传统的化学治疗对白血病的治疗效果越来越局限,目前有许多靶向免疫负调控药物及其相关的抗体研究,以求在血液病治疗上取得突破性进展。近几年,如细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4,CTLA-4)、程序性死亡受体-1(p...传统的化学治疗对白血病的治疗效果越来越局限,目前有许多靶向免疫负调控药物及其相关的抗体研究,以求在血液病治疗上取得突破性进展。近几年,如细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4,CTLA-4)、程序性死亡受体-1(programmed death receptor-1,PD-L1)及中药等负性免疫调控因素受到广泛关注。本文就靶向免疫负调控药物在血液病中的应用及前景做一综述。展开更多
目的:探讨含内质网驻留信号序列KDEL(Lys-Asp-Glu-Leu-COOH)及尿激酶型纤溶酶原激活物裂解位点(cleavage site of urokinase-typeplasminogen activator,uPAcs)的Lun-β靶向融合免疫毒素对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSC...目的:探讨含内质网驻留信号序列KDEL(Lys-Asp-Glu-Leu-COOH)及尿激酶型纤溶酶原激活物裂解位点(cleavage site of urokinase-typeplasminogen activator,uPAcs)的Lun-β靶向融合免疫毒素对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞的抑制活性。方法:RT-PCR法克隆Lun-β基因,引物延伸法构建Lun-β-KDEL-uPAcs融合基因,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转入大肠埃希菌后,诱导其表达融合蛋白Trx-EK-Lun-β-KDEL-uPAcs(简称TELKP),并纯化TELKP蛋白。用肠激酶(enterokinase,EK)切割TELKP后,纯化与回收靶向融合免疫毒素Lun-β-KDEL-uPAcs(简称LKP)。采用CCK-8、RT-PCR和蛋白质印迹等方法,体外检测毒素LKP经uPA酶裂解后释放的Lun-β对NSCLC细胞活性的抑制作用。结果:成功诱导重组载体pET-32a(+)/Lun-β-KDEL-uPAcs表达相对分子质量约4.88×104的含载体表达标签Trx的融合免疫毒素蛋白TELKP,EK酶切该蛋白获得含290个氨基酸、相对分子质量约3.18×104的靶向融合免疫毒素LKP。LKP经uPA酶体外裂解后能释放具肿瘤杀伤活性的细胞毒素小分子Lun-β,且后者的体外抗瘤效应呈剂量依赖性。结论:成功构建了Lun-β-KDEL-uPAcs融合基因及其原核表达载体,并获得相对分子质量约3.18×104的靶向融合免疫毒素LKP,该毒素经uPA酶体外裂解后能释放具杀瘤活性的Lun-β毒素小分子。展开更多
文摘传统的化学治疗对白血病的治疗效果越来越局限,目前有许多靶向免疫负调控药物及其相关的抗体研究,以求在血液病治疗上取得突破性进展。近几年,如细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4,CTLA-4)、程序性死亡受体-1(programmed death receptor-1,PD-L1)及中药等负性免疫调控因素受到广泛关注。本文就靶向免疫负调控药物在血液病中的应用及前景做一综述。
文摘目的:探讨含内质网驻留信号序列KDEL(Lys-Asp-Glu-Leu-COOH)及尿激酶型纤溶酶原激活物裂解位点(cleavage site of urokinase-typeplasminogen activator,uPAcs)的Lun-β靶向融合免疫毒素对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞的抑制活性。方法:RT-PCR法克隆Lun-β基因,引物延伸法构建Lun-β-KDEL-uPAcs融合基因,并亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转入大肠埃希菌后,诱导其表达融合蛋白Trx-EK-Lun-β-KDEL-uPAcs(简称TELKP),并纯化TELKP蛋白。用肠激酶(enterokinase,EK)切割TELKP后,纯化与回收靶向融合免疫毒素Lun-β-KDEL-uPAcs(简称LKP)。采用CCK-8、RT-PCR和蛋白质印迹等方法,体外检测毒素LKP经uPA酶裂解后释放的Lun-β对NSCLC细胞活性的抑制作用。结果:成功诱导重组载体pET-32a(+)/Lun-β-KDEL-uPAcs表达相对分子质量约4.88×104的含载体表达标签Trx的融合免疫毒素蛋白TELKP,EK酶切该蛋白获得含290个氨基酸、相对分子质量约3.18×104的靶向融合免疫毒素LKP。LKP经uPA酶体外裂解后能释放具肿瘤杀伤活性的细胞毒素小分子Lun-β,且后者的体外抗瘤效应呈剂量依赖性。结论:成功构建了Lun-β-KDEL-uPAcs融合基因及其原核表达载体,并获得相对分子质量约3.18×104的靶向融合免疫毒素LKP,该毒素经uPA酶体外裂解后能释放具杀瘤活性的Lun-β毒素小分子。
