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单管半套式RT-PCR法检测贝类中轮状病毒的研究 被引量：6
1
作者 寇晓霞 吴清平 +1 位作者 张菊梅 范宏英 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期401-404,共4页
轮状病毒(Rotavirus)是一种以贝类为载体的重要食源性病毒,目前来说,RT_PCR是贝类中轮状病毒最有效的检测方法,但通常由于病毒含量较低以及贝类中存在大量的PCR抑制物,致使将其运用于实际样本的检测时灵敏度仍较低。在实验室模拟自然环... 轮状病毒(Rotavirus)是一种以贝类为载体的重要食源性病毒,目前来说,RT_PCR是贝类中轮状病毒最有效的检测方法,但通常由于病毒含量较低以及贝类中存在大量的PCR抑制物,致使将其运用于实际样本的检测时灵敏度仍较低。在实验室模拟自然环境,以人工播毒的方式使贝类富集轮状病毒,运用单管半套式RT_PCR法进行检测,并将单管半套式RT_PCR与ELISA、RT_PCR的检测灵敏度做了比较,表明单管半套式RT_PCR比ELISA的灵敏度高10 0 0倍,是传统RT_PCR的10倍,有时甚至10 0倍。另外,单管半套式RT_PCR法降低了实验过程中的内源性和外源性污染,使检测所需时间从6h缩短至4 5h ,大大改进和完善了食源性病毒检测方法。并同时以整只贝和仅以贝的消化道为样检测表明,以消化道为样时的病毒检出率和检测灵敏度较高。 展开更多
关键词 贝类 轮状病毒 半套式rt-pcr 食源性 检测
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应用半套式RT-PCR技术诊断番鸭呼肠孤病毒病 被引量：6
2
作者 林锋强 胡奇林 +4 位作者 陈少莺 欧阳岁东 陈仕龙 朱小丽 程晓霞 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期107-109,共3页
参考GenBank中番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S1基因序列设计并合成3条引物C1、HP11和HP12,组成半套式RT-PCR,扩增片段为300 bp.应用该半套式RT-PCR对MDRV、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭细小病毒(MPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸡胚... 参考GenBank中番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S1基因序列设计并合成3条引物C1、HP11和HP12,组成半套式RT-PCR,扩增片段为300 bp.应用该半套式RT-PCR对MDRV、禽呼肠孤病毒(ARV)、番鸭细小病毒(MPV)、鹅细小病毒(GPV)、鸡胚成纤维细胞(CEF)和番鸭胚成纤维细胞(MDEF)培养物进行扩增.结果仅能从MDRV中扩增出300 bp特异片段,而不能从ARV、MPV、GPV、CEF和MDEF细胞培养物中扩增出特异片段;该方法检测灵敏度为1 fg核酸,重复性好.对人工感染和临床疑似病例用病毒分离和半套式RT-PCR进行检测,2种方法符合率为100%.因此,该半套式RT-PCR可以用于番鸭呼肠孤病毒病的临床快速检测. 展开更多
关键词 半套式rt-pcr 诊断 番鸭呼肠孤病毒
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半套式RT-PCR检测动物狂犬病病毒的研究
3
作者 袁颖烁 赵敬慧 +4 位作者 宋菲菲 刘晔 张守峰 张乐萃 扈荣良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第5期13-16,共4页
基于我国流行的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)均属基因I型,本研究根据GenBank公布的31株RV N基因全序列,选取保守区域设计2对引物,建立了一种检测RV的半套式聚合酶链式反应(Semi-nested RT-PCR),并对引物的灵敏性、敏感性和特异性进行检... 基于我国流行的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)均属基因I型,本研究根据GenBank公布的31株RV N基因全序列,选取保守区域设计2对引物,建立了一种检测RV的半套式聚合酶链式反应(Semi-nested RT-PCR),并对引物的灵敏性、敏感性和特异性进行检测。将该方法检测的36份新鲜脑组织样品,与荧光抗体染色法(FAT)进行比较,并将PCR结果为阳性的新鲜样品室温下放置腐败后进行检测。结果显示,该方法灵敏度检测可达到0.01TCID50/mL。对检测呈阳性的病料进行序列分析,全部为狂犬病病毒;检测犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、犬腺病病毒(CAV)、伪狂犬病病毒(PRV)等非狂犬病病毒,结果均为阴性,表明该引物特异性较高。该方法与FAT检测结果完全一致,并能从腐败样品中检出RV,更适用于腐败样品的检测,具有快速、准确的特点,可广泛应用于广大基层狂犬病的诊断及试验研究。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 半套式rt-pcr 诊断
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西部马脑炎病毒基因组序列的半套式RT-PCR检测
4
作者 赵月峨 于曼 +4 位作者 邓永强 杨保安 吕富双 祝庆余 秦鄂德 《微生物学免疫学进展》 2003年第1期7-10,共4页
为进一步提高RT PCR检测西部马脑炎病毒 (WEE)病毒基因组方法的敏感性 ,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列。首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行扩增。对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进... 为进一步提高RT PCR检测西部马脑炎病毒 (WEE)病毒基因组方法的敏感性 ,采用半套式PCR扩增病毒基因组特异序列。首先采用逆转录法将病毒基因组RNA逆转录为cDNA ,然后以此cDNA为模板 ,进行扩增。对扩增后电泳检查无可见DNA条带的产物进行半套式PCR ;与此同时对扩增的循环数、Mg++浓度和退火温度等条件进行了优化 ,以进一步提高扩增的特异性。结果第一轮PCR未扩出特异性片段的WEE病毒稀释度 ,其半套式扩增出特定大小的DNA产物 ;同时优化的条件提高了扩增产物的特异性。扩增产物约为 190bp的单一DNA片段 ,其大小与预期的相一致。结果表明采用半套式RT PCR方法检测WEE病毒的基因组序列的敏感性可提高 10 展开更多
关键词 西部马脑炎病毒 半套式rt-pcr 基因组序列
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