反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染对人肝癌细胞增生及凋亡的影响 被引量：2

1

作者 乔世峰 孙家邦 +1 位作者 朱斌 王季堃 《首都医科大学学报》 CAS 2004年第1期67-70,共4页

为研究胰岛素样生长因子 I(IGF I)反义寡核苷酸转染对人肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响 ,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性 ,利用反义核酸技术 ,合成针对IGF I的寡核苷酸片段 ,利用脂质体包裹反义IGF I寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细... 为研究胰岛素样生长因子 I(IGF I)反义寡核苷酸转染对人肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响 ,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性 ,利用反义核酸技术 ,合成针对IGF I的寡核苷酸片段 ,利用脂质体包裹反义IGF I寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞 ,MTT法检测细胞增生 ;放免法检测培养细胞上清中AFP、CEA的分泌量 ;采用末端标记 (Tunel)法检测细胞凋亡的变化。结果发现转染反义IGF I寡核苷酸可使人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞增生下降 ,AFP、CEA表达降低 ,凋亡细胞数量增多。反义IGF I寡核苷酸转染人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞可以降低细胞增生。 展开更多

关键词 反义igf-ⅰ寡核苷酸 转染 肝癌细胞增生 凋亡

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脂质体介导的IGF-1R反义寡核苷酸抗胰腺癌的实验研究 被引量：2

2

作者 潘耀振 孙诚谊 王玉芝 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期212-215,共4页

目的研究辐射促进脂质体(lipofectin)介导的胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)反义寡核苷酸(ASON)抑制人胰腺癌细胞系PC-3的生长及接种裸鼠后的成瘤性。方法PC-3细胞经不同剂量60Co照射后,绘制剂量存活曲线,选择照射剂量。用噻唑蓝(MTT)... 目的研究辐射促进脂质体(lipofectin)介导的胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)反义寡核苷酸(ASON)抑制人胰腺癌细胞系PC-3的生长及接种裸鼠后的成瘤性。方法PC-3细胞经不同剂量60Co照射后,绘制剂量存活曲线,选择照射剂量。用噻唑蓝(MTT)比色法比较脂质体介导的ASON(lipo-ASON)直接转染与联合照射转染对PC-3细胞的抑制效果,用流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两种转染方法对PC-3细胞凋亡率及IGF-1RmRNA表达的影响。裸鼠种植PC-3细胞,肿瘤直径为5mm时,比较不同条件下(肿瘤局部照射与不照射)瘤内注射IGF-1Rlipo-ASON对肿瘤的抑制情况。结果Lipo-ASON联合照射对胰腺癌细胞的抑制率(86.3%)、凋亡率(53.06%)及IGF-1RmRNA水平降低程度(降低79.2%)均明显高于未照射组(51.1%、20.23%和45.6%),差异有显著性。照射后瘤内注射lipo-ASON组的肿瘤体积明显小于其他各组,空白对照组与联合照射的lipo-ASON组、Lipo-ASON组肿瘤体积差异有显著性(P<0.01)。结论针对IGF- 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 肿瘤细胞 培养的 脂质体 受体 胰岛素样生长因子1 寡核苷酸类 反义 转染 人胰腺癌细胞系 igf-1R 脂质体介导

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K-ras和IGF-IR反义寡核苷酸联合转染对人胰腺癌Patu8988细胞增殖和凋亡的影响

3

作者 申咏梅 杨晓春 +2 位作者 张梅花 沈钧康 孙亦晖 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第5期496-504,共9页

背景与目的:已有研究表明K-ras基因点突变及胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factor receptor type1,IGF-IR)过表达在胰腺癌的发生发展过程中起着重要作用,针对K-ras mRNA和IGF-IR mRNA的反义寡核苷酸(antisense oligodeoxy... 背景与目的:已有研究表明K-ras基因点突变及胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factor receptor type1,IGF-IR)过表达在胰腺癌的发生发展过程中起着重要作用,针对K-ras mRNA和IGF-IR mRNA的反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)均可抑制胰腺癌细胞的增殖。本研究旨在探讨针对K-ras基因12密码子点突变的硫代反义寡核苷酸(K-ras ASODN)联合IGF-IR硫代反义寡核苷酸(IGF-IR ASODN)对人胰腺癌Patu8988细胞体内外增殖和凋亡的影响。方法:顺序特异引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction using special sequence primers,PCR-SSP)法和基因测序检测Patu8988细胞K-ras点突变形式,根据点突变形式设计并合成K-ras ASODN。K-ras ASODN和IGF-IR ASODN分别单独和联合作用Patu8988细胞后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成实验及透射电镜观察其对Patu8988细胞增殖及形态结构的影响;流式细胞术(FCM)检测K-ras和IGF-IR蛋白表达和细胞凋亡;RT-PCR检测K-ras和IGF-IR mRNA表达水平;以Patu8988细胞建立裸鼠人胰腺癌模型,观察K-ras ASODN与IGF-IR ASODN联合应用在体内的抗肿瘤效果。结果:PCR-SSP法和基因测序检测表明Patu8988细胞存在K-ras基因第12密码子点突变,其突变方式为GGT→GTT。2～32mg/L的K-ras ASODN和2～32mg/L的IGF-IR ASODN单独应用均能一定程度抑制Patu8988细胞增殖、诱导细胞凋亡,两者联合应用较单独应用抑制作用更为显著(P<0.01)。体内实验表明,K-ras ASODN与IGF-IR ASODN联合应用较单独应用能更有效地抑制BALB/c裸鼠胰腺癌的生长(P<0.01)。结论:K-ras ASODN和IGF-IF ASODN两种反义寡核苷酸对人胰腺癌Patu8988细胞增殖的抑制具有协同作用,其机制可能是联合下调K-ras、IGF-IR蛋白及K-ras、IGF-IR mRNA表达水平。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 反义寡核苷酸 K—ras 胰岛素样生长因子ⅰ受体 Patu8988细胞

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人工反义寡核苷酸对人Ⅰ型胶原基因体外转录体系的抑制作用

4

作者 单越新 罗超权 +1 位作者 徐钤 利天增 《第一军医大学学报》 CSCD 1999年第5期426-428,共3页

目的和方法过量Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积是增生性瘢痕组织和瘢痕疙瘩形成的重要原因。采用两个自行构建的ＳＰ６体外转录系统，通过掺入同位素（ａ３２ＰＧＴＰ）进行放射自显影，探讨不同反义寡核苷酸对Ⅰ型胶原基因体外转录的抑制作用。结... 目的和方法过量Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积是增生性瘢痕组织和瘢痕疙瘩形成的重要原因。采用两个自行构建的ＳＰ６体外转录系统，通过掺入同位素（ａ３２ＰＧＴＰ）进行放射自显影，探讨不同反义寡核苷酸对Ⅰ型胶原基因体外转录的抑制作用。结果和结论位于ＳＰ６转录起始位点区域的寡核苷酸能够有效抑制体外转录反应；而位于ＳＰ６转录起始位点下游约２００ｂｐ的寡核苷酸和作为对照的随机寡核苷酸对转录的抑制作用不明显。 展开更多

关键词 ⅰ型胶原基因 反义寡核苷酸 体外转录 瘢痕

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反义寡核苷酸联用对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用 被引量：1

5

作者 杨英 李伍举 +1 位作者 丁雨 王升启 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期694-696,共3页

目的　研究多基因靶向的反义寡核苷酸联用对肺腺癌细胞A5 4 9增殖的抑制作用 ,建立初步筛选、分析组合靶点的实验方法及统计学方法。方法　选择以端粒酶、PKC α、Bcl 2和IGF 1R为靶点的 4种反义寡核苷酸 ,进行两药组合。以脂质体介导... 目的　研究多基因靶向的反义寡核苷酸联用对肺腺癌细胞A5 4 9增殖的抑制作用 ,建立初步筛选、分析组合靶点的实验方法及统计学方法。方法　选择以端粒酶、PKC α、Bcl 2和IGF 1R为靶点的 4种反义寡核苷酸 ,进行两药组合。以脂质体介导进行反义寡核苷酸转染 ,用MTT法染色并计算细胞生长抑制率 ,用SAS统计软件及金正均Q值法进行数据分析。结果　联合用药对A5 4 9细胞增殖的抑制作用显著高于单药 (P <0 0 5 ) ,并筛选出有协同作用的药物组合 (Q≥ 1 15 )。结论　反义寡核苷酸联合用药可以靶向多个与肿瘤发生发展密切相关的基因 ,提高对肿瘤细胞增殖的抑制效果。 展开更多

关键词 反义寡核苷酸 端粒酶 PKG-α Bcl-2 igf-1R 联合用药 A549

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圆盘状受体反义寡核苷酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体表达和胶原合成的抑制作用 被引量：2

6

作者 姜育智 邢新 +1 位作者 李蠡 薛春雨 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期309-313,共5页

目的:观察硫代修饰和脂质体包埋的反义寡核苷酸(ASODN)抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞圆盘状受体基因表达及其对瘢痕疙瘩胶原抑制的影响。方法:实验于2005-03/2006-01进行。收集解放军第二军医大学长海医院整形外科手术切除的4例瘢痕疙瘩(供体... 目的:观察硫代修饰和脂质体包埋的反义寡核苷酸(ASODN)抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞圆盘状受体基因表达及其对瘢痕疙瘩胶原抑制的影响。方法:实验于2005-03/2006-01进行。收集解放军第二军医大学长海医院整形外科手术切除的4例瘢痕疙瘩(供体知情同意),采用组织块培养法进行细胞培养。并将经脂质体包埋并全硫代修饰后的圆盘状受体ASODN加入培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞中,实验分6组,ASODN 5,10,20 μmol/L组、无寡核苷酸组、单纯脂质体及空白对照组。采用反转录-聚合酶链反应技术及[3H]-脯氨酸掺入法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体1 mRNA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达相对量及其对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成分泌的影响。结果:①圆盘状受体1 mRNA表达相对量:ASODN 5,10,20 μmol/L组低于空白对照组(1.91±0.19,1.19±0.37,0.49±0.14,2.61±0.47,P<0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10 μmol/L组(P<0.01)。②Ⅰ型胶原mRNA表达相对量:ASODN 5,10,20 μmol/L组低于空白对照组(1.91±0.59,1.46±0.17,0.19±0.27,3.31±0.53,P<0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10μmol/L组(P<0.01)。③Ⅲ型胶原mRNA表达相对量:ASODN 10,20 μmol/L组低于空白对照组(0.73±0.36,0.61±0.23,1.16±0.43,P<0.01)。④Ⅰ型胶原mRNA/Ⅲ型胶原mRNA:空白对照组为4.50±0.12,ASODN 5,10,20 μmol/L组均低于空白对照组(2.40±0.11,2.00±0.06,1.50±0.07,P<0.05,0.01),ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5,10μmol/L组(P<0.01)。⑤胶原合成分泌量:ASODN 10,20 μmol/L组低于空白对照组(P<0.01)。ASODN 20 μmol/L组低于ASODN 5 μmol/L组(P<0.01)。结论:圆盘状受体-ASODN能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中圆盘状受体表达,显著抑制Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA表达,调整Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原比例,并抑制胶原合成和分泌。 展开更多

关键词 寡核苷酸类 反义 胶原ⅰ型 胶原Ⅲ型 逆转录聚合酶链反应

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C-myc反义寡核苷酸抗恶性黑素瘤作用机制初探 被引量：1

7

作者 张江安 谭升顺 +1 位作者 王梅 彭振辉 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2005年第1期3-5,共3页

目的　初步探讨C-myc反义寡核苷酸(ASODN)抗恶性黑素瘤可能作用机制。方法　以全硫代修饰的C myc反义寡核苷酸体外转染恶性黑素瘤细胞株A375,用台盼蓝活细胞计数法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期变化,间接免疫荧光流式... 目的　初步探讨C-myc反义寡核苷酸(ASODN)抗恶性黑素瘤可能作用机制。方法　以全硫代修饰的C myc反义寡核苷酸体外转染恶性黑素瘤细胞株A375,用台盼蓝活细胞计数法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期变化,间接免疫荧光流式细胞术检测HLA Ⅰ抗原的水平。结果　与对照组相比,①30μmol/LASODN组细胞生长明显受抑制,且发生G1 期阻滞;②ASODN组细胞上HLA Ⅰ抗原的水平明显上调。结论　C myc反义寡核苷酸可能通过抑制A375M细胞的增殖和上调HLA Ⅰ抗原水平的双重机制发挥抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 原癌基因 寡核苷酸 反义 黑素瘤 组织相容性抗原ⅰ类

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小干扰RNA与反义寡核苷酸技术抑制肝星状细胞RhoA表达的效果比较 被引量：1

8

作者 张玉峰 叶坤英 钟丹 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第34期5-8,共4页

目的对比观察小干扰RNA(siRNA)和反义寡核苷酸(ASODN)技术抑制肝星状细胞RhoA表达的效果。方法将培养的大鼠肝星状细胞株HSC-T6随机分为siRNA组和ASODN组,两组又分别分为A、B、C、D各4个亚组;siRNA组和ASODN组中的A亚组不转染质粒,C、D... 目的对比观察小干扰RNA(siRNA)和反义寡核苷酸(ASODN)技术抑制肝星状细胞RhoA表达的效果。方法将培养的大鼠肝星状细胞株HSC-T6随机分为siRNA组和ASODN组,两组又分别分为A、B、C、D各4个亚组;siRNA组和ASODN组中的A亚组不转染质粒,C、D、B亚组分别采用siRNA、ASODN技术转染大鼠RhoA特异性Rat1、Rat2质粒及HK-A阴性对照质粒。转染48 h取各组细胞,以RT-PCR技术检测细胞中的RhoA、Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中的透明质酸(HA)及层粘连蛋白(LN)。结果 siRNA组与ASODN组中RhoA、ColⅠmRNA均以C亚组表达量最低,组内A、C亚组比较差异有统计学意义(P均<0.05),组内其余亚组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);siRNA组C亚组RhoA、ColⅠmRNA相对表达量低于ASODN组(P均<0.05),两组A、B、D同亚组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。siRNA组与ASODN组细胞上清液HA、LN水平均以C亚组最低,组内A、C亚组比较差异有统计学意义(P均<0.05),组内其余亚组间比较差异无统计学意义(P均>0.05);siRNA组C亚组细胞上清液HA、LN水平低于ASODN组(P均<0.05),两组A、B、D同亚组间比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 siRNA和ASODN均可抑制大鼠HSC-T6细胞的RhoA表达,但siRNA下Rat1质粒所介导的RNA干扰技术相对于ASODN能更有效抑制HSC-T6细胞外基质HA、ColⅠ、LN的生成。 展开更多

关键词 小干扰RNA 反义寡核苷酸 RHOA 透明质酸 ⅰ型胶原 层粘连蛋白 肝星状细胞

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反义IGF—I寡核苷酸对肝癌细胞的影响

9

作者 乔世峰 刘学政 +1 位作者 张俊华 王季坤 《锦州医学院学报》 2001年第2期29-29,共1页

关键词 反义igf-ⅰ寡核苷酸 肝癌细胞 影响 ASON

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反义IGF-Ⅰ R基因片段诱导胶质瘤细胞凋亡的流式细胞仪分析和电镜观察 被引量：1

10

作者 牛朝诗 傅先明 汪业汉 《现代神经疾病杂志》 2003年第1期26-29,共4页

目的探讨反义胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-ⅠR)基因片段诱导胶质瘤细胞凋亡的作用及其形态学的变化。方法根据IGF-ⅠRcDNA序列设计其正义、反义基因片段,并对部分碱基进行硫代磷酸修饰。实验分为空白对照组、正义寡核苷酸组和反义寡核... 目的探讨反义胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-ⅠR)基因片段诱导胶质瘤细胞凋亡的作用及其形态学的变化。方法根据IGF-ⅠRcDNA序列设计其正义、反义基因片段,并对部分碱基进行硫代磷酸修饰。实验分为空白对照组、正义寡核苷酸组和反义寡核苷酸组,应用流式细胞仪检测DNA含量,根据DNA直方图分析凋亡细胞发生率。应用透射电镜观察凋亡细胞的形态学变化。结果经反义寡核苷酸5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L等4种浓度处理的胶质瘤细胞的凋亡率分别为(16.06±3.86)%、(24.52±4.84)%、(36.69±5.53)%和(43.85±5.72)%;而经同样浓度正义寡核苷酸处理的胶质瘤细胞的凋亡率分别为(3.76±1.22)%、(3.14±1.15)%、(2.51±0.93)%和(3.26±1.15)%;空白对照组(野生型)的自然凋亡率为(1.01±0.89)%。反义寡核苷酸组与空白对照组相比差异有显著性意义(P<0.05),而正义寡核苷酸组与空白对照组之间差异则无显著性意义(P>0.05)。透射电镜观察显示,凋亡细胞表现为细胞体积缩小,染色质凝聚,并聚集于核膜下呈新月状或块状,胞膜内陷形成膜包裹的核碎片或细胞器,最后出泡形成凋亡小体。结论反义IGF-ⅠR基因片段可诱导胶质瘤细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 癌基因 反义寡核苷酸类 神经胶质瘤 脱噬作用 胰岛素样生长因子-ⅰ受体 流式细胞术

原文传递

人增生性瘢痕成纤维细胞最佳转染条件:α_1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的实验

11

作者 袁即山 利天增 +5 位作者 祁少海 谢举临 徐盈斌 潘姝 张珑娟 孔庆瑜 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第18期108-110,i005,共4页

目的:选择α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳条件。方法:实验于2003-10/2004-06在中山大学附属第一医院外科实验室进行。以阳离子脂质体Oligofectamine转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,应... 目的:选择α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳条件。方法:实验于2003-10/2004-06在中山大学附属第一医院外科实验室进行。以阳离子脂质体Oligofectamine转染体外培养的第2～6代人增生性瘢痕成纤维细胞,应用荧光显微镜记录荧光素在细胞内的空间分布,用流式细胞术作荧光细胞计数和观察细胞凋亡,通过不同细胞接种数量、反义寡核苷酸浓度和脂质体量转染条件的比较,逐步获得各转染过程中的最佳条件。结果:①在6孔板上转染反义寡核苷酸,所用各转染条件未引起细胞凋亡。②其最佳转染条件为:接种细胞数量32.25×104/皿,反义核酸浓度150nmol/L,脂质体量3μL/孔;转染后细胞浆和细胞核内均有荧光素聚集。结论:获得α1(I)型前胶原基因反义寡核苷酸转染的人增生性瘢痕成纤维细胞的最佳转染条件,可为下一步试验提供基础。 展开更多

关键词 胶原ⅰ型 寡核苷酸类 反义 增生性瘢痕 成纤维细胞 阳离子脂质体

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结缔组织生长因子反义寡核苷酸对肝星状细胞胶原表达的影响

12

作者 梁增文 张国 农兵 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2008年第11期1443-1446,共4页

目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸对肝星状细胞株(HSC-T6)前胶原α2(Ⅰ)表达的影响。方法:实验分为反义寡核苷酸(ASODN)组、正义寡核苷酸(SODN)组、脂质体对照组、空白对照组。除空白对照组外,其余各组均于转导前提前加入T... 目的:观察结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸对肝星状细胞株(HSC-T6)前胶原α2(Ⅰ)表达的影响。方法:实验分为反义寡核苷酸(ASODN)组、正义寡核苷酸(SODN)组、脂质体对照组、空白对照组。除空白对照组外,其余各组均于转导前提前加入TGF-β1因子刺激。结果:ASODN能显著抑制经TGF-β1活化后的HSC-T6前胶原α2(Ⅰ)mRNA的表达,而SODN和脂质体对照组对HSC-T6前胶原α2(Ⅰ)mRNA的表达均无明显影响。结论:前胶原α2(Ⅰ)表达与CTGF密切相关,进一步提示CTGF可能是肝纤维化发生发展的关键介导者;应用反义寡核苷酸封闭CTGF的表达有望成为肝纤维化治疗的一种新手段。 展开更多

关键词 肝硬化/免疫学 @结缔组织生长因子 @肝星状细胞 基因表达 胶原ⅰ型/免疫学 寡核苷酸类 反义

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IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ受体反义基因对SMMC-7721肝癌细胞株增殖能力的影响 被引量：3

13

作者 刘志鹏 杨建民 陈文生 《重庆医学》 CAS CSCD 2002年第3期195-197,共3页

目的　研究胰岛素样生长因子Ⅰ受体、Ⅱ受体 (IGF ⅠR、IGF ⅡR)反义基因对SMMC 772 1细胞体外增殖能力的影响。方法　应用反义技术 ,在已将IGF ⅠR反义基因转染入SMMC 772 1肝癌细胞株的基础上 (获得ⅠR AS细胞 ) ,继续利用IGF ⅡR反... 目的　研究胰岛素样生长因子Ⅰ受体、Ⅱ受体 (IGF ⅠR、IGF ⅡR)反义基因对SMMC 772 1细胞体外增殖能力的影响。方法　应用反义技术 ,在已将IGF ⅠR反义基因转染入SMMC 772 1肝癌细胞株的基础上 (获得ⅠR AS细胞 ) ,继续利用IGF ⅡR反义基因真核表达系统 ,通过DOTAPTM脂质体介导的转染技术 ,将IGF ⅡR反义基因导入该细胞 ,经G41 8及潮霉素双重筛选获得稳定表达IGF ⅠR、IGF ⅡR反义基因的SMMC 772 1细胞 (Ⅰ、ⅡR AS细胞 )。结果　光镜、电镜下反义转染细胞形态学上肿瘤性有一定减弱 ;在软琼脂培养基中生长能力低下 (P <0 0 1 ) ;反义G41 8抗性转染细胞克隆形成能力低下 (P <0 0 5) ;在细胞生长曲线上与对照组相比有轻度下降趋势。结论　IGF ⅠR、IGF ⅡR反义基因对SMMC 772 1肝癌细胞株的恶性增殖有明显抑制作用。 展开更多

关键词 igf-ⅰR igf-ⅡR 反义基因 肝癌 SMMC-7721 肝癌细胞株 增殖能力

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IGF-ⅠR、IGF-ⅡR反义基因对SMMC-7721肝癌细胞生物学行为的影响

14

作者 刘志鹏 杨建民 +1 位作者 陈文生 罗元辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期1061-1064,共4页

目的　研究胰岛素样生长因子Ⅰ型及Ⅱ型受体 (IGF ⅠR、IGF ⅡR)反义基因对SMMC 772 1肝癌细胞生物学行为的影响。方法　应用反义技术 ,在已转染了IGF ⅠR反义基因的肝癌SMMC 772 1 (772 1 IGF ⅠR AS)细胞基础上 ,继续利用IGF ⅡR反... 目的　研究胰岛素样生长因子Ⅰ型及Ⅱ型受体 (IGF ⅠR、IGF ⅡR)反义基因对SMMC 772 1肝癌细胞生物学行为的影响。方法　应用反义技术 ,在已转染了IGF ⅠR反义基因的肝癌SMMC 772 1 (772 1 IGF ⅠR AS)细胞基础上 ,继续利用IGF ⅡR反义基因真核表达系统 ,通过DOTAP脂质体介导的转染技术 ,将IGF ⅡR反义基因导入该细胞 ,经G41 8及潮霉素双重筛选获得稳定表达IGF ⅠR、IGF ⅡR反义基因的 772 1 IGF R AS细胞。采用光镜、电镜观察形态学变化 ,双层软琼脂克隆形成实验、MTT细胞生长曲线实验及裸鼠皮下接种实验观察转染后细胞体外生长情况。结果　 772 1 IGF R AS细胞在光镜、电镜下的肿瘤细胞形态恶性程度减低 ;在软琼脂培养基中的生长能力降低 (P <0 .0 1 ) ;在裸鼠体内的致瘤能力也降低 (P <0 .0 5) ;但细胞生长曲线与对照组比较则无明显差异。结论　IGF ⅠR、IGF ⅡR反义基因对SMMC 772 1肝癌细胞株的恶性行为有明显抑制作用。利用反义技术干预肝癌细胞生长因子受体基因表达可能给肝癌的基因治疗提供新的途径。 展开更多

关键词 igf-ⅰR igf-ⅡR 反义基因 肝癌 基因治疗

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肿瘤坏死因子α反义寡核苷酸对鼠单疱病毒性视网膜炎的影响

15

作者 彭伟 李劲 《咸宁学院学报（医学版）》 2009年第3期185-186,共2页

目的观察不同部位注射肿瘤坏死因子α(TNF-α)反义寡核苷酸对实验性单疱病毒性视网膜炎的影响。方法BALB/c小鼠右眼前房注射单纯疱疹病毒-1(HSV-1),同时左眼结膜下或玻璃体注射TNF-αASON治疗,观察其组织学变化并测定小鼠眼的TNF-α含量... 目的观察不同部位注射肿瘤坏死因子α(TNF-α)反义寡核苷酸对实验性单疱病毒性视网膜炎的影响。方法BALB/c小鼠右眼前房注射单纯疱疹病毒-1(HSV-1),同时左眼结膜下或玻璃体注射TNF-αASON治疗,观察其组织学变化并测定小鼠眼的TNF-α含量,比较2种治疗方式的效果。结果试验组小鼠眼TNF-α发生视网膜炎的几率及严重度明显减少;玻璃体注射组TNF-α含量更低。结论采用作用于TNF-α的反义寡核苷酸局部治疗小鼠单疱病毒性视网膜炎,能明显降低感染小鼠眼内细胞因子TNF-α的含量,减轻眼内视网膜炎症反应。结膜下注射给药也许是更好的方法。 展开更多

关键词 视网膜炎 反义寡核苷酸 肿瘤坏死因子 单纯疱疹病毒ⅰ型

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IGF-Ⅰ受体反义寡核苷酸对胰腺癌生长的抑制作用

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作者 徐勤生 王玉芝 +2 位作者 黄志强 冯玉泉 周宁新 《中华普通外科杂志》 CSCD 1999年第5期353-356,共4页

目的　观察 Ｉ Ｇ ＦⅠ受体反义寡核苷酸对胰腺癌细胞生长的抑制作用，为反义核酸疗法在胰腺癌外科综合治疗提供依据。 方法　以免疫组织化学 Ｓ Ｐ法检测 Ｉ Ｇ Ｆ１ 受体在体外培养的胰腺癌细胞系 Ｓ Ｗ１９９０ 的表达；用脂质... 目的　观察 Ｉ Ｇ ＦⅠ受体反义寡核苷酸对胰腺癌细胞生长的抑制作用，为反义核酸疗法在胰腺癌外科综合治疗提供依据。 方法　以免疫组织化学 Ｓ Ｐ法检测 Ｉ Ｇ Ｆ１ 受体在体外培养的胰腺癌细胞系 Ｓ Ｗ１９９０ 的表达；用脂质体包裹合成的 Ｉ Ｇ ＦⅠ受体反义寡核苷酸（ Ａ Ｓ Ｏ Ｎ） 与 Ｓ Ｗ１９９０ 细胞共培养，并接种于裸鼠体内，观察细胞增殖情况。 结果　 Ｓ Ｗ１９９０ 细胞高表达 Ｉ Ｇ ＦⅠ受体，经上述处理细胞增殖抑制率达到８００ ％ ； Ｉ Ｇ ＦⅠ受体表达抑制率为８３９ ％ 。对照组裸鼠体内全部出瘤（１０／１０ ，１００ ％ ） ，处理组出瘤率为２０ ％ （２／１０） ，二者差异有显著意义（ Ｐ＜ ００１） 。 结论　 Ｉ Ｇ ＦⅠ受体反义寡核苷酸可显著抑制胰腺癌细胞系 Ｓ Ｗ１９９０ 在体外及体内的生长，其作用是经抑制受体表达所介导。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 受体 igf-ⅰ 反义寡核苷酸

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STAT1 ASON对肺纤维化大鼠BALF细胞因子和肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响 被引量：5

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作者 王文军 曾鸣 +3 位作者 刘丹 范贤明 朱晨 湛晓勤 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期389-392,共4页

目的:观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)雾化吸入对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺泡灌洗液(BALF)PDGF-BB(血小板衍生生长因子-BB)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、TGF-β1(转化生长因子-β1)、IFN-γ(干扰素-γ)表达... 目的:观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)雾化吸入对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺泡灌洗液(BALF)PDGF-BB(血小板衍生生长因子-BB)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)、TGF-β1(转化生长因子-β1)、IFN-γ(干扰素-γ)表达及肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响。方法:取45只健康雌性Wistar大鼠随机分成ASON组、BLM组和生理盐水(NS)组各15只,气管内分别灌注BLM(ASON组、BLM组)和NS(NS组)复制肺纤维化模型和空白对照,ASON组于第0、2、4、6天雾化吸入STAT1ASON,BLM组和NS组雾化吸入NS,各组分别于第7、14、28天均处死动物5只。观察肺泡炎和肺纤维化改变;收集BALF测定PDGF-BB、TNF-α、IFN-γ、TGF-β1的水平;测定肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果:ASON组第7、14、28天肺泡炎和肺纤维化程度明显低于同时间点BLM组(P<0.05)。BLM组各时间点BALF中PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1表达水平较NS组升高(P<0.05),ASON组较BLM组各时间点均降低(P<0.05);BLM组BALF中IFN-γ表达水平各时间点均低于NS组(P<0.05),但ASON组各时间点均较BLM组高(P<0.05)。ASON组和BLM组第7、14、28天Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达高于NS组(P<0.05);ASON组第7、14、28天Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达均较同时间点BLM组降低(P<0.05)。结论:STAT1ASON雾化吸入能够减轻BLM诱导的肺泡炎和肺纤维化程度,其机制可能与抑制BALF中TGF-β1、PDGF-BB、TNF-α的表达,抑制IFN-γ下降而减少肺组织胶原的沉积有关。 展开更多

关键词 TAT1 反义寡核苷酸 肺纤维化 细胞因子 ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA

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人Ⅰ型前胶原基因反义寡核苷酸对人增生性瘢痕裸鼠移植模型胶原合成的作用 被引量：2

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作者 袁即山 利天增 祁少海 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期718-723,共6页

目的人Ⅰ型前胶原基因(ColⅠA1)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyneucleotide,ASODN)对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞有抑制胶原合成作用,拟进一步探讨ColⅠA1 ASODN对裸鼠移植模型体内的人增生性瘢痕的胶原合成作用。方法 SPF级B... 目的人Ⅰ型前胶原基因(ColⅠA1)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyneucleotide,ASODN)对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞有抑制胶原合成作用,拟进一步探讨ColⅠA1 ASODN对裸鼠移植模型体内的人增生性瘢痕的胶原合成作用。方法 SPF级BALB/c-nunu品系6～8周龄雌性裸鼠60只,体重约20 g;取行瘢痕切除手术患者自愿捐赠的瘢痕组织块去表皮后,移植至裸鼠背部肩胛内侧皮下,每只裸鼠移植1块,制备人增生性瘢痕裸鼠移植模型。将58只成功制备模型的裸鼠根据处理方法不同,随机分成3组,于瘢痕移植2周根据分组行经皮穿刺瘢痕内注射。A组(n=20):5μL浓度为3 mmol/L ColⅠA1 ASODN、3μL脂质体、92μL Opti-MEMⅠ减血清培养基;B组(n=20):3μL脂质体、97μL Opti-MEMⅠ减血清培养基;C组(n=18):100μL Opti-MEMⅠ减血清培养基。实验最初2周每天注射1次,之后隔天1次,至实验取材。注射后2、4、6周,对存活裸鼠进行瘢痕硬度测量后,处死裸鼠取瘢痕组织行胶原染色组织学观察以及透射电镜观察;提取细胞总RNA后行RT-PCR测定ColⅠA1 mRNA相对含量;ELISA法行ColⅠA1蛋白定量分析。结果注射后6周内17只裸鼠死亡;共41只裸鼠40块瘢痕组织符合实验标准,纳入实验;A、B、C组各14、13、14只。注射后2周,3组间瘢痕硬度比较,差异均无统计学意义(P>0.05);4、6周时A组与B、C组比较,差异有统计学意义(P<0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。随时间延长,组织学观察示3组Ⅲ型胶原表达上升,A组最明显,Ⅰ型胶原排列规则。透射电镜观察示A组成纤维细胞退化,胶原纤维排列更趋于一致;B、C组胶原纤维排列也逐渐规则。注射后2、4周3组间ColⅠA1 mRNA和蛋白表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);6周时A组与B、C组比较,差异有统计学意义(P<0.05),B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕内注射ColⅠA1 ASODN可抑制ColⅠA1 mRNA及Ⅰ型胶原表达,促进瘢痕组织成熟、软化,脂质体可促进该抑制效果。 展开更多

关键词 ⅰ型前胶原基因 反义寡核苷酸 增生性瘢痕 胶原 裸鼠

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辐射促脂质体介导的IGF-1R反义寡核苷酸对胰腺癌细胞抑制的实验研究 被引量：1

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作者 孙诚谊 潘耀振 王玉芝 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期795-795,共1页

关键词 igf-1 反义寡核苷酸 胰腺癌细胞 脂质体介导 实验研究 PC-3细胞 裸鼠移植瘤 转染 辐射 生长抑制

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核因子κBp65反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞增殖和Ⅰ型胶原表达的影响 被引量：1

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作者 周宇 陈科全 +6 位作者 王皓 唐志凌 魏国丽 叶文桃 叶石才 刘荣火 冯晓 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2008年第6期405-408,共4页

目的探讨核因子κB（NF-κB）p65反义寡核苷酸（ASOND）对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖和Ⅰ型胶原表达的影响。方法Ⅳ型胶原酶消化密度梯度离心法分离培养大鼠HSC。脂质体介导不同浓度的NF—κB p65 ASOND（0．001、0．01、0．1和μmol／... 目的探讨核因子κB（NF-κB）p65反义寡核苷酸（ASOND）对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖和Ⅰ型胶原表达的影响。方法Ⅳ型胶原酶消化密度梯度离心法分离培养大鼠HSC。脂质体介导不同浓度的NF—κB p65 ASOND（0．001、0．01、0．1和μmol／L）转入HSC。锥虫蓝染色排斥法检测NF—κB p65 ASOND对HSC的毒性并检测各组乳酸脱氢酶（LDH）活性。MTT法测定NF—κB p65 ASOND对1mg／LTNF-α刺激后HSC增殖影响。RT—PCR法和ELISA法检测不同浓度NF—κB p65 ASOND对1mg／LTNF—α刺激后HSCI型胶原表达的影响。结果转染NF—κB p65 ASODN后，HSC细胞NF—κB蛋白的表达下降。不同浓度（0．001、0．01、0．1和1μmol／L）的NF-κB p65 ASOND对于体外培养HSC的存活率和LDH活性无明显影响（P〉0．05）。0．01～1μmol／L的NF—κB p6 5ASOND抑制1mg／LTNF-α刺激后的HSC的增殖和Ⅰ型胶原蛋白和mRNA的表达，且随浓度的增加作用增强（P〈0．05）。结论NF—κB p65 ASOND可通过抑制NF-κB活性减少HSC活化增殖及I型胶原生成，从而减少细胞外基质的产生。 展开更多

关键词 寡核苷酸类 反义 核因子ΚB 转染 肝星状细胞 ⅰ型胶原 增殖 肝 纤维化

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