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利用杨树原生质体瞬时表达系统筛选杨生褐盘二孢菌效应因子蛋白 被引量：6
1
作者 曹友志 谭碧玥 +1 位作者 王明庥 黄敏仁 《南京林业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期31-36,共6页
效应因子蛋白在病原真菌侵染宿主植物过程中发挥着重要作用,效应因子的筛选和鉴定是目前研究的难点。笔者以杨生褐盘二孢菌全基因组测序结果为基础,根据真菌效应因子蛋白结构特征,预测出106个候选效应因子,并成功克隆其中25个。利用杨... 效应因子蛋白在病原真菌侵染宿主植物过程中发挥着重要作用,效应因子的筛选和鉴定是目前研究的难点。笔者以杨生褐盘二孢菌全基因组测序结果为基础,根据真菌效应因子蛋白结构特征,预测出106个候选效应因子,并成功克隆其中25个。利用杨树原生质体瞬时表达系统对这25个候选效应因子蛋白进行细胞内功能筛选,鉴定出4个效应因子蛋白可以抑制杨树转录因子WRKY29启动子的活性,表明这4个效应因子蛋白在干扰植物免疫系统的信号传导途径中发挥重要作用。 展开更多
关键词 杨树原生质体瞬时表达系统 WRKY29 杨生褐盘二孢菌 效应因子
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甘蓝型油菜异三聚体G蛋白原生质体瞬时表达体系的建立
2
作者 陈云 于一帆 +3 位作者 潘淑芬 周研 葛会敏 刘立军 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期21-25,共5页
为建立甘蓝型油菜异三聚体G蛋白各组分原生质体瞬时表达体系,以油菜叶片为试材,从试材选取、平摇时间和聚乙二醇浓度方面优化了油菜原生质体制备条件和转化条件。结果表明,选取30 d苗龄叶片、平摇10 min时原生质体游离状态最佳,产量为10... 为建立甘蓝型油菜异三聚体G蛋白各组分原生质体瞬时表达体系,以油菜叶片为试材,从试材选取、平摇时间和聚乙二醇浓度方面优化了油菜原生质体制备条件和转化条件。结果表明,选取30 d苗龄叶片、平摇10 min时原生质体游离状态最佳,产量为10.73×10~6/m L,活力可达96.4%。采用30%PEG转化原生质体时,目的蛋白表达量最高。Western Bolt的检测分析表明,异三聚体G蛋白各组分均参与了甘蓝型油菜对ABA的应答反应,当ABA浓度分别为100,150,100,50 mmol/L时,Bn GA1、Bn GB1、Bn GG2和BnRGS1蛋白的表达量最高。 展开更多
关键词 油菜 原生质体瞬时表达 异三聚体G蛋白
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拟南芥原生质体瞬时表达快速验证重组酶外源基因删除
3
作者 池俊杰 戴绍军 +1 位作者 魏建华 王宏芝 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期86-92,共7页
通过在拟南芥原生质体中瞬时表达重组酶删除系统,以拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因的启动子诱导加入马铃薯StLs1基因第2个内含子的重组酶表达,证明瞬时转化质粒DNA中位于识别位点之间的基因元件可以被有效删除。建立了一种快速验证重组酶外... 通过在拟南芥原生质体中瞬时表达重组酶删除系统,以拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因的启动子诱导加入马铃薯StLs1基因第2个内含子的重组酶表达,证明瞬时转化质粒DNA中位于识别位点之间的基因元件可以被有效删除。建立了一种快速验证重组酶外源基因删除系统的方法。 展开更多
关键词 位点特异性重组系统 热激蛋白Hsp18 2启动子 拟南芥原生质体瞬时表达
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拟南芥原生质体瞬时表达系统检测病原菌蛋白激发子的免疫活性 被引量：2
4
作者 马雪慧 粟永英 +6 位作者 罗霄 甘爽 杨捷 陈后均 唐昕羽 蔡易 郭晋雅 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期4635-4640,共6页
激发子是一类能激活植物防卫反应的化合物,病原菌的某些分泌蛋白可作为激发子激活植物免疫。目前已有许多不同来源的植物免疫激发子被报道,但仍有大量的病原菌分泌型蛋白激发子尚未被鉴定,其触发的植物免疫信号转导途径尚不明确。本研... 激发子是一类能激活植物防卫反应的化合物,病原菌的某些分泌蛋白可作为激发子激活植物免疫。目前已有许多不同来源的植物免疫激发子被报道,但仍有大量的病原菌分泌型蛋白激发子尚未被鉴定,其触发的植物免疫信号转导途径尚不明确。本研究通过构建四种病原菌分泌蛋白激发子基因(稻瘟病菌MoHrip1及MoHrip2,大丽轮枝菌PevD1,核盘菌SsCut)瞬时表达载体,利用拟南芥原生质体瞬时表达系统获得上述四种分泌蛋白,鉴定其触发植物免疫的活性,初探其参与的植物免疫信号途径。结果表明,MoHrip1、MoHrip2、PevD1和SsCut可引起叶片中活性氧的爆发和胼胝质的积累;它们在拟南芥原生质体细胞中均能激活PTI信号途径下游报告基因FRK1的表达。证明上述四种病原菌蛋白激发子可能参与了植物PTI免疫反应途径的调控;同时也表明本研究采用的原生质体瞬时表达系统可作为快速筛选和鉴定植物免疫激发子的方法。 展开更多
关键词 植物免疫 病原菌 激发子 原生质体瞬时表达
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玉米转录因子ABP9瞬时表达体系的建立 被引量：1
5
作者 陈晓晶 潘振 赵军 《安徽农业科学》 CAS 2014年第9期2554-2558,共5页
[目的]研究玉米抗逆相关转录因子ABP9在玉米抗逆应答中的功能及其表达调控机理。[方法]以2叶期玉米叶片为材料分离原生质体,通过PEG介导的转化方法,建立玉米叶肉原生质体瞬时表达ABP9的系统。利用该系统,通过反转录PCR和Western blot分... [目的]研究玉米抗逆相关转录因子ABP9在玉米抗逆应答中的功能及其表达调控机理。[方法]以2叶期玉米叶片为材料分离原生质体,通过PEG介导的转化方法,建立玉米叶肉原生质体瞬时表达ABP9的系统。利用该系统,通过反转录PCR和Western blot分别检测ABP9genomic∷FLAG融合基因在原生质体中的转录和翻译;并通过转化ABP9∷GFP融合表达载体和GFP荧光检测,对ABP9进行亚细胞定位。[结果]玉米原生质体瞬时表达ABP9系统中,ABP9genomic∷FLAG融合基因能够正确转录出mRNA并翻译出蛋白质;利用该系统进行亚细胞定位结果显示ABP9定位于细胞核中。[结论]玉米原生质体瞬时表达ABP9体系的建立,为进一步探究玉米中ABP9的表达和调控提供了良好的实验系统。 展开更多
关键词 玉米(Zea mays L ) 转录因子 ABP9(ABRE BINDING PROTEIN 9) 原生质体瞬时表达
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甘蓝型油菜FAD2基因调控序列的克隆及瞬时表达分析 被引量：1
6
作者 王茂华 刘绵学 +2 位作者 李德款 杨毅 李旭锋 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第5期96-101,共6页
油酸去饱和酶FAD2(fatty acid desaturase2)是广泛存在于植物中的一种能催化油酸脱氢生成亚油酸的还原酶。根据GenBank上已知的甘蓝型油菜FAD2基因设计引物,以甘蓝型油菜(Brassica napusL.)叶片总DNA为模板,进行TAIL-PCR扩增,获得约1.4k... 油酸去饱和酶FAD2(fatty acid desaturase2)是广泛存在于植物中的一种能催化油酸脱氢生成亚油酸的还原酶。根据GenBank上已知的甘蓝型油菜FAD2基因设计引物,以甘蓝型油菜(Brassica napusL.)叶片总DNA为模板,进行TAIL-PCR扩增,获得约1.4kb片段并测序。序列比对结果说明该片段为已知的FAD2基因编码区上游序列。将该片段进行不同长度的5′端缺失,并用缺失后的序列替换pBI221-LUC质粒上的CaMV35S启动子,构建了甘蓝型油菜瞬时表达载体,进行油菜原生质体瞬时表达的初步研究,结果表明该序列5′端-669bp至-1019bp对报告基因表达水平有较大的影响。结合启动子预测分析结果,此片段中可能存在的赤霉素应答元件、光调控元件等顺式作用元件对FAD2基因的表达调控具有重要作用。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 油酸去饱和酶基因FAD2 FAD2启动子 原生质体瞬时表达
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参与ABA诱导的水稻OsCaMs基因鉴定及其功能分析 被引量：1
7
作者 李闻博 蔡翔 蒋明义 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1474-1485,共12页
以‘徐稻4号’为材料,构建OsCaMs的瞬时表达载体,利用生物信息学和RT-PCR方法设计OsCaMs定量引物5个,鉴定参与ABA诱导的OsCaMs基因并分析其生理功能,为进一步揭示ABA信号转导核心组分的研究奠定基础。结果显示:(1)水稻OsCaMs的5个家族... 以‘徐稻4号’为材料,构建OsCaMs的瞬时表达载体,利用生物信息学和RT-PCR方法设计OsCaMs定量引物5个,鉴定参与ABA诱导的OsCaMs基因并分析其生理功能,为进一步揭示ABA信号转导核心组分的研究奠定基础。结果显示:(1)水稻OsCaMs的5个家族基因的CDS等长,均为450bp,ABA(100μmol·L^(-1))处理能够明显诱导OsCaM1-1和OsCaM1-2的表达。(2)利用瞬时表达载体将表达荧光蛋白的OsCaM1-1-YFP和OsCaM1-2-YFP通过PEG方法转化到原生质体中,激光共聚焦分析显示,这2个基因均定位于细胞核、细胞质和细胞膜中;并构建了OsCaM1-1和OsCaM1-2的干扰载体dsOsCaM1-1和dsOsCaM1-2。(3)经ABA诱导的水稻原生质体抗氧化保护酶APX和SOD活性分别显著提高35%和31%;原生质体瞬时表达和瞬时沉默体系分析表明,OsCaM1-1和OsCaM1-2均能够影响抗氧化保护酶APX和SOD的活性,其中原生质体中瞬时过表达这2个基因对APX和SOD活性上调达到1.15~1.45倍,瞬时干扰这2个基因对APX和SOD活性下调达到25%~30%。(4)外源H_2O_2(10mmol·L^(-1))预处理水稻幼苗可诱导OsCaM1-1和OsCaM1-2基因表达量上调,并且OsCaM1-2能够诱导水稻原生质体中H_2O_2的积累。(5)原生质体瞬时表达分析发现,在水稻原生质体中瞬时表达OsCaM1-1和OsCaM1-2可分别诱导OsrbohB和OsrbohE的表达;而且在水稻原生质体中瞬时表达OsrbohB和OsrbohE可分别诱导OsCaM1-1和OsCaM1-2的表达,表明OsCaMs与Osrbohs之间存在正反馈调节机制。研究表明,OsCaM1-1和OsCaM1-2为水稻参与ABA信号转导中具有调控抗氧化保护作用的同源基因;OsCaM1-1和OsCaM1-2不仅受ABA诱导,也受H_2O_2诱导,而且ABA是通过H_2O_2进行调控。 展开更多
关键词 OsCaM ABA 基因克隆 抗氧化防护 原生质体瞬时表达 亚细胞定位
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利用 TA 克隆的方法简便构建入门克隆 被引量：5
8
作者 殷宪伦 王春涛 +2 位作者 孔祥翔 杨永平 胡向阳 《植物分类与资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期397-402,共6页
Gateway 技术是一种通用型克隆方法,其基于λ噬菌体位点特异性重组,将目的 DNA 快速克隆到各种与 Gateway 技术兼容的目的载体上,不需要进行酶切和连接反应。但存在获得入门克隆过程中相关反应酶制剂价格昂贵,且药品订购时间较长等问题... Gateway 技术是一种通用型克隆方法,其基于λ噬菌体位点特异性重组,将目的 DNA 快速克隆到各种与 Gateway 技术兼容的目的载体上,不需要进行酶切和连接反应。但存在获得入门克隆过程中相关反应酶制剂价格昂贵,且药品订购时间较长等问题。通过对入门载体 pDONR207 的改造,使之产生 3’端具有单个 T-末端的线性化的入门载体,采用 TA 克隆的方法替代 BP 反应,从而简便、经济和快速地获得入门克隆。利用改造后的 Gateway 技术构建拟南芥 SOS2 基因的原核表达载体和真核表达载体,通过原核表达和原生质体瞬时表达证明通过此方法构建的表达载体在原核细胞和真核细胞中都得到了很好的表达。 展开更多
关键词 GATEWAY技术 TA克隆 入门克隆 原核表达 拟南芥原生质体瞬时表达
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