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卡波济肉瘤相关疱疹病毒编码IL-6基因的分离克隆及在NIH3T3细胞中的表达研究 被引量：6
1
作者 陈秀英 卢春 +3 位作者 程林 曾怡 姚水洪 秦娣 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期881-886,共6页
目的:分离克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码IL-6基因(vIL-6),并导入NIH3T3细胞中进行真核表达。方法:根据KSHV编码IL-6基因核苷酸序列设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系B... 目的:分离克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码IL-6基因(vIL-6),并导入NIH3T3细胞中进行真核表达。方法:根据KSHV编码IL-6基因核苷酸序列设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增vIL-6基因,PCR产物经双酶切克隆进真核载体pcDNA3.1(+)。进一步在原有的下游引物5′端加上一段flag序列,以经过序列测定正确的重组质粒为模板,PCR扩增vIL-6-flag融合基因,构建含vIL-6-flag的重组质粒。将该质粒转染NIH3T3细胞,经G418筛选获细胞抗性克隆。最后用抗flagM2单克隆抗体进行Westernblot检测vIL-6在NIH3T3细胞中的表达。结果:获得vIL-6-flag融合基因,全长671bp,其中vIL-6基因核苷酸序列与GenBank中所登记的KSHVvIL-6基因呈现100%同源性。Westernblot结果显示,在约25ku位置有目的条带,与预期的重组vIL-6-flag融合蛋白大小一致。结论:KSHVvIL-6编码基因在NIH3T3细胞中初步获得表达。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 病毒编码IL-6 flag序列 真核表达
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA的克隆及在真核细胞中的表达 被引量：3
2
作者 秦娣 卢春 +3 位作者 钱超 曾怡 唐桂霞 张玲 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期616-619,共4页
目的:分离、克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA,并将其置于真核细胞中进行表达。方法:用K8.1B基因设计一对PCR引物,其5’端分别引入BamHI和XhoI酶切位点。以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCB... 目的:分离、克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1B全长cDNA,并将其置于真核细胞中进行表达。方法:用K8.1B基因设计一对PCR引物,其5’端分别引入BamHI和XhoI酶切位点。以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总RNA为模板,通过RT-PCR扩增KSHVK8.1B编码序列,经双酶切后克隆进pcDNA3.1(+)载体中,构建含K8.1BcDNA的重组真核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后转染人胚肾293细胞,经G418筛选获细胞克隆。用间接免疫荧光染色(IFA)检测K8.1BcDNA编码蛋白在293细胞中的表达状况。结果:RT-PCR分离、克隆的K8.1BcDNA全长501bp,核酸序列分析显示,该基因与Genbank中已登记的K8.1B编码基因呈现100%同源性。经IFA证实该重组蛋白为KSHVK8.1B特异性蛋白。结论:KSHV包膜糖蛋白K8.1B编码cDNA在293细胞中获得了正确表达。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 K8.1B RT-PCR 免疫荧光染色
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的鉴定 被引量：1
3
作者 姚水洪 卢春 +5 位作者 张玲 汤巧 曾怡 唐桂霞 秦娣 钱超 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期481-484,共4页
目的:对已制备并经初筛的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),经3次克隆选择,筛选出能稳定分泌针对K8.1蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株共9株。采用Westernblo... 目的:对已制备并经初筛的卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体进行特异性鉴定。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA),经3次克隆选择,筛选出能稳定分泌针对K8.1蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株共9株。采用Westernblot法评价9株杂交瘤细胞培养上清识别原核表达重组K8.1蛋白和原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白的能力。结果:筛选了9株能够稳定分泌抗K8.1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;Westernblot法显示,9株单抗均能特异性识别原核表达K8.1/GST融合蛋白和BCBL-1中KSHVK8.1包膜糖蛋白。结论:成功制备了KSHV包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 包膜糖蛋白K8.1 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 WESTERN BLOT
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒感染前列腺上皮细胞并激活Wnt信号通路的初探 被引量：1
4
作者 王子盾 冯宁翰 +5 位作者 华立新 王平 黄敏 周峰 秦娣 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期150-154,共5页
目的:研究卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是否能够感染前列腺非致瘤性上皮细胞系RWPE-1及前列腺癌细胞系PC-3,并初步探索其相关信号通路变化。方法:将12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酯(TPA)刺激人原发性渗出性淋巴瘤细胞系BC-3,收集细胞上清(... 目的:研究卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是否能够感染前列腺非致瘤性上皮细胞系RWPE-1及前列腺癌细胞系PC-3,并初步探索其相关信号通路变化。方法:将12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酯(TPA)刺激人原发性渗出性淋巴瘤细胞系BC-3,收集细胞上清(含KSHV病毒颗粒),感染RWPE-1及PC-3,观察前列腺细胞的细胞病变效应(CPE)。采用RT-PCR检测KSHV即刻基因ORF50 mRNA转录状况;进一步运用Western blot检查病毒裂解期产物病毒白细胞介素6(vIL-6)的蛋白表达水平;最后采用Western blot法检测被感染细胞胞浆和胞核中β-catenin表达水平。结果:PC-3细胞感染KSHV后未见明显CPE,但RT-PCR和Western blot均在预期位置检测到KSHV基因ORF50和vIL-6的mRNA及其编码的蛋白条带。RWPE-1细胞感染KSHV后可出现明显的CPE,感染后24h可以检测到vIL-6的表达。Wnt通路蛋白β-catenin在感染KSHV的RWPE-1细胞胞浆和胞核均呈上升趋势。结论:KSHV可以感染前列腺细胞系并有可能激活Wnt通路。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 前列腺癌 感染 WNT通路
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒体外感染人牙龈成纤维细胞初探 被引量：1
5
作者 吴婴南 倪杰 +2 位作者 卢春 秦娣 朱玲 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期138-142,共5页
目的:探索卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)体外感染人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)的途径和方法,为研究KSHV导致口腔卡波济肉瘤病变的机制提供依据。方法:用12-O-十四烷... 目的:探索卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)体外感染人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)的途径和方法,为研究KSHV导致口腔卡波济肉瘤病变的机制提供依据。方法:用12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA)刺激人原发性渗出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma,PEL)细胞系的BC-3细胞,收集细胞上清(含KSHV病毒颗粒),感染HGF细胞。观察细胞病变效应(cytopatric effect,CPE),采用RT-PCR和Western blot分别检测HGF细胞内KSHV编码基因的转录情况和蛋白表达水平。结果:KSHV感染HGF细胞后可出现CPE;感染后采用RT-PCR可检测到不同时间点ORF26和ORF73基因的转录;感染后12 h可检测到vIL-6蛋白的表达。结论:KSHV可感染HGF细胞并建立潜伏感染,为进一步研究KSHV导致的口腔KS发病机制提供了较好的体外模型。 展开更多
关键词 口腔卡波济肉瘤 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 人牙龈成纤维细胞 感染
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒潜伏相关核抗原编码基因的克隆及表达 被引量：1
6
作者 黄丽 卢春 曾怡 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期292-296,共5页
目的:分离卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核心抗原(LANA)羧基端基因(ORF73C),并在大肠杆菌中克隆和表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5′端分别引入BamH I和EcoR I酶切位点,提取稳定状态的BCBL-1细胞的总DNA作模板,通过PCR扩... 目的:分离卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核心抗原(LANA)羧基端基因(ORF73C),并在大肠杆菌中克隆和表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5′端分别引入BamH I和EcoR I酶切位点,提取稳定状态的BCBL-1细胞的总DNA作模板,通过PCR扩增KSHV ORF73C,PCR产物经双酶切后按正确的读码框克隆进原核表达质粒pGEX-6p-1中,并转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果:经核酸序列测定及分析,分离、克隆的ORF73C基因与基因数据库中登记的ORF73基因的羧基端的621bp的序列有99％同源性。经IPTG诱导的重组质粒转化菌体SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳显示有大小约为46ku的融合蛋白表达。结论:初步表明ORF73C基因在大肠杆菌中获得正确表达。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 潜伏相关核抗原(LANA) ORF73C 原核表达
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IL-10、IL-4及其受体启动子在人类单纯疱疹病毒1型激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒复制过程中的启动活性分析
7
作者 吕志刚 卢春 +3 位作者 秦娣 曾怡 程林 陈秀英 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期139-143,193,共6页
目的:分离和鉴定人类IL-10、IL-10受体(IL-10Rα)、IL-4及其受体IL-4Rα启动子序列,并分析IL-10、IL-4以及其受体的启动子在人类单纯疱疹病毒1型(HSV-1)激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)过程中的启动活性。方法:以人类基因组DNA为模板,... 目的:分离和鉴定人类IL-10、IL-10受体(IL-10Rα)、IL-4及其受体IL-4Rα启动子序列,并分析IL-10、IL-4以及其受体的启动子在人类单纯疱疹病毒1型(HSV-1)激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)过程中的启动活性。方法:以人类基因组DNA为模板,PCR扩增IL-10、IL-10Rα、IL-4Rα启动子区序列,并分别克隆载入pGL-3基本载体中虫荧光素酶(Luciferase)报告基因的上游。进一步将上述构建的重组质粒与本室保存的含IL-4启动子重组质粒分别转染HSV-1感染的BCBL-1细胞,并作Luciferase活性检测。结果:分离了IL-10、IL-10Rα和IL-4Rα的启动子区域序列,并成功克隆了含启动子序列重组报告质粒;HSV-1感染的BCBL-1细胞在进一步转染了IL-10、IL-10Rα、IL-4和IL-4Rα启动子重组报告质粒后,其Luciferase值与相应的对照比较显著升高(P<0.05)。结论:在BCBL-1细胞中,HSV-1可通过直接激活IL-10、IL-4以及相应受体的启动子来上调它们的表达;在HSV-1感染的BCBL-1细胞中,IL-10和IL-4可能对KSHV的裂解复制起到促进作用。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 人类单纯疱疹病毒1型 白细胞介素 启动子活性
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宫颈病变卡波济肉瘤相关疱疹病毒感染状况分析
8
作者 姚水洪 陈敏 +2 位作者 查国芬 邱惠萍 陆小青 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第17期1288-1291,共4页
目的:了解宫颈病变卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)感染状况,探讨KSHV感染与宫颈病变的关系方法:选择组织学确诊为宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌(SCC)的病例440例作为研究组,同区域、同期就诊或体检并排除有宫颈病变的女性380例为对照组,... 目的:了解宫颈病变卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)感染状况,探讨KSHV感染与宫颈病变的关系方法:选择组织学确诊为宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌(SCC)的病例440例作为研究组,同区域、同期就诊或体检并排除有宫颈病变的女性380例为对照组,分别采集血液和宫颈脱落细胞标本,提取DNA,巢式PCR检测KSHV ORF26,核酸电泳观察结果结果:研究组血液样品KSHV检出率12.9%(53/412),对照组检出率6.5%(23/354),两组差异有统计学意义(P<0.01),但宫颈脱落细胞样品中未能检出KSHV;对研究组作分层分析,KSHV检出率随年龄增加、宫颈病变程度加重而升高,差异有统计学意义(P<0.05)结论:宫颈病变女性KSHV检出率高于正常女性,感染率随宫颈病变程度加重而升高。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 宫颈病变 宫颈癌 宫颈上皮内瘤变 巢式PCR感染率
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抗卡波济肉瘤相关疱疹病毒vIL-6蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用
9
作者 张晓洁 陈菲 +3 位作者 郭园园 秦娣 卢春 严沁 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第3期175-180,189,共7页
目的制备与鉴定抗卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,v IL-6)多克隆抗体,并探讨将其初步应用于检测天然v IL-6蛋白的价值。方法设计并合成3条v IL-6候选肽... 目的制备与鉴定抗卡波济肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)病毒白细胞介素6(viral interleukin-6,v IL-6)多克隆抗体,并探讨将其初步应用于检测天然v IL-6蛋白的价值。方法设计并合成3条v IL-6候选肽,免疫新西兰兔,制备抗v IL-6多克隆抗体,用间接ELISA法鉴定该抗体的效价。构建重组质粒p HAGE-v IL-6并转染293T细胞和EA.hy926细胞,表达并纯化v IL-6-His融合蛋白,通过western blot鉴定抗v IL-6多克隆抗体对该蛋白质的识别。通过western blot和免疫荧光方法检测对KSHV阳性细胞中天然v IL-6蛋白的识别。结果由3号v IL-6候选合成肽制备的抗v IL-6多克隆抗体效价大于8 000,能特异性识别重组质粒p HAGE-v IL-6转染293T细胞和EA.hy926细胞产生的v IL-6-His融合蛋白,以及天然v IL-6蛋白。结论本实验采用合成肽作为半抗原制备的抗v IL-6多克隆抗体,可以应用于检测重组和天然v IL-6蛋白。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 病毒白细胞介素6蛋白 合成肽 多克隆抗体
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HHV6感染激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的溶解性周期复制 被引量：1
10
作者 曾怡 卢春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期93-100,共8页
运用细胞融合、细胞混合培养、条件培养基培养和病毒直接刺激等方法,研究人类疱疹病毒6型(HHV6)对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响。①将HHV6感染的JJhan细胞(T淋巴细胞系)与BCBL-1细胞(原发性渗出性淋巴瘤,PEL)进行... 运用细胞融合、细胞混合培养、条件培养基培养和病毒直接刺激等方法,研究人类疱疹病毒6型(HHV6)对卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)溶解性周期复制的影响。①将HHV6感染的JJhan细胞(T淋巴细胞系)与BCBL-1细胞(原发性渗出性淋巴瘤,PEL)进行细胞融合形成异核体细胞。②将HHV6感染的JJhan细胞与BCBL-1细胞进行混合培养。③收集HHV6感染的JJhan细胞培养上清液作为条件培养基进行灭活处理,以灭活前后的条件培养基培养BCBL-1细胞。进一步离心纯化HHV6病毒颗粒,并感染BCBL-1细胞,分别设紫外线和热灭活的HHV6病毒颗粒感染BCBL-1细胞为对照。提取上述的实验细胞总RNA,RT-PCR和/或实时定量(Real—time)PCR检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)次要衣壳蛋白编码基因ORF26mRNA转录。结果显示:①细胞融合后15h开始出现明显细胞病变,RT-PCR检测不同时间的实验组ORF26mRNA转录水平均明显高于对照组;Real—timePCR检测各时间ORF26mRNA转录水平是对照组的2.3倍以上;②细胞混合培养72h时,实验组ORF26mRNA转录水平是对照组的1.8倍;混合培养5天时,实验组KSHV裂解周期蛋白K8.1表达水平是对照组的2.46倍;③灭活前后的HHV6感染细胞培养上清液培养BCBL-1细胞96h时,ORF26mRNA转录水平分别是对照组的2.73倍和2.22倍;④灭活前后的HHV6均可增强BCBL-1细胞中KSHVORF26mRNA转录水平。提示:HHV6感染可激活KSHV的溶解性周期复制。 展开更多
关键词 感染 对照组 细胞 卡波济肉瘤 MRNA转录 灭活 疱疹病毒 ORF2 PCR检测 性周期
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒感染及其检测方法研究进展 被引量：1
11
作者 汤巧 卢春 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期158-159,共2页
关键词 卡波济肉瘤 疱疹病毒 艾滋病
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒感染与肿瘤的发生 被引量：2
12
作者 上田啓次 後藤三枝 《日本医学介绍》 2006年第4期170-172,共3页
近年来,各种感染性疾病逐渐成为医学界研究的热点,与之相关的各种细菌、病毒及其继发疾病的研究也更加深入。本文选译自《最新医学》2005年第60卷第2期“感染症の?症”专辑,选文15篇,就感染性疾病的各种继发症作系统阐述,内容全面、新... 近年来,各种感染性疾病逐渐成为医学界研究的热点,与之相关的各种细菌、病毒及其继发疾病的研究也更加深入。本文选译自《最新医学》2005年第60卷第2期“感染症の?症”专辑,选文15篇,就感染性疾病的各种继发症作系统阐述,内容全面、新颖,有较高的参考价值。全文由哈尔滨医科大学附属二院姚桢教授审校。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 DNA肿瘤病毒 疱疹病毒感染 HERPESVIRUS 原发性渗出性淋巴瘤 lymphoma 代表性差异分析 B细胞淋巴瘤 T细胞淋巴瘤 克隆技术
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒(人疱疹病毒8型)的起源
13
作者 朱昱 《国外医学（微生物学分册）》 2002年第1期43-43,共1页
卡波济肉瘤相关疱疹病毒又称人疱疹病毒8型(HHV-8),与EBV病毒(人疱疹病毒4型)关系密切,能感染CD19^+B细胞和卡波济肉瘤病灶中的内皮源梭形细胞。除与卡波济肉瘤相关外,尚可引起B淋巴细胞瘤和B淋巴细胞增生症。在健康人。
关键词 卡波济肉瘤 人疱疹病毒8型 病毒起源
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒K12基因诱导裸鼠体内肿瘤的形成 被引量：6
14
作者 唐桂霞 卢春 曾怡 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期507-513,共7页
目的证实卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K12基因在体外可以转化小鼠成纤维细胞系NIH3T3细胞,体内可以诱导肿瘤的形成。方法采用PCR法构建含KSHVK12基因的重组反转录病毒表达质粒,将该质粒转染NIH3T3细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞。采用... 目的证实卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)K12基因在体外可以转化小鼠成纤维细胞系NIH3T3细胞,体内可以诱导肿瘤的形成。方法采用PCR法构建含KSHVK12基因的重组反转录病毒表达质粒,将该质粒转染NIH3T3细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞。采用软琼脂集落形成试验和裸鼠成瘤试验,分别证实K12基因体外转化细胞和体内致瘤特性。免疫组化(IHC)染色进一步评价转化细胞及其诱导的肿瘤组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Fas和FasL的表达水平。结果K12基因转化的NIH3T3细胞在软琼脂中可以形成集落、在裸鼠体内可以形成肿瘤;转化的细胞及其诱导的肿瘤组织中可观察到VEGF、Fas和FasL的表达,其中,Fas和FasL的表达较高。结论KSHVK12基因具有体外转化细胞、体内诱导肿瘤形成的能力。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 血管内皮细胞生长因子(VEGF) 裸鼠 基因诱导 K12基因 集落形成试验 转化细胞 FasL KSHV 肿瘤组织 反转录病毒 PCR法 表达质粒 嘌呤霉素 免疫组化 基因转化 肿瘤形成 体内诱导 软琼脂 细胞系 成纤维
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒包膜糖蛋白gpK8．1的抗原性与免疫原性分析 被引量：1
15
作者 姚水洪 卢春 +1 位作者 张玲 汤巧 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期934-937,共4页
目的表达并纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白gpK8.1,分析其抗原性和免疫原性。方法异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组大肠杆菌表达KSHV gpK8.1,用KSHV病人阳性血清作为抗体,经EL... 目的表达并纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)包膜糖蛋白gpK8.1,分析其抗原性和免疫原性。方法异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导重组大肠杆菌表达KSHV gpK8.1,用KSHV病人阳性血清作为抗体,经ELISA和Western blot检测其抗原性;用纯化的gpK8.1蛋白免疫新西兰兔,观察诱发抗体产生的时间及其效价,并用Western blot检测兔抗gpK8.1多克隆抗体特异性识别重组与天然gpK8.1抗原的能力,评价其免疫原性。结果ELISA和Western blot证实3份KSHV阳性血清均能识别重组gpK8.1蛋白;重组gpK8.1蛋白免疫动物6周后,兔血清多克隆抗体效价达到105。结论高效表达并纯化的gpK8.1蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,为KSHV检测试剂和疫苗研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 包膜糖蛋白gpK8.1 抗原性 免疫原性
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卡波济肉瘤相关疱疹病毒编码的microRNAs最新研究进展 被引量：2
16
作者 高媛 谭晓华 杨磊 《中国病毒病杂志》 CAS 2013年第1期71-74,共4页
microRNAs（miRNAs）是一类长约23个核苷酸的非编码小RNA,通过其诱导的沉默复合物（miRNA-induced silencing complex,miRISC）在转录水平特异性识别靶mRNA进而使其降解或抑制翻译而发挥功能[1]。2004年Pfeffer等[2]在研究Epstei-Barr... microRNAs（miRNAs）是一类长约23个核苷酸的非编码小RNA,通过其诱导的沉默复合物（miRNA-induced silencing complex,miRISC）在转录水平特异性识别靶mRNA进而使其降解或抑制翻译而发挥功能[1]。2004年Pfeffer等[2]在研究Epstei-Barr病毒（EBV）感染的细胞中首次发现病毒编码的miRNAs（miR-BHRF1-1、miR-BHRF1-2、miR-BHRF1-3和miR-BART1、 展开更多
关键词 MICRORNAS 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 卡波济肉瘤
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新疆某地区吸毒人群卡波济肉瘤相关疱疹病毒血清流行病学分析 被引量：1
17
作者 杨培荣 谭晓华 +5 位作者 郭淑霞 付碧石 曾妍 王林定 陈彬 杨磊 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期418-419,共2页
卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV），又称人疱疹病毒8型（HHV8），有研究发现不同地区不同人群中KSHV有不同程度的流行，新疆是少数民族聚集区，吸毒人群又是该地HIV感染的高危人群，本研究初步探讨新疆某地区吸毒人群中KSHV的血清流行病... 卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV），又称人疱疹病毒8型（HHV8），有研究发现不同地区不同人群中KSHV有不同程度的流行，新疆是少数民族聚集区，吸毒人群又是该地HIV感染的高危人群，本研究初步探讨新疆某地区吸毒人群中KSHV的血清流行病学特点，为深入研究提供基础资料。 展开更多
关键词 吸毒人群 卡波济肉瘤 疱疹病毒 血清流行病学
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抗原捕获ELISA检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒的方法建立
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作者 姚水洪 汤巧 +3 位作者 王先芳 邱惠萍 李胜琴 卢春 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期707-711,共5页
目的建立检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）的抗原捕获ELISA方法，初步探讨其临床应用的可行性。方法以纯化的抗gpK8．1单克隆抗体（McAb）和多克隆抗体（PcAb）配对作为包被抗体和检测抗体，建立和优化抗原捕获ELISA检测方法，评价... 目的建立检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）的抗原捕获ELISA方法，初步探讨其临床应用的可行性。方法以纯化的抗gpK8．1单克隆抗体（McAb）和多克隆抗体（PcAb）配对作为包被抗体和检测抗体，建立和优化抗原捕获ELISA检测方法，评价其敏感性、特异性和重复性，并初步用于3例已知KSHV阳性血清和257例临床血清样品中抗原的检测。结果包被的McAb浓度为5μg/ml、检测抗体浓度为1．6μg/ml时，P／N值最高，检测的敏感度为31．28ng／ml，且与EB病毒（EBV）、单纯疱疹病毒1型（HSV-1）、单纯疱疹病毒2型（HSV-2）等抗原无交叉反应，特异性高。检测3例KSHV阳性患者血清均为阳性，在257例临床血清样品中，4例捕获到KSHV抗原。结论建立了检测KSHV的抗原捕获ELISA方法，为可能的KSHV检测试剂研制提供重要实验依据。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 包膜糖蛋白gpK8.1 抗原捕获 酶联免疫吸附试验
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一种新型疱疹病毒:卡波济肉瘤相关性疱疹病毒或人类疱疹病毒8型
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作者 季晓辉 《国外医学（微生物学分册）》 北大核心 1996年第4期9-12,共4页
1994年从艾滋病相关的卡波济肉瘤(KS)病灶中发现了特异的疱疹病毒样DNA序列,与γ疱疹病毒亚科核壳和包膜蛋白编码基因有相当程度的同源性。随后建立了检测该基因的多聚酶链反应(PCR)和Southern杂交法,从各种类型的KS组织中检获该基因,... 1994年从艾滋病相关的卡波济肉瘤(KS)病灶中发现了特异的疱疹病毒样DNA序列,与γ疱疹病毒亚科核壳和包膜蛋白编码基因有相当程度的同源性。随后建立了检测该基因的多聚酶链反应(PCR)和Southern杂交法,从各种类型的KS组织中检获该基因,故认为是KS致病的相关因子。但从无KS的艾滋病、非艾滋病的免疫缺陷病人的B细胞淋巴瘤、淋巴结及外周血单个核细胞中也检测到该病毒基因的存在,因此称之为人类疱疹病毒8型似更恰当。对该病毒的临床意义、致瘤性及传播途径正在进行研究。 展开更多
关键词 新型病毒 疱疹病毒 卡波济肉瘤 人类疱疹病毒
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安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒的血清阳性率研究 被引量：6
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作者 张莹 曾宪聪 +3 位作者 汪小五 刘淑均 李进 王林定 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第5期493-495,共3页
目的研究安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 008份普通人群血清进行了KSHV抗体检测。结果在检... 目的研究安徽蚌埠地区卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)在普通人群中的感染情况,并初步分析KSHV感染的危险因子。方法选择KSHV ORF65、ORF73和K8.1编码的病毒蛋白为抗原,采用酶联免疫法对1 008份普通人群血清进行了KSHV抗体检测。结果在检测的1 008份血样中,KSHV抗体的总阳性率为4.3%,其中男为3.9%,女为4.6%。统计学分析结果显示,KSHV感染率没有性别差异,在年龄上也基本无差异。结论在中国安徽北部地区的普通人群KSHV的感染率较低,且KSHV的感染与年龄及性别之间无明显相关性。 展开更多
关键词 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒 血清阳性率 蚌埠 安徽
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