猪多杀性巴氏杆菌4个重组蛋白的小鼠免疫保护效力比较 被引量：1

1

作者 孙鑫妍 王怡涤 +4 位作者 关丽君 史琳琪 薛云 司丽芳 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1172-1178,共7页

为筛选多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据GenBank中登录的Pm基因序列,设计相应引物,经PCR扩增Pm torA、prX、gpmA和thiB基因片段,分别克隆于原核表达载体pET28a中,构建各重组表达质粒,经... 为筛选多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据GenBank中登录的Pm基因序列,设计相应引物,经PCR扩增Pm torA、prX、gpmA和thiB基因片段,分别克隆于原核表达载体pET28a中,构建各重组表达质粒,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达,采用His6标签蛋白纯化试剂盒纯化获得4个重组蛋白rTorA、rPrX、rPGAM和rThiB,同时利用透析膜制备rTorA的粗提蛋白(rTorA-C)。SDS-PAGE检测结果显示,分别在91 ku、25 ku、32 ku及41 ku处出现目的条带,表明4个重组蛋白均正确表达,其中rTorA主要以包涵体形式表达,少量表达在上清中;rPrX、rPGAM和rThiB主要以可溶性形式表达;各重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的7.44%~61.46%,各重组蛋白纯化后的纯度为76%~98.15%,浓度为0.15 mg/mL~4.56 mg/mL。Western blot检测结果显示,分别在上述4个位置处出现特异性条带。将4个纯化蛋白和rTorA-C分别与MontanideTM ISA 201 VG佐剂混合制成亚单位疫苗,免疫小鼠后分别于首免前、首免后14 d、二免后14 d(首免后28 d)采血,分离血清,通过间接ELISA方法检测各组小鼠抗体水平;二免后15 d采用4倍半数致死剂量(LD50)A型Pm强毒A5株菌液进行腹腔注射攻毒,观察并记录小鼠死亡及发病情况至21 d。ELISA检测结果显示,各重组蛋白免疫组小鼠的IgG抗体水平均随免疫次数的增加而升高,与PBS对照组相比差异均极显著(P<0.01)。攻毒试验结果显示,PBS对照组小鼠攻毒后24 h内开始发病,10 d内全部死亡(10/10);发病小鼠主要症状为精神萎靡、食欲减退或废绝,被毛凌乱,对外界刺激无明显反应等;对死亡小鼠剖检,各组织器官主要表现为出血为特征的败血症的剖检变化。各重组蛋白免疫组小鼠中,也出现了不同程度的发病或死亡。rTorA、rTorA-C、rPGAM、rThiB和rPrX免疫组小鼠的免疫保护率分别为60%、40%、100%、20%和0。本研究首次在相同条件下对Pm 4个重要重组抗原蛋白的免疫保护效力进行了对比分析,筛选出的rPGAM和rTorA具有作为亚单位疫苗靶抗原的潜力,为Pm亚单位疫苗候选保护性抗原蛋白的筛选奠定基础。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 重组表达 小鼠 免疫保护效力 亚单位疫苗

下载PDF 职称材料

表达H5亚型禽流感病毒HA基因的DNA疫苗免疫保护效力研究 被引量：11

2

作者 姜永萍 于康震 +3 位作者 邓国华 田国斌 乔传玲 陈化兰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期1071-1075,共5页

表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA... 表达高致病力禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1) [GD/1/96(H5N1)]HA基因的DNA疫苗质粒pCIHA5具有良好的免疫保护性,为了将其开发并应用于实际,对其免疫保护效力进行了进一步的研究。结果表明,用10、40、70、100和150g pCIHA5和油苗1次免疫后,其免疫保护率分别为12.5%(1/8)、58.3%(7/12)、72.7%(8/11)、50.0%(6/12)、66.7%(8/12)和100%(12/12),其中70和100g剂量组的病毒分离结果为1/8和2/6;用剂量为5、20、35和50g pCIHA5分别免疫2次,免疫保护率分别为45.5%(5/11)、58.3%(7/12)、58.3%(7/12)和91.7%(11/12),5g的病毒分离结果为1/5,其余组未分离出病毒;pCIHA5免疫后AGP抗体均未检出,油苗免疫后其HI抗体虽高,但AGP抗体也呈阳性。结果显示,加强免疫应为DNA疫苗质粒pCIHA5的安全免疫方式,DNA疫苗质粒pCIHA5虽具有较为稳定的免疫原性和免疫保护性,但有必要进一步提高其在肌肉组织中的有效表达水平和抗体反应水平。 展开更多

关键词 H5亚型禽流感病毒 HA基因 基因表达 DNA疫苗 免疫保护效力

下载PDF 职称材料

H120活疫苗对部分基因型传染性支气管炎病毒的免疫保护效力 被引量：11

3

作者 张小荣 程小果 +5 位作者 张建军 王小波 杨瑞 秦乐 焦库华 吴艳涛 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期1-5,共5页

对LH、PZ、CZ-JT和JT等最新分离的传染性支气管炎病毒(IBV)进行S1基因序列分析和基因分型。结果表明:LH株和PZ株均属于QX基因型,但分属2个不同的基因亚群;CZ-JT株属于HN08基因型;JT株则属于CK/CH/LSC/99I基因型。用商品化传染性支气管... 对LH、PZ、CZ-JT和JT等最新分离的传染性支气管炎病毒(IBV)进行S1基因序列分析和基因分型。结果表明:LH株和PZ株均属于QX基因型,但分属2个不同的基因亚群;CZ-JT株属于HN08基因型;JT株则属于CK/CH/LSC/99I基因型。用商品化传染性支气管炎活疫苗(H120株)对4个分离株和M41标准强毒株的免疫攻毒保护试验结果表明:H120疫苗能够对属于Mass-type的M41标准强毒株提供完全保护;对LH株和PZ株可提供临床保护,但试验鸡可检出较高比例的气管和肾脏排毒;对CZ-JT株和JT株只能提供部分临床保护,且试验鸡气管和肾脏排毒较为严重。研究结果提示Mass-type疫苗已经不能对当前流行毒株提供完全保护,迫切需要研制新的疫苗以适应生产的需要。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 传染性支气管炎活疫苗(H120株) 流行毒株 免疫保护效力

下载PDF 职称材料

猪霍乱沙门菌菌蜕的制备及免疫保护效力研究 被引量：2

4

作者 单晓枫 陈龙 +4 位作者 李茂辉 康元环 孙武文 张伟 钱爱东 《中国兽药杂志》 北大核心 2016年第9期22-25,共4页

为制备猪霍乱沙门菌菌蜕并研究其免疫保护效力,克隆噬菌体phi X174裂解基因E,与p BV220连接,构建温控溶菌表达载体,将该载体转入猪霍乱沙门菌TTB1中,制备菌蜕并对其裂解率、安全性以及对小鼠的免疫保护效力进行了研究。结果显示:成功克... 为制备猪霍乱沙门菌菌蜕并研究其免疫保护效力,克隆噬菌体phi X174裂解基因E,与p BV220连接,构建温控溶菌表达载体,将该载体转入猪霍乱沙门菌TTB1中,制备菌蜕并对其裂解率、安全性以及对小鼠的免疫保护效力进行了研究。结果显示:成功克隆了裂解基因E、片段大小274 bp,构建了温控溶菌质粒载体p BVE,制备了猪霍乱沙门菌菌蜕,其裂解率最高为99.46%、经冻干灭活残余活菌,安全性试验检测证实其安全后,对小鼠进行了免疫保护试验,其保护率为70%、与弗氏佐剂灭活苗保护率相当、优于甲醛灭活苗。研究为猪霍乱沙门菌感染的防治奠定了基础。 展开更多

关键词 猪霍乱沙门菌 菌蜕 免疫保护效力 裂解基因E 裂解效率

下载PDF 职称材料

副猪嗜血杆菌灭活疫苗对仔猪免疫保护效力的研究 被引量：9

5

作者 宋凤香 陆桂英 +1 位作者 肖丽辉 肖毅 《山东畜牧兽医》 2010年第6期8-9,共2页

以副猪嗜血杆菌DZ02分离株为抗原研制的副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗物理性状稳定,安全性良好,并具有较好的免疫保护效力。含菌数为8×108CFU/头副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗加强免疫后14d可有效保护免疫猪免受同源副猪嗜血杆菌菌株... 以副猪嗜血杆菌DZ02分离株为抗原研制的副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗物理性状稳定,安全性良好,并具有较好的免疫保护效力。含菌数为8×108CFU/头副猪嗜血杆菌油乳剂灭活疫苗加强免疫后14d可有效保护免疫猪免受同源副猪嗜血杆菌菌株攻毒发病,在德州市5个规模化猪场实际应用可保护大群发病率降低至1.9%,比未免疫猪群发病率下降9.0%,且5个免疫猪群的副猪嗜血杆菌病的发病率均控制在2.5%以下。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 灭活疫苗 仔猪 免疫保护效力 研究

下载PDF 职称材料

H7N9禽流感DNA疫苗的免疫保护效力研究

6

作者 和扬彩 《畜禽业》 2020年第6期35-35,共1页

禽流感病毒可以导致鸟类家禽出现死亡问题。H7N9禽流感属于高致病性的禽流感,不但会造成严重的公共卫生安全事件,还会导致养禽业的巨大经济损失。我国目前主要利用H7N9疫苗进行免疫接种,进而控制H7N9禽流感的传播与发展。然而H7N9高致... 禽流感病毒可以导致鸟类家禽出现死亡问题。H7N9禽流感属于高致病性的禽流感,不但会造成严重的公共卫生安全事件,还会导致养禽业的巨大经济损失。我国目前主要利用H7N9疫苗进行免疫接种,进而控制H7N9禽流感的传播与发展。然而H7N9高致病性的病毒进化非常迅速,因此对H7N9禽流感的防控提出了更高的要求。主要研究H7N9禽流感DNA疫苗的免疫保护效力。 展开更多

关键词 H7N9禽流感 DNA疫苗 免疫保护效力

下载PDF 职称材料

鸭坦布苏病毒灭活油乳苗的制备及免疫效力测定 被引量：18

7

作者 李振华 李小康 +3 位作者 郭香玲 张春杰 刘凤军 王臣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期388-391,共4页

鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭的产蛋量急剧下降,甚至绝产。为评价其灭活疫苗的免疫效力,本实验从产蛋下降综合征的病鸭中分离鉴定到一株DTMUV,经鸭胚增殖,测定其尿囊液中病毒含量为5×102.25ELD50/mL;采用该尿囊... 鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭的产蛋量急剧下降,甚至绝产。为评价其灭活疫苗的免疫效力,本实验从产蛋下降综合征的病鸭中分离鉴定到一株DTMUV,经鸭胚增殖,测定其尿囊液中病毒含量为5×102.25ELD50/mL;采用该尿囊液按照常规方法制备灭活油乳苗。将10日龄雏鸭分成4组,每组20只,分别免疫0.2 mL,0.5 mL,0.8 mL疫苗,以及PBS对照组,并于免疫后28 d攻毒。通过间接ELISA法检测鸭血清中抗体水平,结果显示,在免疫后7 d～21 d内,其中0.5 mL免疫组抗体水平与对照组相比差异极显著(p<0.01);免疫21 d时,E玫瑰花环试验检测鸭血清中T淋巴细胞数量,结果 0.5 mL组玫瑰花环形成率为67.09±1.23%,极显著(p<0.01)于对照组(51.86±1.14%);攻毒保护试验结果显示,0.2 mL组免疫保护率为80%,0.5 mL和0.8 mL组疫苗保护率均为100%,而对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中3只死亡。实验结果表明,本研究制备的鸭坦布苏病灭活疫苗能够有效诱导抗体和细胞免疫反应,为进一步研究鸭坦布苏病疫苗提供了实验数据。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 灭活油乳苗 免疫保护效力

下载PDF 职称材料

季节性流感疫苗对小鼠感染H7N9禽流感病毒的保护效力 被引量：1

8

作者 吕琦 鲍琳琳 +6 位作者 许黎黎 邓巍 李枫棣 袁静 于品 姚艳丰 秦川 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第1期44-47,共4页

目的 评价季节性流感裂解疫苗对流感病毒H7N9的免疫保护效力.方法 用我国2012～2013年度季节性流感裂解疫苗,以腹腔注射方式免疫BALB/c小鼠,并设PBS免疫模型组,末次免疫14 d后以5 LD50 A/Anhui/1（H7N9）进行攻试验.感染后观察记录小鼠... 目的 评价季节性流感裂解疫苗对流感病毒H7N9的免疫保护效力.方法 用我国2012～2013年度季节性流感裂解疫苗,以腹腔注射方式免疫BALB/c小鼠,并设PBS免疫模型组,末次免疫14 d后以5 LD50 A/Anhui/1（H7N9）进行攻试验.感染后观察记录小鼠临床表现,体重变化,并分别于第2天和第4天每组处死3只小鼠,取肺组织和鼻甲骨测病毒滴度和载量.结果 感染后疫苗与模型组小鼠体重下降明显,疫苗组存活率为10%,模型组全部死亡.感染后第4天疫苗组鼻甲骨滴度显著低于模型组.血凝抑制试验及中和实验表明免疫小鼠血清无中和H7N9病毒抗体.结论 季节性流感疫苗在小鼠中对于H7N9流感病毒感染无明显保护作用. 展开更多

关键词 H7N9流感病毒 季节性流感疫苗 免疫保护效力

下载PDF 职称材料

血清5型和13型副猪嗜血杆菌二价灭活苗的制备和免疫效果评价 被引量：1

9

作者 朱璐 范小兵 +5 位作者 王正皓 代科 文心田 曹三杰 赵勤 文翼平 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期514-519,共6页

【目的】制备一种用于预防副猪嗜血杆菌病的二价灭活苗,并对其免疫效力进行评价。【方法】选择四川地区流行的副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)血清5型MC-203株和血清13型XJ-103株,用甲醛灭活后,经PBS重悬,将2种菌液与佐剂(铝胶)... 【目的】制备一种用于预防副猪嗜血杆菌病的二价灭活苗,并对其免疫效力进行评价。【方法】选择四川地区流行的副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)血清5型MC-203株和血清13型XJ-103株,用甲醛灭活后,经PBS重悬,将2种菌液与佐剂(铝胶)按1:1:2的比例混合制出二价灭活苗。随后用制备的灭活苗免疫仔猪进行相关安全性检验,抗体滴度检测。同时为了对比制备疫苗与国产商品疫苗和进口商品疫苗的免疫效果,进行了仔猪免疫保护效果评价实验。【结果】(1)用0.2%的甲醛在37℃作用20 h可将HPS完全灭活。(2)灭活苗免疫仔猪后未造成不良反应,安全性好。(3)免疫仔猪后14 d即可在体内检测到HPS特异性抗体,196 d的血清中仍可检测到HPS抗体。(4)仔猪免疫保护效力试验表明,所制备的灭活疫苗、进口商品疫苗和国产商品疫苗的免疫保护率分别为80%、80%、60%。【结论】制备的HPS灭活苗免疫仔猪,可以产生较好的免疫应答,并且能在一定程度上抵御HPS的感染。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 二价灭活苗 抗体滴度 免疫保护效力

下载PDF 职称材料

仔猪白痢毒性大肠杆菌粗制核糖体疫苗的初步研究

10

作者 李靖炎 陈云鹤 +1 位作者 周瑆良 郑子修 《Zoological Research》 SCIE CAS 1984年第2期169-174,共6页

以硫酸铵沉淀的方法制备了仔猪白痢病原体——毒性大肠杆菌的核糖体粗制品,而未使用超速离心设备。本工作表明如此制备的核糖体也同样有很高的免疫保护效力。给小鼠皮下注射50或100微克核糖体15天后,用四倍于全数致死量的活菌作皮下攻击... 以硫酸铵沉淀的方法制备了仔猪白痢病原体——毒性大肠杆菌的核糖体粗制品,而未使用超速离心设备。本工作表明如此制备的核糖体也同样有很高的免疫保护效力。给小鼠皮下注射50或100微克核糖体15天后,用四倍于全数致死量的活菌作皮下攻击,动物百分之百存活(P<0.001),注射25微克,即已可存活86.7%(P<0.001)。皮下给予核糖体500微克后两个月,进行皮下攻击,动物仍可存活94.7%(P<0.001)。皮下免疫注射后进行腹腔攻击,免疫效果即低得多,此点与文献上肺炎双球菌核糖体的情况相似。 展开更多

关键词 肺炎双球菌 仔猪白痢 免疫效果 免疫保护效力 超速离心 致死量 硫酸铵沉淀 大肠杆菌

下载PDF 职称材料

抗口蹄疫疫苗问世

11

《医药与保健》 2001年第6期18-18,共1页

关键词 口蹄疫疫苗 基因工程疫苗 O型口蹄疫病毒 免疫保护效力 生命科学 人工感染 乳状液 活性蛋白 疫苗免疫 二次免疫

下载PDF 职称材料

鸭疫里默氏杆菌类似crp基因的鉴定及其突变株对雏鸭免疫效果的评价 被引量：8

12

作者 刘青 卞晓萍 +1 位作者 唐一波 王豪举 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2322-2329,共8页

旨在鉴定鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)中的crp基因,并探究该基因与菌株毒力的关系,了解crp基因突变株的免疫保护效力,为开发新型R.anatipestifer减毒活疫苗奠定基础。采用P-BLAST在R.anatipestifer蛋白质组中搜寻与沙门菌... 旨在鉴定鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)中的crp基因,并探究该基因与菌株毒力的关系,了解crp基因突变株的免疫保护效力,为开发新型R.anatipestifer减毒活疫苗奠定基础。采用P-BLAST在R.anatipestifer蛋白质组中搜寻与沙门菌crp基因相似的蛋白基因,发现R.anatipestifer CH-1株的B739-0373基因与沙门菌crp基因相似度为45%;将B739-0373基因克隆到表达载体上,并回补到沙门菌!crp突变株中,利用麦芽糖-麦康凯培养基颜色反应对其糖代谢功能进行鉴定,结果发现该基因可完全回补沙门菌自身crp的缺失,推测R.anatipestifer CH-1株的B739-0373基因具有类似沙门菌crp基因的功能;利用同源重组和自杀质粒,构建R.anatipestifer CH-1Δcrp突变株,比较野生及突变株的生长情况和毒力(包括黏附率、侵染率、LD50、在雏鸭肝脑中的定殖能力),结果表明,crp基因的缺失使菌株生长变得缓慢,黏附力(P<0.01)和侵染力(P<0.001)显著下降,对雏鸭的半数致死量(LD50)显著提高,在雏鸭肝脏、脑中定殖能力也显著下降(P<0.01);在CH-1Δcrp突变株免疫雏鸭后7,14,21d,检测雏鸭血清中IgG水平,并以R.anatipestifer野生株对免疫后的雏鸭进行肌注攻毒,观察其临床症状和免疫保护率,发现Δcrp突变株能刺激雏鸭产生高水平的IgG抗体(P<0.01),对雏鸭的免疫保护率为100%。综上表明,B739-0373基因鉴定为R.anatipestifer CH-1株的类似crp基因,可全局调控该菌株的生长和毒力;安全剂量的CH-1Δcrp突变株可诱导雏鸭产生较强的免疫保护效力,可作为新型减毒活疫苗的候选菌株。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 沙门菌 环腺苷酸受体蛋白基因(crp) 毒力 免疫保护效力

原文传递