人胚胎成纤维细胞的分离、培养和鉴定及人胚胎生殖细胞体外生长所需细胞因子的表达 被引量：14

1

作者 王英 何津 李玉林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期245-248,共4页

目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物... 目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物学特性（细胞形态、细胞生长特点、细胞周期）。采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测hEFs表达成纤维细胞特异性标志（脯氨酰4-羟化酶β亚单位）和上皮细胞特异性标志（细胞角蛋白4）的情况,对该细胞进行鉴定。应用RT-PCR检测hEG生长所需的重要细胞因子的表达,即碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和白血病抑制因子（LIF）。结果：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中成功地分离培养出hEFs,该细胞可传25代以上,且经过传代及冻存复苏后生物学特性无改变;hEFs表达脯氨酰4-羟化酶β亚单位,不表达细胞角蛋白4,确定其为成纤维细胞;该成纤维细胞表达bFGF和LIF。结论：成功地分离和培养了人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源的成纤维细胞,证明其表达对于hEG体外生长起重要作用的细胞因子。 展开更多

关键词 人胚胎成纤维细胞 人胚胎生殖细胞 细胞培养

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SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达 被引量：2

2

作者 李芳 陈永珍 +2 位作者 陈谦 朱旻 张苏 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期21-24,共4页

分离5~9周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,采用组织块法进行体外培养,免疫细胞化学染色法检测SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达,以证实利用组织块体外培养所获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。结果表明:组织块体... 分离5~9周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,采用组织块法进行体外培养,免疫细胞化学染色法检测SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT在人胚胎生殖细胞中的表达,以证实利用组织块体外培养所获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。结果表明:组织块体外培养得到的细胞或细胞集落均阳性表达SSEA-1、SSEA-3、Oct-4及hTERT,说明组织块体外培养获得的细胞为未分化的人胚胎生殖细胞。 展开更多

关键词 人胚胎生殖细胞 SSEA-1 SSEA-3 OCT-4 HTERT 表达

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以转染白血病抑制因子基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞 被引量：1

3

作者 李芳菲 刘永刚 +2 位作者 王建伟 王莎莉 王亚平 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期310-314,共5页

目的以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础。方法将LIF真核表达载体pcDNA3.1(+)-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LI... 目的以转染白血病抑制因子(LIF)基因的人胚肺成纤维细胞为饲养层培养人胚胎生殖细胞,为建立无动物成分污染的人胚胎生殖细胞培养体系奠定基础。方法将LIF真核表达载体pcDNA3.1(+)-LIF转染到人胚肺成纤维细胞中,通过筛选和鉴定获得表达LIF的阳性细胞。将原始生殖细胞(PGCs)种植到转染后细胞制备而成的饲养层上,在不添加外源性LIF的条件下培养,并对PGCs来源的细胞集落进行鉴定。结果经RT-PCR及Western blotting鉴定证实,转染pcDNA3.1(+)-LIF的人胚肺成纤维细胞表达LIF基因。在转染后人胚肺成纤维细胞上生长的PGCs可形成典型的鸟巢状集落,经检测集落碱性磷酸酶活性呈强阳性,表达胚胎阶段特异性抗原SSEA-1、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81,及未分化标志Oct-4。结论用转染LIF基因后的人胚肺成纤维细胞作为饲养层能支持PGCs来源人胚胎生殖细胞的生长,维持自我更新。 展开更多

关键词 人胚肺成纤维细胞 白血病抑制因子 饲养层 逆转录聚合酶链反应 免疫印迹法 人胚胎生殖细胞

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人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源的成纤维样细胞作为饲养层体外培养人胚胎生殖细胞方法的建立

4

作者 何津 王英 +1 位作者 张晓霞 李玉林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期894-898,924,F0003,共7页

目的:研究以来源于人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜的成纤维样细胞为饲养层,体外培养人胚胎生殖细胞(hEG)。方法:分离培养孕5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中的成纤维样细胞,以该细胞作为饲养层,体外原代培养来源于孕5～9周人胚胎的生殖腺... 目的:研究以来源于人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜的成纤维样细胞为饲养层,体外培养人胚胎生殖细胞(hEG)。方法:分离培养孕5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中的成纤维样细胞,以该细胞作为饲养层,体外原代培养来源于孕5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜组织的hEG。免疫荧光染色法、碱性磷酸酶染色法和体外分化实验用于鉴定所培养的hEG。结果:成功分离培养人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源的成纤维样细胞,可传至25代以上,并保持状态稳定,3～15代人胚胎成纤维样细胞用于制备饲养层。21例hEG原代培养中,有7例获得明显增殖的hEG细胞集落,目前传到第10代,仍然保持碱性磷酸酶、胚胎阶段性表面抗原(SSEA)-1、SSEA-4和POU转录因子Octamer-4(Oct-4)的表达为强阳性,并具有向3个胚层细胞分化的能力。结论:成功利用人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜的成纤维样细胞作为饲养层细胞,获得了能够增殖并保持未分化状态和多向分化潜能的hEG,建立了一种新的hEG培养方法,为hEG的体外培养建系奠定基础。 展开更多

关键词 胚胎成纤维细胞 人胚胎生殖细胞 细胞培养

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人胚胎生殖细胞饲养层的制备

5

作者 姜蓉 黎晓莉 +1 位作者 吴宏 王璐 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1440-1444,共5页

目的:建立稳定高效的人包皮成纤维细胞(Human foreskin fibroblasts,HFF)饲养层培养体系,用于培养人胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs)。方法:取4～5岁小儿包皮,采用机械法和组织消化法分离、培养成纤维细胞,倒置相差显微镜观察... 目的:建立稳定高效的人包皮成纤维细胞(Human foreskin fibroblasts,HFF)饲养层培养体系,用于培养人胚胎生殖细胞(Embryonic germ cells,EGCs)。方法:取4～5岁小儿包皮,采用机械法和组织消化法分离、培养成纤维细胞,倒置相差显微镜观察细胞生长状况,免疫细胞化学法、MTT法、流式细胞术检测细胞纯度、生长曲线及细胞周期,筛选丝裂霉素C作用的最佳浓度和时间。分离5～11周人胚胎原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)并培养于经丝裂霉素C处理的HFF饲养层上,观察人EGCs生长情况。结果:机械法和组织消化法结合分离HFF方法可靠,纯度高,细胞生长活性好,能快速进入对数生长期,细胞周期与细胞生长曲线保持一致,细胞可以传60代以上,P3～P30代均适宜作饲养层;丝裂霉素C抑制细胞增殖的适宜浓度及时间为12.5 mg/L作用2.5 h;分离的人PGCs在该饲养层上培养可形成典型的EGCs集落,体外连续培养超过3代。结论:HFF饲养层能有效地支持人EGCs的生长。 展开更多

关键词 人胚胎生殖细胞 包皮成纤维细胞 饲养层

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人胚胎生殖细胞体外培养条件优化及细胞移植实验研究

6

作者 李芳 陈永珍 +1 位作者 张于娟 李金 《南通大学学报（医学版）》 2008年第6期415-418,共4页

目的:优化人胚胎生殖细胞(EG细胞)的体外培养体系,并将生长状态良好的传代的人EG细胞移植用于大鼠心肌梗死模型的治疗。探讨人胚胎生殖细胞进行异种移植对大鼠心肌梗死的治疗机制。方法:取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,用添加和... 目的:优化人胚胎生殖细胞(EG细胞)的体外培养体系,并将生长状态良好的传代的人EG细胞移植用于大鼠心肌梗死模型的治疗。探讨人胚胎生殖细胞进行异种移植对大鼠心肌梗死的治疗机制。方法:取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,用添加和不添加细胞因子的两种培养体系对比进行组织块原代及传代培养,选取生长情况良好的传至第4代的人EG细胞,移植到急性心肌梗死大鼠的梗死心肌周围,分别于移植后1天、1、2、4周处死大鼠,以鼠抗人细胞核抗体MAB1281作为示踪剂,通过免疫组化方法检测移植细胞的分布。结果:在培养液中添加LIF和b-FGF后原代及传代培养的人EG细胞生长旺盛,形成集落更早,传到第4代形成的集落体积变化不大:移植组人EG细胞在移植后1天、1周、2周、4周均可以在心梗区域观察到MAB1281阳性细胞。结论:添加LIF和b-FGF的培养体系是更高效的人EG细胞培养体系。人EG细胞可异种移植,人EG细胞在大鼠心肌梗死处由心外膜层逐渐向心肌层迁移。 展开更多

关键词 人胚胎生殖细胞 白血病抑制因子 碱性成纤维细胞生长因子 心肌梗死 细胞移植

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人胚胎生殖细胞移植于梗死心肌后不同时期心肌特异转录因子GATA-4的表达

7

作者 张于娟 李芳 +2 位作者 余水长 李金 陈永珍 《交通医学》 2008年第6期611-614,共4页

目的：探讨人胚胎生殖细胞（hEGCs）移植入急性心肌梗死大鼠心肌组织后，移植细胞早期心肌特异转录因子GATA-4的表达。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜，进行人EG细胞的组织块原代及传代培养，以传四代的人EG细胞为移植细胞... 目的：探讨人胚胎生殖细胞（hEGCs）移植入急性心肌梗死大鼠心肌组织后，移植细胞早期心肌特异转录因子GATA-4的表达。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜，进行人EG细胞的组织块原代及传代培养，以传四代的人EG细胞为移植细胞。40只SD大鼠随机分为两组，移植组将获得的人EG细胞移植到急性心肌梗死大鼠的梗死心肌边缘：对照组用同样的方法给急性心肌梗死大鼠注入PBS。于移植后1天，1、2、4周处死大鼠。用免疫组化方法检测心肌特异转录因子GATA-4在移植细胞的表达。结果：移植后1天，1、2、4周移植组均有移植细胞稳定存活，GATA—4的表达在移植1天时呈弱阳性，1周及2周时呈阳性，4周时强阳性；对照组均未检测出移植细胞及心肌细胞转录因子。结论：随着移植时问的延长，移植细胞GATA-4表达呈增强趋势，移植后4周表达强度最大。 展开更多

关键词 人胚胎生殖细胞 GATA-4 心肌梗死

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人胚胎成纤维细胞对人胚胎生殖细胞生长的作用

8

作者 王莉 曹宇静 段恩奎 《Developmental and Reproductive Biology》 2001年第B10期108-108,共1页

关键词 人胚胎成纤维细胞 人胚胎生殖细胞 生长 培养

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人胚胎生殖细胞的初步分化研究

9

作者 王莉 刘为敏 段恩奎 《Developmental and Reproductive Biology》 2001年第B10期115-115,共1页

关键词 人胚胎生殖细胞 培养 分化

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人胚胎生殖细胞移植治疗猪心肌梗死

10

作者 陈彦君 李芳 +5 位作者 张于娟 孙辉 许梅杰 沈耀耀 朱旻 陈永珍 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1039-1042,共4页

目的：研究人胚胎生殖细胞（EG细胞）移植猪心肌梗死区存活及心肌再生作用。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴，采用组织块培养法体外培养获得人胚胎生殖细胞。取太湖小型猪2只，分移植组和对照组，开胸结扎冠状动脉左前降支制作心肌梗死... 目的：研究人胚胎生殖细胞（EG细胞）移植猪心肌梗死区存活及心肌再生作用。方法：取5～10周人胚胎生殖腺嵴，采用组织块培养法体外培养获得人胚胎生殖细胞。取太湖小型猪2只，分移植组和对照组，开胸结扎冠状动脉左前降支制作心肌梗死模型。术后2周处死猪，取出心肌组织，以鼠抗人细胞核抗体MABl281作为示踪剂，免疫组织化学检测移植细胞的存活情况；并观察转录因子GATA_4、连接蛋白Cx43、心肌转录因子NKx-2．5和心肌肌钙蛋白T（cTnT）在移植猪心组织的表达。结果：成功地建立猪急性心肌梗死模型，结扎冠脉后可见心电图典型的心肌梗死变化；免疫组织化学显示移植组MABl281阳性细胞，GATA_4、Cx43、Nkx2．5和cTnT均阳性表达。结论：人EG细胞移植于此模型的心肌组织中不仅存活，而且能向心肌细胞分化，具有心肌再生能力。 展开更多

关键词 人胚胎生殖细胞 细胞移植 心肌再生

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抗坏血酸体外诱导人胚胎生殖细胞向心肌细胞分化 被引量：1

11

作者 陈永珍 朱旻 +1 位作者 李芳 张于娟 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第13期1551-1554,F0002,共5页

目的探讨抗坏血酸作为诱导剂诱导人胚胎生殖细胞(hEGC)体外分化为心肌细胞。方法取5～10周人胚胎生殖腺嵴,进行组织块体外培养,用直接悬浮法使hEGC形成拟胚体(EBs),用不同浓度抗坏血酸的培养基对其进行诱导分化。然后取不同时间的细胞... 目的探讨抗坏血酸作为诱导剂诱导人胚胎生殖细胞(hEGC)体外分化为心肌细胞。方法取5～10周人胚胎生殖腺嵴,进行组织块体外培养,用直接悬浮法使hEGC形成拟胚体(EBs),用不同浓度抗坏血酸的培养基对其进行诱导分化。然后取不同时间的细胞做免疫细胞化学染色,鉴定细胞的心肌特异转录因子GATA-4和心肌肌钙蛋白T(cTnT)表达情况。结果抗坏血酸诱导hEGC分化为心肌细胞的最佳浓度为0.1mg/ml,诱导第3周时分化率达(85.2±1.8)%,显著高于不添加任何诱导剂的对照组。诱导后细胞形态变成梭形,4周时细胞突起相互连接成条索状,且排列方向趋于一致;诱导后1周即开始出现GATA-4弱表达,第3周时表达最强;诱导后2周,细胞内开始表达cTnT,3周强阳性表达,4周表达明显增强。结论抗坏血酸能够促进hEGC向心肌细胞分化,可用以建立体外诱导hEGC分化为心肌细胞的方法 。 展开更多

关键词 抗坏血酸 人胚胎生殖细胞 心肌细胞

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人胚胎生殖细胞向心肌细胞诱导分化及质谱分析 被引量：1

12

作者 王士珍 朱旻 +1 位作者 冯琦 陈永珍 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第4期580-585,共6页

目的分析人胚胎生殖细胞(hEGC)向心肌细胞分化过程中蛋白质表达谱的改变。方法组织块培养法体外培养hEGC,采用抗坏血酸诱导hEGC向心肌细胞分化,通过免疫荧光法检测诱导后细胞中肌钙蛋白T(cT-nT)的表达;分别提取hEGC及诱导分化2周后的细... 目的分析人胚胎生殖细胞(hEGC)向心肌细胞分化过程中蛋白质表达谱的改变。方法组织块培养法体外培养hEGC,采用抗坏血酸诱导hEGC向心肌细胞分化,通过免疫荧光法检测诱导后细胞中肌钙蛋白T(cT-nT)的表达;分别提取hEGC及诱导分化2周后的细胞总蛋白,采用iTRAQ标记、液相色谱(LC)分离总蛋白,串联质谱(MS/MS)鉴定差异蛋白。结果诱导后细胞阳性表达cTnT;通过质谱分析和数据库搜索共鉴定出349种蛋白,其中27种蛋白差异显著。结论 hEGC能诱导分化为心肌细胞;蛋白质组学方法可以高通量筛选hEGC向心肌细胞分化相关的重要蛋白。 展开更多

关键词 人胚胎生殖细胞 肌钙蛋白T 质谱

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人胚胎生殖细胞向心肌细胞诱导分化的研究

13

作者 冯琦 朱旻 陈永珍 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 2012年第4期504-509,共6页

目的诱导人胚胎生殖细胞(hEGC)向心肌细胞分化,初步探讨其定向分化过程及调控机制。方法组织块培养法体外培养hEGC,采用抗坏血酸诱导hEGC向心肌细胞分化,通过CCK-8法测定诱导后心肌细胞增殖率,免疫荧光法检测心肌连接蛋白Cx43的表达;利... 目的诱导人胚胎生殖细胞(hEGC)向心肌细胞分化,初步探讨其定向分化过程及调控机制。方法组织块培养法体外培养hEGC,采用抗坏血酸诱导hEGC向心肌细胞分化,通过CCK-8法测定诱导后心肌细胞增殖率,免疫荧光法检测心肌连接蛋白Cx43的表达;利用半定量RT-PCR的方法鉴定hEGC和诱导后心肌细胞GATA-4和ACTC1等基因的表达;结合生物信息学方法推断分化过程中各蛋白的相互作用关系。结果诱导后细胞阳性表达Cx43,且表现出一定的增殖能力;其表达GATA-4、ACTC1等基因的强度与未经诱导的hEGC均有所不同;GATA-4、Nkx2.5与各类心肌肌钙蛋白有着密切的联系。结论 hEGC能诱导分化为心肌细胞;蛋白质组学方法可以协助探讨其分化过程及调控机制。 展开更多

关键词 人胚胎生殖细胞 细胞分化 生物信息学 RT-PCR

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人胚胎干细胞建系的研究现状与存在的问题 被引量：3

14

作者 孟国良 尚克刚 丁明孝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期131-135,共5页

人胚胎干细胞系的建立 ,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义 ;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程 ,就建系的几种方案、路线、意义和可... 人胚胎干细胞系的建立 ,对人类胚胎发生和人类发育生物学研究、人类新基因的发现和功能研究以及基因治疗、细胞和组织的移植治疗等领域的突破性进展具有重大意义 ;回顾了人胚胎干细胞建系研究的历程 ,就建系的几种方案、路线、意义和可行性进行了探讨 ;详细系统地说明了迄今为止建立人胚胎干细胞系所需要的饲养层类型、培养基组成、添加细胞因子种类及其作用 ;分析了建立和维持人胚胎干细胞系所需消化酶的种类及其作用以及目前常用的几种传代方法 ;从若干方面总结了人胚胎干细胞系的鉴定方法 ,并对建立和维持人胚胎干细胞系中存在的若干问题进行了剖析 。 展开更多

关键词 人胚胎干细胞 人胚胎生殖细胞 多能性 分化 端粒酶

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胚胎干细胞的生物学特性及其应用 被引量：2

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作者 王志华 何志旭 《中国小儿血液》 2005年第2期89-91,共3页

关键词 生物学特性 人胚胎生殖细胞 胚胎干细胞系 ES细胞 Evans 1981年 1994年 1998年 文献记载 cell ICM 中分化 胚泡 建系 离出

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人胚胎心脏干细胞系已建立

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《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期650-650,共1页

关键词 干细胞系 胚胎心脏 生物医学工程研究所 人胚胎生殖细胞 人胚胎干细胞 间充质干细胞 血管组织工程 第二军医大学 1998年 神经干细胞 胰腺干细胞 心脏干细胞 cells 分离培养 种子细胞 研究人员 小组分 研究史 国内外

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