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铂电极表面生物素-亲和素固载单链脱氧核糖核酸的电化学传感器 被引量：8
1
作者 王保珍 杜晓燕 +1 位作者 郑晶 金滨锋 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2005年第6期789-792,共4页
通过直接吸附将亲和素固定在Pt电极表面,联于生物素标记的脱氧核糖核酸(DNA)探针,制备了电化学基因传感器,建立了Pt电极表面修饰单链脱氧核糖核酸(ssDNA)的方法。修饰电极与待测溶液中人工合成的转基因食品中常有的花椰菜花叶病毒35S启... 通过直接吸附将亲和素固定在Pt电极表面,联于生物素标记的脱氧核糖核酸(DNA)探针,制备了电化学基因传感器,建立了Pt电极表面修饰单链脱氧核糖核酸(ssDNA)的方法。修饰电极与待测溶液中人工合成的转基因食品中常有的花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)或根癌农杆菌终止子(NOS)DNA片段进行杂交,以邻菲罗林钴络合物[Co(phen)3+3]为杂交指示剂,循环伏安法测量,通过杂交前后指示剂峰电流的变化检测DNA杂交的量。研究了电极修饰、杂交反应及测量的适宜条件,在优化实验条件下,峰电流的差值与DNA杂交量之间有良好的线性关系,相关系数r=0.9996。杂交后的电极经热变性再生,可重复使用多次。 展开更多
关键词 脱氧核糖核酸 电极表面 电化学传感器 亲和素 单链 花椰菜花叶病毒 DNA杂交 固载 35S启动子 生物素标记 基因传感器 DNA片段 根癌农杆菌 转基因食品 循环伏安法 可重复使用 表面修饰 PT电极 人工合成 修饰电极 钴络合物
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不同转染方式用于modRNA转染人脂肪干细胞的初步研究
2
作者 李凯祥 罗润娇 +6 位作者 于新迪 刘明璐 卢婷婷 王湘莹 王会景 付炜 王伟 《组织工程与重建外科》 CAS 2024年第3期275-284,共10页
目的筛选更优的转染方式,探讨其用于modRNA转染人脂肪干细胞(Human adipose-derived stem cell,hADSC)并表达特定蛋白的可行性。方法分别采用2种电转染方式Optimization4及Optimization6和脂质体转染试剂RNAiMAX,将modGFP转染到hADSC中... 目的筛选更优的转染方式,探讨其用于modRNA转染人脂肪干细胞(Human adipose-derived stem cell,hADSC)并表达特定蛋白的可行性。方法分别采用2种电转染方式Optimization4及Optimization6和脂质体转染试剂RNAiMAX,将modGFP转染到hADSC中去。应用流式细胞分析仪和荧光显微镜分析,比较不同转染方式的转染效率和蛋白表达情况;通过细胞死活染色,评估转染后24 h细胞的存活情况;将更优的电转方式与RNAiMAX用于modVEGFA转染hADSC,收集其培养24 h的上清用于人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,hUVECs)成管和transwell迁移实验,并与基质胶混合后注射于裸鼠皮下,通过大体观、HE染色及免疫荧光染色,分析其在体内促进血管再生的情况。结果Optimization6电转转染hADSC的效率为87.75%±1.52%,高于Optimization4转染组(80.85%±1.48%)和RNAiMAX转染组(81.80%±1.08%),且荧光显微镜观察及流式分析均表明电转染方式的蛋白表达优于RNAiMAX脂质体转染。3种转染方式对细胞的毒性均较小,无统计学差异。与RNAiMAX相比,Optimization6电转能更高效地介导modVEGFA转染hADSC,能更好地促进体外hUVECs成管和迁移,皮下血管再生的效果也更佳。结论相比于RNAiMAX和Optimization4电转染,Optimization6电转方式转染hADSC的效率更高,蛋白表达高效,且能在体内外快速高效促进血管再生。 展开更多
关键词 化学合成修饰信使核糖核酸 基因表达 电转染 脂质体 人脂肪干细胞
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日本研究成蛋白质合成新技术
3
作者 百里 《畜牧兽医科技信息》 2001年第6期18-18,共1页
日本三菱化学公司和东洋纺织公司最近合作研制出可在短时间内大量合成开发药品所需蛋白质的新技术。新技术的关键是从小麦胚芽细胞中萃取核糖体。在需合成某种蛋白质时,把这种蛋白质的基因复制品(信使核糖核酸)以及蛋白质的原材料(氨基... 日本三菱化学公司和东洋纺织公司最近合作研制出可在短时间内大量合成开发药品所需蛋白质的新技术。新技术的关键是从小麦胚芽细胞中萃取核糖体。在需合成某种蛋白质时,把这种蛋白质的基因复制品(信使核糖核酸)以及蛋白质的原材料(氨基酸)与核糖体一起放入容器内进行反应。其合成蛋白质数量可达传统方法的10倍左右。 展开更多
关键词 蛋白质合成 新技术 信使核糖核酸 日本研究 日本三菱化学公司 核糖体 东洋纺织公司 合成方法 基因复制 小麦胚
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脂质体方法用于modRNA转染各种类型细胞的初步研究 被引量：2
4
作者 颜冰倩 王会景 +5 位作者 艾雪峰 宫艺其 谭瑶 徐徐 王伟 付炜 《组织工程与重建外科杂志》 2019年第6期373-378,383,共7页
目的筛选更优的脂质体转染试剂,探讨其用于modRNA转染各种类型细胞并表达所需目的蛋白的可行性。方法分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞,应用荧光显微镜、流式细胞分析仪检测并比较两种转染试剂的转染效率和蛋白表达效果... 目的筛选更优的脂质体转染试剂,探讨其用于modRNA转染各种类型细胞并表达所需目的蛋白的可行性。方法分别用RNAiMax及MessageMax将modGFP转染入MEF细胞,应用荧光显微镜、流式细胞分析仪检测并比较两种转染试剂的转染效率和蛋白表达效果。将更优的转染试剂用于modGFP转染其他各种类型细胞的实验中,采用同样的方法分析modGFP的转染效率及蛋白表达情况。将modGFP与modmCherry共转MEF细胞,荧光显微镜观察共转的情况。将modnGFP及modmTBX5转染MEF细胞,荧光显微镜观察核内蛋白的表达情况。结果MEF细胞转染modGFP 24 h后,流式分析发现MessageMax的转染效率为(83.33%±3.23%),略高于RNAiMax的(78.77%±6.12%),两者没有统计学差异,但是流式分析和荧光显微镜观察均表明MessageMax转染后1周内的蛋白翻译表达效率更高,是更高效的modRNA转染试剂。MessageMax能将modGFP高效转染入3T3细胞、Hela细胞及MCF-7细胞中,并实现modGFP和modmCherry在MEF细胞中的共转及核内因子nGFP和mTBX5在MEF细胞核中的定位。结论相比于RNAiMax,MessageMax转染modRNA效果更佳,既能实现包括核内蛋白在内的各种目的蛋白在各类细胞中的高效、快速表达,也能实现多因子同时转染、共同表达。 展开更多
关键词 化学合成修饰信使核糖核酸 脂质体 基因表达 小鼠胚胎成纤维细胞
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modRNA技术:一种蛋白表达新方法 被引量：2
5
作者 颜冰倩 付炜 《组织工程与重建外科杂志》 2019年第2期107-110,共4页
早在上世纪90年代,注射裸信使核糖核酸(mRNA)已经能够在体内实现外源性蛋白的表达。然而,mRNA的不稳定性及高度免疫原性阻碍了这项技术的进一步发展与应用。近年来,随着对mRNA结构的认识深入及核酸技术的进步,可化学合成并修饰信使核糖... 早在上世纪90年代,注射裸信使核糖核酸(mRNA)已经能够在体内实现外源性蛋白的表达。然而,mRNA的不稳定性及高度免疫原性阻碍了这项技术的进一步发展与应用。近年来,随着对mRNA结构的认识深入及核酸技术的进步,可化学合成并修饰信使核糖核酸,即Chemically synthetic modified message RNA(modRNA),modRNA兼具稳定性、低免疫原性及良好的蛋白翻译表的优势。我们对其研究现状、存在问题进行综述,并对可能的改进方向进行展望。 展开更多
关键词 化学合成修饰信使核糖核酸 基因表达 机制
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大环内酯类药物对免疫调节作用的研究进展 被引量：32
6
作者 沈慧 沈策 《国外医学（呼吸系统分册）》 2005年第11期818-821,共4页
关键词 大环内酯类药物 免疫调节作用 信使核糖核酸 革兰阳性菌感染 罗红霉素 蛋白合成 化学结构 抑制作用 克拉霉素 地红霉素
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电转方法用于modRNA转染细胞的初步研究 被引量：1
7
作者 陈茂林 王会景 +5 位作者 艾雪峰 颜冰倩 宫艺奇 谭瑶 付炜 王伟 《组织工程与重建外科杂志》 2019年第4期215-221,共7页
目的探讨电转方法用于modRNA转染细胞的可行性,并筛选出不同细胞电转所需的最适电压和脉冲时间。方法①筛选电转EGFPmodRNA进入人成纤维细胞的最佳电压和脉冲时间参数;②在此基础上将人成纤维细胞转染nGFP/EGFP+mCherrymodRNA;③将Hela... 目的探讨电转方法用于modRNA转染细胞的可行性,并筛选出不同细胞电转所需的最适电压和脉冲时间。方法①筛选电转EGFPmodRNA进入人成纤维细胞的最佳电压和脉冲时间参数;②在此基础上将人成纤维细胞转染nGFP/EGFP+mCherrymodRNA;③将Hela、293T、3T3三种常见贴壁细胞电转EGFPmodRNA。结果①人成纤维细胞电转modRNA的最适电压为440V,最适脉冲时间为30ms;②nGFP可在核内表达,EGFP和mCherry两种蛋白可同时在胞质中表达;③Hela、293T、3T3细胞电转最适电压分别为425V、400V和440V,最适脉冲时间均为30ms。结论本实验证明①电转法转染modRNA进入细胞质和细胞核的可行性;②可同时将两种modRNA导入同一个细胞内并表达;③最适电压和最适脉冲时间需根据不同的细胞种类分别筛选。 展开更多
关键词 合成修饰的信使核糖核酸 电转法 最适电压 最适脉冲时间
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