烟草粉螟卵黄原蛋白基因鉴定及其对X射线胁迫的响应

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作者 赵钧 徐鹿 +3 位作者 苗圃 李成军 吴孔明 李淑君 《中国烟草学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期132-138,共7页

【背景和目的】卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)是昆虫卵黄发生的关键物质,为探索X射线辐照胁迫对烟草粉螟Vg基因转录表达和雌成虫繁殖力的影响。【方法】采用RT-PCR技术克隆烟草粉螟Vg基因的全长并进行生物信息学分析,利用qPCR技术检测在... 【背景和目的】卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)是昆虫卵黄发生的关键物质,为探索X射线辐照胁迫对烟草粉螟Vg基因转录表达和雌成虫繁殖力的影响。【方法】采用RT-PCR技术克隆烟草粉螟Vg基因的全长并进行生物信息学分析,利用qPCR技术检测在烟草粉螟雌成虫不同组织(足、头、中肠、脂肪体、卵巢和表皮)的表达量和雌成虫在不同X射线辐照剂量(50,100和150 Gy)胁迫下该基因的相对表达量以及对其蛹羽化率、成虫寿命、产卵量、卵孵化率的影响。【结果】(1)克隆获得烟草粉螟卵黄原蛋白基因,命名为EeVg(GenBank登录号:OM804251),开放阅读框(ORF)长度为5337bp,编码1778个氨基酸。(2)EeVg基因在雌成虫的脂肪体中相对表达量最高,为头部表达量的17.96倍。(3)100和150 Gy的X射线辐照雌蛹极显著地降低EeVg在烟草粉螟羽化后的表达量,分别为对照的0.34倍和0.09倍。(4)剂量为50、100和150 Gy的X射线辐照降低烟草粉螟雌蛹羽化率和成虫寿命(87.78%~75.56%和6.40~4.17d),显著降低雌蛾的产卵量和卵孵化率(55.27~20.37粒和76.67%~72.22%)。【结论】高剂量的X射线辐照胁迫可使EeVg基因表达量显著下调,显著降低烟草粉螟繁殖力,为深入研究X射线影响烟草粉螟繁殖力的分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 烟草粉螟 卵黄原蛋白基因 X射线辐照 表达量 繁殖力

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滇南中蜂蜂王卵黄原蛋白基因实时荧光定量PCR的建立

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作者 陈顺安 宋文菲 +1 位作者 王艳辉 罗卫庭 《蜜蜂杂志》 2014年第11期6-8,共3页

采用实时荧光定量PCR技术,以蜜蜂β-act in基因为内参,利用特异引物对滇南中蜂蜂王的卵黄原蛋白基因进行了转录水平上的定量分析。结果表明:所建立的SYBR Gr een-II实时荧光定量PCR技术扩增效率E=99.9%,R 2=0.99,最低检出量为13个循环... 采用实时荧光定量PCR技术,以蜜蜂β-act in基因为内参,利用特异引物对滇南中蜂蜂王的卵黄原蛋白基因进行了转录水平上的定量分析。结果表明:所建立的SYBR Gr een-II实时荧光定量PCR技术扩增效率E=99.9%,R 2=0.99,最低检出量为13个循环。检测灵敏度高,能准确定量滇南中蜂初生蜂王中的Vg基因。 展开更多

关键词 滇南中蜂蜂王 卵黄原蛋白基因 实时荧光定量PCR 扩增曲线 标准曲线 基因表达

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大草蛉雄虫卵黄原蛋白基因的鉴定和表达特征 被引量：3

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作者 冯彦姣 刘小平 +6 位作者 张婷婷 陈红印 王孟卿 刘晨曦 李玉艳 张礼生 毛建军 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2021年第1期77-85,共9页

为探索卵黄原蛋白基因对大草蛉雄虫生殖生理等活动的调节作用,利用PCR技术克隆了大草蛉卵黄原蛋白基因部分cDNA序列,采用生物信息学方法分析其序列特征,通过实时荧光定量PCR技术检测了该基因在不同发育阶段和不同组织的表达特征。结果表... 为探索卵黄原蛋白基因对大草蛉雄虫生殖生理等活动的调节作用,利用PCR技术克隆了大草蛉卵黄原蛋白基因部分cDNA序列,采用生物信息学方法分析其序列特征,通过实时荧光定量PCR技术检测了该基因在不同发育阶段和不同组织的表达特征。结果表明,克隆到的卵黄原蛋白基因的cDNA长度为1501 bp,编码501个氨基酸,其预测的蛋白质分子量为206 kD,等电点8.11,具有vitellogenin保守的半胱氨基酸残基、GL/ICG、RXXR等结构域。序列分析表明大草蛉vitellogenin与其他昆虫同源蛋白的氨基酸序列一致性不太高,在29.46%~36.43%,与骚扰锥蝽在系统进化上关系最近。荧光定量PCR结果显示vitellogenin在不同日龄的成虫中表达量没有显著差异;在雄虫的腹部表达量较高,均高于头部和胸部,且头部和胸部的表达量之间没有显著差异,表达量均较低。结果表明vitellogenin基因在大草蛉中的表达具有组织的特异性,推测其可能参与大草蛉雄虫生殖调控。 展开更多

关键词 大草蛉 卵黄原蛋白基因 克隆 表达

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中华鳖卵黄蛋白原基因克隆与表达及外源E2的影响

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作者 姚苗 韦智梅 +6 位作者 BIZOZA 周针宇 李虹 王波 熊银林 刁晓明 翟旭亮 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2024年第4期102-112,共11页

为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)卵黄蛋白原Vtg基因的生物学信息与表达及其作为生理与毒理研究标志物的可行性,本实验克隆获得VtgAB1、VtgAB2、VtgAB3(GenBank登录号OK287927、OK287929、OK287928)基因序列,其cDNA长分别为5055、5537... 为探究中华鳖(Pelodiscus sinensis)卵黄蛋白原Vtg基因的生物学信息与表达及其作为生理与毒理研究标志物的可行性,本实验克隆获得VtgAB1、VtgAB2、VtgAB3(GenBank登录号OK287927、OK287929、OK287928)基因序列,其cDNA长分别为5055、5537、5306 bp,分别编码了1684、1760、1725个氨基酸。三种亚型Vtg蛋白均由脂蛋白N-末端(Vitellogenin_N)、1943DUF、1944DUF、PV、D型血管血友病因子(VWD)5个保守结构域构成,为完整型Vtg。同源性分析发现皆与龟鳖目具有更近的亲缘关系,同时在3种亚型中VtgAB2与VtgAB3更相似。荧光定量PCR显示,3种亚型Vtg只在雌性肝脏中强烈表达。在60日龄、2龄、4龄雌性个体肝脏中,Vtg表达量随年龄呈上升趋势,VtgAB1、VtgAB2为主要表达亚型。原位杂交结果显示,3种亚型Vtg在卵原细胞内未发现杂交信号;在生长期卵母细胞胞质和滤泡细胞中发现杂交信号;成熟期卵母细胞胞质中未发现杂交信号,在滤泡细胞和周围的网状组织中发现杂交信号。信号在初级卵母细胞的细胞质中分布较为均匀且表达最强,随着卵母细胞的发育信号聚集在核周区且信号逐渐减弱。以雄性中华鳖为对象,注射雌激素E2,3种亚型Vtg表达量表现出明显的时间和剂量相关性。研究结果表明,在中华鳖卵黄积累过程中Vtg发挥重要作用,首次证实其Vtg存在内源性合成,并发现其可以作为雌激素暴露的生物标志物。 展开更多

关键词 中华鳖(Pelodiscus sinensis) 卵黄蛋白原基因 克隆与表达 外源E2

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家蚕卵黄原蛋白(BmVg)基因启动子的克隆与活性鉴定

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作者 杨从文 沈关望 +6 位作者 张海燕 彭芷昕 陈恩祥 邢润苗 刘红玲 韩超珊 林英 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期382-388,共7页

卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)在家蚕蛹期脂肪体高量表达,研究家蚕卵黄原蛋白基因(BmVg)的转录调控机制及启动子活性,将有助于利用家蚕蛹生物反应器高效表达外源蛋白。设计特异引物,以家蚕蛹基因组DNA为模板PCR扩增得到BmVg长约1.5 kb的... 卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)在家蚕蛹期脂肪体高量表达,研究家蚕卵黄原蛋白基因(BmVg)的转录调控机制及启动子活性,将有助于利用家蚕蛹生物反应器高效表达外源蛋白。设计特异引物,以家蚕蛹基因组DNA为模板PCR扩增得到BmVg长约1.5 kb的启动子片段。构建由不同长度截短BmVg启动子片段驱动荧光素酶报告基因表达的细胞转染载体pGL3-Vg Promoter,分析转染家蚕胚胎培养细胞BmE-SWU1中的BmVg启动子片段活性,结果显示最低截短至BmVg基因翻译起始位点上游90 bp的启动子片段具有转录活性。进一步用截短法分析不同长度启动子的活性,当启动子-752^-952 bp、-42^-152 bp区域被截掉后,启动子的转录活性明显降低,暗示这2个区域内可能存在与启动子启动效率相关的重要调控元件。 展开更多

关键词 卵黄原蛋白基因 启动子 克隆 活性区域 家蚕蛹

原文传递

甜菜夜蛾卵黄原蛋白受体基因的RNA干扰 被引量：1

6

作者 赵静 陶蓉 +2 位作者 郝德君 肖留斌 谭永安 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期56-64,共9页

【目的】卵黄原蛋白受体(vitellogenin receptor,VgR)是介导昆虫卵黄原蛋白胞吞作用的主要受体,通过RNA干扰(RNAi)方法研究甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)VgR的功能,为深入了解甜菜夜蛾生殖生理的分子机制及开发有效防治新方法提供依据。... 【目的】卵黄原蛋白受体(vitellogenin receptor,VgR)是介导昆虫卵黄原蛋白胞吞作用的主要受体,通过RNA干扰(RNAi)方法研究甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)VgR的功能,为深入了解甜菜夜蛾生殖生理的分子机制及开发有效防治新方法提供依据。【方法】以甜菜夜蛾雌成虫腹部的cDNA为模板,通过PCR克隆得到甜菜夜蛾VgR基因片段,其包含配体结合域功能区。绿色荧光蛋白基因(GFP)片段通过特异性引物从笔者实验室保存的GFP质粒上扩增。将VgR和GFP目的片段连入pMD-19T载体后进行测序,利用DNAMAN软件分析基因序列的准确性。以测序验证正确的质粒作为DNA模板,利用带T7启动子的引物进行PCR扩增。用T7 RiboMAXTM Express RNAi System合成试剂盒合成VgR-dsRNA和GFP-dsRNA。应用10μL微量进样器在化蛹第2、6天的甜菜夜蛾雌蛹腹部注射3μL双链RNA(2μg·μL-1)。利用RT-qPCR技术检测甜菜夜蛾刚羽化、羽化24 h、羽化48 h雌成虫的VgR表达量变化,同时统计对照组(空白对照、注射GFP-dsRNA)和处理组(注射VgR-dsRNA)甜菜夜蛾的羽化率及单雌产卵量。【结果】扩增得到VgR和GFP基因片段,大小分别为327和417 bp。RT-qPCR检测结果表明,与对照组相比,注射dsRNA后甜菜夜蛾的VgR表达水平显著下降。对于刚羽化、羽化24 h、羽化48 h的雌成虫,注射VgR-dsRNA处理组的VgR表达量相比注射GFP-dsRNA的对照组分别下降了79.35%、84.22%、67.68%。通过解剖观察刚羽化、羽化24 h、羽化48 h的甜菜夜蛾卵巢,发现注射VgR-dsRNA处理组与注射GFP-dsRNA对照组相比,卵巢发育进度显著推迟。对于羽化24 h的甜菜夜蛾,与注射GFP-dsRNA组相比,注射VgR-dsRNA处理组卵巢管长度下降了23.92%;注射GFP-dsRNA组的卵巢成熟卵粒较多,平均直径为(0.46±0.05)mm,而注射VgR-dsRNA处理组成熟卵粒数量较少且相对较小,平均直径为(0.23±0.02)mm。注射GFP-dsRNA组和VgR-dsRNA组的羽化率无显著差异。注射VgR-dsRNA处理组的单雌平均产卵量只有170粒,而对照组(空白对照和注射GFP-dsRNA)单雌平均产卵量可达到451粒和420粒,处理组与对照组的产卵量存在显著差异。【结论】通过体外注射dsRNA的方法研究VgR的功能,能够显著降低VgR表达。VgR在甜菜夜蛾的生殖中起着不可替代的作用,直接影响甜菜夜蛾卵巢的发育与产卵量,可以作为控制甜菜夜蛾的潜在靶标。 展开更多

关键词 甜菜夜蛾 卵黄原蛋白受体基因 RNA干扰 卵巢发育

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条纹密鲈卵黄蛋白原基因的克隆与检测 被引量：3

7

作者 梁岳 方展强 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1281-1292,共12页

采用RT-PCR方法克隆并分析了条纹密鲈卵黄蛋白原(VTG)和β-肌动蛋白(β-actin)cDNA部分序列。获得的VTG cDNA序列片段长3 464 bp,全部处于编码区,编码1 150个氨基酸;β-actin cDNA序列片段长1 253 bp,编码375个氨基酸。使用活体与离体... 采用RT-PCR方法克隆并分析了条纹密鲈卵黄蛋白原(VTG)和β-肌动蛋白(β-actin)cDNA部分序列。获得的VTG cDNA序列片段长3 464 bp,全部处于编码区,编码1 150个氨基酸;β-actin cDNA序列片段长1 253 bp,编码375个氨基酸。使用活体与离体的实验方法,检测了VTG mRNA转录情况,并以此评价雌二醇(E2)、辛基酚(OP)、镉(Cd2+)和全氟辛烷磺酸类化合物(PFOS)引起的雌激素效应。结果显示,E2和OP在活体和离体实验中均能剂量依赖性地诱导VTG mRNA表达。Cd2+仅在活体实验低剂量组诱导VTG mRNA表达,PFOS在活体和离体实验的各个浓度组均未见显著的VTG mRNA表达。结果表明,所诱导的雌激素效应强弱的排列顺序为E2>OP>Cd2+。Cd2+的雌激素效应活体和离体实验的结果不一致,推测Cd2+引起雌激素效应的机理可能和E2不同。条纹密鲈VTG cDNA对环境激素敏感,适合作为监测环境激素的生物标志物。 展开更多

关键词 条纹密鲈 卵黄蛋白原基因 克隆与表达 环境激素

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96孔板-PCR排除法筛选猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因 被引量：1

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作者 魏冬霞 邓艳 +3 位作者 吴绍强 林瑞庆 宋慧群 朱兴全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期731-733,共3页

为了从猪蛔虫雌虫cDNA文库中筛选出猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因,本研究根据猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因的EST序列为模板设计引物,采用96孔板-PCR排除法对猪蛔虫雌虫cDNA文库进行筛选,并筛选出阳性克隆F993-G10-A10。测序结果表明,该基因序列... 为了从猪蛔虫雌虫cDNA文库中筛选出猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因,本研究根据猪蛔虫雌虫卵黄蛋白原基因的EST序列为模板设计引物,采用96孔板-PCR排除法对猪蛔虫雌虫cDNA文库进行筛选,并筛选出阳性克隆F993-G10-A10。测序结果表明,该基因序列长621bp,有完整的3'端。经BLAST分析,其推导的氨基酸序列与秀丽隐杆线虫(C.elegans)的卵黄蛋白原基因(Vit1、Vit2、Vit3、Vit4和Vit5)的氨基酸序列的一致性分别为35%、35%、34%、34%和35%,核苷酸序列相似性分别为55%、57%、54%、54%和53%。该阳性克隆的获得为该基因的深入研究奠定了基础。同时也证明了96孔-PCR排除法是一种高效、简便、低成本的筛选文库方法。 展开更多

关键词 旋猪蛔虫 卵黄蛋白原基因 96孔板-PCR排除法 文库筛选

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甜菜夜蛾卵黄原蛋白多克隆抗体制备及其在不同发育时期蛋白表达 被引量：4

9

作者 赵静 孙洋 +3 位作者 谭永安 肖留斌 姜义平 柏立新 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第22期4316-4324,共9页

【目的】制备甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)多克隆抗体,并检测甜菜夜蛾不同发育时期血淋巴中的Vg蛋白表达量变化,为进一步研究Vg转运与利用机制以及生物学功能打下基础。【方法】以羽化24 h的甜菜夜蛾雌成虫c... 【目的】制备甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)多克隆抗体,并检测甜菜夜蛾不同发育时期血淋巴中的Vg蛋白表达量变化,为进一步研究Vg转运与利用机制以及生物学功能打下基础。【方法】以羽化24 h的甜菜夜蛾雌成虫c DNA为模板,通过PCR扩增得到甜菜夜蛾Vg基因片段,其包含vitellogenin-N结构功能区。将Vg目的片段连入pMD-19T载体后进行测序,利用DNAMAN软件分析该基因序列的准确性及编码蛋白的特性。将测序正确的Vg基因片段通过Nde Ⅰ和Xba Ⅰ限制性内切酶连接到原核表达载体pCzn1。将重组表达载体pCzn1-Vg转入大肠杆菌Arctic Express,离心收集诱导表达的菌液,超声波破碎菌体沉淀,取上清液与沉淀进行SDS-PAGE检测,分析Vg重组蛋白的可溶性。在不同温度、不同浓度IPTG条件下诱导表达Vg重组蛋白,筛选最优表达条件。经Ni-NTA琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化得到了Vg重组蛋白,将该蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗Vg血清抗体。采用间接ELISA方法检测血清抗体的效价,并通过Western blot法检测甜菜夜蛾雌虫不同发育阶段血淋巴中Vg蛋白的表达差异。【结果】扩增所得Vg基因片段为2 091 bp,编码697个氨基酸,预测蛋白分子量为80.88 k D。通过大肠杆菌表达出的Vg重组蛋白相对分子量为80 k D,其大小与预期的Vg重组蛋白带大小相符合。其主要以包涵体形式表达,而在上清中表达量不明显。不同温度、不同浓度IPTG条件下诱导表达Vg重组蛋白的结果显示温度为25℃,IPTG浓度为0.6 mmol·L^(-1)时,Vg重组蛋白表达量最高。继续提高温度和IPTG浓度,对提高Vg重组蛋白的表达量无明显作用,且杂蛋白增多。新西兰白兔经4次免疫后,间接ELISA法检测表明,制备的兔抗Vg抗体具有较好的灵敏度,效价达到1﹕512 000。Western blot检测Vg蛋白在甜菜夜蛾不同发育阶段血淋巴中的表达,其杂交出的单一条带在180 k D左右。Vg蛋白在甜菜夜蛾雌蛹末期开始微弱表达。雌成虫羽化后血淋巴中Vg蛋白表达量先升高后降低,呈动态变化,到羽化48 h表达量最高,随后降低。【结论】纯化获得了Vg重组蛋白,并明确了最优表达条件(温度为25℃,IPTG浓度为0.6 mmol·L^(-1));制备了高效价的甜菜夜蛾Vg多克隆抗体,明确了甜菜夜蛾Vg蛋白的表达规律。 展开更多

关键词 甜菜夜蛾 卵黄原蛋白基因 原核表达 抗体制备 表达模式

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大劣按蚊卵黄蛋白原基因cDNA全长序列扩增及功能域蛋白的表达与纯化研究 被引量：1

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作者 于莎莎 胡辉 +4 位作者 秦杰 王静 刘婷 刘婷婷 王英 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1140-1145,共6页

目的对大劣按蚊卵黄蛋白原(Anopheles dirus vitellogenin, AdVg)基因cDNA的全长序列进行扩增和分析,并对其功能域蛋白进行表达与纯化。方法基于前期克隆的AdVg基因cDNA片段,利用RACE PCR技术,扩增AdVg基因的5′末端及3′末端序列。用Ve... 目的对大劣按蚊卵黄蛋白原(Anopheles dirus vitellogenin, AdVg)基因cDNA的全长序列进行扩增和分析,并对其功能域蛋白进行表达与纯化。方法基于前期克隆的AdVg基因cDNA片段,利用RACE PCR技术,扩增AdVg基因的5′末端及3′末端序列。用Vector NTI软件将测序得到的AdVg cDNA片段、5′末端序列、3′末端序列进行校正,拼接得到完整的AdVg cDNA全长序列。对AdVg全长序列进行功能域预测。利用pet28a(+)构建重组质粒进行AdVg功能域蛋白的表达与纯化。结果成功获得AdVg基因全长cDNA序列,包括117 bp的5′UTR序列、192 bp的3′UTR序列和6 186 bp的ORF序列。AdVg蛋白主要包含Vit N、DUF1943及vWD 3个结构域。通过构建重组质粒,成功表达和纯化了AdVg Vit N功能域蛋白。结论成功克隆了大劣按蚊卵黄蛋白原基因的全长序列,并获得了重组蛋白。 展开更多

关键词 大劣按蚊 卵黄蛋白原基因 RACE扩增 蛋白表达与纯化

原文传递

广聚萤叶甲Vg基因的鉴定及表达分析

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作者 周永平 黄玉锋 +4 位作者 张燕 马超 陈红松 桂富荣 周忠实 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期278-286,共9页

卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)作为雌性多功能生殖蛋白,为卵黄发生提供所需的储备能源。为明确Vg基因在广聚萤叶甲Ophraella communa生殖过程中的潜在作用,本研究通过RT-PCR技术克隆得到广聚萤叶甲的3个Vg基因,其OcVg1,OcVg2和OcVg3开放... 卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)作为雌性多功能生殖蛋白,为卵黄发生提供所需的储备能源。为明确Vg基因在广聚萤叶甲Ophraella communa生殖过程中的潜在作用,本研究通过RT-PCR技术克隆得到广聚萤叶甲的3个Vg基因,其OcVg1,OcVg2和OcVg3开放阅读框(ORF)分别为5310、5322 bp和5298 bp,对应编码1768、1772和1764个氨基酸。其OcVgs蛋白具有LLTP超家族的保守结构域:LPD_N、DUF1943和VWD结构域;多位于N-端的多聚丝氨酸区(polyserine domains),保守的GL/ICG、R/KXXR/K、DGXR基序和C-端半胱氨酸残基等。构建系统进化树发现,OcVgs与鞘翅目昆虫聚为一支。时空表达分析发现,OcVgs基因在不同组织及发育阶段的表达动态相似,在脂肪体中特异性高表达(P<0.05);在成虫羽化后的性成熟阶段的表达量最高,幼虫期的表达水平可以忽略不计(P<0.05)。研究结果为深入理解广聚萤叶甲生殖作用的分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 广聚萤叶甲 卵黄原蛋白基因 克隆 序列分析 表达水平

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人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平 被引量：3

12

作者 张怡丁 张卫星 +1 位作者 胥保华 刘锋 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期2722-2729,共8页

本试验以酶水解酪蛋白为外源粗蛋白质,探究人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平。移取1日龄幼虫960只,平均分为5组：对照组饲喂幼虫基础饲粮,粗蛋白质水平为8%,试验组在其基础上分别添加不同剂量的酶水解酪蛋白,使各组... 本试验以酶水解酪蛋白为外源粗蛋白质,探究人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平。移取1日龄幼虫960只,平均分为5组：对照组饲喂幼虫基础饲粮,粗蛋白质水平为8%,试验组在其基础上分别添加不同剂量的酶水解酪蛋白,使各组粗蛋白质水平分别为9%、10%、11%和12%。采用人工饲养蜜蜂幼虫技术饲养幼虫直至羽化出房。结果表明：1）幼虫饲粮粗蛋白质水平9%、10%组的化蛹率和羽化率与对照组差异不显著（P〉0.05）,但显著高于其他试验组（P〈0.05）;粗蛋白质水平12%组只能少数化蛹,不能成功羽化。2）与对照组相比,粗蛋白质水平为9%～11%时,幼虫和蛹的体重显著升高（P〈0.05）;粗蛋白质水平对新出房工蜂的体重影响不显著（P〉0.05）。3）粗蛋白质水平显著影响蜂体各发育阶段的抗氧化能力（P〈0.05）,且对蛹和新出房工蜂而言,均表现粗蛋白质水平为8%时超氧化物歧化酶活性最强,9%时总抗氧化能力最大。4）与对照组相比,粗蛋白质水平为9%～10%时,幼虫和蛹的卵黄原蛋白基因相对表达量显著升高（P〈0.05）,但对新出房工蜂影响不显著（P〉0.05）。由此推断,人工饲养条件下意大利蜜蜂幼虫饲粮的适宜粗蛋白质水平为8%～10%。 展开更多

关键词 蜜蜂幼虫 粗蛋白质水平 人工饲养 抗氧化活性 卵黄原蛋白基因表达

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利用食蚊鱼目标基因转录水平评价东莞寒溪河雌/雄激素物质污染现状 被引量：7

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作者 谢勇平 方展强 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期691-697,共7页

应用食蚊鱼(Gambusia affinis)的卵黄蛋白原(VTGα)基因和雌/雄激素受体(ERα/ARα)基因转录水平为指标,评价广东东莞寒溪河受雌/雄激素物质污染的现状。结果显示,与对照点从化流溪河(LX)相比,寒溪河松山湖(SM)、杨屋村(YW)、横沥镇(HL... 应用食蚊鱼(Gambusia affinis)的卵黄蛋白原(VTGα)基因和雌/雄激素受体(ERα/ARα)基因转录水平为指标,评价广东东莞寒溪河受雌/雄激素物质污染的现状。结果显示,与对照点从化流溪河(LX)相比,寒溪河松山湖(SM)、杨屋村(YW)、横沥镇(HL)、樟村污水处理厂上游(ZU)和樟村污水处理厂下游(ZC)各采样点雄性成年食蚊鱼肝脏中的VTGα转录水平都具有显著或极显著水平的升高(P<0.05和P<0.001),分别为7.67、169.43、148.69、152.01和98.12倍;而较之对照点,雄鱼臀鳍的雌激素受体ERα转录水平仅HL位点有显著性升高(P<0.05),其余位点则不明显(P>0.05)。此外,寒溪河SM、YW、HL、ZU和ZC各采样点雌鱼臀鳍雄激素受体ARα转录水平分别是对照点从化流溪河(LX)的1.21、0.82、0.34、0.41和0.89倍,但是只有HL和ZU点有显著性减小(P<0.05),其余各点的变化差异不显著(P>0.05)。研究结果显示,生活在东莞寒溪河中的食蚊鱼受雌/雄激素物质干扰明显,普遍出现显著的雌激素效应,表明寒溪河水体受雌激素物质污染更严重。此外证明,鱼类肝脏VTGα基因相对于臀鳍ERα/ARα基因转录水平更适合作为监测水体环境雌/雄激素物质的生物标志物。 展开更多

关键词 卵黄蛋白原基因 雌 雄激素受体基因 mRNA转录水平 环境雌 雄激素物质 食蚊鱼 寒溪河

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利用食蚊鱼目标基因转录水平评价四会市邓村河雌/雄激素物质污染现状 被引量：2

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作者 侯丽萍 舒琥 +2 位作者 李强 应光国 方展强 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期152-158,共7页

利用西部食蚊鱼(Gambusia affinis)的雌/雄激素受体(ERα/ARα)基因和卵黄蛋白原(VTGα)基因的转录水平为生物学指标,对广东省四会市邓村河的雌/雄激素物质污染现状进行评价。结果显示,与未受造纸废水污染的对照点REF相比,受造纸废水污... 利用西部食蚊鱼(Gambusia affinis)的雌/雄激素受体(ERα/ARα)基因和卵黄蛋白原(VTGα)基因的转录水平为生物学指标,对广东省四会市邓村河的雌/雄激素物质污染现状进行评价。结果显示,与未受造纸废水污染的对照点REF相比,受造纸废水污染位点A、B、C中雌性食蚊鱼臀鳍中的雄激素受体ARαm RNA转录水平均比对照点显著升高(P<0.05),雄性食蚊鱼臀鳍的雌激素受体ERα转录水平不明显(P>0.05)。造纸废水暴露位点A、B、C中雄性食蚊鱼肝脏中的VTG受体VTGαm RNA转录水平均比对照点显著升高(P<0.05)。结果表明,生活在受造纸废水污染的邓村河中的食蚊鱼受雌/雄激素物质干扰明显,且受雄激素物质污染更严重。鱼类肝脏VTGα基因和臀鳍ARα基因转录水平可适合作为监测水体环境雌/雄激素物质的生物标志物。 展开更多

关键词 卵黄蛋白原基因 雌/雄激素受体基因 m RNA转录水平 环境雌/雄激素物质 食蚊鱼 造纸废水

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圆唇散白蚁补充生殖蚁发育过程中的卵黄蛋白原基因的表达及卵子发生 被引量：1

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作者 张小晶 薛薇 +3 位作者 刘鹤 陈娇玲 邢连喜 苏晓红 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1257-1264,共8页

【目的】研究圆唇散白蚁Reticulitermes labralis(Hsia)补充生殖蚁分化及发育过程中卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)基因的表达、卵母细胞的发育以及子代品级分化。【方法】通过使用实时定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain r... 【目的】研究圆唇散白蚁Reticulitermes labralis(Hsia)补充生殖蚁分化及发育过程中卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)基因的表达、卵母细胞的发育以及子代品级分化。【方法】通过使用实时定量PCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)技术测定补充生殖蚁从分化到产卵的过程中Vg基因相对表达量的动态变化;采用组织染色的方法进行卵母细胞发育阶段的观察;对子代的数量及分化进行统计分析。【结果】补充生殖蚁发育过程中,Vg基因表达呈现先升高后降低的动态变化模式。在补充生殖蚁分化后的第10天开始形成具卵黄的卵母细胞,在20 d时具卵黄卵母细胞的数量达到最高值。第1个月至第3个月,补充生殖蚁的产卵数逐渐增加,分别为(2.45±1.43)、(7.68±2.53)和(12.10±7.09)粒。第3个月,巢内开始出现幼蚁,数量为(5.15±2.41)头;第10个月,巢群内有工蚁、前兵蚁和兵蚁的分化,分别为(17.03±2.28)、(1.45±0.31)和(0.79±0.18)头。【结论】在新建巢群中,若蚁的分化在工蚁和兵蚁分化之后。圆唇散白蚁若蚁在巢群需要的时候,可以在很短时间内转化为补充生殖蚁;Vg基因的表达水平与卵母细胞的卵黄形成相关,Vg基因表达量的增加启动了卵母细胞的卵黄摄取过程。虽然单个补充生殖蚁产卵量不如单个原始生殖蚁的多,但是在一个巢内补充生殖蚁总的产卵数目要远远超过原始生殖蚁,因为补充生殖蚁的数量比原始生殖蚁的数量多。因此补充生殖蚁对巢群稳定和发展具有重要作用。 展开更多

关键词 白蚁 补充生殖蚁 卵黄蛋白原基因 卵母细胞 实时定量PCR

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红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)Vtg基因实时荧光定量PCR分析的引物设计与评估 被引量：2

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作者 藏林 封岩 +2 位作者 门磊 仇雪梅 王秀利 《河北渔业》 2019年第3期1-6,共6页

为应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)基因的组织表达谱,利用Primer5.0软件设计了扩增红鳍东方鲀Vtg基因片段的引物并进行了qPCR评估。结果显示:引物对VtgF-VtgR在qPCR扩增时... 为应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)基因的组织表达谱,利用Primer5.0软件设计了扩增红鳍东方鲀Vtg基因片段的引物并进行了qPCR评估。结果显示:引物对VtgF-VtgR在qPCR扩增时,熔解曲线为单一尖锐峰;标准曲线分析显示:引物的扩增效率为105.32%,R^2值为0.999。上述结果说明该对引物具有良好的扩增特异性和扩增效率,满足了qPCR扩增的要求。 展开更多

关键词 红鳍东方鲀(Takifugu rubripes) 卵黄蛋白原(Vtg)基因 实时荧光定量 PCR

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幼虫信息素酯类混合物对中华蜜蜂育王质量的影响 被引量：3

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作者 胡景华 张丽珍 +3 位作者 廖春华 江武军 曾志将 颜伟玉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期300-307,共8页

【目的】基于免移虫育王技术,探究幼虫信息素酯类混合物在育王中对中华蜜蜂Apis cerana cerana蜂王质量的影响,为优质蜂王的培育奠定基础。【方法】利用中华蜜蜂免移虫育王生产器培育蜂王,在幼虫60-64 h时向王台内注入1μL不同酯类组成... 【目的】基于免移虫育王技术,探究幼虫信息素酯类混合物在育王中对中华蜜蜂Apis cerana cerana蜂王质量的影响,为优质蜂王的培育奠定基础。【方法】利用中华蜜蜂免移虫育王生产器培育蜂王,在幼虫60-64 h时向王台内注入1μL不同酯类组成的混合物(酯类混和物的浓度梯度分别为0,0.1%,1.0%和10.0%),待蜂王出房后测定蜂王初生重、胸重、胸宽以及单侧卵巢管数量;并利用荧光定量PCR测定蜂王卵巢卵黄原蛋白基因Vitellogenin(Vg),昆虫储存蛋白基因hexamerin70b(hex70b)和hexamerin110(hex110)的表达量。【结果】免移虫育王过程中添加3种信息素酯类混合物3E(1.0%甲基亚油酸酯、16.0%甲基亚麻酸酯和35.0%甲基油酸酯),不同浓度处理时蜂王的初生重较对照(石蜡油)均显著增加,但蜂王胸宽和胸重均无显著变化;0.1%和1.0%浓度处理组蜂王单侧卵巢管数显著增加;不同浓度处理组Vg和hex70b的表达量均无显著变化,但1.0%和10.0%浓度处理组蜂王卵巢的hex110表达量显著升高。4种信息素酯类混合物4E(4.5%甲基棕榈酸酯、1.0%甲基亚油酸酯、16.0%甲基亚麻酸酯和35.0%甲基油酸酯)试验组只有10.0%浓度处理组蜂王的初生重和单侧卵巢管数较对照显著上升(P<0.05),0.1%和1.0%浓度处理对蜂王的个体发育指标均无显著影响(P>0.05);0.1%和1.0%浓度处理组Vg的表达量、10.0%浓度处理组hex70b的表达量以及1.0%和10.0%浓度处理组hex110的表达量均显著上升(P<0.05)。10种信息素酯类混合物10E(4.5%甲基棕榈酸酯、2.5%甲基硬脂酸、35.0%甲基油酸酯、1.0%甲基亚油酸酯、16.0%甲基亚麻酸酯、3.5%乙基棕榈酸酯、1.5%乙基硬脂酸酯、18.0%乙基油酸酯、0.5%乙基亚油酸酯和17.5%乙基亚麻酸酯)试验组,各个浓度处理蜂王的初生重以及Vg和hex110的表达量均显著下降(P<0.05),但蜂王的单侧卵巢管数和胸部指标无显著变化(P>0.05),10.0%浓度处理时hex70b的表达量也显著降低(P<0.05)。【结论】中华蜜蜂育王过程中添加1.0%的3E和10.0%的4E幼虫信息素酯类可以在一定程度上提高蜂王质量。 展开更多

关键词 中华蜜蜂 幼虫信息素 卵黄原蛋白基因 昆虫储存蛋白基因 育王质量

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醋酸甲羟孕酮暴露致食蚊鱼的雄激素效应 被引量：1

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作者 金子越 方展强 《实验动物与比较医学》 CAS 2016年第1期6-12,共7页

目的 探讨人工合成孕激素（醋酸甲羟孕酮,MPA）暴露对雌性食蚊鱼（Gambusia affinis）的雄激素效应.方法 将成年雌性食蚊鱼随机分为4组,包括对照组和40 ng/L（低密度组）、200 ng/L（中密度组）和1 000 ng/L（高密度组）等3个MPA实验暴... 目的 探讨人工合成孕激素（醋酸甲羟孕酮,MPA）暴露对雌性食蚊鱼（Gambusia affinis）的雄激素效应.方法 将成年雌性食蚊鱼随机分为4组,包括对照组和40 ng/L（低密度组）、200 ng/L（中密度组）和1 000 ng/L（高密度组）等3个MPA实验暴露组,并设置平行组.持续暴露28 d后观察与测定食蚊鱼的体长（BL）、体质量（BW）、身体健康指数（CF）、臀鳍第3鳍条分节数（FJ）、第4、5、6鳍条长度（FL）变化和第14、15、16椎体脉棘的形态变化等5项指标,并在7d、14d、21 d、28 d测定了卵黄蛋白原基因（VTGα）、雄激素受体基因（ARα）和细胞色素P450芳香化酶基因（CYP19α）mRNA表达水平的变化.结果 食蚊鱼经MPA暴露28d后,与对照组相比,200 ng/L和1 000 ng/L实验组食蚊鱼的BL、BW和CF均无明显变化（分别P＞0.05）.臀鳍第3鳍条分节数和第6鳍条长度变化不明显（P＞0.05）,但第4、5鳍条的长度显著增加（P＜0.01）.暴露在200 ng/L和1 000 ng/L MPA中、高浓度组食蚊鱼的第14椎体脉棘的总长（L）、尾部尖端到脊的高度（D）值,第15椎体脉棘的投影长（P）、P∶D值和第16椎体脉棘的P、L∶D、P∶D值分别呈现显著性变化（P＜0.05或P＜0.01）,椎体脉棘伸长,且与脊椎骨接近垂直,显示形态雄性化效应.与对照组相比,低浓度组（40 ng/LMPA） VTGα,CYP19α基因的表达量上升（P＜0.01）,而ARα表达被抑制（P＜0.05）;中浓度组VTGα,CYP19α,ARα基因的表达量都显著上升（P＜0.01）;高浓度组CYP19α,ARα基因的表达量显著上升（P＜0.01）,而VTGα的表达量则被抑制（P＜0.01）.结论 MPA暴露致雌性食蚊鱼骨骼出现形态雄性化,目标基因表达水平的变化结果证明MPA对食蚊鱼具雄激素效应,表明MPA是一种具有雄激素效应的孕激素. 展开更多

关键词 醋酸甲羟孕酮(MPA) 食蚊鱼 雄性化 细胞色素P450芳香化酶基因(CYP19α) 卵黄蛋白原基因(VTGα) 雄激素受体基因(ARα) mRNA表达 骨骼形态学

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凡纳滨对虾繁殖性状的SNP分子标记筛选的初步研究 被引量：4

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作者 王冉 刘红 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期825-832,共8页

对虾繁殖性状的相关分子遗传标记一直是甲壳动物中研究极少的部分,为了筛选与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)繁殖性状(产卵与产卵量)相关的SNP(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)分子标记,为凡纳滨对虾的良种选育提供参考,选择卵... 对虾繁殖性状的相关分子遗传标记一直是甲壳动物中研究极少的部分,为了筛选与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)繁殖性状(产卵与产卵量)相关的SNP(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)分子标记,为凡纳滨对虾的良种选育提供参考,选择卵黄蛋白原(vitellogenin,VG)基因作为筛选基因。本实验采用PCR产物直接测序法对VG基因进行SNP位点筛查,并与繁殖性状进行关联分析。结果表明:(1)在150个凡纳滨对虾样品中,VG基因的4个结构域一共可以检测到37个SNP位点,8个能引起蛋白质氨基酸的同义突变,3个错义突变,26个无义突变。(2)对37个位点进行分析,发现4个可能的SNP候选位点。(3)多态性分析结果显示,4个候选位点都在中等多态水平,多态信息较为丰富。(4)对4个候选位点与产卵次数、产卵总量、平均产卵量和单位体质量产卵量繁殖性状进行单因素方差分析,结果显示位点3 839与总产卵量和单位体质量产卵量存在显著性差异(P <0. 05),其他位点不存在显著差异(P> 0. 05)。 展开更多

关键词 凡纳滨对虾 卵黄蛋白原基因 SNP 繁殖性状 分子标记

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