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靶向SARS-CoV-2受体结合结构域的嵌合抗体表达及功能研究
1
作者 石慧春 焦凡珂 +3 位作者 徐巍 陈永康 陆路 邹鹏 《微生物与感染》 CAS 2023年第1期2-12,共11页
严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染所致的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)给人民的生命健康造成了严重的威胁,目前该病毒仍然在广泛传播,针对SARS-CoV-... 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染所致的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)给人民的生命健康造成了严重的威胁,目前该病毒仍然在广泛传播,针对SARS-CoV-2有效的治疗方法仍有限,因此寻找广谱中和抗体阻断SARS-CoV-2感染具有重要的意义。本文成功表达并纯化了3株靶向SARS-CoV-2的受体结合结构域(receptor-binding domain,RBD)的人鼠嵌合抗体,并且检测了这几株抗体对多种SARS-CoV-2假病毒和活病毒的中和活性。本研究表明这3株抗体能特异性地中和SARS-CoV-2野生型假病毒,IC 50分别为0.03μg/mL、0.06μg/mL、0.03μg/mL。此外,这3株抗体对Alpha株假病毒、Delta株假病毒和Lambda株假病毒也具有广谱中和活性,并可以抑制SARS-CoV-2 Delta株活病毒的复制。机制研究表明,这些抗体可以阻断SARS-CoV-2的S蛋白介导的细胞-细胞融合,且RBD上的K417、E484和N501位点可能是其与这3株抗体结合的关键位点。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 受体结合结构域 嵌合抗体 中和抗体
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静注人免疫球蛋白中IgG二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响
2
作者 雷婷婷 张巍 +3 位作者 李长清 叶生亮 杜晞 马莉 《中国输血杂志》 CAS 2023年第2期125-129,共5页
目的研究静注人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)中免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响。方法利用蛋白纯化技术和高效液相色谱(HPLC)技术,制备不同浓度的IgG二聚体,... 目的研究静注人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)中免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响。方法利用蛋白纯化技术和高效液相色谱(HPLC)技术,制备不同浓度的IgG二聚体,然后采用直接添加的方式,制备得到含有不同浓度IgG二聚体的IVIG。最后利用本实验室已建立的IgG Fc段与THP-1细胞表面Fc段受体结合能力的检测方法,考察IgG二聚体含量对IgG Fc段与细胞表面受体结合能力的影响。结果当IVIG中IgG二聚体含量为1.11%~10.30%时,其与THP-1细胞表面Fc段受体的结合能力为97.67%~135.33%,且这种结合能力与IgG二聚体的含量呈正相关。当IgG二聚体含量超过13.22%时,IgG Fc段与THP-1细胞表面受体的结合能力与IgG二聚体含量则没有相关性。结论一定浓度的IgG二聚体对IVIG中IgG Fc段与THP-1细胞表面受体的结合能力具有促进作用,但尚需动物实验和临床数据进一步验证。 展开更多
关键词 静注人免疫球蛋白(IVIG) IgG二聚体 IgG Fc段 THP-1细胞 受体结合能力
原文传递
噬菌体受体结合蛋白及其宿主谱扩展的相关研究进展
3
作者 李凡 于振兴 +4 位作者 张明 林洪 李学鹏 励建荣 张德福 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第23期252-260,共9页
噬菌体是如今地球上种类最多、分布最广的生物之一,在清除细菌尤其是针对目前广泛出现的多重耐药细菌上具有巨大优势。目前多种噬菌体产品已在食品原料、养殖动物、食源性致病菌检测及即食食品杀菌等领域投入使用且效果良好,但天然噬菌... 噬菌体是如今地球上种类最多、分布最广的生物之一,在清除细菌尤其是针对目前广泛出现的多重耐药细菌上具有巨大优势。目前多种噬菌体产品已在食品原料、养殖动物、食源性致病菌检测及即食食品杀菌等领域投入使用且效果良好,但天然噬菌体狭窄的宿主范围与复杂的宿主互作机制很大程度上限制了新型噬菌体抑菌剂的开发。噬菌体与宿主细菌的特异性结合依赖于噬菌体表面的受体结合蛋白,对各种不同的噬菌体受体结合蛋白的结构功能与作用机制进行研究有助于进一步了解噬菌体与细菌的互作过程,在此基础上利用诱导培养及基因工程等方法对噬菌体受体结合蛋白进行改造以获得优质的宽谱噬菌体已经成为噬菌体研究的重要内容之一。本文对噬菌体受体结合蛋白的不同结构与各种宿主谱扩展方案的相关研究进行总结,为食品工业中噬菌体的进一步开发与应用提供理论支撑。 展开更多
关键词 噬菌体 特异性结合 受体结合蛋白 基因改造 宿主谱扩展 食品领域
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七氟醚联合丙帕他莫对老年患者术后认知功能及磷酸化雷帕霉素靶蛋白/生长因子受体结合蛋白通路的影响
4
作者 陈华樑 姜闽英 巫瑞珠 《中国当代医药》 CAS 2023年第29期110-115,共6页
目的探讨七氟醚联合丙帕他莫对老年患者术后认知功能及磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/生长因子受体结合蛋白(Grb)通路的影响。方法选取2019年1月至2020年12月于南平市第一医院行择期全身麻醉腹腔镜下胆囊切除术老年患者76例为研究对象,... 目的探讨七氟醚联合丙帕他莫对老年患者术后认知功能及磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/生长因子受体结合蛋白(Grb)通路的影响。方法选取2019年1月至2020年12月于南平市第一医院行择期全身麻醉腹腔镜下胆囊切除术老年患者76例为研究对象,采用随机数字表法将其分为观察组和对照组,每组各38例。观察组在麻醉诱导前15 min给予2 g丙帕他莫配伍100 ml氯化钠注射液静脉滴注,对照组仅给予100 ml氯化钠注射液静脉滴注。比较两组患者的手术情况、手术前后简明精神症状量表(MMSE)评分,比较两组患者在麻醉诱导前、术后1、6、12 h(T_(0)~T_(3))血流动力学、血清炎症因子、中枢神经特异蛋白(S100-β)、p-mTOR、Grb水平。结果两组患者的手术时间、输液量及术中出血量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组T_(1)~T_(3)时间点平均动脉压(MAP)、T_(1)的中心静脉压(CVP)、T_(1)、T_(2)的心率和血氧饱和度(SpO_(2))高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者T_(0)~T_(3)时点血清C反应蛋白(CRP)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素8(IL-8)水平呈逐渐升高趋势,而观察组T_(1)~T_(3)血清CRP、IL-4、IL-8低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者T_(1)~T_(3)时的血清S100-β蛋白水平高于T_(0),而观察组T_(1)~T_(3)血清S100-β蛋白水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者T_(1)~T_(3)时血清p-mTOR、Grb蛋白水平高于T_(0)时,观察组T_(1)~T_(3)时的血清p-mTOR、Grb蛋白水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组术后MMSE各项评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论给予老年全身麻醉患者丙帕他莫超前镇痛联合七氟醚吸入麻醉,能有效维持围手术期血流动力学稳定,通过影响mTOR/Grb信号通路磷酸化,减轻麻醉后炎症反应,改善术后认知功能。 展开更多
关键词 七氟醚 丙帕他莫 老年患者 术后认知功能障碍 磷酸化雷帕霉素靶蛋白/生长因子受体结合蛋白通路
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新型冠状病毒疫苗受体结合域抗原含量检测方法建立
5
作者 何欢 李文东 +3 位作者 李玉立 邵天舒 梅婕 李潇 《中国药业》 CAS 2023年第23期84-87,共4页
目的建立通用的新型冠状病毒疫苗(简称新冠疫苗)受体结合域(RBD)抗原含量检测方法。方法以新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)RBD的重组抗体为标准品,先将疫苗中的蛋白解吸附,采用酶联免疫吸附试验检测疫苗中的RBD蛋白含量,并验证方法的线性、定... 目的建立通用的新型冠状病毒疫苗(简称新冠疫苗)受体结合域(RBD)抗原含量检测方法。方法以新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)RBD的重组抗体为标准品,先将疫苗中的蛋白解吸附,采用酶联免疫吸附试验检测疫苗中的RBD蛋白含量,并验证方法的线性、定量下限、准确度、精密度和稀释可靠性,同时对部分上市新冠疫苗进行检测。结果3次试验标准曲线的决定系数(R2)分别为0.9966,0.9958,0.9975(n=6);定量下限为7.81 pg/mL;批内和批间准确度均值为质控标示值的91.98%~110.16%(精密度试验)和93.68%~101.01%(稀释可靠性试验),X,Y,Z公司的加样回收率分别为86.81%,82.97%,105.41%,测定值的变异系数均小于10%。X,Y,Z公司新冠疫苗中RBD蛋白的平均含量分别为302.96 pg/mL、1010.80 pg/mL、42.92μg/mL。结论该方法的方法学验证指标均符合2020年版《中国药典(四部)》通则9012指导原则相关要求,可用于多种技术路线新冠疫苗的RBD抗原含量检测。 展开更多
关键词 新型冠状病毒疫苗 受体结合域蛋白 抗原含量检测 酶联免疫吸附试验 棘突蛋白
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Fc段受体结合蛋白(SPA-SPG)基因克隆表达及其在IgG纯化中的应用 被引量：6
6
作者 孟照辉 林兵 +1 位作者 谢月辉 张克勤 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第2期146-149,共4页
利用生物信息学 ,遴选编码SPA及SPG蛋白的基因 ,进行密码子优化 ,将目的基因分割成互为重叠的小片段寡聚核苷酸链 ,采用一步升温后T4DNA连接酶连接的方法 ,合成了编码SPA及SPG蛋白的融合基因 .将其克隆到pSK质粒进行扩增 ,经测序、修正... 利用生物信息学 ,遴选编码SPA及SPG蛋白的基因 ,进行密码子优化 ,将目的基因分割成互为重叠的小片段寡聚核苷酸链 ,采用一步升温后T4DNA连接酶连接的方法 ,合成了编码SPA及SPG蛋白的融合基因 .将其克隆到pSK质粒进行扩增 ,经测序、修正后再克隆到表达载体 ,高效表达了带His6的融合蛋白———蛋白AG .将蛋白AG共价结合到表面带羧基的磁粒上 ,形成蛋白AG磁粒复合物 ,用此复合物可在 1h内从大鼠、小鼠、人、猕猴、马、羊及猪等常用实验动物血清中纯化IgG . 展开更多
关键词 Fc段受体结合蛋白 SPA-SPG 融合基因合成 蛋白AG磁粒 IGG 纯化 受体结合蛋白 基因克隆 基因表达
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Fc受体结合型与非Fc受体结合型CD3单抗的制备
7
作者 李晴 陈剑晖 李晓帆 《福建医药杂志》 CAS 2016年第1期46-49,共4页
目的研究Fc受体结合型与非Fc受体结合型CD3单抗的制备及单抗的特性。方法利用杂交瘤细胞株扩增,使用体外培养法制备Fc受体结合型CD3单抗,利用动物体内诱生法制备非Fc受体结合型CD3单抗。使用亲和层析法纯化抗体并与市售的CD3单抗比较,... 目的研究Fc受体结合型与非Fc受体结合型CD3单抗的制备及单抗的特性。方法利用杂交瘤细胞株扩增,使用体外培养法制备Fc受体结合型CD3单抗,利用动物体内诱生法制备非Fc受体结合型CD3单抗。使用亲和层析法纯化抗体并与市售的CD3单抗比较,行淋巴细胞培养、流式细胞术等了解Fc受体结合型与非Fc受体结合型CD3单抗的特性。结果使用体外培养法制备蛋白G琼脂糖纯化了Fc受体结合型CD3单抗;使用动物体内诱生法制备A蛋白亲和层析法纯化了非Fc受体结合型CD3单抗;CD3单抗与市售的CD3单抗一致;Fc受体结合型与非Fc受体结合型CD3单抗的增殖及T细胞受体内化效应和文献报道一致。结论利用杂交瘤细胞株扩增并成功制备了Fc受体结合型与非Fc受体结合型CD3单抗,并为后续工作的进行奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 Fc受体结合型 非Fc受体结合型 CD3单抗 T细胞受体 细胞因子风暴
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山柰酚拮抗血小板活化因子与其受体结合的作用 被引量：14
8
作者 臧宝霞 金鸣 +3 位作者 吴伟 陈文梅 朴永哲 李金荣 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期789-791,共3页
目的 :观察山柰酚对氚标记的血小板活化因子与血小板膜上受体结合作用的影响 ,试图证明该药为一新型血小板激活因子 (PAF)受体拮抗剂。方法 :以放射配基结合试验观察 [3 H]PAF与家兔血小板受体的特异性结合 ;分光光度法测定PAF诱发的血... 目的 :观察山柰酚对氚标记的血小板活化因子与血小板膜上受体结合作用的影响 ,试图证明该药为一新型血小板激活因子 (PAF)受体拮抗剂。方法 :以放射配基结合试验观察 [3 H]PAF与家兔血小板受体的特异性结合 ;分光光度法测定PAF诱发的血小板黏附强度 ;Fura 2荧光分光光度法测定PAF介导的兔多形核白细胞 (PMNs)内钙离子浓度的升高。结果 :山柰酚可浓度依赖地抑制 1,2 ,4nmol·L-1[3 H]PAF与血小板受体的特异性结合 ,IC50 分别为 30 .8,74 .6 ,92 .0 μmol·L-1;该药可明显抑制PAF诱发的兔血小板黏附及PMNs内游离钙升高 ,且均呈明显的量效关系 ,其抑制血小板黏附的IC50 为 6 5 μmol·L-1。结论 :山柰酚具抗PAF的作用 。 展开更多
关键词 PAF 山柰酚 受体结合 血小板黏附 抗血小板活化 PMN 诱发 特异性结合 家兔 拮抗
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鸡源株与人源株H9N2流感病毒血凝素受体结合位点氨基酸比较与分析 被引量：15
9
作者 刘金华 吴清民 +2 位作者 陈福勇 郭玉璞 Hiroshi Kida 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期416-418,共3页
H9N2病毒可以感染多种禽类和哺乳动物 ,包括人类。流感病毒血凝素受体结合位点的氨基酸可以影响受体结合特性。为了解鸡源株与人源株H9N2病毒受体结合部氨基酸的差异 ,作者对二者进行了比较与分析 ,结果表明 ,鸡源株与人源株血凝素受体... H9N2病毒可以感染多种禽类和哺乳动物 ,包括人类。流感病毒血凝素受体结合位点的氨基酸可以影响受体结合特性。为了解鸡源株与人源株H9N2病毒受体结合部氨基酸的差异 ,作者对二者进行了比较与分析 ,结果表明 ,鸡源株与人源株血凝素受体结合部位氨基酸的第 137、183、190、2 2 6位点存在差异 ,鸡源株在这些位点分别为K、N、AorVorT、LorQ ,而人源株则分别为R、H、E、L。虽然尚不清楚这些位点的改变对病毒与细胞亲和力及宿主范围的影响 ,但由于H9N2在我国养鸡业的普遍存在 ,加强H9N2病毒的分子流行病学监测有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感 H9N2 血凝素 受体结合位点
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芦丁拮抗血小板活化因子与受体结合的作用 被引量：12
10
作者 金鸣 臧宝霞 +3 位作者 吴伟 陈文梅 朴永哲 李金荣 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期390-392,共3页
目的　观察芦丁对血小板活化因子(PAF)与受体结合的拮抗作用。方法　以放射配基结合试验观察[3H]PAF与家兔血小板受体特异性结合的作用;体外以分光光度法测定PAF介导血小板黏附的强度;以Fura- 2荧光分光光度法测定PAF介导的兔多形核白细... 目的　观察芦丁对血小板活化因子(PAF)与受体结合的拮抗作用。方法　以放射配基结合试验观察[3H]PAF与家兔血小板受体特异性结合的作用;体外以分光光度法测定PAF介导血小板黏附的强度;以Fura- 2荧光分光光度法测定PAF介导的兔多形核白细胞(PMNs)内钙离子浓度的升高。结果　芦丁可浓度依赖地抑制1、2、4 nm ol/L [3H]PAF与血小板受体的特异性结合,其IC50 分别为7.3、8.7、17.2 mm ol/L ;芦丁可明显抑制PAF介导的血小板黏附,IC50 为1.5 1mm ol/L;芦丁浓度为6 8.2～5 4 6 μm ol/L 时可浓度依赖地抑制PAF介导的PMNs内游离钙浓度的升高。结论　芦丁具有抗PAF作用,为一种新的PAF受体拮抗剂。 展开更多
关键词 芦丁 血小板活化因子(PAF) 受体结合试验 血小板黏附 多形核白细胞(PMNs)
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尼帕病毒融合蛋白、受体结合蛋白的表达及特异性高免血清制备 被引量：7
11
作者 刘勇军 肖昌 +2 位作者 王贵平 宣华 涂长春 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期465-470,共6页
尼帕病毒膜融合蛋白F和受体结合蛋白G在病毒感染和诱导机体产生保护性免疫中起重要的作用。通过PCR扩增获得尼帕病毒F1和G基因片段(均去掉信号肽和跨膜区),克隆至原核表达载体,IPTG诱导大肠杆菌表达目的蛋白,Western blot表明重组F1、G... 尼帕病毒膜融合蛋白F和受体结合蛋白G在病毒感染和诱导机体产生保护性免疫中起重要的作用。通过PCR扩增获得尼帕病毒F1和G基因片段(均去掉信号肽和跨膜区),克隆至原核表达载体,IPTG诱导大肠杆菌表达目的蛋白,Western blot表明重组F1、G蛋白与兔抗尼帕病毒血清具有良好的反应原性;同时将F1和G基因克隆至经改造过的杆状病毒表达载体,获得了含有目的基因的重组杆状病毒,接种sf9单层细胞,间接免疫荧光检测表明F1、G蛋白在杆状病毒中正确表达,并与抗尼帕病毒血清具有良好的反应原性。以纯化原核表达的F1、G蛋白免疫兔获得了抗F1和抗G重组蛋白的特异血清,Western blot和间接免疫荧光检测表明所制备的血清具有特异性。试验所表达的抗原和制备的特异血清可用于尼帕病的诊断。 展开更多
关键词 尼帕病毒(NiV) 融合蛋白 受体结合蛋白 重组杆状病毒 高免血清
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泥蚶(Tegillarca granosa)生长因子受体结合蛋白2(GRB2)基因的克隆与表达分析 被引量：7
12
作者 董迎辉 项翔 +3 位作者 姚韩韩 包永波 孙长森 林志华 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期937-943,共7页
通过已构建的泥蚶(Tegillarca granosa)转录组文库,利用SMART RACE技术扩增得到泥蚶Tg-GRB2基因的全长cDNA序列,并对其生物信息学、组织表达及发育阶段表达特征进行了分析。结果表明,泥蚶Tg-GRB2 cDNA全长1283bp,开放阅读框为708bp,编码... 通过已构建的泥蚶(Tegillarca granosa)转录组文库,利用SMART RACE技术扩增得到泥蚶Tg-GRB2基因的全长cDNA序列,并对其生物信息学、组织表达及发育阶段表达特征进行了分析。结果表明,泥蚶Tg-GRB2 cDNA全长1283bp,开放阅读框为708bp,编码236个氨基酸;蛋白结构预测显示,Tg-GRB2蛋白包含SH3-SH2-SH3三个功能域,SH2结构域由两端的α-螺旋和中间反向平行的β-折叠片构成,SH3结构域主要由β-折叠片组成,具备典型的结构特征;氨基酸序列比对发现,Tg-GRB2与脊椎动物的同源性为62.1%—63.8%,而与玻璃海鞘和日本血吸虫同源性较低。qRT-PCR检测结果显示:Tg-GRB2 mRNA在泥蚶血液、斧足、鳃、外套膜、闭壳肌、内脏团6个组织中都有表达,而在血液中的表达量极显著地高于其它组织;在泥蚶的不同发育阶段中,Tg-GRB2 mRNA在2—4细胞胚胎、原肠胚、担轮幼虫、D形幼虫中均有较高的表达量,而在D形幼虫中表达量最高,表明Tg-GRB2基因在泥蚶早期发育中发挥重要调节作用。 展开更多
关键词 泥蚶 生长因子受体结合蛋白2（GRB2） 基因克隆 荧光定量PCR
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槲皮素抑制血小板活化因子受体结合作用的研究 被引量：14
13
作者 臧宝霞 金鸣 +4 位作者 吴伟 朴永哲 赵颂军 李金荣 陈文梅 《心肺血管病杂志》 CAS 2004年第2期105-107,共3页
目的 :观察槲皮素对氚标记的血小板活化因子与血小板膜上受体结合的影响 ,试图证明该药为一新型血小板激活因子 (PAF)受体拮抗剂。方法 :以放射配基结合试验观察 [3H]PAF与兔血小板受体特异性结合的作用 ;以分光光度法测定PAF诱发血小... 目的 :观察槲皮素对氚标记的血小板活化因子与血小板膜上受体结合的影响 ,试图证明该药为一新型血小板激活因子 (PAF)受体拮抗剂。方法 :以放射配基结合试验观察 [3H]PAF与兔血小板受体特异性结合的作用 ;以分光光度法测定PAF诱发血小板黏附的强度。结果 :槲皮素可浓度依赖地抑制2 5 ,5 0 ,10 0nmol·L- 1 [3H]PAF与兔血小板受体的特异性结合 ;该药可明显抑制PAF诱发的血小板黏附 ,具明显的量效关系 ,其IC50 为 39 8μmol·L- 1 。结论 :槲皮素具抗PAF作用 ,为一新的PAF受体拮抗剂。 展开更多
关键词 槲皮素 血小板活化因子 受体结合 血小板黏附 试验
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猪流行性腹泻病毒S蛋白受体结合域的分析 被引量：5
14
作者 孙东波 陈建飞 +5 位作者 时洪艳 申识川 吕茂杰 范秀萍 陈洪岩 冯力 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期528-532,共5页
以猪流行性腹泻病毒(PEDV)可溶性的猪氨基肽酶N受体为靶蛋白对PEDV S1基因特异性肽库进行3轮生物淘选,然后对30个淘选的噬菌体克隆进行测序。序列分析发现,2个噬菌体克隆展示无义氨基酸序列,其余28个噬菌体克隆展示的氨基酸序列位于PED... 以猪流行性腹泻病毒(PEDV)可溶性的猪氨基肽酶N受体为靶蛋白对PEDV S1基因特异性肽库进行3轮生物淘选,然后对30个淘选的噬菌体克隆进行测序。序列分析发现,2个噬菌体克隆展示无义氨基酸序列,其余28个噬菌体克隆展示的氨基酸序列位于PEDV S蛋白的第249-529位氨基酸区域,这个区域被命名为MRR。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对MRR基因进行真核表达。Western blot结果表明,表达的MRR重组蛋白能够与兔抗PEDV多克隆抗体反应。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 受体结合域
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禽流感病毒血凝素保守氨基酸对其受体结合位点的影响 被引量：13
15
作者 贾红玲 苏艳 吴润 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期500-504,共5页
采用PCR定点突变技术,对H5N1亚型禽流感病毒的血凝素HA基因受体结合位点相关的保守氨基酸分别进行以下位点的定点突变:35位K→R、45位D→N、98位Y→F、193位K→R和267位A→T,构建突变表达载体pCI-HA,转染293T细胞进行瞬时表达。流式细... 采用PCR定点突变技术,对H5N1亚型禽流感病毒的血凝素HA基因受体结合位点相关的保守氨基酸分别进行以下位点的定点突变:35位K→R、45位D→N、98位Y→F、193位K→R和267位A→T,构建突变表达载体pCI-HA,转染293T细胞进行瞬时表达。流式细胞检测结果显示:193位K→R的突变体的HA的表达显著增加;98位Y→F突变体的HA的表达受到显著抑制。同时,血球吸附试验表明,同一HA突变体吸附鸡红细胞和马红细胞时,显示出不同的红细胞吸附能力。因此,受体结合位点相关的193位和98位的保守氨基酸不仅对受体结合位点结构域的形成有影响,它们还在决定AIV感染的宿主特异性中具有重要的作用。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1亚型 血凝素 受体结合位点 定点突变
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文蛤生长因子受体结合蛋白2(GRB2)基因克隆、时空表达及SNP位点筛查 被引量：5
16
作者 高晓艳 董迎辉 +4 位作者 施沈佳 姚韩韩 阮文斌 赵家熙 林志华 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1324-1332,共9页
为探索贝类GRB2基因的结构、功能特征,以及在贝类生长发育过程中的作用,实验通过已构建的文蛤转录组文库,利用SMART RACE技术扩增得到了文蛤GRB2基因的c DNA全长序列,对其生物信息学、组织及发育阶段表达特征进行了分析,并利用直接测序... 为探索贝类GRB2基因的结构、功能特征,以及在贝类生长发育过程中的作用,实验通过已构建的文蛤转录组文库,利用SMART RACE技术扩增得到了文蛤GRB2基因的c DNA全长序列,对其生物信息学、组织及发育阶段表达特征进行了分析,并利用直接测序方法在外显子中筛选SNP位点。结果显示,GRB2基因c DNA全长1 791 bp,开放阅读框669 bp,编码223个氨基酸,蛋白由SH-SH2-SH3 3个结构域组成;氨基酸序列比对发现,文蛤G RB2与泥蚶的同源性最高,达到65.6%,与脊椎动物的同源性都在60%以上,说明GRB2基因在进化过程中比较保守。荧光实时定量PCR(qRT-PCR)结果表明,GRB2在文蛤6个组织和10个发育时期中均有表达,但不同组织间的表达量并没有显著差异;发育时期中的表达量呈现逐渐升高的趋势,在壳顶幼虫时期达到最高,之后表达量又有所降低。SNP位点的筛选结果表明,在G RB2基因的外显子区域共发现16个SNP位点。 展开更多
关键词 文蛤 生长因子受体结合蛋白2(GRB2) 克隆 SNP
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受体结合法与荧光偏振免疫法测定环孢素 A 血药浓度的比较 被引量：7
17
作者 李芳秋 张中书 +3 位作者 许瑞吉 储小曼 周燕 武建国 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期282-284,共3页
建立了测定全血中环孢素 Ａ（ Ｃｓ Ａ） 浓度的受体结合法，并与荧光偏振免疫法（ Ｆ Ｐ Ｉ Ａ） 进行比较。用环孢素 Ａ 的重组受体亲环素 Ａ 作为结合蛋白，３ Ｈ Ｃｓ Ａ 作示踪剂，活性炭吸附分离结合的与游离的两相，测定结... 建立了测定全血中环孢素 Ａ（ Ｃｓ Ａ） 浓度的受体结合法，并与荧光偏振免疫法（ Ｆ Ｐ Ｉ Ａ） 进行比较。用环孢素 Ａ 的重组受体亲环素 Ａ 作为结合蛋白，３ Ｈ Ｃｓ Ａ 作示踪剂，活性炭吸附分离结合的与游离的两相，测定结合相的放射性。测定了３０ 例肾移植患者 Ｃｓ Ａ 血药浓度并与 Ｆ Ｐ Ｉ Ａ 的结果进行比较。受体结合法的有效测定范围为５０１６００ ｎｇｍｌ ，变异系数批内为８ ．２ ％ （ ｎ ＝ ８） ，批间为１０ ．６ ％ （ ｎ ＝ ６） ，测定结果与 Ｆ Ｐ Ｉ Ａ 法相关（ ｒ＝ ０ ．９６ ； Ｐ＜０ ．００１） 。测定 Ｃｓ Ａ 的受体结合法灵敏、特异、重复性和稳定性好，测定结果与 Ｆ Ｐ Ｉ Ａ 法相关，适用于临床血药浓度的测定。 展开更多
关键词 环孢素A 亲环素A 受体结合法 FPIA 血药浓度
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Ⅴ型分泌系统菌体表面展示F18大肠杆菌黏附素及其受体结合位点的确定 被引量：6
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作者 原志伟 蒋颖 +1 位作者 王建业 朱国强 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期319-323,共5页
自主转运蛋白(V型分泌系统)的β结构域已被证明可以将异源性多肽展示在细菌表面。运用DNA重组技术优化构建V型分泌系统MisL并在菌体表面展示F18大肠杆菌黏附素FedF及其受体结合域FedF1。含重组质粒pnirBMisL-fedF或pnirBMisL-fedF1大肠... 自主转运蛋白(V型分泌系统)的β结构域已被证明可以将异源性多肽展示在细菌表面。运用DNA重组技术优化构建V型分泌系统MisL并在菌体表面展示F18大肠杆菌黏附素FedF及其受体结合域FedF1。含重组质粒pnirBMisL-fedF或pnirBMisL-fedF1大肠杆菌(E.coli)DH5α经厌氧诱导后,分别与兔抗F18ab菌毛FedF亚单位单因子血清和F18大肠杆菌黏附素受体易感性仔猪的小肠上皮细胞做玻板凝集试验和体外黏附试验,结果表明上述两株诱导表达重组菌与FedF抗血清发生明显的凝集反应,且能较好地黏附于F18大肠杆菌黏附素受体易感性仔猪小肠上皮细胞。而菌体表面展示F18大肠杆菌黏附素FedF突变体FedF(M)(黏附素受体结合域第88和89位组氨酸残基双突变为丙氨酸)的重组菌则失去上述凝集和黏附特性。以上试验结果说明,F18大肠杆菌黏附素FedF及其受体结合域FedF1在大肠杆菌表面得到了功能性表达,并进一步证明了位于FedF受体结合域内第88和89位组氨酸残基对FedF受体结合域的形成至关重要。 展开更多
关键词 V型分泌系统 自主转运蛋白 菌体表面展示 FedF受体结合域
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流感病毒受体结合特性鉴别方法的建立 被引量：4
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作者 孙培录 夏咸柱 +7 位作者 侯小强 高玉伟 贺文琦 孙贺庭 王承宇 杨松涛 王铁成 黄耕 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第8期713-716,共4页
目的建立一种快速鉴别流感病毒受体结合特性的方法。方法应用流式细胞仪技术,通过地高辛标记的植物凝集素DIG-SNA和DIG-MAA,检测正常鸡红细胞、绵羊红细胞和经α-2,3唾液酸酶处理的鸡红细胞表面受体。分别应用两种受体类型不同的红细胞... 目的建立一种快速鉴别流感病毒受体结合特性的方法。方法应用流式细胞仪技术,通过地高辛标记的植物凝集素DIG-SNA和DIG-MAA,检测正常鸡红细胞、绵羊红细胞和经α-2,3唾液酸酶处理的鸡红细胞表面受体。分别应用两种受体类型不同的红细胞进行微量血凝试验,检测流感病毒的受体结合特性,并检测醛化红细胞对其受体结合特性的影响。结果流式细胞检测结果表明,鸡红细胞表面既有SAα2,6Gal受体,也有SAα2,3Gal受体,绵羊红细胞表面只有SAα2,3Gal受体,处理后的鸡红细胞表面只有SAα2,6Gal受体。经分别检测人禽流感病毒毒株,证实该方法能快速准确地鉴别流感病毒的受体结合特性,醛化红细胞未影响其受体结合特性。结论已成功建立了流感病毒受体结合特性的鉴别方法。 展开更多
关键词 流感病毒 受体结合特性 SAα2 6Gal受体 SAα2 3Gal受体
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F18大肠杆菌黏附素受体结合域鉴定新方法 被引量：4
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作者 葛兆宏 陆广富 +7 位作者 朱军 郁磊 羊扬 原志伟 朱吕昌 吴圣龙 包文斌 朱国强 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期1-5,共5页
运用DNA重组技术将F18ab和F18ac大肠杆菌黏附素fedF亚单位内的第60～109位氨基酸残基区段(fedF1)和fedF全基因克隆入V型分泌系统MisL的载客结构域上,经DNA测序确证其正确阅读框后,含重组菌质粒pnirBMisL-fedF或pnirBMisL-fedF1经厌氧诱... 运用DNA重组技术将F18ab和F18ac大肠杆菌黏附素fedF亚单位内的第60～109位氨基酸残基区段(fedF1)和fedF全基因克隆入V型分泌系统MisL的载客结构域上,经DNA测序确证其正确阅读框后,含重组菌质粒pnirBMisL-fedF或pnirBMisL-fedF1经厌氧诱导后,与断奶仔猪小肠上皮细胞进行体外黏附试验。结果表明:FUT1基因M307位点中GG型和AG型仔猪小肠上皮细胞均能黏附上述重组菌,而AA型个体小肠上皮细胞则不能黏附。上述重组菌均能与兔抗F18ab菌毛FedF亚单位单因子高免血清发生玻板凝集反应。而FedF突变体FedF(M)的重组质粒菌则失去上述凝集和黏附特性。证明F18大肠杆菌黏附素fedF基因及其基因片段fedF1在大肠杆菌表面得到了功能性表达,F18ab和F18ac黏附素FedF直接介导F18大肠杆菌与易感仔猪小肠上皮细胞表面大分子受体黏附结合,fedF1为黏附素FedF的受体主要结合域,其His88、His99是FedF黏附素受体结合域的重要氨基酸残基。 展开更多
关键词 F18大肠杆菌 黏附素FedF V型分泌系统 自主转运蛋白 受体结合域
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