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hTERT和survivin双靶点RNAi表达载体的构建及对人结肠癌SW480细胞的抑制作用
被引量:
1
1
作者
王平
肖琳
+3 位作者
董俊红
孙凤祥
蒋吉英
王守训
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2013年第11期1440-1445,共6页
目的构建人端粒酶反转录酶(hTERT)和生存素(survivin)基因表达的RNA共干扰载体,并检测其对人结肠癌SW480细胞中hTERT基因和survivin基因的干扰作用。方法根据Genbank提供的hTERT和survivin cDNA序列,设计、筛选出高效、特异性强的干扰序...
目的构建人端粒酶反转录酶(hTERT)和生存素(survivin)基因表达的RNA共干扰载体,并检测其对人结肠癌SW480细胞中hTERT基因和survivin基因的干扰作用。方法根据Genbank提供的hTERT和survivin cDNA序列,设计、筛选出高效、特异性强的干扰序列,构建特异性干扰hTERT基因和survivin基因的重组体pGenesil-1.1-survivin、pGenesil-1.2-hTERT,酶切、测序鉴定正确后,两个重组体均用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,将pGenesil-1.1-survivin回收大片段,pGenesil-1.2-hTERT回收小片段,将回收大、小片段用T4 DNA连接酶定向连接,即构建成重组体pGenesil1.1-survivin-hTERT。将3个重组体分别转染SW480细胞,RT-PCR检测细胞中hTERT和survivin基因表达水平,MTT检测对SW480细胞增殖的影响。结果构建的各质粒经限制性酶切及DNA测序均证明其质粒构建正确,RT-PCR检测hTERT和survivin基因表达水平明显降低(P<0.05),各干扰质粒重组体对细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。结论靶向survivin和hTERT基因的双干扰载体构建成功,为后续的结肠癌基因治疗研究奠定理论基础。
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关键词
双靶点rna干扰
SURVIVIN
HTERT
下载PDF
职称材料
题名
hTERT和survivin双靶点RNAi表达载体的构建及对人结肠癌SW480细胞的抑制作用
被引量:
1
1
作者
王平
肖琳
董俊红
孙凤祥
蒋吉英
王守训
机构
潍坊医学院生化教研室
出处
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2013年第11期1440-1445,共6页
基金
国家自然科学基金(30901779)
潍坊市科技局资助项目(20121227)
+1 种基金
山东省自然科学基金(ZR2010HM065
ZR2010HM006)
文摘
目的构建人端粒酶反转录酶(hTERT)和生存素(survivin)基因表达的RNA共干扰载体,并检测其对人结肠癌SW480细胞中hTERT基因和survivin基因的干扰作用。方法根据Genbank提供的hTERT和survivin cDNA序列,设计、筛选出高效、特异性强的干扰序列,构建特异性干扰hTERT基因和survivin基因的重组体pGenesil-1.1-survivin、pGenesil-1.2-hTERT,酶切、测序鉴定正确后,两个重组体均用HindⅢ和BamHⅠ双酶切,将pGenesil-1.1-survivin回收大片段,pGenesil-1.2-hTERT回收小片段,将回收大、小片段用T4 DNA连接酶定向连接,即构建成重组体pGenesil1.1-survivin-hTERT。将3个重组体分别转染SW480细胞,RT-PCR检测细胞中hTERT和survivin基因表达水平,MTT检测对SW480细胞增殖的影响。结果构建的各质粒经限制性酶切及DNA测序均证明其质粒构建正确,RT-PCR检测hTERT和survivin基因表达水平明显降低(P<0.05),各干扰质粒重组体对细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。结论靶向survivin和hTERT基因的双干扰载体构建成功,为后续的结肠癌基因治疗研究奠定理论基础。
关键词
双靶点rna干扰
SURVIVIN
HTERT
Keywords
double inierferenee si
rna
survivin
hTERT
分类号
R735.3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
hTERT和survivin双靶点RNAi表达载体的构建及对人结肠癌SW480细胞的抑制作用
王平
肖琳
董俊红
孙凤祥
蒋吉英
王守训
《基础医学与临床》
CSCD
北大核心
2013
1
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