中国猪瘟兔化弱毒株(C-株)兔脾组织毒主要保护性抗原E2(gp55)基因序列分析 被引量：11

1

作者 韩雪清 李红卫 +11 位作者 刘湘涛 李小兵 马军武 涂长春 胡弘博 殷震 蒋帅 刘伯华 赵启祖 李健强 李忠润 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期52-57,共6页

利用反转录 (RT)及套式PCR(N PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株 (C 株 )兔脾组织毒主要保护性抗原E2 (gp55)基因 ,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列 ,与国内外已发表的猪瘟病毒 (HCV)E2基因序列比较的结果是 :C 株兔脾毒与C 株细胞 (S... 利用反转录 (RT)及套式PCR(N PCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株 (C 株 )兔脾组织毒主要保护性抗原E2 (gp55)基因 ,成功地将其克隆并测定了核苷酸序列 ,与国内外已发表的猪瘟病毒 (HCV)E2基因序列比较的结果是 :C 株兔脾毒与C 株细胞 (SK6)毒、C 株疫苗 (犊牛睾丸细胞 ,HCLV C)毒、HCV SM株 (石门 )毒、Brescia株 (荷兰 )毒、Alfort株 (德国 )毒的E2核苷酸序列同源性分别为 98 87%、98 34 %、94 58%、91 0 0 %、80 78% ;氨基酸同源性分别为 98 95%、97 37%、94 2 2 %、91 60 %、89 2 3%。对C 株兔脾毒与C 株细胞毒、经典强毒及国内流行野毒E2上的A、B、C三个中和性抗原区的氨基酸组成进行了比较 ,其结果为 :C 株兔脾毒与C 株细胞毒的差异很小甚至没有差异 ,而与流行野毒及经典强毒在B、C区有较大的差异。我国经典强毒石门毒与国内80年代和 90年代流行毒之间有明显的差异 ,表明我国猪瘟流行毒株发生了变化。 展开更多

关键词 猪瘟 兔化弱毒株 兔脾组织毒E2基因 序列分析

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猪瘟病毒兔化弱毒株全长cDNA克隆的感染性鉴定 被引量：5

2

作者 胡建和 刘湘涛 +4 位作者 郭东升 张淼涛 田宏 张彦明 谢庆阁 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期143-147,共5页

用SrfⅠ限制性内切酶将构建的猪瘟病毒兔化弱毒株(C 株)全长cDNA线性化,体外转录获得其基因组RNA,利用脂质体将基因组RNA转染至SK 6细胞系,连续传代,收集5代以后培养细胞,采用RT PCR、荧光抗体直接法、夹心ELISA进行鉴定。结果表明,所... 用SrfⅠ限制性内切酶将构建的猪瘟病毒兔化弱毒株(C 株)全长cDNA线性化,体外转录获得其基因组RNA,利用脂质体将基因组RNA转染至SK 6细胞系,连续传代,收集5代以后培养细胞,采用RT PCR、荧光抗体直接法、夹心ELISA进行鉴定。结果表明,所构建的全长cDNA具有感染性。猪瘟病毒C 株全长感染性cDNA的成功构建,为在分子水平上进一步研究中国猪瘟病毒兔化弱毒株提供了极有价值的研究工具。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 兔化弱毒株 CDNA 克隆 感染性 转染 体外转录

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应用免疫金银技术检测猪瘟病毒兔化弱毒株感染细胞 被引量：4

3

作者 王镇 张海 丁明孝 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期356-359,共4页

在应用免疫金银染色技术成功地对猪瘟病毒弱毒疫苗Thiveral株（CSFV．T株）感染的PK－15细胞进行检测的基础上，通过改进免疫金银反应的条件，进一步提高了免疫金银法的检测灵敏度和特异性。目前已将该技术应用到对猪瘟病毒兔化弱毒疫... 在应用免疫金银染色技术成功地对猪瘟病毒弱毒疫苗Thiveral株（CSFV．T株）感染的PK－15细胞进行检测的基础上，通过改进免疫金银反应的条件，进一步提高了免疫金银法的检测灵敏度和特异性。目前已将该技术应用到对猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株（CSFVC株）感染细胞的检测，获得较为满意的实验结果。免疫金银染色技术的应用为研究CSFV在细胞中增殖的规律提供更为灵敏的检测手段，并且可望为猪瘟疫苗生产中的滴度测定提供一种简便有效的手段。 展开更多

关键词 免疫金银染色 IGSS 猪瘟病毒 兔化弱毒株 CSFV

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我国猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0基因的克隆及序列测定 被引量：6

4

作者 李红卫 刘湘涛 +2 位作者 李小兵 韩雪清 殷震 《中国病毒学》 CSCD 1999年第2期169-173,共5页

采用异硫氰酸胍一步法从４８０代猪瘟病毒兔化弱毒株（ＨＣＬＶ）脾毒中提取总ＲＮＡ，以该ＲＮＡ为模板，进行反转录，然后采用套式ＰＣＲ扩增出ＨＣＬＶ的囊膜糖蛋白Ｅ０基因，琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将扩增出的Ｅ０基... 采用异硫氰酸胍一步法从４８０代猪瘟病毒兔化弱毒株（ＨＣＬＶ）脾毒中提取总ＲＮＡ，以该ＲＮＡ为模板，进行反转录，然后采用套式ＰＣＲ扩增出ＨＣＬＶ的囊膜糖蛋白Ｅ０基因，琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将扩增出的Ｅ０基因克隆到ｐＧＥＭＴ载体中，用自动序列分析仪对其进行序列测定。将测得的序列及推导的氨基酸序列与国外测得的Ｃ株相应序列进行比较，结果发现，它们之间核苷酸序列同源性为９９．０８％，氨基酸序列同源性为９８．４２％。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 兔化弱毒株 囊膜糖蛋白 E0基因 HCLV

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接种猪瘟兔化弱毒株的永生化猪血管内皮细胞传代情况研究

5

作者 谭晓妮 张彦明 +1 位作者 张旭 邓力 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第7期11-15,共5页

在传至70代的永生化猪血管内皮细胞接种猪瘟兔化弱毒,72 h后收取细胞上清液并对处理的细胞进行传代培养,分别检测第70、75、80、90、100、105代接毒细胞中病毒,观察各代细胞的生长情况。结果表明,接种猪瘟兔化弱毒后20代(第90代永生化... 在传至70代的永生化猪血管内皮细胞接种猪瘟兔化弱毒,72 h后收取细胞上清液并对处理的细胞进行传代培养,分别检测第70、75、80、90、100、105代接毒细胞中病毒,观察各代细胞的生长情况。结果表明,接种猪瘟兔化弱毒后20代(第90代永生化猪血管内皮细胞)的细胞与正常的形态相似,但传至接毒后35代(第105代永生化猪血管内皮细胞)时,细胞稍有拉长现象。各代次细胞中都有猪瘟兔化弱毒的检出。本研究为永生化猪血管内皮细胞生产猪瘟兔化弱毒疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒株(HCLV) 永生化猪血管内皮细胞 形态变化 细胞传代

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猪肺炎霉形体兔化弱毒株的超微结构及致病性研究——Ⅱ.兔化弱毒株的致病性 被引量：7

6

作者 张启敬 徐伟 +2 位作者 李继庚 丁庆猷 王桂敏 《电子显微学报》 CAS CSCD 1990年第1期5-9,共5页

扫描电子显微镜观察表明,已适应于兔体的猪肺炎霉形体兔化弱毒株能够在猪肺内繁殖,接种后30天可见到大量的霉形体生长于支气管纤毛丛表面;45天霉形体数量减少且变形;60天霉形体趋向消失。在长达60天的感染过程中,兔化弱毒株对纤毛的损... 扫描电子显微镜观察表明,已适应于兔体的猪肺炎霉形体兔化弱毒株能够在猪肺内繁殖,接种后30天可见到大量的霉形体生长于支气管纤毛丛表面;45天霉形体数量减少且变形;60天霉形体趋向消失。在长达60天的感染过程中,兔化弱毒株对纤毛的损伤轻微,肺泡的病变也较轻。而济南株强毒在接种后15天就造成了纤毛大面积脱落,45天内仍然持续进行;既使无眼观病变的部位其支气管纤毛丛也发生了严重脱落。结果证明猪肺炎霉形体兔化弱毒株对猪的致病力减弱。 展开更多

关键词 猪肺炎 兔化弱毒株 结构 霉形体

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猪肺炎霉形体兔化弱毒株的超微结构及致病性研究——1.兔化弱毒株的超微结构 被引量：4

7

作者 张启敬 徐伟 +2 位作者 李继庚 王桂敏 丁庆猷 《电子显微学报》 CAS CSCD 1989年第4期13-18,共6页

利用透射电子显微镜研究了猪肺炎霉形体兔化弱毒株的超微结构,并与济南强毒株进行了比较。结果表明猪肺炎霉形体兔化弱毒株主要呈圆形、椭园形,直径在20—1000nm之间;具有厚度约7nm的细胞膜;胞浆内充满颗粒状核糖体,其间散在有淡染区,... 利用透射电子显微镜研究了猪肺炎霉形体兔化弱毒株的超微结构,并与济南强毒株进行了比较。结果表明猪肺炎霉形体兔化弱毒株主要呈圆形、椭园形,直径在20—1000nm之间;具有厚度约7nm的细胞膜;胞浆内充满颗粒状核糖体,其间散在有淡染区,淡染区内可见到丝状的核酸物质。细胞膜外有一英膜状结构,兔化弱毒株的英膜厚约12nm,在较低的放大倍数下,看上去象是细胞膜的电子致密外层,进一步放大后发现是单独存在于细胞膜外的电子致密度高的结构;济南株的荚膜厚约20nm,与细胞膜的外层之间不存在明显的电子透明区。 展开更多

关键词 猪肺炎 霉形体 兔化弱毒株 免疫

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基于mRNA-Seq技术分析猪瘟兔化弱毒株感染家兔后脾脏转录组学变化 被引量：1

8

作者 邓玲聪 廖青 +3 位作者 邓吉平 纪佳雨 袁露露 许道军 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第7期6-13,共8页

为了探究猪瘟兔化弱毒株(Chinese strain, C株)在家兔体内的病毒清除机制,试验以新西兰兔为材料,适应性喂养7 d后随机分为3组,即1个对照组和2个试验组,每组6只。2个试验组家兔分别在感染C株后第5天和第9天耳缘静脉注射空气处死,取出脾脏... 为了探究猪瘟兔化弱毒株(Chinese strain, C株)在家兔体内的病毒清除机制,试验以新西兰兔为材料,适应性喂养7 d后随机分为3组,即1个对照组和2个试验组,每组6只。2个试验组家兔分别在感染C株后第5天和第9天耳缘静脉注射空气处死,取出脾脏,获得T1和T2样本,采用TRIzol法提取脾脏总RNA,利用mRNA-Seq技术对家兔脾脏进行转录组测序与分析,以正常家兔基因组为参考,筛选出差异表达基因并进行GO功能富集分析和KEGG信号通路分析,并利用实时荧光定量PCR方法对部分差异基因进行验证。结果表明:与对照组相比,感染C株后T1样本获得的上调基因和下调基因分别有61个和25个,T2样本分别有22个和8个。T1样本差异基因映射到109个GO条目,T2样本差异基因映射到61个GO条目,T1和T2样本差异基因均富集到代谢过程和细胞进程。T1样本差异基因主要富集在趋化因子信号通路、细胞因子与其受体通路、细胞周期通路、RIG-Ⅰ样受体信号通路和Toll样受体信号通路,T2样本差异基因主要富集在精氨酸和脯氨酸代谢通路、维生素B6代谢通路以及钙信号通路。实时荧光定量PCR验证结果与mRNA-Seq技术的分析结果基本一致。说明家兔感染C株后,T1样本主要通过免疫反应抵抗、清除病毒,T2样本主要通过细胞代谢相关基因的调控来恢复机体细胞的正常功能。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒株 脾脏 MRNA-SEQ 转录组分析 GO功能富集分析 KEGG信号通路分析

原文传递

猪瘟兔化弱毒株克隆化的研究

9

作者 王欢 《中国兽医科技》 CSCD 1989年第6期3-5,共3页

采用终点稀释——纯化染毒细胞的方法对中国株猪瘟兔化弱毒(以下简称C株)种毒进行了3次克隆,最后1次克隆获得10株克隆毒。通过对10株克隆毒的10项病毒学检验,确认这10株克隆毒与种毒的生物学特性基本一致,未发现变异毒株,无杂毒污染。... 采用终点稀释——纯化染毒细胞的方法对中国株猪瘟兔化弱毒(以下简称C株)种毒进行了3次克隆,最后1次克隆获得10株克隆毒。通过对10株克隆毒的10项病毒学检验,确认这10株克隆毒与种毒的生物学特性基本一致,未发现变异毒株,无杂毒污染。本克隆方法比目前文献上介绍的有关方法更简单实用,在克隆非致细胞病变病毒方面取得一项较好的经验。 展开更多

关键词 猪 猪瘟 兔化弱毒株 克隆化 病毒

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猪瘟兔化弱毒株(C株)ST敏感细胞的克隆和鉴别 被引量：2

10

作者 商晓桂 韩志玲 +5 位作者 毕力格 高永伟 闫聪 郝鹏 张贵刚 刘国英 《现代畜牧兽医》 2019年第1期1-6,共6页

本研究采用有限稀释法将ST细胞进行克隆,将获取的单克隆细胞放大培养后接种猪瘟兔化弱毒株(C株),通过实时荧光定量RT-PCR技术定量检测毒液中病毒含量,筛选对猪瘟兔化弱毒株敏感的细胞株。试验结果获得D3株、C4株、C8株、D5株、E10株、E1... 本研究采用有限稀释法将ST细胞进行克隆,将获取的单克隆细胞放大培养后接种猪瘟兔化弱毒株(C株),通过实时荧光定量RT-PCR技术定量检测毒液中病毒含量,筛选对猪瘟兔化弱毒株敏感的细胞株。试验结果获得D3株、C4株、C8株、D5株、E10株、E11株、F9株和H9株共8株ST单克隆细胞。其中,C4株和E11株细胞对C株高度易感,收获毒液RNA拷贝数能够维持在106 copies/mL,并且高峰期毒液拷贝数可达107 copies/mL。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒株(C株) ST細胞 克隆 实时荧光定量RT-PCR

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基于高通量测序技术分析家兔感染猪瘟兔化弱毒株后脾脏的转录组学变化 被引量：9

11

作者 侯玉臻 赵丹彤 +5 位作者 刘国英 贺番 刘斌 付绍印 郝永清 张文广 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期316-323,共8页

本研究基于高通量测序技术对感染猪瘟兔化弱毒株(C株)后0h,12h,24h,30h,36h,48h的家兔脾脏组织进行测序,以家兔基因组作为参考,筛选感染后各时间点和对照组(0h)之间的差异基因。利用Uniprot和NCBI数据库查找各组中变化水平显著的前10个... 本研究基于高通量测序技术对感染猪瘟兔化弱毒株(C株)后0h,12h,24h,30h,36h,48h的家兔脾脏组织进行测序,以家兔基因组作为参考,筛选感染后各时间点和对照组(0h)之间的差异基因。利用Uniprot和NCBI数据库查找各组中变化水平显著的前10个差异基因的生物学功能。结果发现,感染后12h,24h,30h的前10个差异基因只有少数与炎症、免疫、凋亡等相关;感染后36h,48h的前10个差异基因完全相同,其中B2M、RLA-DR-ALPHA、CD74和IGJ参与抗病毒过程。GO功能注释结果显示:感染后各时间点的差异基因都和免疫、代谢、调控途径紧密相关。KEGG通路富集分析发现,感染后24h的差异基因富集到RIG-I样受体信号通路,感染后30h的差异基因富集到黏着斑和细胞外基质-受体相互作用通路,感染后36h和48h的差异基因共同富集到的通路有20个,其中蛋白酶体,溶酶体,核糖体,趋化因子信号通路,B细胞受体信号通路,抗原加工提呈通路和FcγR介导的吞噬通路与抗病毒相关。本研究建立的家兔感染C株后脾脏组织的差异表达基因数据库,将为进一步阐述家兔适应C株的分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒株 家兔脾脏 转录组分析

原文传递

猪瘟强毒株与兔化弱毒疫苗株的LAMP鉴别检测 被引量：10

12

作者 张改平 何文博 +5 位作者 王德国 周景明 邓瑞广 郭军庆 祁艳华 王爱萍 《郑州大学学报（理学版）》 CAS 北大核心 2014年第3期85-90,共6页

为了鉴别猪瘟病毒(CSFV)野毒感染和疫苗接种,系统比较分析CSFV标准强毒株、疫苗株、不同基因亚型的野毒株的全基因组序列差异,设计一套分别针对猪瘟强毒与弱毒NS5B基因的环介导等温扩增(LAMP)引物,建立特异性的猪瘟强毒株与疫苗株的LAM... 为了鉴别猪瘟病毒(CSFV)野毒感染和疫苗接种,系统比较分析CSFV标准强毒株、疫苗株、不同基因亚型的野毒株的全基因组序列差异,设计一套分别针对猪瘟强毒与弱毒NS5B基因的环介导等温扩增(LAMP)引物,建立特异性的猪瘟强毒株与疫苗株的LAMP检测方法.LAMP扩增产物用罗丹明B指示剂或者琼脂糖凝胶电泳进行检测.该方法特异性好,比RT-PCR灵敏度高出1 000倍,且重复性稳定性良好,为快速准确地鉴别CSFV野毒感染和疫苗接种提供了有效的方法. 展开更多

关键词 猪瘟强毒株 兔化弱毒疫苗株 环介导等温扩增 鉴别检测

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快速检测猪瘟兔化弱毒疫苗株的TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立 被引量：3

13

作者 高博 杨晓农 +3 位作者 于学辉 刘内生 向毅勇 曾光志 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第1期92-97,共6页

在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的5′端非编码区设计一对引物和一条TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了特异性检测HCLV的荧光定量RT-PCR方法.结果表明:该方法检测的最低拷贝数为45拷贝/μL,灵敏度比普通PCR方法高104倍,在较广的... 在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的5′端非编码区设计一对引物和一条TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了特异性检测HCLV的荧光定量RT-PCR方法.结果表明:该方法检测的最低拷贝数为45拷贝/μL,灵敏度比普通PCR方法高104倍,在较广的范围内(4.5×101～4.5×106拷贝/μL)有良好的线性关系(r=0.994);分别以乙型脑炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、副猪嗜血杆菌、牛病毒性腹泻/黏膜病病毒作为模板进行TaqManRT-PCR扩增,未出现阳性信号;4个不同浓度标准品组内试验变异系数为1.90%～5.82%,组间试验变异系数为4.02%～5.69%;HCLV3个cDNA样本组内试验变异系数为3.72%～4.93%;组间试验变异系数为2.99%～4.02%.该方法具有很好的灵敏性、特异性及稳定性,能够快速准确定量检测HCLV,为HCLV疫苗的研制、猪瘟病毒分子生物学等方面研究提供了一种快捷有效的工具. 展开更多

关键词 猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针 定量检测

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猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立 被引量：2

14

作者 胡继明 杨培培 +7 位作者 王颖 孙海芳 黄娟 陈俏俏 杨瑞梅 张传美 秦晓冰 单虎 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期943-949,共7页

本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆... 本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322bp和503bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6μg.mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被ApaⅠ酶切;8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群。建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 野毒株 兔化弱毒疫苗株 RT-PCR-RFLP

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口蹄疫兔化弱毒疫苗ZB株L蛋白N^2D、M^(143)L和E^(147)G氨基酸突变对病毒毒力影响的研究 被引量：1

15

作者 赵国洪 王继华 +3 位作者 李华春 何于雯 朱明旺 信爱国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期822-827,共6页

口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白L^(pro)是病毒的毒力因子之一。前期研究发现,FMDV兔化弱毒疫苗ZB株传代减毒致弱后,前导蛋白L^(pro)内仅存在3个氨基酸点突变(N^2D、M^(143)L和E^(147)G)。为确定这3个突变对病毒生物学特性的影响,本研究利用... 口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白L^(pro)是病毒的毒力因子之一。前期研究发现,FMDV兔化弱毒疫苗ZB株传代减毒致弱后,前导蛋白L^(pro)内仅存在3个氨基酸点突变(N^2D、M^(143)L和E^(147)G)。为确定这3个突变对病毒生物学特性的影响,本研究利用弱毒疫苗ZB株感染性分子克隆为骨架,构建获得含有这3个氨基酸回复突变的重组病毒r ZBatt-L,并比较其与亲本病毒r ZBatt生物学特性。结果显示,r ZBatt-L和r ZBatt在BHK-21细胞中均可以产生细胞病变效应,形成大小相似的噬斑,而在牛原代肾细胞(BK)中均不产生CPE;二者在BHK-21细胞中的生长曲线与病毒RNA复制动态相似(p>0.05),对乳鼠的致病性也无显著差异;测定了r ZBatt-L和r ZBatt分别感染BK诱导I型干扰素(IFN-α和β)能力,结果显示r ZBatt-L和r ZBatt均可以在感染早期诱导IFN-α表达,而感染晚期抑制IFN-α表达。相对的是,r ZBatt-L和r ZBatt感染细胞后均可以诱导IFN-β含量增加,并且二者诱导IFN-β含量无差异(p>0.05)。结果表明,FMDV弱毒疫苗ZB株L^(pro)蛋白中的N^2D、M^(143)L和E^(147)G突变不改变病毒的生物学特性,对病毒毒力不产生明显的影响。本研究明确了L^(pro)蛋白突变不是ZB株致弱的关键氨基酸位点。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 兔化弱毒疫苗株 ZB株 前导蛋白 点突变

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RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗 被引量：10

16

作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 黄秀琴 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期338-343,共6页

【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列... 【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。 展开更多

关键词 猪瘟病毒(CSFV) 猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV) RT-LAMP 浊度 特异性 敏感度

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中药复方病毒克对兔HCLV模型组织病毒含量影晌的研究

17

作者 江平康 刘群 +4 位作者 周李 杨荣 康莲莲 王赛 毕琳 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期41-43,46,共4页

探讨抗病毒中药复方制剂的抗病毒作用机理,为提高临床疗效和扩大临床应用范围提供试验依据,本研究采用水萃取法制备抗病毒中药复方流浸膏制剂,以HCLV"C"株为模式病毒,GAPDH、ACTB为内参基因,以FQ-PCR作为检测方法,研究该中药... 探讨抗病毒中药复方制剂的抗病毒作用机理,为提高临床疗效和扩大临床应用范围提供试验依据,本研究采用水萃取法制备抗病毒中药复方流浸膏制剂,以HCLV"C"株为模式病毒,GAPDH、ACTB为内参基因,以FQ-PCR作为检测方法,研究该中药复方制剂在对兔感染HCLV后脾脏、肠系膜淋巴结病毒增殖的变化情况。研究结果表明,高、中、低3个中药剂量组在连续5次给药后的24 h,即攻毒后的72、96、120、144 h,脾脏和肠系膜淋巴结中的HCLV含量低于对照组,脾脏中144 h病毒含量尤为明显(P<0.05),肠系膜淋巴结中72 h病毒含量尤为明显(P<0.05),说明该中药复方制剂在大剂量连续使用的情况下能明显抑制猪瘟兔化弱毒"C"株在淋巴结和脾脏中的增殖作用,并预示着这种抑制作用可能存在量效关系和时效关系。 展开更多

关键词 中药复方 猪瘟兔化弱毒“C”株 组织器官 含量

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不同猪瘟病毒株在ST细胞上的增殖研究 被引量：4

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作者 陈景容 《福建畜牧兽医》 2017年第3期9-11,共3页

在做荧光抗体检测病毒中和试验时,用不同毒株检测同一份血清样品经常出现不一样的效果。通过开展猪瘟病毒(兔化弱毒株)和猪瘟病毒(法国Thiveral株)在ST细胞上的增殖研究,掌握猪瘟活疫苗收获抗原的最佳时间,选择更好的毒株进行荧光抗体... 在做荧光抗体检测病毒中和试验时,用不同毒株检测同一份血清样品经常出现不一样的效果。通过开展猪瘟病毒(兔化弱毒株)和猪瘟病毒(法国Thiveral株)在ST细胞上的增殖研究,掌握猪瘟活疫苗收获抗原的最佳时间,选择更好的毒株进行荧光抗体检测病毒中和试验。结果表明:猪瘟病毒(兔化弱毒株)增值效果差,猪瘟病毒(法国Thiveral株)繁殖速度很快,在接种后30 h就能达到10^(5.4)TCID_(50)/mL,55 h达到最高峰10^(6.0)TCID_(50)/mL,72 h后呈平稳状态。 展开更多

关键词 ST细胞 猪瘟病毒(兔化弱毒株) 猪瘟病毒(法国Thiveral株)

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猪瘟弱毒疫苗使用的几个误区及对策

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作者 杨小冰 陈盛絮 《中国畜牧兽医文摘》 2018年第4期152-152,共1页

猪瘟到目前为止还是养猪业的头号疾病。猪瘟疫苗是预防该病的最好办法,目前我国应用的都是猪瘟兔化弱毒株（C株）弱毒活疫苗,C株猪瘟疫苗为国际公认的具有安全、高效、应激小等优点,可以安全地免疫接种任何怀孕期的母猪和吮乳仔猪,不影... 猪瘟到目前为止还是养猪业的头号疾病。猪瘟疫苗是预防该病的最好办法,目前我国应用的都是猪瘟兔化弱毒株（C株）弱毒活疫苗,C株猪瘟疫苗为国际公认的具有安全、高效、应激小等优点,可以安全地免疫接种任何怀孕期的母猪和吮乳仔猪,不影响受精率和存活率,不引起流产、死胎,可安全地用于建立种猪群。但在实际生产中即使在100%的免疫率下,还是有猪瘟散在发生,究其原因多是由免疫失败引起。 展开更多

关键词 猪瘟疫苗 弱毒活疫苗 疫苗使用 误区 兔化弱毒株 吮乳仔猪 免疫接种 免疫失败

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“文易宁”猪瘟弱毒活疫苗

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《动物保健》 2005年第9期29-29,共1页

关键词 猪瘟病毒 弱毒活疫苗 冷冻真空干燥 兔化弱毒株 C-株 淋巴结 保护剂 制成 家免

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