目的建立一种快速、灵敏、可视化的H7亚型禽流感病毒等温核酸扩增检测方法。方法针对H7N9禽流感病毒的HA片段保守区序列设计引物、探针,优化反应温度,建立H7亚型禽流感病毒的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条检测技术,评价其特异性...目的建立一种快速、灵敏、可视化的H7亚型禽流感病毒等温核酸扩增检测方法。方法针对H7N9禽流感病毒的HA片段保守区序列设计引物、探针,优化反应温度,建立H7亚型禽流感病毒的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条检测技术,评价其特异性和敏感性,并与Real time PCR方法进行比较。结果该方法检测H7亚型禽流感病毒的最低检出限为20拷贝/μL,与其他流感/禽流感病毒无交叉反应,反应可在20~50℃温度范围内进行,临床样本检测结果与Real time PCR法一致性为100.0%。结论该检测方法具有快速、特异及灵敏的特点,为在基层和现场快速检测H7亚型禽流感病毒提供了新的方法。展开更多
目的:建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法,为其基层检测的展开提供依据和便利。方法:利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flo...目的:建立一种快速、高效、可视化的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1检测方法,为其基层检测的展开提供依据和便利。方法:利用重组酶聚合酶扩增结合胶体金侧向流试纸条技术(Recombinase polymerase amplification combined with a lateral flow dipstick,RPA-LFD),辅以手持式胶体金读数仪;根据mcr-1基因保守序列设计合成一对特异性RPA引物,通过对反应条件和体系的优化,以及特异性试验、灵敏度试验、模拟食样试验和实际样品试验,成功建立了可视化定量检测细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD方法。结果:在引物浓度400 nmol/L,引物比例1:1时,该方法最佳反应条件为Mg^(2+)浓度14.0 mmol/L,反应温度37℃,反应时间20 min;灵敏度好,标准曲线方程为y=0.117x+0.051,定量限为10^(1)~108 copies/μL,检出限为10^(1)copies/μL,比PCR法低一个数量级且模拟样品检出结果与PCR法一致。利用建立的RPA-LFD法对猪肉样品、鸡肉样品、生猪养殖场环境样品、肉鸡养殖场环境样品、大肠杆菌分离株和弯曲肠杆菌分离株各15份中多黏菌素耐药基因mcr-1携带情况进行分析;RPA-LFD法与常规PCR法阳性样本检出率一致,共检出9份mcr-1基因阳性样品。RPA-LFD定量分析显示,阳性样品中mcr-1基因浓度在4.5×10^(2)~8.6×10^(4)copies/μL之间。结论:本研究建立的细菌多黏菌素耐药基因mcr-1的RPA-LFD检测法特异性强、灵敏性高、操作简单,可广泛应用于基层检验。展开更多
为建立一种快速、准确的猪霍乱沙门菌现场检测方法,针对猪霍乱沙门菌侵袭蛋白A(Invasion protein A,invA)基因序列设计特异性引物和探针,优化反应条件,建立重组酶聚合酶等温扩增结合侧向流层析试纸条(RPA-LFS)检测方法。结果表明:建立...为建立一种快速、准确的猪霍乱沙门菌现场检测方法,针对猪霍乱沙门菌侵袭蛋白A(Invasion protein A,invA)基因序列设计特异性引物和探针,优化反应条件,建立重组酶聚合酶等温扩增结合侧向流层析试纸条(RPA-LFS)检测方法。结果表明:建立的方法在39℃等温条件下15 min内即可特异性检出猪霍乱沙门菌,与金黄色葡萄球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、铜绿假单胞菌、单增李斯特菌无交叉反应,该方法对猪霍乱沙门菌的最低检出限为1 CFU/反应;应用该方法对50份猪肉样本进行检测,与PCR方法检测结果一致。建立的猪霍乱沙门菌现场RPA-LFS检测方法敏感性高、特异性强、反应快速、操作简便的特点,可应用于猪霍乱沙门菌的临床快速检测。展开更多
文摘目的建立一种快速、灵敏、可视化的H7亚型禽流感病毒等温核酸扩增检测方法。方法针对H7N9禽流感病毒的HA片段保守区序列设计引物、探针,优化反应温度,建立H7亚型禽流感病毒的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条检测技术,评价其特异性和敏感性,并与Real time PCR方法进行比较。结果该方法检测H7亚型禽流感病毒的最低检出限为20拷贝/μL,与其他流感/禽流感病毒无交叉反应,反应可在20~50℃温度范围内进行,临床样本检测结果与Real time PCR法一致性为100.0%。结论该检测方法具有快速、特异及灵敏的特点,为在基层和现场快速检测H7亚型禽流感病毒提供了新的方法。
文摘为建立一种快速、准确的猪霍乱沙门菌现场检测方法,针对猪霍乱沙门菌侵袭蛋白A(Invasion protein A,invA)基因序列设计特异性引物和探针,优化反应条件,建立重组酶聚合酶等温扩增结合侧向流层析试纸条(RPA-LFS)检测方法。结果表明:建立的方法在39℃等温条件下15 min内即可特异性检出猪霍乱沙门菌,与金黄色葡萄球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌、铜绿假单胞菌、单增李斯特菌无交叉反应,该方法对猪霍乱沙门菌的最低检出限为1 CFU/反应;应用该方法对50份猪肉样本进行检测,与PCR方法检测结果一致。建立的猪霍乱沙门菌现场RPA-LFS检测方法敏感性高、特异性强、反应快速、操作简便的特点,可应用于猪霍乱沙门菌的临床快速检测。
