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剑尾鱼IgZ基因的克隆及疫苗免疫对其在组织中表达的影响 被引量：2
1
作者 王片片 刘春 +2 位作者 李凯彬 石存斌 吴淑勤 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期318-326,共9页
为研究剑尾鱼igZ基因序列及其在疫苗免疫后的表达规律，本实验根据已知的EST库设计引物，利用RT-PCR等方法，获得剑尾鱼冶z基因cDNA全长序列，并进行生物信息学分析和疫苗免疫后组织表达分析。结果显示，剑尾鱼堙z基因全长序列为5420bp... 为研究剑尾鱼igZ基因序列及其在疫苗免疫后的表达规律，本实验根据已知的EST库设计引物，利用RT-PCR等方法，获得剑尾鱼冶z基因cDNA全长序列，并进行生物信息学分析和疫苗免疫后组织表达分析。结果显示，剑尾鱼堙z基因全长序列为5420bp，包含4个外显子和3个内含子；cDNA序列全长1527bp，包含一个1299bp的完整ORF框，该基因编码432个氨基酸，预测其编码蛋白的分子量大小为47．48ku，并具有IgZ的基本结构，与其他硬骨鱼类IgZ氨基酸序列一致性为28％～54％。荧光定量PCR分析结果显示，增z基因主要在剑尾鱼的头肾、脾脏和肠中分布，且疫苗免疫后11天内，lgZ基因在头肾、脾脏和肠组织中均表现为先上升后下降的趋势。头肾中IgZ基因的表达量在第4天时最高，为对照组的2．12倍；脾脏中IgZ基因在第4天时呈现最高峰，为对照组的4．65倍；肠组织中坛z基因的表达量在12h时有一个小高峰，第2天时最高，为对照组的11．41倍。本研究获得了剑尾鱼坛z基因cDNA全长序列，并对其表达规律进行了初步研究，发现IgZ在肠道黏膜免疫中具有重要作用，这将为进一步验证其在黏膜免疫中的作用以及剑尾鱼作为疾病研究模式动物和疫苗免疫评价模型奠定基础。 展开更多
关键词 剑尾鱼 免疫球蛋白z 基因克隆 免疫
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斜带石斑鱼IgM、IgZ和IgD重链基因的克隆 被引量：5
2
作者 黄贝 陈善楠 +1 位作者 徐镇 聂品 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1000-1010,共11页
应用RACE方法获得斜带石斑鱼膜结合型免疫球蛋白M（membrane-bound immu-noglobulin M,mIgM）,膜结合型免疫球蛋白D（mIgD）,分泌型免疫球蛋白Z（secretory immu-noglobulin Z,sIgZ）的重链基因。斜带石斑鱼膜结合型IgM重链恒定区包含3... 应用RACE方法获得斜带石斑鱼膜结合型免疫球蛋白M（membrane-bound immu-noglobulin M,mIgM）,膜结合型免疫球蛋白D（mIgD）,分泌型免疫球蛋白Z（secretory immu-noglobulin Z,sIgZ）的重链基因。斜带石斑鱼膜结合型IgM重链恒定区包含3个恒定区结构域（μ1,μ2,μ3）以及两个跨膜外显子（TM1,TM2）,TM1外显子与μ3结构域末端相连接。氨基酸序列相似性分析结果显示,斜带石斑鱼mIgM各恒定区与牙鲆mIgM恒定区相似性最高,为53%-78%。mIgD的cDNA全长为3 375 bp,开放阅读框包含3 006 bp,其恒定区由1个μ1外显子,7个δ外显子以及跨膜区组成。斜带石斑鱼IgD恒定区与鳜IgD各恒定区氨基酸序列相似性最高,δ1-δ7的相似性分别为75.5%、75.8%、65.4%、76.6%、88.1%、90.6%、82.8%,TM结构域为82.7%。sIgZ的基因结构与其他硬骨鱼类sIgZ的结构相似,包括4个外显子和3个内含子,内含子长度分别为222、129和458 bp。利用半定量PCR分别检测了这3种基因在斜带石斑鱼各器官/组织中的表达,发现mIgM在头肾、肾脏、脑、脾脏、肠、鳃、心脏和胸腺中均有表达;mIgD的mRNA在头肾、肾脏以及胸腺中有较高的表达,在肠中表达量较低;sIgZ mRNA主要分布于淋巴组织如头肾、肾及脾脏中,而在鳃、心脏和胸腺中的丰度较低。 展开更多
关键词 斜带石斑鱼 免疫球蛋白 膜结合型免疫球蛋白M 膜结合型免疫球蛋白D 分泌型免疫球蛋白z
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斜带石斑鱼IgZ重链基因的表达纯化和抗体制备 被引量：2
3
作者 姚占娟 张其中 崔淼 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期149-152,共4页
为获得斜带石斑鱼IgZ重链基因的多克隆抗体,成功构建了斜带石斑鱼免疫球蛋白IgZ重链重组蛋白表达质粒pQE30/IgZ,将其转化到大肠杆菌表达菌株M15中,确定了最佳诱导表达条件:IPTG 0.2 mmol/L,诱导温度30℃,诱导时间6 h。所获得的IgZ重链... 为获得斜带石斑鱼IgZ重链基因的多克隆抗体,成功构建了斜带石斑鱼免疫球蛋白IgZ重链重组蛋白表达质粒pQE30/IgZ,将其转化到大肠杆菌表达菌株M15中,确定了最佳诱导表达条件:IPTG 0.2 mmol/L,诱导温度30℃,诱导时间6 h。所获得的IgZ重链重组蛋白经Ni-NTA亲和层析后,纯度达到85%以上;以纯化的IgZ重链重组蛋白为抗原免疫新西兰兔,制备出相应的多克隆抗体,经ELISA测定抗血清效价约为1∶320 000。 展开更多
关键词 斜带石斑鱼 免疫球蛋白z 原核表达 多克隆抗体制备
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