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DEC2通过阻断TGF-β/ROCK1信号通路抑制小鼠肾小球内皮细胞转分化和肾纤维化
1
作者 尹秀花 陈莉 +1 位作者 孟繁伟 姜鹰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期816-823,共8页
目的 基于分化型胚胎软骨发育基因2(DEC2)通过转化生长因子β/Rho相关激酶1(TGF-β/ROCK1)信号通路探讨对肾小球内皮细胞转分化的保护机制。方法 将小鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻(UUO)组、空载体处理的UUO组和过表达DEC2的UUO组... 目的 基于分化型胚胎软骨发育基因2(DEC2)通过转化生长因子β/Rho相关激酶1(TGF-β/ROCK1)信号通路探讨对肾小球内皮细胞转分化的保护机制。方法 将小鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻(UUO)组、空载体处理的UUO组和过表达DEC2的UUO组,每组6只。除假手术组外,其余组建立UUO模型。空载体处理的UUO组和过表达DEC2的UUO组,于第0天(UUO后立即)在超声系统的引导下每侧肾脏注射10μL(108个嗜菌斑形成单位[PFU])空载体或DEC2载体。术后14 d处死小鼠,HE染色检测肾组织学病变情况、 Masson染色检测肾纤维化情况,Western blot法检测肾组织DEC2、 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、 Rho相关激酶1(ROCK1)的蛋白表达。正常人肾小球内皮细胞(GEnC),采用ROCK1抑制剂Y-27632处理或转染DEC2, Western blot法检测暴露于TGF-β的GEnC中ROCK1、 α-SMA、 DEC2、 E-cadherin表达影响。通过免疫荧光细胞化学染色检测GEnC中ROCK1和DEC2定位,并通过免疫共沉淀实验验证二者的相互作用关系。结果 与假手术组相比,UUO组在第14天出现显著的肾纤维化和胶原蛋白积聚。在UUO组中,小鼠肾组织中DEC2和E-cadherin的表达显著降低,α-SMA的表达显著增加。与空载体处理的UUO组相比,过表达DEC2的UUO组小鼠肾纤维化和胶原蛋白积聚程度降低,并且小鼠肾组织中ROCK1、 α-SMA表达降低和DEC2、 E-cadherin表达增加。TGF-β以时间依赖性方式增强GEnC中ROCK1和α-SMA表达,并且DEC2、 E-cadherin水平降低。用ROCK1抑制剂Y-27632处理可部分消除TGF-β诱导的ROCK1、 α-SMA表达增加和DEC2、 E-cadherin表达降低。此外,在TGF-β刺激前,将GEnC转染DEC2降低细胞中ROCK1、 α-SMA表达,并增加DEC2、 E-cadherin表达。免疫荧光染色显示DEC2在GEnC中与ROCK1共定位,并且免疫共沉淀结果显示DEC2与ROCK1相互拉低。结论 DEC2在纤维化肾组织中下调,上调DEC2通过阻断TGF-β/ROCK1信号通路抑制GEnC的上皮肌纤维母细胞转分化及肾纤维化。 展开更多
关键词 分化型胚胎软骨发育基因2(dec2) 肾小球内皮细胞 Rho相关激酶1(ROCK1) 上皮肌纤维母细胞转分化 肾纤维化
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转录因子DEC1和DEC2通过Ebox元件下调大鼠Gclc基因的表达 被引量：1
2
作者 黄楚琴 周问渠 +3 位作者 付欣 洪玮 蔡磊 李冰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期585-590,共6页
为研究Ebox元件在谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalyticsubunit,GCLC)基因表达中的地位,构建含Gclc上游5.9 kb调控序列,及突变Ebox(-3 853～-3 848)的萤火虫荧光素酶报道载体.转染大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(L... 为研究Ebox元件在谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalyticsubunit,GCLC)基因表达中的地位,构建含Gclc上游5.9 kb调控序列,及突变Ebox(-3 853～-3 848)的萤火虫荧光素酶报道载体.转染大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(L2),比较野生与突变报道载体的转录活性.共转染野生型载体与转录因子分化型胚胎软骨发育基因1/2(differentiated embryochondrocyte expressed gene1/2,DEC1/2)真核表达载体,检测DEC1/2对Gclc转录活性的影响;电泳迁移率(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)和超级迁移率实验(supershift assay)检测Ebox元件是否与DEC1/2特异结合.蛋白免疫印迹技术检测Dec1/2过表达对Gclc表达的影响.结果显示,载体构建符合预期;突变Ebox元件可显著上调Gclc荧光素酶活性(P<0.01);共转染DEC1/2表达载体显著下调Gclc荧光素酶活性(P<0.01);EMSA证实Ebox元件(-3 853～-3 848)与核蛋白结合,且特异性强;超级迁移率显示,结合的核蛋白有转录因子DEC1、DEC2;Western印迹结果显示,DEC1/2的表达明显下调Gclc的内源性表达.结果提示,转录因子DEC1与DEC2具有Gclc表达抑制活性,可能与Ebox(-3 853～-3 848)有关. 展开更多
关键词 谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC) 分化型胚胎软骨发育基因1 2 Ebox元件 大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(L2)
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非小细胞肺癌组织中DEC1 mRNA、DEC2 mRNA表达及意义 被引量：7
3
作者 马育华 彭海英 +2 位作者 王志蕙 高伟 汪运山 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第12期20-23,共4页
目的探讨非小细胞肺癌组织中分化型胚胎软骨发育基因1(DEC1)mRNA和DEC2 mRNA表达变化及意义。方法收集42例非小细胞肺癌患者的癌组织标本,28例癌旁正常组织标本;采用实时RT-PCR法检测两种组织标本中DEC1 mRNA、DEC2 mRNA的相对表达量;分... 目的探讨非小细胞肺癌组织中分化型胚胎软骨发育基因1(DEC1)mRNA和DEC2 mRNA表达变化及意义。方法收集42例非小细胞肺癌患者的癌组织标本,28例癌旁正常组织标本;采用实时RT-PCR法检测两种组织标本中DEC1 mRNA、DEC2 mRNA的相对表达量;分析DEC1 mRNA、DEC2 mRNA表达与非小细胞肺癌患者临床病理参数的关系。结果 DEC1在非小细胞肺癌组织中相对表达量为0.045 6,正常组织为0.001 7;DEC2 mRNA在非小细胞肺癌组织中的相对表达量为0.056 6,正常组织为0.000 9;两组比较P均<0.05。DEC1 mRNA、DEC2mRNA表达与非小细胞肺癌患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度和TNM分期均无关(P均>0.05);DEC1 mRNA、DEC2 mRNA在腺癌中的相对表达量均高于鳞癌(P均<0.05)。非小细胞肺癌组织中DEC1 mRNA、DEC2 mRNA表达呈正相关(r=0.691,P<0.05)。结论非小细胞肺癌组织中DEC1、DEC2过表达,二者的表达变化可能参与非小细胞肺癌的发生和发展。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 分化型胚胎软骨发育基因1 分化型胚胎软骨发育基因2 相对定量实时RT-PCR
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胃癌中DEC2、HIF-2α的表达及临床意义
4
作者 樊荣 李彬彬 +2 位作者 马晓丽 汪运山 郏雁飞 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2023年第7期12-18,共7页
目的 研究分化型胚胎软骨发育基因2(DEC2)和缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)在胃癌中的表达以及与临床病理参数之间的关系。方法 将胃癌细胞株MKN45和HGC27分为实验组(缺氧72h组)和对照组(常氧72 h组),检测各组细胞DEC2和HIF-2α mRNA及蛋白... 目的 研究分化型胚胎软骨发育基因2(DEC2)和缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)在胃癌中的表达以及与临床病理参数之间的关系。方法 将胃癌细胞株MKN45和HGC27分为实验组(缺氧72h组)和对照组(常氧72 h组),检测各组细胞DEC2和HIF-2α mRNA及蛋白的表达;并在这两种胃癌细胞株中转染DEC2真核表达质粒,检测DEC2和HIF-2α蛋白水平的表达。另外,通过免疫组织化学染色的方法检测60例胃癌组织及相应的癌旁胃黏膜组织中DEC2和HIF-2α的表达,并分析其相关性。结果 缺氧处理后DEC2的mRNA及蛋白表达明显低于对照组,而HIF-2α的表达高于对照组。过表达DEC2后,HIF-2α的表达降低。DEC2在胃癌组织中的表达显著低于癌旁胃黏膜组织(χ^(2)=20.512,P<0.001),HIF-2α的表达则高于癌旁胃黏膜组织(χ^(2)=11.172,P=0.001)。在胃癌组织中DEC2、HIF-2α的表达水平与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及临床分期显著相关。DEC2与HIF-2α的表达在胃癌组织中呈负相关(P<0.001)。结论 DEC2在胃癌细胞及组织中低表达,HIF-2α在胃癌细胞及组织中高表达,两者呈负相关,且与肿瘤发展转移联系密切。 展开更多
关键词 胃癌 分化型胚胎软骨发育基因2 缺氧诱导因子-2Α 缺氧 免疫组织化学
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