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程序性死亡分子1胞外区的表达及其抗血清对PCV2增殖的影响
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作者 王林青 徐朋丽 +3 位作者 陈曦艋 李洪炫 陈红英 赵丽 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2022年第3期443-448,共6页
为研究猪的程序性死亡分子1(PD-1)胞外区参与猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)感染的免疫调节功能,PCR扩增健康猪舌组织中PD-1胞外区,构建重组表达质粒p ET-28a-PD-1,转化至Rosetta(DE3)。经IPTG诱导表达后,采用SDS-PAGE... 为研究猪的程序性死亡分子1(PD-1)胞外区参与猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)感染的免疫调节功能,PCR扩增健康猪舌组织中PD-1胞外区,构建重组表达质粒p ET-28a-PD-1,转化至Rosetta(DE3)。经IPTG诱导表达后,采用SDS-PAGE和Western Blot检测重组PD-1胞外段蛋白ex PD-1表达情况。结果显示,重组菌p ET-28a-PD1/DE3,在37℃、0.5 mmol·L-1 IPTG诱导8 h时,ex PD-1蛋白的表达量最高,大小约为20 kDa,且以包涵体形式表达。然后将经纯化和复性获得的ex PD-1辅以佐剂免疫新西兰兔,制备兔抗ex PD-1血清,经Western Blot检测结果显示该抗血清具有较好的反应原性。用PCV2感染猪肾(Porcinekidney-15,PK-15)细胞,采用荧光定量PCR检测PD-1转录水平,结果显示PCV2感染PK-15细胞1~48 h时PD-1的m RNA转录水平均下调;用兔抗ex PD-1血清处理PK-15细胞后感染PCV2,PD-1的转录水平显著上调(P<0.01),且明显地抑制了PCV2的复制(P<0.01)。上述结果表明,在体外PCV2感染可引起PD-1转录水平下调,兔抗ex PD-1血清可通过封闭PD-1/PD-L1通路,抑制PCV2增殖。 展开更多
关键词 程序性死亡分子1 表达 兔抗pd-1血清 PCV2
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