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中性内切型纤维素酶在毕赤酵母中高水平表达的研究 被引量：21
1
作者 丁少军 宋美静 +3 位作者 杨红军 邢增涛 周蕊 曹杰 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期71-76,共6页
中性内切型纤维素酶在纺织及造纸工业具有重要的应用,为了进一步提高从我国草菇中克隆的一种新的中性内切型纤维素酶(EG1)在Pichiapastoris中的表达水平,我们进行了提高基因拷贝数及高密度发酵等多种手段实现其高水平表达的研究。在前... 中性内切型纤维素酶在纺织及造纸工业具有重要的应用,为了进一步提高从我国草菇中克隆的一种新的中性内切型纤维素酶(EG1)在Pichiapastoris中的表达水平,我们进行了提高基因拷贝数及高密度发酵等多种手段实现其高水平表达的研究。在前期研究的基础上,利用对已整合eg1的重组子再转化的方法,从含有2000μgLZeocin的YPDSZ平板上筛选到高抗Zeocin转化子,在摇瓶培养条件下,该转化子表达量比原来提高了3.8倍,在pH4～8条件下均有稳定表达,接种量(OD600=5.0)表达水平最好,提高甲醇的诱导浓度对表达有显著的促进作用。用3.2L发酵罐进行了高密度发酵,甲醇诱导95.5h后达到最高值,比摇瓶培养再提高了6.4倍,因此利用高抗Zeocin转化子及高密度发酵的手段,使EG1的表达水平提高了34倍,蛋白表达量达8.80mgmL,EG1酶活达到543.36IUmL,实现了中性内切纤维素酶的高水平表达,本研究将大大促进建立我国纺织用纤维素酶大规模高效生产技术。 展开更多
关键词 中性内切型纤维素酶 毕赤酵母 高水平表达
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不同碳源条件下草菇内切型纤维素酶基因(eg1)转录表达的分析 被引量：8
2
作者 丁少军 宋美静 +1 位作者 池杏微 BUSWELL JA 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期419-422,共4页
利用Northernblot方法分析了不同碳源条件下草菇切型纤维素酶基因(eg1)的表达.结果发现,在含有纤维素的液体培养基中生长10d,eg1在草菇菌丝中有高效表达;纤维二糖、α-乳糖、β-乳糖,也能诱导eg1的表达,但和纤维素相比,eg1的表达量相对... 利用Northernblot方法分析了不同碳源条件下草菇切型纤维素酶基因(eg1)的表达.结果发现,在含有纤维素的液体培养基中生长10d,eg1在草菇菌丝中有高效表达;纤维二糖、α-乳糖、β-乳糖,也能诱导eg1的表达,但和纤维素相比,eg1的表达量相对较低,并且它们的诱导效应在加入这类糖12h后迅速减弱;槐糖和龙胆二糖的诱导作用非常弱.在天然稻草为基质的固体栽培料生长时,草菇eg1的表达和草菇菌丝生长与出菇相对应,在菌丝生长期(d8)可见eg1的表达,d12时菌丝已长满,表达减弱,在出菇及菇体的分化及增大期,eg1的表达量逐渐增强,在成熟期达到最高水平;表明在草菇菇体发育中需要更多碳源及能源的补充,eg1在这方面起着非常重要的作用. 展开更多
关键词 草菇 内切型纤维素酶基因 转录表达
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米曲霉(Aspergillus oryzae)沪酿3.042内切型纤维素酶的分离纯化与鉴定 被引量：2
3
作者 武金霞 常淑英 +2 位作者 孙鹏 张永阔 张贺迎 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2012年第1期68-74,共7页
为了解米曲霉纤维素酶在物料分解过程中的作用,从米曲霉沪酿3.042成曲中提取粗酶液,利用DNS法分析了粗酶液中外切酶、内切酶及β-葡萄糖苷酶的活力.用刚果红染色法确定了沪酿3.042成曲粗酶液中含有4种内切型纤维素酶,分别称为Cx酶Ⅰ,Cx... 为了解米曲霉纤维素酶在物料分解过程中的作用,从米曲霉沪酿3.042成曲中提取粗酶液,利用DNS法分析了粗酶液中外切酶、内切酶及β-葡萄糖苷酶的活力.用刚果红染色法确定了沪酿3.042成曲粗酶液中含有4种内切型纤维素酶,分别称为Cx酶Ⅰ,Cx酶Ⅱ,Cx酶Ⅲ和Cx酶Ⅳ.经DEAE-Cellulose-52离子交换层析,0.15,0.20,0.25,0.30mol/L NaCl洗脱峰均测得内切型纤维素酶活性,制备电泳纯化得到4个内切型纤维素酶组分,SDS-PAGE结果显示,Cx酶Ⅰ,Cx酶Ⅱ,Cx酶Ⅲ为单体酶,分子质量分别为31 800,34 000,26 000u,Cx酶Ⅳ含有4个亚基,分子质量分别为14 000,23 600,26 000,33 500u.粗酶液中内切型纤维素酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为4.0. 展开更多
关键词 米曲霉 内切型纤维素酶 刚果红染色 离子交换层析 制备电泳
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赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)内切型纤维素酶组分鉴定及纯化
4
作者 武金霞 张永阔 田志鹏 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2011年第1期63-68,共6页
从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)匀浆液中提取出粗酶液,利用DNS法分析粗酶液中内切型纤维素酶(也称Cx酶)的活力.用刚果红染色法确定了赤子爱胜蚓含有3种内切型纤维素酶,将其分别称作Cx酶Ⅰ、Cx酶Ⅱ和Cx酶Ⅲ.经DEAE-Cellulose-52离子交换... 从赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)匀浆液中提取出粗酶液,利用DNS法分析粗酶液中内切型纤维素酶(也称Cx酶)的活力.用刚果红染色法确定了赤子爱胜蚓含有3种内切型纤维素酶,将其分别称作Cx酶Ⅰ、Cx酶Ⅱ和Cx酶Ⅲ.经DEAE-Cellulose-52离子交换层析分离内切型纤维素酶,得到0.15～0.20mol/L NaCl洗脱峰含有活性组分.以制备电泳得到了Cx酶Ⅰ和Cx酶Ⅱ,并用SDS-PAGE测定它们的分子质量分别为33 400u和28 800u.用DNS法测得在粗酶液中内切型纤维素酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH值为7.0. 展开更多
关键词 赤子爱胜蚓 内切型纤维素酶 离子交换层析 刚果红染色
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生物酶处理方法改善稻秸/聚乙烯界面相容性的研究 被引量：3
5
作者 梅长彤 周绪斌 +2 位作者 朱坤安 潘明珠 崔举庆 《林产工业》 北大核心 2009年第6期24-27,共4页
研究了生物酶处理对稻秸纤维表面改性效果以及对稻秸/聚乙烯界面相容性的影响。结果表明:经纯内切型纤维素酶处理,有效降低了稻秸纤维的表面润湿性和表面反应活性,改善了稻秸纤维与聚乙烯塑料的界面相容性,并使复合材料力学性能(存储模... 研究了生物酶处理对稻秸纤维表面改性效果以及对稻秸/聚乙烯界面相容性的影响。结果表明:经纯内切型纤维素酶处理,有效降低了稻秸纤维的表面润湿性和表面反应活性,改善了稻秸纤维与聚乙烯塑料的界面相容性,并使复合材料力学性能(存储模量)得以提高。 展开更多
关键词 内切型纤维素酶 稻秸 复合材料 界面
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