA和蛋白相对表达量较低(P<0.05),p27 mRNA和蛋白相对表达量较高(P<0.05),P组与B组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论莪术醇可抑制人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖,可能与下调PCNA mRNA和蛋白表达、上调p27 mRNA和蛋白表达有关。 展开更多
关键词 莪术醇 人神经母细胞瘤 生长 增殖 机制
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硫芥对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的毒效应及机制
4
作者 张赔 徐斌 +1 位作者 蒋宁 周文霞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期263-273,共11页
目的建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型,研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法采用SM 0(溶剂,0.2%乙醇),0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^(-1)孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min,而后去除药物,换用正常培养基孵育... 目的建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型,研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法采用SM 0(溶剂,0.2%乙醇),0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^(-1)孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min,而后去除药物,换用正常培养基孵育24 h。应用IncuCyte ZOOM长时间动态活细胞成像及数据分析系统观察细胞融合率和细胞形态;CCK-8法检测细胞活力;SM 0,1.0,10,25,50,100和400μmol·L^(-1)以同样方式处理细胞,calcein-AM/PI荧光染色检测活细胞比例和死细胞比例;试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)-488细胞增殖试剂盒检测细胞增殖;免疫荧光法测定细胞DNA双链断裂标志物γ-H2AX。SM 0,1.0,10和100μmol·L^(-1)以同样方式处理细胞后,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)相对含量;试剂盒检测细胞内NAD+/NADH和ATP含量;SM 10μmol·L^(-1)处理细胞后,超高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内SM-DNA加合物种类。结果与溶剂组相比,SM染毒后2 h时,SM 800μmol·L^(-1)组细胞融合率降至<5%且不再增加;SM染毒6~8 h后,SM 10~400μmol·L^(-1)组细胞融合率曲线逐渐降低。SM染毒后24 h时,细胞活力呈浓度依赖性降低(P<0.05,P<0.01,r=-0.6681),半数抑制浓度(IC50)为15.92μmol·L^(-1)。SM 25~400μmol·L^(-1)显著增加死细胞比例(P<0.01),浓度依赖性显著增加LDH释放率(P<0.01,r=0.9401);SM 400μmol·L^(-1)显著降低EdU阳性细胞比例(P<0.01)。SM 1.0~100μmol·L^(-1)均可显著增加细胞内ROS含量(P<0.01),且显著降低细胞内NAD+/NADH和ATP含量(P<0.01),均呈浓度依赖性(r分别为0.8074,-0.8885和-0.9514);SM 25~400μmol·L^(-1)可浓度依赖性增加γ-H2AX阳性细胞比例(P<0.01,r=0.8550)。在SM 10μmol·L^(-1)染毒细胞中检测到2种SM与DNA加合物——单加合物N7-HETEG和双加合物Bis-G。结论SM对SH-SY5Y细胞具有明显的细胞毒性作用,可破坏细胞膜结构,阻碍细胞增殖,降低细胞存活率,其机制可能与引起神经细胞内DNA加合物形成、DNA损伤、能量代谢紊乱和氧化应激反应密切相关。 展开更多
关键词 硫芥 人神经母细胞瘤细胞 DNA损伤 氧化应激 能量代谢
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李氏5号方对人神经母细胞瘤株SY5Y生长的影响 被引量：36
5
作者 张景艳 王蓉 +4 位作者 李子中 程浩然 李生海 刘梦霞 盛树力 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期258-260,共3页
目的:观察李氏5号方在细胞水平上对神经细胞生长的影响,寻找最佳药物浓度.方法:不同浓度的李氏5号方作用于人神经母细胞瘤株SY5Y,利用MTT测定细胞的存活率,制定浓度-药效曲线得出最佳药物浓度.以MTT代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、... 目的:观察李氏5号方在细胞水平上对神经细胞生长的影响,寻找最佳药物浓度.方法:不同浓度的李氏5号方作用于人神经母细胞瘤株SY5Y,利用MTT测定细胞的存活率,制定浓度-药效曲线得出最佳药物浓度.以MTT代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度、胞体面积为观察指标.结果:李氏5号方在0.125～0.75 g*L-1浓度范围内均可增加SY5Y细胞的存活率.与正常对照组相比,加药组SY5Y细胞轴突长度和胞体面积均增加,MTT代谢率升高、LDH漏出率降低. 结论:李氏5号方具有营养神经细胞、促进神经细胞存活的作用. 展开更多
关键词 李氏5号方 神经细胞 中医病理 人神经母细胞瘤株SY5Y 药理作用 精神病学
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没食子酸抑制人神经母细胞瘤增殖作用的实验研究 被引量：17
6
作者 何文飞 何大维 +3 位作者 马超 赵丹 张永波 卞则栋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期107-110,共4页
目的研究没食子酸抑制小鼠模型中人神经母细胞瘤增殖的作用以及对化疗药物的协同作用。方法建立人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株免疫活性C57BL/6j小鼠移植瘤模型,随机分配成4组,每组10只:①PBS荷瘤对照组,按PBS0.5ml/只,腹腔注射,作为阴性... 目的研究没食子酸抑制小鼠模型中人神经母细胞瘤增殖的作用以及对化疗药物的协同作用。方法建立人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株免疫活性C57BL/6j小鼠移植瘤模型,随机分配成4组,每组10只:①PBS荷瘤对照组,按PBS0.5ml/只,腹腔注射,作为阴性对照;②没食子酸组,按250mg/kg,1次/2d给药,连续2周;③环磷酰胺组,按75mg/kg给药,每周2次,连续2周,作为阳性对照;④没食子酸+环磷酰胺组,没食子酸在环磷酰胺给药前24h给药,没食子酸与环磷酰胺独立给药,剂量和时间同前。药物均9:00腹腔注射给药,每周监测相对肿瘤体积(RTV),治疗时间共2周,次日处死小鼠,称体质量和瘤质量(Wt)、计算抑瘤率(IR),BrdU标记检测移植瘤细胞增殖。结果没食子酸组、环磷酰胺组、没食子酸+环磷酰胺组在2周的移植瘤瘤质量分别为(4559.0±677.7)、(2117.0±749.6)、(637.7±319.6)mg,平均抑瘤率分别为36.94%、70.72%、91.18%,与PBS组比较差异有显著性(P<0.01),没食子酸+环磷酰胺组瘤质量与环磷酰胺组比较差异有显著性(P<0.01)。各给药组肿瘤增殖指数分别为0.1229±0.0219、0.1076±0.0156、0.0413±0.0130,与PBS组肿瘤增殖指数(0.2308±0.0759)比较差异有显著性(P<0.01),同时没食子酸+环磷酰胺组与没食子酸组或环磷酰胺组比较差异有显著性(P<0.01)。结论没食子酸具有抑制人神经母细胞移植瘤增殖、协同环磷酰胺抗肿瘤生长的作用。 展开更多
关键词 没食子酸 人神经母细胞瘤 肿瘤增殖指数 环磷酰胺
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Caspase-3和Caspase-8在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用 被引量：8
7
作者 何卫红 徐八一 +4 位作者 徐志霞 夏涛 何平 高萍 王爱国 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期381-384,共4页
目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-... 目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-3活性以及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;再选择适宜的40μg/mlNaF染毒剂量组,观察在Fas受体激动剂CH11或拮抗剂ZB4作用下其细胞凋亡率、Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平的改变。结果与对照组比较,40、80μg/ml染毒组细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势,且40、80μg/ml染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);40、80μg/ml染毒组Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);激动剂CH11与NaF共培养对细胞凋亡显示出协同效应,拮抗剂ZB4可部分阻断NaF致SH-SY5Y细胞的凋亡。结论NaF可通过上调死亡受体Fas途径的关键酶Caspase-3和Caspase-8的表达,促进SH-SY5Y细胞凋亡。 展开更多
关键词 氟化物 氟化钠 人神经母细胞瘤细胞株 细胞凋亡 CASPASE-3 CASPASE-8
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叠氮钠对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞线粒体跨膜电位的影响 被引量：12
8
作者 张兰 李林 +5 位作者 班立勤 安文林 刘树森 李晓明 薛冰 徐艳玲 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 2000年第5期436-439,共4页
目的 观察线粒体呼吸链复合体 IV（即细胞色素 C氧化酶）抑制剂叠氮钠 (NaN3)对人神经母细胞瘤细胞能量代谢的影响，探讨线粒体缺陷在神经退行性疾病发病中的作用。方法 将叠氮钠与培养的人神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y细胞共同孵育，用... 目的 观察线粒体呼吸链复合体 IV（即细胞色素 C氧化酶）抑制剂叠氮钠 (NaN3)对人神经母细胞瘤细胞能量代谢的影响，探讨线粒体缺陷在神经退行性疾病发病中的作用。方法 将叠氮钠与培养的人神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y细胞共同孵育，用微测量法测定线粒体复合体 IV活性，噻唑兰（ MTT）法测定细胞存活率，激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测线粒体跨膜电位变化。 结果 16～ 64 mmol/L叠氮钠与培养的 SH-SY5Y细胞共孵育 1 h，细胞线粒体细胞色素 C氧化酶活性下降； 16～ 128 mmol/L叠氮钠作用 1～ 8 h，细胞存活率下降，呈时间及剂量依赖性；叠氮钠使细胞线粒体跨膜电位的荧光强度值下降，尤以细胞突起内降低最为显著，门控内正常细胞数减少。结论 叠氮钠与培养的 SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞共孵育导致细胞损伤，其机制是使细胞线粒体跨膜电位下降，能量合成障碍，最终导致细胞死亡。 展开更多
关键词 叠氮钠 线粒体跨膜电位 人神经母细胞瘤细胞
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氯化钴预处理在培养分化的人神经母细胞瘤细胞株缺氧损伤中的保护作用 被引量：4
9
作者 孙胜 高文祥 +1 位作者 蒋春华 高钰琪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1010-1012,共3页
目的探讨氧化钴(CoCl2)对体外培养分化的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导因子1、2和其调节基因产物血管内皮生长因子在其中的作用。方法分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞用50μmol/LCoCl2... 目的探讨氧化钴(CoCl2)对体外培养分化的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导因子1、2和其调节基因产物血管内皮生长因子在其中的作用。方法分化的SH-SY5Y细胞分为对照组、化学缺氧预处理组(细胞用50μmol/LCoCl2预处理3h,换液后常氧培养1h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28h)、缺氧组(无CoCl2预处理过程,其余同化学缺氧预处理组)。用Westernblotting法测细胞HIF-1α、HIF-2α和VEGF的蛋白表达,通过乳酸脱氢酶释放率测定、MTT细胞活力测定判断细胞损伤程度。结果化学缺氧预处理组细胞HIF-2α和VEGF的蛋白表达显著高于缺氧组(P<0.01),HIF-1α蛋白表达在两组之间没有显著性差异(P>0.05),化学缺氧预处理组细胞较缺氧组细胞存活率高、乳酸脱氢酶释放率减少(P<0.01)。结论CoCl2化学预缺氧可保护分化的SH-SY5Y细胞对缺氧产生耐受,缺氧预处理可能通过HIF-2促进VEGF的表达而产生保护作用。 展开更多
关键词 化学缺氧预处理 缺氧诱导因子1 缺氧诱导因子2 血管内皮生长因子 人神经母细胞瘤
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叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用 被引量：5
10
作者 张景燕 陈娟 +2 位作者 王蓉 赵静姝 吴燕川 《首都医科大学学报》 CAS 2012年第6期776-778,共3页
目的通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响,探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、叶酸组(1.875 mg/L)、维生素B12组(800μg/L)、叶酸(1.875 mg/L)+维生素B12(800... 目的通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响,探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、叶酸组(1.875 mg/L)、维生素B12组(800μg/L)、叶酸(1.875 mg/L)+维生素B12(800μg/L)组,进行细胞形态观察、细胞计数分析以及测定各组细胞的噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率。结果与对照组相比,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组的细胞计数和MTT代谢率升高(P<0.05),LDH漏出率降低(P<0.05),在细胞形态上,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组明显好于对照组,表现为细胞胞体饱满、存活细胞数目增多、贴壁良好、突起延长。结论叶酸、维生素B12能促进神经细胞生长,降低神经细胞死亡率,从而达到保护神经元的作用。 展开更多
关键词 叶酸 维生素B12 人神经母细胞瘤株SH-SY5Y
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微波辐射诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的可能机制 被引量：2
11
作者 王程 李琴 +5 位作者 刘微 闫岗林 徐冶 于洋 刘师兵 潘文干 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期422-426,I0002,共6页
目的:观察微波辐射对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用10、30和50 mW.cm-2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,以假辐射组(0 mW.cm-2)为对照,光镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜下观察DAPI染色细胞核的形... 目的:观察微波辐射对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用10、30和50 mW.cm-2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,以假辐射组(0 mW.cm-2)为对照,光镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜下观察DAPI染色细胞核的形态;CTAB法提取细胞基因组DNA,电泳观察DNAladder;台盼蓝拒染法检测细胞存活率;AnnexinV-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;MTT法检测细胞相对活性;蛋白质印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:微波辐射后SH-SY5Y细胞形态即刻改变,胞核、胞质结构欠清,细胞皱缩甚至脱壁;细胞核内的染色质出现不规则凝集,碎裂成2～5个微核;细胞DNA出现明显的梯状条带;细胞存活率随微波辐射强度增大逐渐降低,10 mW.cm-2辐射组与假辐射组比较,细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05),但30、50 mW.cm-2辐射组细胞存活率明显低于假辐射组(P<0.05);微波辐射后6 h的细胞凋亡率随辐射强度的增加逐渐升高,各辐射组细胞凋亡率均明显高于假辐射组(P<0.05);微波辐射后24和48 h,细胞相对活力随辐射强度的增加明显降低,各辐射组的细胞相对活力均明显低于假辐射组(P<0.05)。微波辐射后,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、survivin表达水平逐渐下降,Bax、caspase-3和caspase-7表达水平逐渐升高,caspase-8和-9表达水平无明显变化。结论:微波辐射可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与survivin、Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调及caspase-3和caspase-7的作用有关,而与caspase-8和caspase-9介导的caspase-3活化这一作用无密切关系。 展开更多
关键词 微波辐射 人神经母细胞瘤 SH-SY5Y细胞 细胞凋亡
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氯化钾或谷氨酸对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞钙离子通透性的影响 被引量：7
12
作者 陈文东 李雅莉 李林 《细胞生物学杂志》 CSCD 2000年第4期206-209,F003,共5页
用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系作为研究对象,通过测定细胞存活率(MTT法)和脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA),探讨了氯化钾(KCI)或谷氨酸分别对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤作用。结果发现在含Ca^(-2)的温育液中,SH-SY5Y细胞与KCl(40-... 用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系作为研究对象,通过测定细胞存活率(MTT法)和脂质过氧化代谢产物丙二醛(MDA),探讨了氯化钾(KCI)或谷氨酸分别对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤作用。结果发现在含Ca^(-2)的温育液中,SH-SY5Y细胞与KCl(40-80mmol/L)或谷氨酸(50-100mmol/L)一起温育4h后,细胞存活率显著降低,脂质过氧化程度明显增高。当温育液中无Ca^(2+)时,KCl或谷氨酸均未引起细胞存活率和脂质过氧化程度的显著变化。相差显微镜观察细胞形态的变化与上述结果吻合,提示氯化钾或谷氨酸分别对SH-SY5Y细胞均有损伤作用,并且这种作用与细胞外Ca^(2+)内流和脂质过氧化有关。该传代细胞模型为筛选神经保护药提供了一种快速而简便的手段。 展开更多
关键词 人神经母细胞瘤 氯化钾 谷氨酸 钙离子通透性
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视黄酸诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分化过程中核基质蛋白组成的变化 被引量：1
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作者 梁盈 张秀艳 +3 位作者 李祺福 石松林 赵振利 陈晋安 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期957-967,共11页
在鉴定视黄酸(retinoic acid,RA)诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分化的基础上,应用免疫细胞化学、选择性抽提和蛋白质组学分析技术,对SK-N-SH细胞诱导分化过程中核基质蛋白组成变化进行了系统研究.实验结果显示,经1μmol/L RA处理后SK-N... 在鉴定视黄酸(retinoic acid,RA)诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞分化的基础上,应用免疫细胞化学、选择性抽提和蛋白质组学分析技术,对SK-N-SH细胞诱导分化过程中核基质蛋白组成变化进行了系统研究.实验结果显示,经1μmol/L RA处理后SK-N-SH细胞呈极性状,伸出较长的轴突样突起,胞体逐渐变小变圆.免疫细胞化学结果显示,处理后神经细胞特异表达的蛋白synaptophysin、NSE、MAP2的表达量都较对照组有明显增强.双向凝胶电泳分析显示,在RA诱导SK-N-SH细胞分化前后存在52个差异表达的核基质蛋白,经质谱分析,鉴定了其中的41个蛋白.蛋白印迹杂交进一步确证了诱导分化差异表达核基质蛋白中nucleophosmin和prohibitin等的表达变化.研究结果表明,1μmol/LRA对SK-N-SH细胞具有显著的诱导分化作用,在SK-N-SH细胞分化过程中,其核基质蛋白组成发生了明显变化.这些变化对于揭示人神经母细胞瘤细胞癌变与逆转机制和肿瘤细胞增殖与分化调控机理均有十分重要的意义,从而为研究神经系统正常发育过程及神经系统疾病的发病机理提供科学依据. 展开更多
关键词 核基质蛋白 诱导分化 人神经母细胞瘤 视黄酸
原文传递
组织因子siRNA表达载体的构建及其抑制人神经母细胞瘤细胞组织因子表达的研究 被引量：2
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作者 方峻 汤浩 +5 位作者 夏凌辉 魏文宁 陈燕 周木想 胡豫 宋善俊 《微循环学杂志》 2007年第3期16-18,共3页
目的:构建组织因子(TF)特异性小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其对人神经母细胞瘤细胞TF表达的影响。方法:分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,限制酶切予以初步筛选,基因测序进行证实。以脂质体Lipo-fectamine2000介导转染人神... 目的:构建组织因子(TF)特异性小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其对人神经母细胞瘤细胞TF表达的影响。方法:分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,限制酶切予以初步筛选,基因测序进行证实。以脂质体Lipo-fectamine2000介导转染人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC。以WesternBlotting检测TF表达。结果:所构建TFsiRNA-pSUPER表达载体经基因测序证实。SK-N-MC细胞高表达TF,TFsiRNA-pSUPER表达载体转染48h后,TF表达水平与转染pSUPER质粒的对照细胞相比显著降低,呈剂量依赖性。结论:人神经母细胞瘤SK-N-MC中TF异常高表达,本研究构建的TFsiRNA表达载体可在SK-N-MC中特异性下调TF表达,可作为干预TF表达、研究其非凝血功能的有效手段。 展开更多
关键词 SIRNA 表达载体 组织因子 人神经母细胞瘤 因子表达 细胞组织 神经母细胞瘤细胞系 分子生物学方法
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不同能量的培养条件对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响 被引量：2
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作者 赵静姝 王蓉 +2 位作者 张景燕 吴燕川 姬志娟 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第2期66-69,I0003,共5页
目的建立热量限制的体外模型,观察不同能量培养条件下对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞生长代谢的影响。方法将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞分别采用含有低浓度(2 g/L)、正常浓度(3.15g/L)或高浓度(4.5 g/L)葡萄糖的培养基进行常... 目的建立热量限制的体外模型,观察不同能量培养条件下对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞生长代谢的影响。方法将人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y细胞分别采用含有低浓度(2 g/L)、正常浓度(3.15g/L)或高浓度(4.5 g/L)葡萄糖的培养基进行常规传代培养,利用MTT代谢率、细胞生长曲线及LDH漏出率等指标观察各组细胞生长情况。结果与正常葡萄糖浓度培养条件下培养的对照组相比,高糖组细胞突起缩短,细胞胞体皱缩,MTT代谢率稍低(0.573±0.001),LDH漏出率高,细胞生长状态差;与对照组相比,低糖组细胞突起伸展,MTT代谢率较低(0.428±0.003),LDH漏出率低,细胞生长速度缓慢,但是形态良好。结论高糖培养对细胞有损伤作用,细胞代谢加速,更容易衰老死亡;而低糖培养起到保护作用,在热量限制允许范围内降低培养液的含糖量,不但不会对细胞造成损伤,反而对细胞的代谢及生长起到保护作用,延长细胞的总体寿命。 展开更多
关键词 热量限制 葡萄糖 细胞生长 细胞代谢 细胞培养 人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y
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新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用 被引量：1
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作者 黄晓明 李祺福 +3 位作者 刘用金 石松林 宋建晔 武福云 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期399-405,共7页
应用新生牛牛脑活性肽NBBP-1处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,通过细胞计数、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst染色、HE染色和电子显微镜检测等方法,研究新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用.实验结果... 应用新生牛牛脑活性肽NBBP-1处理人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,通过细胞计数、流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳、Hoechst染色、HE染色和电子显微镜检测等方法,研究新生牛牛脑活性肽NBBP-1对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的诱导作用.实验结果显示,60μg/mL新生牛牛脑活性肽NBBP-1能有效抑制人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖活动,生长抑制率高达88.84%;细胞周期检测出现亚G1细胞凋亡峰,细胞凋亡率达19.20%;琼脂糖凝胶电泳显示出现细胞凋亡典型的DNA梯状条带;Hoechst染色显示细胞核内出现浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光;光学显微镜和电子显微镜下可见典型的细胞凋亡特征:细胞核固缩、染色质凝聚与凋亡小体等典型的细胞凋亡形态和超微结构特征.因此,新生牛牛脑活性肽NBBP-1能够有效诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的凋亡. 展开更多
关键词 新生牛牛脑活性肽NBBP-1 人神经母细胞瘤SK—N-SH细胞 细胞凋亡
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人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞Ca^(2+)通道的电生理特性 被引量：1
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作者 雷洪伊 张庆国 +1 位作者 徐世元 许平 《广东医学》 CAS CSCD 2003年第8期821-822,共2页
目的　研究人神经母细胞瘤SK -N -SH细胞L型Ca2 + 通道的特性及其激动剂BayK 864 4对通道的影响。方法　培养SK -N -SH细胞 ,用膜片钳细胞贴附式技术记录和研究L型Ca2 + 通道的特性。结果　SK -N -SH细胞L型Ca2 + 通道电导为 ( 2 7 8... 目的　研究人神经母细胞瘤SK -N -SH细胞L型Ca2 + 通道的特性及其激动剂BayK 864 4对通道的影响。方法　培养SK -N -SH细胞 ,用膜片钳细胞贴附式技术记录和研究L型Ca2 + 通道的特性。结果　SK -N -SH细胞L型Ca2 + 通道电导为 ( 2 7 8± 2 5 6)pS ,平均开放时间为 ( 0 65± 0 0 8)ms ,平均关闭时间的短关闭时间常数 ( 0 5 3±0 0 5 )ms ,长关闭时间常数 ( 6 0 2± 3 46)ms。BayK 864 4使Ca2 + 通道平均开放时间延长 (P <0 0 5 ) ,但不影响其电导 (P >0 0 5 )。结论　人神经母细胞瘤SK -N -SH细胞上存在L型Ca2 + 通道 ,与其他神经元上L型Ca2 + 展开更多
关键词 人神经母细胞瘤 SK—N—SH细胞 CA^2+通道 电生理特性
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玛咖多糖对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤的保护作用 被引量：1
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作者 周意 蒋静娴 +1 位作者 储智勇 栾洁 《解放军药学学报》 CAS CSCD 2018年第3期210-213,共4页
目的探讨玛咖多糖对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用体外细胞培养的方法,建立人神经母细胞瘤细胞的过氧化氢损伤模型,并给予玛咖多糖预保护。观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,测定培养液中乳... 目的探讨玛咖多糖对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用体外细胞培养的方法,建立人神经母细胞瘤细胞的过氧化氢损伤模型,并给予玛咖多糖预保护。观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,测定培养液中乳酸脱氢酶活性,以及胞浆中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力。流式细胞仪检测细胞活性氧酶含量以及细胞周期。结果与过氧化氢模型组相比,玛咖多糖给药组可明显提高细胞的存活率,减轻过氧化氢引起的人神经母细胞瘤细胞的损伤,且呈浓度依赖性关系,可减少乳酸脱氢酶的释放,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力,缓解细胞周期S-期阻滞。结论玛咖多糖对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞有明显的保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活力,减少细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 玛咖多糖 过氧化氢 人神经母细胞瘤细胞 凋亡
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α-突触核蛋白诱导的人神经母细胞瘤细胞凋亡与RhoGTPases信号通路的活化相关 被引量：1
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作者 丁雪冰 王雪晶 +1 位作者 马明明 滕军放 《中国实用神经疾病杂志》 2014年第23期12-14,共3页
目的探讨α-突触核蛋白诱导的人神经母细胞瘤细胞凋亡的分子机制。方法构建α-Syn寡聚体诱导SHSY5Y细胞凋亡模型,流式细胞技术检测SH-SY5Y细胞凋亡;免疫荧光检测SH-SY5Y细胞内α-Syn阳性包涵体;Pull down检测SH-SY5Y细胞Rac1、Cdc42、R... 目的探讨α-突触核蛋白诱导的人神经母细胞瘤细胞凋亡的分子机制。方法构建α-Syn寡聚体诱导SHSY5Y细胞凋亡模型,流式细胞技术检测SH-SY5Y细胞凋亡;免疫荧光检测SH-SY5Y细胞内α-Syn阳性包涵体;Pull down检测SH-SY5Y细胞Rac1、Cdc42、RhoA活性。结果与对照组相比,α-Syn寡聚体诱导SH-SY5Y细胞凋亡率显著增加,细胞内α-Syn阳性包涵体数量增加,Rac1、Cdc42、RhoA活性增高。结论α-突触核蛋白诱导的人神经母细胞瘤细胞凋亡与Rho GTPases信号通路的活化相关。 展开更多
关键词 RhoGTPases信号通路 Α-突触核蛋白 人神经母细胞瘤细胞 凋亡
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牛磺酸对毒胡萝卜素致人神经母细胞瘤细胞凋亡的保护作用研究 被引量：2
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作者 王晶 宋云飞 《中医药导报》 2021年第5期54-57,77,共5页
目的:探讨牛磺酸调控内质网应激对毒胡萝卜素(TG)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)内质网应激模型的保护作用。方法:采用不同浓度的TG制备内质网TG+应激细胞模型,MTT法检测各组细胞的存活率筛选出适用于造模浓度。将细胞分为对照组、TG... 目的:探讨牛磺酸调控内质网应激对毒胡萝卜素(TG)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)内质网应激模型的保护作用。方法:采用不同浓度的TG制备内质网TG+应激细胞模型,MTT法检测各组细胞的存活率筛选出适用于造模浓度。将细胞分为对照组、TG组、TG+10μmol/L牛磺酸组、20μmol/L牛磺酸组及TG+4-苯基丁酸(4-PBA)阳性药组;MTT检测各组细胞存活能力;TUNEL染色检测各组细胞凋亡情况;试剂盒检测各组细胞中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性;Western blotting法检测各组细胞中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和转录因子C/EBP的同源蛋白(CHOP)蛋白表达的水平。结果:与对照组比较,用不同浓度TG处理的SH-SY5Y细胞存活能力显著降低,且TG致细胞内质网应激损伤的最佳造模条件为10μmol/L孵育24 h;与TG组比较,给予高、低剂量的牛磺酸均能显著改善受损细胞的形态,提高损伤细胞的存活率,减少TUNEL阳性细胞数,抑制Caspase-3的活性,降低GRP78和CHOP的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:牛磺酸可显著改善TG诱导SH-SY5Y细胞的形态,提高其存活能力,减少细胞凋亡,这种作用可能与抑制内质网应激活化有关。 展开更多
关键词 牛磺酸 内质网应激 毒胡萝卜素 细胞凋亡 葡萄糖调节蛋白78 人神经母细胞瘤细胞
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