背景:体外淋巴细胞增殖实验常用于检测医疗器械潜在的免疫原性,但在相关标准中均未给出详尽的浸提条件及作用剂量。目的:考察供试品不同浸提条件及作用剂量对体外人淋巴细胞增殖的影响,思考在选择体外淋巴细胞增殖实验条件时需考虑的因...背景:体外淋巴细胞增殖实验常用于检测医疗器械潜在的免疫原性,但在相关标准中均未给出详尽的浸提条件及作用剂量。目的:考察供试品不同浸提条件及作用剂量对体外人淋巴细胞增殖的影响,思考在选择体外淋巴细胞增殖实验条件时需考虑的因素。方法:实验检测同种骨修复材料与肝素修饰人工晶状体两种供试品,均分为以下12组:①实验组1:供试品24 h完全培养基(含体积分数10%胎牛血清的RPMI改良培养基)浸提液200μL+淋巴细胞悬液50μL;②阴性对照组1:24 h完全培养基200μL+淋巴细胞悬液50μL;③实验组2:供试品24 h完全培养基浸提液100μL+淋巴细胞悬液100μL;④阴性对照组2:24 h完全培养基100μL+淋巴细胞悬液100μL;⑤实验组3:供试品72 h RPMI改良培养基浸提液(实验前加体积分数10%胎牛血清)200μL+淋巴细胞悬液50μL;⑥阴性对照组3:72 h RPMI改良培养基(实验前加体积分数10%胎牛血清)200μL+淋巴细胞悬液50μL;⑦实验组4:供试品72 h RPMI改良培养基浸提液(实验前加体积分数10%胎牛血清)100μL+淋巴细胞悬液100μL;⑧阴性对照组4:72 h RPMI改良培养基(实验前加体积分数10%胎牛血清)100μL+淋巴细胞悬液100μL;⑨阳性对照组1:含10μg/mL植物血凝素M的完全培养基200μL+淋巴细胞悬液50μL;⑩阳性对照组2:含10μg/mL植物血凝素M的完全培养基100μL+淋巴细胞悬液100μL;⑪空白对照组1:250μL完全培养基;⑫空白对照组2:200μL完全培养基。培养3 d后,采用CCK-8法检测淋巴细胞增殖。结果与结论:①不同实验条件下,同种骨修复材料浸提液均可增强人淋巴细胞的活性,以RPMI改良培养基浸提72 h、浸提液与淋巴细胞悬液的体积比为4∶1的实验条件最为显著;肝素修饰人工晶状体在该条件下对淋巴细胞活性有明显的抑制作用,可能与浸提液中的肝素有关,但在完全培养基浸提24 h、浸提液与淋巴细胞悬液的体积比为4∶1的实验条件下对淋巴细胞活性有轻微的增强作用;②供试品不同浸提条件及作用剂量下,人体外淋巴细胞增殖实验结果可能会有较大差异,实验条件的选择需结合产品临床应用情况,也需考虑产品的固有特性。展开更多
文摘背景:体外淋巴细胞增殖实验常用于检测医疗器械潜在的免疫原性,但在相关标准中均未给出详尽的浸提条件及作用剂量。目的:考察供试品不同浸提条件及作用剂量对体外人淋巴细胞增殖的影响,思考在选择体外淋巴细胞增殖实验条件时需考虑的因素。方法:实验检测同种骨修复材料与肝素修饰人工晶状体两种供试品,均分为以下12组:①实验组1:供试品24 h完全培养基(含体积分数10%胎牛血清的RPMI改良培养基)浸提液200μL+淋巴细胞悬液50μL;②阴性对照组1:24 h完全培养基200μL+淋巴细胞悬液50μL;③实验组2:供试品24 h完全培养基浸提液100μL+淋巴细胞悬液100μL;④阴性对照组2:24 h完全培养基100μL+淋巴细胞悬液100μL;⑤实验组3:供试品72 h RPMI改良培养基浸提液(实验前加体积分数10%胎牛血清)200μL+淋巴细胞悬液50μL;⑥阴性对照组3:72 h RPMI改良培养基(实验前加体积分数10%胎牛血清)200μL+淋巴细胞悬液50μL;⑦实验组4:供试品72 h RPMI改良培养基浸提液(实验前加体积分数10%胎牛血清)100μL+淋巴细胞悬液100μL;⑧阴性对照组4:72 h RPMI改良培养基(实验前加体积分数10%胎牛血清)100μL+淋巴细胞悬液100μL;⑨阳性对照组1:含10μg/mL植物血凝素M的完全培养基200μL+淋巴细胞悬液50μL;⑩阳性对照组2:含10μg/mL植物血凝素M的完全培养基100μL+淋巴细胞悬液100μL;⑪空白对照组1:250μL完全培养基;⑫空白对照组2:200μL完全培养基。培养3 d后,采用CCK-8法检测淋巴细胞增殖。结果与结论:①不同实验条件下,同种骨修复材料浸提液均可增强人淋巴细胞的活性,以RPMI改良培养基浸提72 h、浸提液与淋巴细胞悬液的体积比为4∶1的实验条件最为显著;肝素修饰人工晶状体在该条件下对淋巴细胞活性有明显的抑制作用,可能与浸提液中的肝素有关,但在完全培养基浸提24 h、浸提液与淋巴细胞悬液的体积比为4∶1的实验条件下对淋巴细胞活性有轻微的增强作用;②供试品不同浸提条件及作用剂量下,人体外淋巴细胞增殖实验结果可能会有较大差异,实验条件的选择需结合产品临床应用情况,也需考虑产品的固有特性。
