目的:研究虎杖提取物对人肺癌A549细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用,并探讨其作用机制,为新药开发提供实验和理论依据。方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)法...目的:研究虎杖提取物对人肺癌A549细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用,并探讨其作用机制,为新药开发提供实验和理论依据。方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)法检测虎杖提取物对细胞诱导凋亡的情况;采用流式细胞仪检测A549细胞株的细胞周期分布相和细胞凋亡率;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡关键酶Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9与凋亡相关基因产物bcl-2,以及与细胞周期有关的p21ras、Ki-67蛋白的表达情况,深入探讨虎杖提取物对人肺癌细胞株诱导凋亡的机制。结果:(1)TUNEL法检测结果:虎杖提取物40μg/mL作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;加药组凋亡率与对照组相比有显著差异,同时凋亡指数呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)流式细胞仪检测结果显示:虎杖提取物可以诱导A549细胞凋亡,加药组出现G0/G1期和G2/M期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期细胞比例则明显下降,将细胞阻滞在G0/G1期;(3)免疫细胞化学结果表明:虎杖提取物作用后加药组Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达增强,Ki-67、p21ras蛋白随提取物浓度表达均降低,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:1.虎杖提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用。2.虎杖提取物抑制增殖作用机制可能与下调Ki-67、p21ras蛋白表达,细胞周期发生G0/G1期阻滞有关。3.虎杖提取物诱导凋亡作用机制可能与下调bcl-2蛋白表达,上调Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。展开更多
背景与目的:血管性血友病因子(von Willebr and factor,vWF)、整合素β3(integrinβ3)与肿瘤转移的机制目前研究不清楚。本研究目的是观察vWF与integrinβ3在人肺癌细胞H460中的表达,人肺癌细胞H460与vWF黏附的关系,两因子与肿瘤轻移的...背景与目的:血管性血友病因子(von Willebr and factor,vWF)、整合素β3(integrinβ3)与肿瘤转移的机制目前研究不清楚。本研究目的是观察vWF与integrinβ3在人肺癌细胞H460中的表达,人肺癌细胞H460与vWF黏附的关系,两因子与肿瘤轻移的相关性及vWF与integrinβ3的相互关系。方法:①应用免疫组化技术观察vWF及integrinβ3在人肺癌细胞株H460的表达;②联合应用vWF黏附实验、抗体抑制实验及MTT法,观察vWF及integrinβ3与人肺癌细胞H460的黏附,及vWF与integrinβ3的相互关系。结果:①免疫组化结果显示H460细胞均表达vWF及integrinβ3。②vWF可以与H460细胞黏附,Anti-integrinβ3抑制后这种黏附降低,A值由1.59±0.06降到0.55±0.03,(P=0.01619),Anti-vWF抑制后这种黏附也降低,A值由1.60±0.06降到0.54±0.03,(P=0.01598),两者抑制黏附效果相同。结论:H460细胞表达vWF及integrinβ3,vWF可以与H460细胞黏附,vWF可能通过与integrinβ3结合发挥黏附作用,从而促进肿瘤细胞转移。展开更多
文摘目的:研究虎杖提取物对人肺癌A549细胞株的抑制增殖及诱导凋亡作用,并探讨其作用机制,为新药开发提供实验和理论依据。方法:应用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick endlabeling,TUNEL)法检测虎杖提取物对细胞诱导凋亡的情况;采用流式细胞仪检测A549细胞株的细胞周期分布相和细胞凋亡率;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡关键酶Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9与凋亡相关基因产物bcl-2,以及与细胞周期有关的p21ras、Ki-67蛋白的表达情况,深入探讨虎杖提取物对人肺癌细胞株诱导凋亡的机制。结果:(1)TUNEL法检测结果:虎杖提取物40μg/mL作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;加药组凋亡率与对照组相比有显著差异,同时凋亡指数呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)流式细胞仪检测结果显示:虎杖提取物可以诱导A549细胞凋亡,加药组出现G0/G1期和G2/M期细胞比例显著增加(P<0.01),而S期细胞比例则明显下降,将细胞阻滞在G0/G1期;(3)免疫细胞化学结果表明:虎杖提取物作用后加药组Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9表达增强,Ki-67、p21ras蛋白随提取物浓度表达均降低,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.01)。结论:1.虎杖提取物在体外对人肺癌A549细胞株有显著的抑制增殖和诱导凋亡作用。2.虎杖提取物抑制增殖作用机制可能与下调Ki-67、p21ras蛋白表达,细胞周期发生G0/G1期阻滞有关。3.虎杖提取物诱导凋亡作用机制可能与下调bcl-2蛋白表达,上调Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白表达,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。
文摘背景与目的:血管性血友病因子(von Willebr and factor,vWF)、整合素β3(integrinβ3)与肿瘤转移的机制目前研究不清楚。本研究目的是观察vWF与integrinβ3在人肺癌细胞H460中的表达,人肺癌细胞H460与vWF黏附的关系,两因子与肿瘤轻移的相关性及vWF与integrinβ3的相互关系。方法:①应用免疫组化技术观察vWF及integrinβ3在人肺癌细胞株H460的表达;②联合应用vWF黏附实验、抗体抑制实验及MTT法,观察vWF及integrinβ3与人肺癌细胞H460的黏附,及vWF与integrinβ3的相互关系。结果:①免疫组化结果显示H460细胞均表达vWF及integrinβ3。②vWF可以与H460细胞黏附,Anti-integrinβ3抑制后这种黏附降低,A值由1.59±0.06降到0.55±0.03,(P=0.01619),Anti-vWF抑制后这种黏附也降低,A值由1.60±0.06降到0.54±0.03,(P=0.01598),两者抑制黏附效果相同。结论:H460细胞表达vWF及integrinβ3,vWF可以与H460细胞黏附,vWF可能通过与integrinβ3结合发挥黏附作用,从而促进肿瘤细胞转移。
