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巨噬细胞迁移抑制因子促进人胚胎干细胞分化为腹侧中脑多巴胺能神经祖细胞
1
作者 郑晓晗 冯晓丽 +7 位作者 胡兰 高仕君 魏艳召 黄婷 孙圣童 魏绪芳 王埮 赵振强 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第33期5348-5356,共9页
背景:细胞替代疗法是一种可以治疗帕金森病的非常有前景的方法。目前将人多能干细胞进行神经分化的主要方案是“双SMAD”抑制方案,利用阻断糖原合酶激酶3β来激活WNT通路信号,随后利用音猬因子信号与骨形态发生蛋白信号之间的调控相结合... 背景:细胞替代疗法是一种可以治疗帕金森病的非常有前景的方法。目前将人多能干细胞进行神经分化的主要方案是“双SMAD”抑制方案,利用阻断糖原合酶激酶3β来激活WNT通路信号,随后利用音猬因子信号与骨形态发生蛋白信号之间的调控相结合,可以精确地控制人多能干细胞从底板区域到顶板区域特异性的细胞命运。巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)是一类具有独特结构的多效免疫调节细胞因子,在多项研究中证明MIF对神经发育和分化非常重要。然而,MIF是否参与诱导干细胞的分化还是未知的。目的:在“双SMAD”抑制分化方案的基础上,通过在培养基中添加不同浓度MIF及其抑制剂(S,R)-3-(4-羟基苯基)-4,5-二氢-5-异噻唑乙酸甲酯(ISO-1),观察其对人胚胎干细胞分化为中脑多巴胺能祖细胞的影响,以期寻找解决人胚胎干细胞分化为中脑多巴胺能祖细胞过程异质性问题的新途径。方法:CCK8检测添加不同浓度MIF和ISO-1培养人胚胎干细胞的存活情况。免疫荧光法检测人胚胎干细胞上MIF受体CD74、CD44、CXCR7的表达。在胚胎干细胞分化16 d后,通过RT-qPCR和Western blot分别检测腹侧中脑标志物LMX1A、FOXA2、EN1、前脑标记物FOXG1、后脑标记物HOXA2、中脑基板标记物PAX6和Wnt1/β-catenin信号通路转录因子SOX6的表达水平。同时,通过免疫荧光法检测LMX1A、FOXA2、EN1、MAP2的表达。将胚胎干细胞继续分化到42 d后用免疫荧光法检测LMX1A、FOXA2、TH和GIRK2在多巴胺能神经元中的表达。结果与结论:(1)MIF在人胚胎干细胞内表达,其相关受体CD44和CXCR7也表达,但CD74不发生表达;(2)添加MIF后,促进了LMX1、FOXA2、EN1的蛋白表达,促进了LMX1、FOXA2的基因表达,同时明显抑制了FOXG1和HOXA2以及PAX6的基因与蛋白表达,有效抑制了分化的异质性;(3)添加MIF后,多巴胺能神经祖细胞中SOX6并未如预期那样高表达,反而在基因层面表达下降,而其抑制剂ISO-1则使SOX6表达在基因水平上轻度升高;(4)该研究证明了MIF在人胚胎干细胞的多巴胺能分化潜能与腹侧中脑命运决定中起着重要作用,MIF的干预进一步优化了神经诱导的区域定位。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 巨噬细胞迁移抑制因子 帕金森病 多巴胺能神经祖细胞 分化
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人胚胎干细胞来源角膜上皮样细胞用于治疗兔角膜缘干细胞缺乏
2
作者 杨哲 曾湘纹 +1 位作者 李钊 王丽强 《联勤军事医学》 CAS 2023年第7期553-558,共6页
目的 通过小分子化合物诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells, hESCs)分化为角膜上皮样细胞,观察角膜上皮样细胞治疗兔角膜缘干细胞缺乏(limbal stem cell deficiency, LSCD)的效果。方法 利用拟胚体联合小分子化合物方法,将hES... 目的 通过小分子化合物诱导人胚胎干细胞(human embryonic stem cells, hESCs)分化为角膜上皮样细胞,观察角膜上皮样细胞治疗兔角膜缘干细胞缺乏(limbal stem cell deficiency, LSCD)的效果。方法 利用拟胚体联合小分子化合物方法,将hESCs H9细胞系向角膜上皮样细胞分化,将角膜上皮样细胞在去上皮羊膜片上培养构建重组细胞膜片。选取造模成功的12只LSCD兔,按照随机数表法分为对照组和实验组,对照组接受去上皮的的羊膜片治疗,实验组接受角膜上皮样细胞膜片移植治疗。术后通过裂隙灯、前节照相等方法,对角膜透明度、新生血管、荧光素钠染色情况进行评分,并于移植后4周观察角膜病理切片结构。结果 成功将hESCs诱导为角膜上皮样细胞,细胞形状和结构类似角膜上皮细胞。病理结果显示,实验组的角膜形成复层上皮结构,上皮下炎症细胞浸润轻,治疗效果明显优于对照组。进行细胞移植治疗后发现,实验组的角膜透明度高、新生血管少,角膜评分明显优于对照组(P<0.05)。诱导后的角膜上皮样细胞的角膜上皮标记物ΔNP63和CK12的表达与hESCs H9相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 采用拟胚体联合小分子化合物可以成功诱导出角膜上皮样细胞,角膜上皮样细胞膜片移植到兔体内后可有效治疗LSCD。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 角膜上皮样细胞 角膜缘干细胞缺乏 小分子化合物
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烯醇化酶1通过影响mRNA定位调节人胚胎干细胞自我更新能力
3
作者 赫佳音 杨嘉宾 +2 位作者 陈仲扬 马艳妮 余佳 《基础医学与临床》 2023年第6期867-874,共8页
目的探究烯醇化酶1(ENO1)的表达对维持人胚胎干细胞(hESCs)自我更新能力的影响,并揭示其机制。方法预测与ENO1结合的RNA和蛋白质,并进行GO富集分析。在hESCs中通过shRNA抑制ENO1内源表达,集落形成实验及碱性磷酸酶染色(AP)检测hESCs的... 目的探究烯醇化酶1(ENO1)的表达对维持人胚胎干细胞(hESCs)自我更新能力的影响,并揭示其机制。方法预测与ENO1结合的RNA和蛋白质,并进行GO富集分析。在hESCs中通过shRNA抑制ENO1内源表达,集落形成实验及碱性磷酸酶染色(AP)检测hESCs的集落形成能力,荧光定量PCR检测hESCs的多能性及分化标志基因的表达变化,RNA荧光原位杂交技术检测带有polyA尾的RNA的定位变化。结果抑制ENO1的内源表达后,hESCs的集落形成能力得到了显著抑制(P<0.05),同时分化标志基因表达水平升高(P<0.001),带polyA尾的RNA的定位由分散在细胞质中变为集中在核内(P<0.001)。结论ENO1通过影响mRNA在细胞内的定位调控hESCs自我更新能力。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 烯醇化酶1 RNA结合蛋白 多能性 mRNA定位
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增强定向造血分化信号提高人胚胎干细胞向自然杀伤细胞生成的效率
4
作者 张朝晖 尹小凤 +7 位作者 徐博宁 毕清华 赖强强 季妍 刘涛 戴礼猛 刘高科 邓有才 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期839-846,共8页
目的探讨在造血分化阶段增强定向造血(DH)信号对人胚胎干细胞(hESCs)分化形成的自然杀伤(NK)细胞(也称为hESC-NK细胞)生成效率和功能的影响。方法hESC(H1)经离心法形成拟胚体,在诱导造血分化的第0至8天,对照组加入BMP4、VEGF、bFGF、SC... 目的探讨在造血分化阶段增强定向造血(DH)信号对人胚胎干细胞(hESCs)分化形成的自然杀伤(NK)细胞(也称为hESC-NK细胞)生成效率和功能的影响。方法hESC(H1)经离心法形成拟胚体,在诱导造血分化的第0至8天,对照组加入BMP4、VEGF、bFGF、SCF等细胞因子;而增强定向造血(DH)组在对照组的基础上添加WNT激动剂(CHIR99021)和Nodal-activin抑制剂(SB431542);进而采用一致的方法分化形成NK细胞。使用流式细胞术和靶细胞K562共培养等方法分析造血分化效率、NK细胞生成效率、体外效应功能及表面受体等相关分子表达。结果相较于对照组,DH组在造血分化阶段第8天动脉生血内皮细胞(CD34^(+)DLL4^(+))数量显著增加,原始造血相关细胞(CD34^(-)CD43^(+))显著降低(P<0.05)。在NK细胞分化第28天分析发现,DH组NK细胞(CD45^(+)CD56^(+))数量显著增加,效应功能相关分子IFN-γ、Granzyme B、Perforin、CD107a虽微弱上升,但无统计学差异,激活性受体CD16a和CD69明显增加,但NKP46显著降低,抑制性受体NKG2A显著增加,CD96显著降低(P<0.05)。结论在hESC向造血分化过程中增强定向造血信号,在不影响NK细胞体外功能的情况下显著提高NK细胞生成效率和CD16a表达,为提高hESC-NK细胞或iPSC-NK细胞生成效率提供了一种新的思路。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 自然杀伤细胞 定向造血 SB431542 CHIR99021
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小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞体外编程为神经前体细胞
5
作者 杨盼 王圆圆 +5 位作者 高群伟 刘阳 王翼 郭俣 刘长青 刘高峰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期360-367,共8页
目的通过小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞(HEFs)重编程为化学诱导神经前体细胞(ciNPCs)。方法HEFs重编程为ciNPCs涉及两个阶段,第1阶段是小分子组合诱导阶段,常氧条件下,将HEFs在含有小分子化合物组合VCR(VPA,CHIR99021,Repsox)的KS... 目的通过小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞(HEFs)重编程为化学诱导神经前体细胞(ciNPCs)。方法HEFs重编程为ciNPCs涉及两个阶段,第1阶段是小分子组合诱导阶段,常氧条件下,将HEFs在含有小分子化合物组合VCR(VPA,CHIR99021,Repsox)的KSR培养基中培养15 d,HEFs形态发生变化,形成致密细胞集落。第2阶段是特异性诱导ciNPCs,将形成的细胞集落胰酶消化后,低粘附板中悬浮培养,可以形成ciNPCs神经球。采用CM-DiI染料标记P3代ciNPCs,并将其移植于6-OHDA法制作的帕金森大鼠模型右脑内侧前脑束(MFB)区,检测ciNPCs在PD大鼠脑内微环境中的存活、迁移以及分化状况。结果VCR组合诱导10 d细胞开始出现明显的聚集趋势,15 d时,形成致密的细胞集落。单层培养1×10^(5)/孔中大约形成40个克隆,且AP染色呈阳性。将细胞集落消化后,低粘附板中悬浮培养培养2 d,可见大量神经球形成,即为第1代ciNPCs(P1代)。ciNPC高表达神经前体细胞(NPCs)特异性标记物(Nestin、Pax6和Sox2),经体外神经特异性诱导分化,ciNPCs表达神经元特异性标记物Tuj1和星形胶质细胞特异性标记物GFAP。而且,P3代ciNPCs移植PD大鼠脑内4周后,可以分化为Tuj1+、GFAP+、TH+和GABA+细胞。结论VCR可以将HEFs重编程为ciNPCs,而无需引入外源性基因,为神经科学研究和神经退行性疾病的治疗提供有利的供体材料。 展开更多
关键词 小分子化合物组合 细胞重编程 人胚胎成纤维细胞 神经前体细胞
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L-抗坏血酸促进人胚胎干细胞向心肌细胞分化的研究
6
作者 陈景 邱敏 +3 位作者 张海鹏 李慧丽 张梦珍 李晓红 《生物医学工程与临床》 CAS 2023年第5期545-552,共8页
目的用不同浓度的L-抗坏血酸(VitC)作为分化基础培养液中的诱导剂,观察其对人胚胎干细胞(hESC)分化为心肌细胞的影响,探寻一种成分明确、成本低廉且高效的诱导方法。方法复苏hESC,使用干细胞培养液培养至细胞融合度90%后,分别用含不同浓... 目的用不同浓度的L-抗坏血酸(VitC)作为分化基础培养液中的诱导剂,观察其对人胚胎干细胞(hESC)分化为心肌细胞的影响,探寻一种成分明确、成本低廉且高效的诱导方法。方法复苏hESC,使用干细胞培养液培养至细胞融合度90%后,分别用含不同浓度(0、10、20、30、40、50、60、70μmol/L)VitC的分化培养液对其进行诱导分化,在光学显微镜下观察分化过程。用实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)分别检测干细胞特异性标志物Nanog和性别决定因子同源盒2(Sox2),心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心脏特异性同源盒转录因子(Nkx2.5)的表达。用免疫荧光检测Nanog、cTnT、Nkx2.5的蛋白表达变化。结果在分化基础培养液中,低浓度VitC(10~30μmol/L)不能诱导h ESC向心肌分化,随着VitC浓度的增高,干细胞逐渐往心肌方向分化,心肌分化效率逐渐提高,Nanog和Sox2的表达量逐渐下降;VitC浓度为40μmol/L或50μmol/L组在第8天开始出现自发跳动细胞,且有cTnT和Nkx2.5阳性表达。realtime PCR结果显示随分化时间延长,cTnT和Nkx2.5的mRNA表达逐渐增加,心肌表面标志物Nkx2.5、cTnT的mRNA表达量在VitC浓度40μmol/L和50μmol/L要比60μmol/L和70μmol/L的诱导效果更高。提示浓度大于60μmol/L就开始出现抑制分化的作用。结论实验研究证实VitC在hESC向心肌分化中是不可或缺的因子,研究还明确了VitC诱导h ESC分化为心肌细胞的适宜浓度范围。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞(hESC) 心肌分化 心肌细胞 L-抗坏血酸(VitC) 维生素C
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人胚胎嗅鞘细胞与神经干细胞联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的研究 被引量：8
7
作者 尹国栋 汤逊 +2 位作者 林月秋 徐永清 周田华 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期680-682,719,F0005,共5页
目的:探索人胚胎嗅鞘细胞(hOECs)与神经干细胞(hNSCs)联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。方法:制作Wistar大鼠脊髓全横断模型,9—10d后,分别将取材自人胎脑的hOECs和hNSCs移植到脊髓损伤处(联合移植组),并设hOECs移植组、hNSCs... 目的:探索人胚胎嗅鞘细胞(hOECs)与神经干细胞(hNSCs)联合移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。方法:制作Wistar大鼠脊髓全横断模型,9—10d后,分别将取材自人胎脑的hOECs和hNSCs移植到脊髓损伤处(联合移植组),并设hOECs移植组、hNSCs移植组和对照组,移植术后第1、2、4、6、8、10周进行BBB运动功能评分,取材行荧光化学(Hoechst33342)和免疫组织化学染色(P75、NF-200、GFAP、Synaptophysin)观察。结果:术后4—10周,hNSCs组、hOECs组和联合移植组的BBB评分较对照组明显提高(P<0.05),其中,联合移植组的运动功能改善更显著。免疫组化染色显示,hNSCs可以在损伤脊髓内存活10周以上,并分化为神经元或星形胶质细胞,联合移植组和hOECs组P75染色呈阳性反应,hOECs与hNSCs联合移植可促进神经突触的形成,恢复神经元之间的联系。结论:hOECs和hNSCs联合移植可促进脊髓全横断损伤大鼠神经突触的再生,改善其肢体运动功能。 展开更多
关键词 脊髓损伤 人胚胎嗅鞘细胞 人胚胎神经干细胞 BBB评分
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人胚胎成纤维细胞的分离、培养和鉴定及人胚胎生殖细胞体外生长所需细胞因子的表达 被引量：14
8
作者 王英 何津 李玉林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期245-248,共4页
目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物... 目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物学特性（细胞形态、细胞生长特点、细胞周期）。采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测hEFs表达成纤维细胞特异性标志（脯氨酰4-羟化酶β亚单位）和上皮细胞特异性标志（细胞角蛋白4）的情况,对该细胞进行鉴定。应用RT-PCR检测hEG生长所需的重要细胞因子的表达,即碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和白血病抑制因子（LIF）。结果：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中成功地分离培养出hEFs,该细胞可传25代以上,且经过传代及冻存复苏后生物学特性无改变;hEFs表达脯氨酰4-羟化酶β亚单位,不表达细胞角蛋白4,确定其为成纤维细胞;该成纤维细胞表达bFGF和LIF。结论：成功地分离和培养了人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源的成纤维细胞,证明其表达对于hEG体外生长起重要作用的细胞因子。 展开更多
关键词 人胚胎成纤维细胞 人胚胎生殖细胞 细胞培养
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人胚胎干细胞建系的研究现状与存在的问题 被引量：3
9
作者 孟国良 尚克刚 丁明孝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期131-135,共5页
人胚胎干细胞系的建立 ,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义 ;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程 ,就建系的几种方案、路线、意义和可... 人胚胎干细胞系的建立 ,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义 ;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程 ,就建系的几种方案、路线、意义和可行性进行了探讨 ;详细系统地说明了迄今为止建立人胚胎干细胞系所需要的饲养层类型、培养基组成、添加细胞因子种类及其作用 ;分析了建立和维持人胚胎干细胞系所需消化酶的种类及其作用以及目前常用的几种传代方法 ;从若干方面总结了人胚胎干细胞系的鉴定方法 ,并对建立和维持人胚胎干细胞系中存在的若干问题进行了剖析 。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 人胚胎生殖细胞 多能性 分化 端粒酶
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改良三维条件下人胚胎干细胞向内皮细胞的分化及功能 被引量：2
10
作者 苏位君 王宝玉 +5 位作者 宋祥和 王丽娜 刘艳华 周曼倩 童玲玲 李宗金 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期539-544,共6页
目的建立一种改良的三维分化无血清方法,对人胚胎干细胞(hESCs)向内皮细胞进行分化,并对这种方法得到的人胚胎干细胞来源内皮细胞(hESC-ECs)进行功能检测。方法在低附着培养皿中培养未分化的H9 hESCs12 d,使其形成类胚体(EBs),12 d后将... 目的建立一种改良的三维分化无血清方法,对人胚胎干细胞(hESCs)向内皮细胞进行分化,并对这种方法得到的人胚胎干细胞来源内皮细胞(hESC-ECs)进行功能检测。方法在低附着培养皿中培养未分化的H9 hESCs12 d,使其形成类胚体(EBs),12 d后将已形成的EBs收集起来,用浓度为1.5 mg/ml的Ⅰ型鼠尾胶原重悬,加入六孔板中,在37℃待胶原凝固后加入EGM-2培养基培养3 d,获得出芽类胚体后用0.25%胶原酶Ⅰ和0.56 U/ml LiberaseBlendzyme消化芽生类胚体各20 min,采用流式技术分选出其中CD31阳性的细胞,并用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)摄取实验和成管实验验证这部分细胞的内皮细胞功能。结果建立了一种基于胶原培养环境的三维分化方法,采用这种方法能够将hESCs向内皮细胞分化的效率提高到18%,最终获得的hESC-ECs具有和人脐带静脉内皮细胞(HU-VECs)相似的细胞表面标志物,并在乙酰化LDL吞噬实验和血管新生实验中表现出良好的内皮细胞功能。结论建立的改良三维分化方法能够明显提高hESCs向内皮细胞的分化效率,是一种简单高效的分化方法,同时无血清培养方法为将来hESC-ECs的临床应用提供了可能。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 人胚胎干细胞来源内皮细胞 三维分化法 CD31
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人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞生长的作用
11
作者 王莉 曹宇静 段恩奎 《Developmental and Reproductive Biology》 2001年第B10期108-108,共1页
关键词 人胚胎成纤维细胞 人胚胎生殖细胞 生长 培养
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人胚胎肾小体和肾小管的发育 被引量：16
12
作者 朱平 姜叙诚 +4 位作者 金连弘 张亚坤 宋雁南 吴振铎 李学钧 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期414-417,共4页
对３２例（８～２８周）人胚胎肾进行光镜、透射电镜和扫描电镜观察。结果表明：胚胎肾小体的发育可分为原始期（ⅠＳ）、发育期（ⅡＳ）和成熟期（ⅢＳ）３个阶段。８周胚肾有少量ⅡＳ肾小体，并形成滤过膜的３层结构。２０周胎儿肾内... 对３２例（８～２８周）人胚胎肾进行光镜、透射电镜和扫描电镜观察。结果表明：胚胎肾小体的发育可分为原始期（ⅠＳ）、发育期（ⅡＳ）和成熟期（ⅢＳ）３个阶段。８周胚肾有少量ⅡＳ肾小体，并形成滤过膜的３层结构。２０周胎儿肾内约３０％肾小体达ⅢＳ。２８周胎儿肾内约５０％肾小体达ⅢＳ。肾小管的发育与所属肾小体的发育程度相应，可分为分化早期、发育期和成熟期３个阶段。８周胚肾可见少量发育期的近端小管和远端小管。１２周胎儿肾内可见发育期髓袢细段。２０周胎儿肾内成熟期肾小管数量增多。 展开更多
关键词 肾小体 肾小管 超微结构 发育 人胚胎
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人参总皂苷对人胚胎神经干细胞增殖及定向诱导为多巴胺能神经元的影响 被引量：17
13
作者 王莎莉 李英博 +1 位作者 王亚平 冯敏 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第13期1310-1313,共4页
目的：探讨人参总皂苷（TSPG）对人胚胎神经干细胞（NSC）增殖和分化为多巴胺（DA）能神经元的影响。方法：从7～12周人工流产胚胎脑组织中分离培养人胚胎NSC,免疫细胞化学鉴定NSC特异性nestin抗原表达,在NSC的培养体系中加入TSPG,采用... 目的：探讨人参总皂苷（TSPG）对人胚胎神经干细胞（NSC）增殖和分化为多巴胺（DA）能神经元的影响。方法：从7～12周人工流产胚胎脑组织中分离培养人胚胎NSC,免疫细胞化学鉴定NSC特异性nestin抗原表达,在NSC的培养体系中加入TSPG,采用流式细胞术和MTT法检测不同浓度TSPG以及TSPG与EGF,bFGF联合应用对人胚胎NSC增殖的影响;经免疫细胞化学检测培养细胞酪氨酸羟化酶（TH）表达,分析不同浓度TSPG以及TSPG与IL-1联合应用对NSC定向诱导为DA能神经元的影响。结果：TSPG对NSC的增殖有促进作用,TSPG与EGF、bFGF联合应用的促增殖作用是EGF和bFGF联合应用时的2倍;TSPG能促进神经干细胞定向分化为DA能神经元,TSPG与IL-1联合诱导的效果是单用IL-1的5倍。结论：TSPG能促进人胚胎NSC的增殖,并能诱导NSC向DA能神经元分化。 展开更多
关键词 人参总皂苷 人胚胎 神经干细胞 多巴胺能神经元
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人胚胎海马发育的形态学研究　Ⅴ.室管膜的发生 被引量：6
14
作者 邓锦波 蔡琰 +4 位作者 邱建勇 鞠躬 苏敏 孙晓江 张毅 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期137-142,共6页
运用HE和Nissl染色、免疫组织化学法、透射电镜及扫描电镜，对60例6周至足月的人胚胎海马室管膜上皮变化进行了观察。发现胚胎发育过程中室管膜发生了剧烈变化。最早室管层神经上皮细胞为假复层柱状，随着未分化细胞向外迁徙，海马室管... 运用HE和Nissl染色、免疫组织化学法、透射电镜及扫描电镜，对60例6周至足月的人胚胎海马室管膜上皮变化进行了观察。发现胚胎发育过程中室管膜发生了剧烈变化。最早室管层神经上皮细胞为假复层柱状，随着未分化细胞向外迁徙，海马室管膜层神经上皮细胞迅速增殖，形成复层上皮。当室管膜层细胞停止迁徙时，室管膜开始向假复层柱状及单层柱状上皮转变。电镜观察，胚胎早期神经上皮细胞由未分化细胞构成；其特点是，细胞质内各种特化细胞器匮乏，但糖原丰富。15周左右未分化细胞开始向长突细胞及室管膜细胞分化。长突细胞电子密度高，底部有细长突起，表面有微绒毛，胞质内微丝丰富；而室管膜细胞电子密度低，底部无突起，但表面有丰富的纤毛。对长突细胞及免疫组化染色的GFAP阳性细胞进行形态和发育特征的比较，提示两者属同一类细胞。扫描电镜下，15周前室管膜表面微绒毛较多，以后纤毛逐步发育，大量密集纤毛布满于室管膜表面。此外，还能见到一类接触脑脊液神经元，这类神经元可为多极或双极，并有突起伸入室管膜上皮内。 展开更多
关键词 海马 人胚胎 发育 室管膜 形态学 发生
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人胚胎干细胞饲养层的制备及生物学活性 被引量：7
15
作者 胡嘉波 麻全慧 +4 位作者 胡三强 周中卫 王晓慧 钱晖 许文荣 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第23期4233-4236,共4页
背景:建立一种既可以大量制备,又能保存并保持较高活性的饲养层是胚胎干细胞培养研究不可缺少的环节。目的:体外分离培养、冻存复苏ICR小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性。方法:取ICR小鼠13.5d胚胎,用胰蛋白酶分步消化法分离培养小... 背景:建立一种既可以大量制备,又能保存并保持较高活性的饲养层是胚胎干细胞培养研究不可缺少的环节。目的:体外分离培养、冻存复苏ICR小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性。方法:取ICR小鼠13.5d胚胎,用胰蛋白酶分步消化法分离培养小鼠成纤维细胞,对冻存复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞形态、生长曲线、贴壁率、细胞化学染色及支持人胚胎干细胞生长特性等进行观察。结果与结论:复苏后的小鼠胚胎成纤维细胞在体外传代30min时80%以上细胞贴壁,生长曲线显示细胞增殖活跃,细胞化学染色AKP、PAS、POX阴性,能长期支持人胚胎干细胞传代生长。提示此方法所获得的小鼠胚胎成纤维细胞复苏后有较高的生物学活性,可为人胚胎干细胞扩增提供稳定、优质的饲养层细胞。 展开更多
关键词 小鼠胚胎成纤维细胞 ICR小鼠 人胚胎干细胞 冻存 复苏
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神经生长导向因子Slit mRNA在人胚胎脊髓的原位杂交定位 被引量：6
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作者 闵敏 丁新生 +3 位作者 田向阳 王枫 邓晓萱 姚娟 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期337-338,共2页
目的　检测神经生长导向因子SlitmRNA在人胚胎脊髓中的定位表达。方法　地高辛标记的cRNA探针原位杂交技术。结果　SlitmRNA在脊髓中央管、前角和后角处表达。结论　神经生长导向因子Slit在人胚胎脊髓发育期轴突投射和神经通路形成中可... 目的　检测神经生长导向因子SlitmRNA在人胚胎脊髓中的定位表达。方法　地高辛标记的cRNA探针原位杂交技术。结果　SlitmRNA在脊髓中央管、前角和后角处表达。结论　神经生长导向因子Slit在人胚胎脊髓发育期轴突投射和神经通路形成中可能起重要作用。 展开更多
关键词 神经生长导向因子 人胚胎 脊髓 原位杂交定位 轴突 神经通路 CRNA探针
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人脐带间充质干细胞作为维持人胚胎干细胞生长饲养层细胞的研究 被引量：10
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作者 刘峰 徐永胜 +2 位作者 俞海燕 王薇 张纯 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2011年第4期271-276,I0009,共7页
目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长... 目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长状态。用胶原酶消化法分离人脐带间充质干细胞,光镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测其表面标志;诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞进行分化。将人胚胎干细胞系H1接种于丝裂霉素C灭活后的人脐带间充质干细胞上,每隔5d进行一次传代。培养20代后,对人胚胎干细胞特性进行相关检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因的表达、分化能力。结果从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞高表达CD44、CD29、CD73、CD105、CD90、CD86、CD147、CD117,不表达CD14、CD38、CD133、CD34、CD45、HLA-DR;具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的潜能。人胚胎干细胞在人脐带间充质干细胞饲养层上培养20代后,继续保持人胚胎干细胞的典型形态,碱性磷酸酶染色为阳性,免疫荧光染色显示OCT4、Nanog、SSEA4、TRA-1-81、TRA-1-60的表达为阳性,SSEA1表达为阴性,体外悬浮培养可以形成拟胚体。结论人脐带间充质干细胞可以作为人胚胎干细胞的饲养层细胞,支持其生长,并维持其未分化生长状态。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 人脐带间充质干细胞 饲养层细胞 临床应用
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sonic hedgehog信号通路蛋白在人胚胎前列腺发育不同阶段的表达及意义 被引量：4
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作者 朱国栋 贺大林 +4 位作者 何辉 张林琳 王新阳 Zhau E Haiyen Chung Leland WK 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2006年第10期896-899,共4页
目的：探明sonic hedgehog信号通路中几个关键的效应蛋白sonic hedgehog（SHH）、Patchedl（PTC1）、Smoothened（SMO）及GLI1在人胚胎前列腺组织中的定位表达及变化.方法：应用免疫组织化学方法研究SHH、PTC1、SMO及GLI1在不同胎龄（10... 目的：探明sonic hedgehog信号通路中几个关键的效应蛋白sonic hedgehog（SHH）、Patchedl（PTC1）、Smoothened（SMO）及GLI1在人胚胎前列腺组织中的定位表达及变化.方法：应用免疫组织化学方法研究SHH、PTC1、SMO及GLI1在不同胎龄（10～39周）人胚胎前列腺组织中的表达变化情况.结果：随胎龄增大,SHH、PTC1、SMO及GLI1在前列腺组织中的表达水平呈由弱变强,由强渐弱,又由弱转强的双峰变化趋势.SHH和SMO仅表达在胚胎前列腺上皮细胞中;而PTC1和GLI1主要表达在上皮细胞外,也可表达在腺体周围的间质中.结论：SHH信号通路参与了人胚胎前列腺发育的调控过程,可能对于腺体发育初期的诱导发生,以及后期的增殖、分化都具有重要的调控作用. 展开更多
关键词 sonic HEDGEHOG patched1 SMOOTHENED GLI1 人胚胎前列腺
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人胚胎嗅鞘细胞移植修复大鼠脊髓全横断损伤 被引量：5
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作者 尹国栋 汤逊 +2 位作者 林月秋 徐永清 周田华 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第14期1093-1095,i0002,共4页
[目的]探索人胚胎嗅鞘细胞（hOECs）移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。[方法]分离、培养并鉴定人胚嗅鞘细胞，24只Wistar大鼠，随机分为实验组和对照组，均行T10节段脊髓全横断。术后第9～10d，实验组、对照组分别移植Hoechst33342... [目的]探索人胚胎嗅鞘细胞（hOECs）移植修复大鼠脊髓全横断损伤的可行性。[方法]分离、培养并鉴定人胚嗅鞘细胞，24只Wistar大鼠，随机分为实验组和对照组，均行T10节段脊髓全横断。术后第9～10d，实验组、对照组分别移植Hoechst33342标记的hOECs 5μl（2．5×10^5个细胞）、DMEM—F12培养基5μl。移植术后第1、2、4、6、8、10周进行BBB运动功能评分，取材行荧光化学（Hoechsd3342）和免疫组织化学染色（P75、NF-200、Synaptophysin）。双盲条件下进行数据统计。[结果]移植的hOECs可以在损伤脊髓内存活10周以上，可向损伤脊髓头尾两端迁移；术后4～10周实验组的BBB运动功能评分明显高于对照组（P〈0．01）；P75染色实验组呈阳性反应；NF-200和Synaptophysin免疫组化染色，实验组神经纤维、突触数目和密度都较对照组高。[结论]hOECs移植对脊髓全横断损伤大鼠运动功能恢复具有促进作用。 展开更多
关键词 脊髓损伤 人胚胎嗅鞘细胞 细胞移植 BBB评分
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Wnt3a和Activin A共同促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化 被引量：6
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作者 周静 李进 +1 位作者 林戈 卢光琇 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第4期37-41,共5页
【目的】研究Wnt3a和ActivinA存限定性内胚层诱导中共同作用的最佳时间窗。【方法】在无饲养层体系培养的人胚胎于细胞中，加入25ng／mLWnt3a和100ng／mLActivinA，共同作用不同时间（1～4d），收集不同作用时间点（0，1，2，3，4，5d... 【目的】研究Wnt3a和ActivinA存限定性内胚层诱导中共同作用的最佳时间窗。【方法】在无饲养层体系培养的人胚胎于细胞中，加入25ng／mLWnt3a和100ng／mLActivinA，共同作用不同时间（1～4d），收集不同作用时间点（0，1，2，3，4，5d）细胞，对原条、内中胚层前体标记Brachyury及限定性内胚层标记Sox17分别进行免疫荧光染色，统计阳性细胞总数，计算阳性细胞率。以看家基阕β-actin作为对照，采用RTPCR方法对原肠作用基因（Goosecoid（GSC）、Mixll）及三胚层发育相关基因（内胚层基因Sox17、Foxa2，内中胚层前体基因Braarchyury，中胚层基因Flk-1，外胚层基闪Pax6，胚外内胚层基因Sox7、CDX2）的表达进行检测。【结果]Wnt3a与ActivinA共同作用1～4d，均能获得限定性内胚层细胞，其中二者共同作用1d分别能获得（78．9±7．3）％Brachyury阳性细胞和（85．2±3．8）％的Sox17阳性细胞。RTPCR结果显示，在Wnt3a与ActivinA共同作用下，原肠作用基因及三胚层发育相关基因表达的时间有差异。【结论】Wnt3a和ActivinA共同作用1d，是有效促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的最佳作用时间窗。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 限定性内胚层 WNT3A ACTIVIN A
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