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miR-122-5p靶向调控人骨髓间充质干细胞诱导成骨分化的分子机制研究
1
作者 蔡立雄 缪忠绿 《中医康复》 2024年第1期26-31,共6页
目的:研究miR-122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导的作用分子机制。方法:运用茜素红S、碱性磷酸酶活性ALP染色试剂盒检测hBMSCs成骨分化的钙结节与成骨活性;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-122-5p与BRCC3之间的靶向... 目的:研究miR-122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导的作用分子机制。方法:运用茜素红S、碱性磷酸酶活性ALP染色试剂盒检测hBMSCs成骨分化的钙结节与成骨活性;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-122-5p与BRCC3之间的靶向关系;运用qRT-PCR分别检测Runx2、Osterix、wnt3a、β-catenin、GSK3-β、miR-122-5以及BRCC3基因的表达情况;Western印迹检测β-catenin蛋白的表达量。结果:过表达miR-122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导21天后的钙结节与干细胞成骨活性均有明显促进作用,对成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因子Runx2、Os‐terix及wnt3a、β-catenin、GSK3-β主要基因均激活作用,过表达BRCC3对干细胞成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因子Runx2、Osterix及wnt3a、β-catenin、GSK3-β主要基因有抑制作用;并且通过双荧光素酶报告基因与回复性实验确定miR122-5p与BRCC3之间的靶向关系,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-122-5p靶向抑制BRCC3的表达诱导hBMSCs细胞通过wnt/β-catenin通路进行成骨分化诱导。 展开更多
关键词 miR-122-5p 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 WNT/Β-CATENIN信号通路
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骨痹通消颗粒对激素型股骨头坏死人骨髓间充质干细胞成骨与成脂分化的影响
2
作者 王壮壮 周正新 +5 位作者 朱磊 朱彩玉 顾一帆 李子鹏 陈少奇 李胜 《中国医药导报》 CAS 2024年第3期28-33,39,共7页
目的 探究骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死人骨髓间充质干细胞(h BMMSC)成骨与成脂分化的影响。方法 取激素性股骨头坏死患者骨髓,体外进行h BMMSC的培养,通过细胞形态学观察、成骨及成脂分化潜能来鉴定h BMMSC。以完培组(基础培养基+10... 目的 探究骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死人骨髓间充质干细胞(h BMMSC)成骨与成脂分化的影响。方法 取激素性股骨头坏死患者骨髓,体外进行h BMMSC的培养,通过细胞形态学观察、成骨及成脂分化潜能来鉴定h BMMSC。以完培组(基础培养基+10%的胎牛血清)作为对照,采用CCK-8法测定1%、2%、5%、8%、10%体积分数的骨痹通消含药血清A组作用24 h后对细胞增殖的影响。细胞在96孔板的培养过程中,每孔加入地塞米松溶液0.52μl,以完培组(基础培养基+10%的胎牛血清)和损伤组(基础培养组+10%的胎牛血清+0.52μl地塞米松溶液)作为对照,采用CCK-8法测定2%、5%、8%体积分数的骨痹通消含药血清B组对激素环境中细胞活力的影响。以无激素诱导细胞作为对照组(基础培养基+10%的胎牛血清),将体外激素诱导的h BMMSC细胞分为模型组(基础培养基+10%的胎牛血清+10-5mol/L地塞米松溶液)、实验组(基础培养基+5%的骨痹通消含药血清+10-5mol/L地塞米松溶液)。茜素红染色试剂盒测定各组成骨分化后矿化结节的形成;油红O染色试剂盒测定各组成脂分化后脂滴的形成;RT-q PCR测定成脂相关标志基因PPARγ、C/EBP-α与Fabp4中m RNA的表达,Western blot检测成骨相关蛋白BMP-2、Runx2及β-catenin的蛋白表达含量。结果 原代细胞培养7 d后,可见梭形、纺锤形或多角形的贴壁细胞。第三代细胞生长均匀,平行排列,透光率好。成骨诱导21 d,细胞发生改变,局部细胞聚集,并有矿化结节产生,茜素红染色呈阳性;成脂诱导21 d,脂滴与油红O染液结合变为红色,油红O染色呈阳性。与完培组比较,10%体积分数的含药血清A组细胞活力下降(P<0.05)。与完培组比较,损伤组细胞活力下降(P<0.05);与损伤组比较,2%、5%、8%体积分数的含药血清B组细胞活力升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组染色面积降低(P<0.05);与模型组比较,实验组中矿化结节与沉积升高,染色范围也更广(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞内脂质积累增多(P<0.05);与模型组比较,实验组较细胞内脂质积累降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组PPARγ、C/EBP-α和Fabp4的表达量升高(P<0.01),与模型组比较,实验组PPARγ、C/EBP-α和Fabp4的表达量降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组BMP-2、Runx2及β-catenin蛋白表达含量升高(P<0.01),与模型组比较,实验组BMP-2、Runx2及β-catenin蛋白表达含量降低(P<0.05)。结论 骨痹通消颗粒能够促进激素性股骨头坏死h BMMSC的增殖及其向成骨分化的能力,抑制成脂分化,为临床上防治激素性股骨头坏死提供了理论基础。 展开更多
关键词 激素性股骨头坏死 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂分化
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慢病毒沉默Piezo1蛋白与人骨髓间充质干细胞成骨分化及TAZ的表达 被引量：1
3
作者 韦雨柔 田佳庆 +5 位作者 何宪顺 詹芝玮 魏腾飞 林天烨 何伟 魏秋实 《中国组织工程研究》 CAS 2024年第1期12-19,共8页
背景:Piezo1作为机械敏感蛋白与成骨分化密切相关,TAZ也被证明参与调节成骨分化,但Piezo1调控人骨髓间充质干细胞成骨分化时TAZ是否参与其中目前尚不明确,故研究其具体机制对防治股骨头坏死具有重要意义。目的:探讨Piezo1对人骨髓间充... 背景:Piezo1作为机械敏感蛋白与成骨分化密切相关,TAZ也被证明参与调节成骨分化,但Piezo1调控人骨髓间充质干细胞成骨分化时TAZ是否参与其中目前尚不明确,故研究其具体机制对防治股骨头坏死具有重要意义。目的:探讨Piezo1对人骨髓间充质干细胞成骨分化及TAZ表达的影响。方法:构建靶向Piezo1的siRNA,转染至293T细胞,通过RT-qPCR检测其沉默效率并筛选出Piezo1-Homo-2337进行包装,使用荧光染色检测其最佳感染复数值。Piezo1沉默重组慢病毒进一步被转染至人骨髓间充质干细胞中,通过RT-qPCR、Western blot检测其沉默效果;通过茜素红染色、碱性磷酸酶活性分析、免疫荧光染色、RT-qPCR及Western blot检测分析沉默Piezo1对人骨髓间充质干细胞成骨分化能力及TAZ表达的影响。结果与结论:①与正常组、阴性对照组比较,转染si-Piezo1后人骨髓间充质干细胞中Piezo1的mRNA及蛋白水平明显降低;②与阴性对照组比较,si-Piezo1组碱性磷酸酶活性明显降低,钙沉积明显减少;③与阴性对照组比较,si-Piezo1组成骨相关基因Runx2、OPN、DLX5、osteocalcin、β-catenin及TAZ的mRNA水平明显降低。si-Piezo1组TAZ、β-catenin的蛋白表达明显降低;相反,si-Piezo1组p-TAZ、p-β-catenin的蛋白表达明显增加;④与阴性对照组比较,免疫荧光染色结果提示si-Piezo1组人骨髓间充质干细胞中TAZ、β-catenin的表达较少;⑤结果表明Piezo1可促进人骨髓间充质干细胞的成骨分化,沉默Piezo1后人骨髓间充质干细胞的成骨能力明显降低,同时TAZ的表达也同样降低。 展开更多
关键词 股骨头坏死 人骨髓间充质干细胞 Piezo1 TAZ 成骨分化
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不同个体来源和低氧条件对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
4
作者 孙雪飞 李静颐 +4 位作者 陈媛 姜茜茜 张玲玲 王琳 刘元波 《中国医药生物技术》 2023年第5期393-401,共9页
目的研究6株不同个体(男:M1、M2、M3;女:F1、F2、F3)来源人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)在不同低氧条件下生物学特性的差异。方法流式及诱导分化实验鉴定间充质干细胞的标志物表达及三系分化能力。Transwell法检测迁移能力。CCK8法检测5%... 目的研究6株不同个体(男:M1、M2、M3;女:F1、F2、F3)来源人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)在不同低氧条件下生物学特性的差异。方法流式及诱导分化实验鉴定间充质干细胞的标志物表达及三系分化能力。Transwell法检测迁移能力。CCK8法检测5%及1%氧气下细胞活力差异。结果6株BM-MSC阳性标志物表达均高于99%,阴性标志物总表达均低于2%,且均具有三系分化能力。不同个体来源BM-MSC成骨、成脂分化效率和细胞活力具有差异,性别分层统计显示成脂分化差异可能与性别相关;不同低氧条件下BM-MSC的细胞活力和细胞迁移能力具有差异,5%氧气条件显著优于1%氧气条件。同时考虑氧气和性别因素时,发现不同低氧条件下男性来源的BM-MSC活力相对女性均具有较高的趋势,而迁移能力则是女性来源的BM-MSC相对更强。结论提示应根据人骨髓间充质干细胞的应用目的所需特性对供者个体和扩增环境设立特定标准。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 低氧 性别 细胞活力
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异位高表达OCT4的人骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞功能的影响
5
作者 郭晓萍 陈燕飞 +4 位作者 陈萍 潘劲 应培挺 赵宁 汤永民 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1523-1530,共8页
目的:探讨异位高表达OCT4的人骨髓间充质干细胞(MSC)在体外对T细胞增殖、活化及分泌功能的影响。方法:分离健康儿童外周血单个核细胞,使用Anti-CD3/CD28单克隆抗体体外激活T淋巴细胞,白介素(IL)2体外刺激培养的T细胞1周。建立异位高表达... 目的:探讨异位高表达OCT4的人骨髓间充质干细胞(MSC)在体外对T细胞增殖、活化及分泌功能的影响。方法:分离健康儿童外周血单个核细胞,使用Anti-CD3/CD28单克隆抗体体外激活T淋巴细胞,白介素(IL)2体外刺激培养的T细胞1周。建立异位高表达OCT4的MSC(MSC-OCT4)与活化T细胞的体外共培养体系,收集共培养1周后的上清液,流式细胞仪测定Th1/Th2细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α、γ干扰素)水平。收集共培养1周后的淋巴细胞,通过Countstar软件进行计数,用流式细胞仪测定T细胞及活化T细胞亚群的比例后,计算出绝对值,以均数±标准差表示。结果:与对照单独T细胞培养组相比,MSC及MSC-OCT4均能显著抑制CD3^(+)T细胞、CD3^(+)CD4^(+)T细胞和CD3^(+)CD8^(+)T细胞增殖。与MSC相比,MSC-OCT4能更好地抑制CD3^(+)CD8^(+)T细胞增殖(P=0.049),且主要抑制早期T细胞活化。与对照单独T细胞培养组相比,MSC及MSC-OCT4均能显著下调细胞因子IL-2和γ干扰素水平。与T细胞共培养1周后,MSC与MSC-OCT4组细胞因子IL-6水平显著增加。与对照MSC组相比,MSC-OCT4组在共培养1周后活细胞数更高(P=0.019),且能耐受更高浓度丝裂霉素C的抑制增殖作用。结论:MSC及MSC-OCT4在体外均能抑制IL-2刺激的T细胞增殖及活化,过表达OCT4后MSC能更强地抑制CD3^(+)CD8^(+)T细胞增殖,且具有更好的体外增殖能力,可能具有更好更持久地调节Th1/Th2造血因子平衡的作用。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 转录因子 OCT4 免疫调节 细胞因子
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LncRNA FGD5-AS1调节miR-93-5p/BMP2轴促进人骨髓间充质干细胞成骨分化
6
作者 张亮亮 赵程锦 +3 位作者 周煜虎 曹博 段明明 冯阳阳 《基础医学与临床》 2023年第8期1179-1185,共7页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA miR-93-5p/骨形态发生蛋白-2(BMP2)轴对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)成骨分化的影响。方法取对数增殖期的hBM-MSCs,分别检测成骨分化前、后lncRNA FGD5-AS1、miR-93-5p、BMP2 mRNA... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA miR-93-5p/骨形态发生蛋白-2(BMP2)轴对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)成骨分化的影响。方法取对数增殖期的hBM-MSCs,分别检测成骨分化前、后lncRNA FGD5-AS1、miR-93-5p、BMP2 mRNA表达水平;将细胞分别转染或共转染pcDNA FGD5-AS1、miR-93-5p inhibitor、miR-93-5p mimics及相应阴性对照,分组为pcDNA NC组、pcDNA FGD5-AS1组、inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA FGD5-AS1+mimics NC组、pcDNA FGD5-AS1+miR-93-5p mimics组,取未转染细胞作为空白组;CCK-8法检测细胞增殖;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测其活性;茜素红染色鉴定细胞矿化结节形成;Western blot检测BMP2及成骨相关标志物--骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、成骨相关转录因子(OSX)水平;双荧光素酶报告基因实验分别验证miR-93-5p与FGD5-AS1、BMP2的靶向关系。结果miR-93-5p分别与FGD5-AS1、BMP2存在靶向关系。与分化前相比,hBM-MSCs成骨分化后lncRNA FGD5-AS1、BMP2 mRNA表达显著增加,miR-93-5p表达显著下降(P<0.05);与pcDNA NC组相比,pcDNA FGD5-AS1组FGD5-AS1表达显著增加(P<0.05),表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);与inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组miR-93-5p表达降低,表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);miR-93-5p过表达可抑制FGD5-AS1对细胞成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论上调FGD5-AS1可以促进细胞成骨分化,可能与miR-93-5p/BMP2轴有关。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 lncRNA FGD5-AS1 miR-93-5p/BMP2轴 成骨分化
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滋肾健骨方含药血清对人骨髓间充质干细胞成骨分化中TGF-β_(1)/Smads信号通路的影响
7
作者 张震 许光明 +4 位作者 庄加川 吴克亮 肖庆华 朱建宗 林晓生 《现代中西医结合杂志》 CAS 2023年第4期439-443,448,共6页
目的 探讨滋肾健骨方含药血清对老年骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其作用机制。方法 取SD大鼠制备低、中、高剂量滋肾健骨方含药血清和空白血清。将培养第3代的老年骨质疏松症患者hBMSCs分为6组,空白组常规培... 目的 探讨滋肾健骨方含药血清对老年骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化的影响及其作用机制。方法 取SD大鼠制备低、中、高剂量滋肾健骨方含药血清和空白血清。将培养第3代的老年骨质疏松症患者hBMSCs分为6组,空白组常规培养;模型组进行成骨诱导;空白血清组进行成骨诱导+空白血清培养;低剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+低剂量滋肾健骨方含药血清培养;中剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+中剂量滋肾健骨方含药血清培养;高剂量滋肾健骨含药血清组进行成骨诱导+高剂量滋肾健骨方含药血清培养。CKK-8法检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)染色观察细胞分化情况,Western blot法检测细胞中转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达情况。结果 与模型组和空白血清组比较,各剂量滋肾健骨含药血清组细胞增殖活性和ALP活性均明显增强(P均<0.05),且中、高剂量滋肾健骨含药血清组均明显强于低剂量滋肾健骨含药血清组(P均<0.05);与模型组和空白血清组比较,各剂量滋肾健骨含药血清组细胞中TGF-β_(1)、Smad2、Smad3、Smad4蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),且高剂量滋肾健骨含药血清组均明显高于低剂量滋肾健骨含药血清组(P均<0.05)。结论 滋肾健骨方含药血清可能通过调控TGF-β_(1)/Smads信号通路促进老年骨质疏松症患者hBMSCs的成骨增殖及分化。 展开更多
关键词 骨质疏松症 滋肾健骨方 TGF-β_(1)/Smads信号通路 人骨髓间充质干细胞 成骨分化
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LncRNA MCF2L-AS1靶向调控miR-138-5p对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡和成骨分化的影响
8
作者 徐梅玲 张育珠 申大年 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2023年第1期188-192,共5页
目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)MCF2L-AS1靶向调控miR-138-5p对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖、凋亡和成骨分化的影响。方法收集青海省第五人民医院手术切除的正常骨组织和骨质疏松(OP)患者的骨组织各25例,实时荧光定量聚合酶链反应(R... 目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)MCF2L-AS1靶向调控miR-138-5p对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖、凋亡和成骨分化的影响。方法收集青海省第五人民医院手术切除的正常骨组织和骨质疏松(OP)患者的骨组织各25例,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA MCF2L-AS1和miR-138-5p表达水平;hBMSCs分为si-MCF2L-AS1组、si-NC组、miR-138-5p组、miR-NC组、pcDNA-MCF2L-AS1组、pcDNA-NC组、si-MCF2L-AS1+anti-miR-NC组和si-MCF2L-AS1+anti-miR-138-5p组;将hBMSCs进行成骨诱导分化培养,用RT-qPCR检测成骨诱导0、1、3、7、14 d及各组细胞LncRNA MCF2L-AS1、miR-138-5p及成骨相关因子碱性磷酸酶(ALP)、Run相关基因(RUNX)2、骨钙素(OCN)的表达水平;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋;双荧光素酶报告实验检测LncRNA MCF2L-AS1和miR-138-5p靶向关系。结果OP患者骨组织中LncRNA MCF2L-AS1表达明显低于正常骨组织,miR-138-5p表达明显高于正常骨组织(P<0.001);在成骨诱导分化中,LncRNA MCF2L-AS1表达水平明显升高,miR-138-5p表达水平明显降低,ALP、RUNX2、OCN表达水平明显升高(P<0.05)。低表达LncRNA MCF2L-AS1或高表达miR-138-5p,ALP、RUNX2、OCN表达水平、细胞增殖率降低,凋亡率明显升高(P<0.05)。LncRNA MCF2L-AS1靶向调控miR-138-5p,低表达miR-138-5p部分回复MCF2L-AS1低表达对hBMSCs增殖、凋亡和成骨分化的作用。结论LncRNA MCF2L-AS1可靶向负调控miR-138-5p抑制hBMSCs增殖和成骨分化,促进凋亡。 展开更多
关键词 LncRNA MCF2L-AS1 miR-138-5p 人骨髓间充质干细胞 增殖 凋亡 成骨分化 骨质疏松
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人骨髓间充质干细胞定向内皮分化前后miRNA的表达差异分析
9
作者 罗雪兰 周炜潜 +3 位作者 杨鹏 陈伟 李龙春 欧和生 《医学研究杂志》 2023年第10期71-75,共5页
目的探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell,hBMSC)定向内皮分化前后miRNA的表达差异分析,为进一步研究其调控hBMSC内皮分化的分子机制奠定理论基础。方法根据hBMSC定向血管内皮诱导分化培养方法培养细胞,应... 目的探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cell,hBMSC)定向内皮分化前后miRNA的表达差异分析,为进一步研究其调控hBMSC内皮分化的分子机制奠定理论基础。方法根据hBMSC定向血管内皮诱导分化培养方法培养细胞,应用电子显微镜观察细胞分化前后形态的变化,应用细胞免疫荧光法检测内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的蛋白质表达情况,应用高通量测序分析检测细胞分化前后miRNA表达谱的改变,应用qRT-PCR验证两组中表达差异明显的miRNA分子。结果与未分化组hBMSC比较,分化后的细胞形态发生类内皮细胞样改变;eNOS蛋白的表达明显增加;分化后hBMSC共筛选41个差异性表达的miRNA,其中表达上调的有27个,表达下调的有14个;分化组细胞miR-31-5p上调近21倍,miR-200a-3p下调近15倍。结论hBMSC定向内皮分化前后miRNA表达发生差异性改变,其改变可能影响干细胞的分化程度,可为进一步研究干细胞在血管内皮功能异常所致的血管性疾病异常机制提供研究方向和理论支持。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 内皮分化 MIRNA ENOS
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人骨髓间充质干细胞定向诱导分化为成骨细胞及其鉴定 被引量：58
10
作者 殷晓雪 陈仲强 +2 位作者 郭昭庆 马庆军 党耕町 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2004年第2期88-91,共4页
目的　探讨将成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的方法 ,并对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。　方法　分离人骨髓 ,梯度离心并结合全骨髓法进行培养 ,培养基中添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠及抗坏血酸。贴壁... 目的　探讨将成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的方法 ,并对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。　方法　分离人骨髓 ,梯度离心并结合全骨髓法进行培养 ,培养基中添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠及抗坏血酸。贴壁细胞传代 ,取第 3代细胞鉴定其成骨特性 ;在倒置相差显微镜下观察细胞形态 ,钙 -钴法染色检测碱性磷酸酶 (AL P)表达 ,免疫组织化学检测 型胶原表达 ,原位杂交检测骨连接素 (ON)、骨桥素 (OP)表达 ,Von Kos-sa染色检测钙结节形成。　结果　第 3代人 MSCs呈典型的成骨细胞形态 ,可连续传代 10次 ;AL P染色阳性率达 85 % ; 型胶原、ON和 OP表达阳性 ;Von Kossa染色可见钙结节形成。　结论　成功地将人 MSCs诱导分化为成骨细胞 ,所诱导的细胞具有典型的成骨细胞特性。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 成骨诱导 成骨分化 成骨细胞 细胞鉴定 组织工程 成骨特性
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骨碎补各种提取成分对人骨髓间充质干细胞的影响 被引量：36
11
作者 邓展生 张璇 +2 位作者 邹冬青 许宇霞 胡懿合 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第16期2426-2429,共4页
目的初步探讨骨碎补水提液、醇提液以及骨碎补的有效成分柚皮甙对人骨髓间充质干细胞(hu-manbonemarrowmesenchymalstemcells,hMSCs)增殖、分化的影响。方法将骨碎补水提液、醇提液和骨碎补的有效成分柚皮甙与hMSCs共同体外培养,倒置显... 目的初步探讨骨碎补水提液、醇提液以及骨碎补的有效成分柚皮甙对人骨髓间充质干细胞(hu-manbonemarrowmesenchymalstemcells,hMSCs)增殖、分化的影响。方法将骨碎补水提液、醇提液和骨碎补的有效成分柚皮甙与hMSCs共同体外培养,倒置显微镜观察描述细胞生长情况、CCK-8法检测每组药液对细胞的毒性和增殖作用、碱性磷酸酶(ALP)活性测定,图文报告分析系统检测VonKossa染色的钙结节,统计学处理所得数据。结果与空白对照组比较,1mg/L骨碎补水提液、50μg/L骨碎补醇提液与50μg/L柚皮甙能促进hMSCs增加(P<0.05),50μg/L骨碎补醇提液与50μg/L柚皮甙能促进其向成骨细胞分化(P<0.05)。结论骨碎补水提液、醇提液与柚皮甙对hMSCs有保护作用并能分别促进其增殖、分化。 展开更多
关键词 骨碎补 人骨髓间充质干细胞 CCK-8 ALP Von Kossa
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人骨髓间充质干细胞表达多种造血细胞因子 被引量：28
12
作者 朱光荣 周小玉 +5 位作者 陆化 周建伟 李爱萍 徐卫 李建勇 汪承亚 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期115-119,共5页
为了研究培养的人骨髓间充质干细胞在造血中的生物作用 ,采用RT PCR方法在mRNA水平上分析体外培养的人骨髓间充质干细胞 (BM MSC)造血因子的表达 ,以及氢化考的松对BM MSC表达造血细胞因子的影响。结果显示 ,体外传代培养的正常人、白... 为了研究培养的人骨髓间充质干细胞在造血中的生物作用 ,采用RT PCR方法在mRNA水平上分析体外培养的人骨髓间充质干细胞 (BM MSC)造血因子的表达 ,以及氢化考的松对BM MSC表达造血细胞因子的影响。结果显示 ,体外传代培养的正常人、白血病和淋巴瘤等血液病人BM MSC均能表达SCF ,Flt3 ligandTPO ,LIF ,IL 6和IL 11等重要的造血细胞因子 ,但不表达G CSF ,GM CSF和IL 3。不同代数的BM MSC细胞 ,造血细胞因子的表达相同。BM MSC经氢化考的松作用 7- 2 1天后 ,可诱导G CSFmRNA表达 ,但不诱导GM CSF的表达 ,细胞在形态学上也未发生明显改变。结论 :体外培养的正常人和本组血液病病人BM 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 造血细胞因子 表达 生物作用 氢化考的松 白血病 淋巴瘤
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鹿茸多肽对人骨髓间充质干细胞BMP-2和Runx2表达的影响 被引量：20
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作者 张洪长 张莹 +5 位作者 刘明昕 潘志 律广富 陈港 姜鸿远 郭骏骐 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期491-495,共5页
目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中骨形态发生蛋白2(BMP-2)和骨特异性转录因子2(Runx2)基因和蛋白表达的影响,阐明其对骨合成及hBMSCs向成骨细胞方向分化的作用机制。方法:体外培养的hBMSCs分为对照组和5、10、15、... 目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中骨形态发生蛋白2(BMP-2)和骨特异性转录因子2(Runx2)基因和蛋白表达的影响,阐明其对骨合成及hBMSCs向成骨细胞方向分化的作用机制。方法:体外培养的hBMSCs分为对照组和5、10、15、20g·L-1 VAP组,通过检测各组hBMSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性,确定体外用药最佳药物浓度;CCK-8法检测对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖情况;荧光定量PCR法与Western blotting法测定对照组和10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因与蛋白的表达。结果:VAP各组细胞中ALP活性均高于对照组,其中以10g·L-1 VAP组细胞中ALP活性最高(P<0.01);CCK-8法,10g·L-1 VAP组hBMSCs增殖率明显高于对照组(P<0.05),VAP诱导培养第9天hBMSCs增殖率最高,且进入平台期,之后hBMSCs的增殖率开始下降;荧光定量PCR和Western blotting检测,10g·L-1 VAP组hBMSCs中BMP-2和Runx2基因及蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VAP能够提高hBMSCs中ALP活性,促进hBMSCs增殖分化,上调hBMSCs中BMP-2及其下游Runx2基因和蛋白的表达,这可能是VAP对hBMSCs骨形成及骨代谢影响的分子调控机制之一。 展开更多
关键词 鹿茸多肽 人骨髓间充质干细胞 骨形态发生蛋白2 骨特异性转录因子2
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人骨髓间充质干细胞的体外培养及诱导分化 被引量：10
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作者 沙慧芳 冯久贤 +2 位作者 顾伟勇 谭强 董强刚 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期232-234,F003,共4页
目的建立一株能在体外长期培养并具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞(HBMSC).方法利用差异贴壁法从人肋骨中分离纯化HBMSC,在体外通过地塞米松、胰岛素诱导分化为脂肪细胞,用VitC、β-磷酸甘油、地塞米松诱导下可分化成骨细胞,裸鼠... 目的建立一株能在体外长期培养并具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞(HBMSC).方法利用差异贴壁法从人肋骨中分离纯化HBMSC,在体外通过地塞米松、胰岛素诱导分化为脂肪细胞,用VitC、β-磷酸甘油、地塞米松诱导下可分化成骨细胞,裸鼠体内分化为软骨样细胞及成骨样组织,采用流式细胞仪检测细胞表面CD31、CD34、CD45、CD9、CD90、CD105和CD106.以2.5×107细胞接种于裸鼠皮下进行致瘤实验,用DY-NALREU-SSO反向杂交法检测HLA.结果细胞已连续培养超过30代仍能稳定生长,细胞表面特性为CD105、CD106阳性,而CD31、CD34、CD45、CD9、CD90为阴性.在体外能诱导成脂肪细胞、成骨细胞.无致瘤性,在裸鼠体内能形成软骨细胞及骨样组织.结论培养了一株能在体外长期培养及具有多向分化潜能的人骨髓间充质干细胞. 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 体外 CDl0 裸鼠 诱导分化 CD45 细胞表面 长期培养 连续培养 贴壁法
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体外模拟心肌微环境中人骨髓间充质干细胞向心肌细胞的分化 被引量：24
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作者 邓方阁 张秀英 +2 位作者 王心蕊 马英智 李玉林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期257-259,共3页
目的:研究在体外模拟心肌微环境中人骨髓间充质干细胞(hMSCs)向心肌细胞(CM)的分化。方法:体外分离培养扩增hMSCs,进行流式细胞仪分析鉴定其免疫学表型CD34、CD44和CD45,以未加一抗只加二抗的hMSCs作为平行对照组;同时原代培养SD乳鼠的C... 目的:研究在体外模拟心肌微环境中人骨髓间充质干细胞(hMSCs)向心肌细胞(CM)的分化。方法:体外分离培养扩增hMSCs,进行流式细胞仪分析鉴定其免疫学表型CD34、CD44和CD45,以未加一抗只加二抗的hMSCs作为平行对照组;同时原代培养SD乳鼠的CM以模拟体外心肌微环境。选用生长良好、纯度达到95%的第5代hMSCs,与乳鼠原代培养的CM共培养,并进行心肌特异性标志cTnI的免疫组化鉴定。结果:体外分离纯化培养扩增出的hMSCs,不表达CD34及CD45,高表达CD44,其CD44阳性率平均为(93.26±2.48)%,与平行对照组[(3.42±1.09)%]比较差异有显著性(P<0.01)。hMSCs与CM共培养后,其形态逐渐向CM形态过渡,并表达心肌特异性抗体cTnI。结论:hMSCs在体外模拟的心肌微环境中可分化为CM,干细胞的分化具有环境依赖性。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 心肌细胞 体外微环境
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尿酸对人骨髓间充质干细胞成骨分化中Cbfα1/Runx2表达的影响 被引量：17
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作者 张山山 杨乃龙 +2 位作者 徐丽丽 李百举 崔晶 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期363-366,344,共5页
目的观察不同浓度尿酸对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化过程中核心结合因子α1(Cbfα1/Runx2)表达变化的影响。方法以体外培养的健康成年hBMSCs为研究对象,分为5个组,分别为对照组(完全培养基组)和加入不同浓度尿酸(0 mmol/l、0.2 ... 目的观察不同浓度尿酸对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)成骨分化过程中核心结合因子α1(Cbfα1/Runx2)表达变化的影响。方法以体外培养的健康成年hBMSCs为研究对象,分为5个组,分别为对照组(完全培养基组)和加入不同浓度尿酸(0 mmol/l、0.2 mmol/l、0.4 mmol/l、0.8mmol/l)的成骨诱导组,通过倒置显微镜观察细胞形态,碱性磷酸酶染色和茜素红染色鉴定细胞。在干预诱导第7天和第14天行RT-PCR检测Cbfα1/Runx2的表达。结果碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果均阳性,表示诱导后细胞为成骨细胞。RT-PCR结果表明,对照组各时间点均无Cbfα1/Runx2表达,尿酸培养组随尿酸浓度增加和时间的延长,Cbfα1/Runx2表达逐渐增强,呈现时间依赖性和浓度依赖性。结论尿酸可能通过促进Cbfα1/Runx2的表达,从而促进hBMSCs向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 尿酸 人骨髓间充质干细胞 成骨分化 Cbfcfal RUNX2
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持续低氧增强人骨髓间充质干细胞体外增殖 被引量：19
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作者 李海生 陈金武 +5 位作者 朱玲玲 赵彤 赵惠卿 吴丽颖 丁爱石 范明 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2005年第3期268-271,共4页
目的探讨不同方式低氧对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖的影响。方法采用血球计数板计数法和流式细胞术分别观察了间歇性低氧(3%O2、10%O2)和持续性低氧(3%O2、10%O2、100μmol/LCoCl2、200μmol/LCoCl2)对hMSCs数量以及增殖指数的影响... 目的探讨不同方式低氧对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖的影响。方法采用血球计数板计数法和流式细胞术分别观察了间歇性低氧(3%O2、10%O2)和持续性低氧(3%O2、10%O2、100μmol/LCoCl2、200μmol/LCoCl2)对hMSCs数量以及增殖指数的影响。结果间歇性低氧对hMSCs数量和增殖指数无明显影响;持续性低氧各组hM SCs数量和增殖指数均增加(P<0.05)。结论持续性低氧可促进体外培养的hMSCs增殖,说明持续性低氧作为体外的一种可控制因素,可调节hMSCs的增殖,对于hMSCs的临床应用具有一定的意义。 展开更多
关键词 细胞体外增殖 人骨髓间充质干细胞 HMSCS 持续性低氧 间歇性低氧 mol/L 增殖指数 流式细胞术 血球计数板 CoCl2 可控制因素 体外培养 O2 计数法 可调节 临床应
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乙醇对人骨髓间充质干细胞成脂转录因子γ和骨钙素mRNA表达的影响 被引量：16
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作者 吴学建 尹万乐 +1 位作者 李月白 王义生 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第6期1098-1100,共3页
目的观察乙醇对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)内成脂转录因子(PPAR)γ和骨钙素(Osteocalcin)mR-NA表达的影响。方法取健康自愿者骨髓,通过梯度离心、贴壁分离培养,获得hBMSCs,传至第2代hBMSCs8d,随机分为2组,实验组以0.09mol/L乙醇作为诱... 目的观察乙醇对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)内成脂转录因子(PPAR)γ和骨钙素(Osteocalcin)mR-NA表达的影响。方法取健康自愿者骨髓,通过梯度离心、贴壁分离培养,获得hBMSCs,传至第2代hBMSCs8d,随机分为2组,实验组以0.09mol/L乙醇作为诱导剂每d处理细胞,对照组不给予乙醇,继续培养细胞6d。应用RT-PCR技术检测2组细胞中PPARγmRNA和OsteocalcinmRNA的表达。结果与对照组比较,实验组hBMSCs内PPARγmRNA表达增高(1.38±0.27vs1.73±0.34,P<0.05)。与对照组比较,实验组hBMSCs内OsteocalcinmR-NA表达降低(1.08±0.22vs0.48±0.11,P<0.05)。结论乙醇能够诱导hBMSCsPPARγ表达增强,Osteocalcin表达减少,这可能与酒精性骨坏死的发生机制有关。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 成脂转录因子γ 骨钙素 乙醇
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纳米晶胶原基骨/血管内皮生长因子缓释支架对人骨髓间充质干细胞体外粘附增殖的影响 被引量：7
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作者 徐晓峰 刘小平 +4 位作者 陈静家 李阳 钱栋 张志坚 刘进炼 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期740-746,共7页
研制纳米晶胶原基骨(nHAC)/血管内皮生长因子(VEGF)缓释支架,了解VEGF体外缓释效果及对人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)成骨诱导后粘附、增殖的影响,为骨组织工程寻求一种新型复合支架材料.利用生物学方法将VEG... 研制纳米晶胶原基骨(nHAC)/血管内皮生长因子(VEGF)缓释支架,了解VEGF体外缓释效果及对人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)成骨诱导后粘附、增殖的影响,为骨组织工程寻求一种新型复合支架材料.利用生物学方法将VEGF负载于nHAC,制备具有VEGF缓释效果的复合支架;hMSCs经体外培养、扩增、成骨诱导后种植于VEGF缓释支架上行体外增殖。分为四组:实验组A:nHAC、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、肝素(heparin,HP)和VEGF(nHAC-FN-HP-VEGF);对照组B:nHAC、FN和VEGF(nHAC-FN-VEGF);对照组C,nHAC、HP和VEGF(nHAC-HP-VEGF);对照组D:nHAC和VEGF(nHAC-VEGF)。通过检测支架材料上VEGF的释放量和持续时间,及种植细胞后细胞的黏附率、不同时间点(3、7、10、14 d)支架材料中细胞数、碱性磷酸酶活性以及扫描电镜观察细胞在材料上的生长状况,比较分析不同复合支架材料对细胞粘附、增殖的影响。人第三代MSCs经诱导培养14 d后,碱性磷酸酶细胞化学染色、I型胶原免疫荧光染色均为阳性;实验组A的VEGF缓释量最高,持续时间最长(可达14 d),细胞黏附率最高,为61.8%;各组支架中的细胞数量均随培养时间延长而增长,实验组A的细胞数增加较快,与相同时间点其他各组材料中细胞数差异有显著性(P<0.05);各时间点细胞碱性磷酸酶活性表达实验组最高,差异亦有显著性(P<0.05)。电镜扫描发现4组材料上均有细胞生长,实验组A的细胞增殖、分化状况明显好于其他组。hMSCs经诱导培养后可具有成骨细胞特性,hHAC-FN-HP-VEGF缓释支架具有较好的VEGF缓释效果,能显著提高细胞的粘附和增殖,可作为较理想的新型复合支架应用于骨组织工程。 展开更多
关键词 纳米晶胶原基骨 纤维连接蛋白 肝素 血管内皮生长因子 人骨髓间充质干细胞
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模拟微重力对人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中细胞信号通路影响的分析 被引量：8
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作者 黄国平 郑强 +6 位作者 杨金凤 郭春娟 沈丹 石东燕 徐玉林 潘志军 王金福 《空间科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期87-96,共10页
通过模拟来研究微重力对hMSC向成骨细胞分化的影响,并利用相关信号通路的激活剂或抑制剂来调节这一分化过程.研究结果表明,在成骨细胞分化诱导条件下,微重力降低了hMSC向成骨细胞定向分化的能力,并且成骨细胞标记性基因的表达明显降低,R... 通过模拟来研究微重力对hMSC向成骨细胞分化的影响,并利用相关信号通路的激活剂或抑制剂来调节这一分化过程.研究结果表明,在成骨细胞分化诱导条件下,微重力降低了hMSC向成骨细胞定向分化的能力,并且成骨细胞标记性基因的表达明显降低,Runt相关转录因子2(Runx2)的表达受到抑制.相反,过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ2)的表达则增加.同时,微重力也降低了ERK的磷酸化水平,而增加了p38MAPK的磷酸化水平.使用p38MAPK的抑制剂SB203580能够抑制p38MAPK的磷酸化,但不能降低PPARγ2的表达水平.骨形态发生蛋白(BMP)能增加Runx2的表达水平.成纤维细胞生长因子2(FGF2)增加了ERK的磷酸化水平,但也不能显著增加成骨细胞标记性基因的表达水平.采用BMP,FGF2和SB203580三种因子组合来调控微重力下的成骨细胞分化能力,结果表明三者的协同作用能显著逆转微重力对成骨细胞定向分化的生物学效应.研究结果还说明,模拟微重力应该是通过不同的细胞信号通路来抑制成骨细胞分化和提升脂肪细胞分化的. 展开更多
关键词 脂肪形成 人骨髓间充质干细胞 微重力 成骨形成 信号通路
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