目的建立粉尘螨变应原第2组分(Der f 2)血清特异性IgE的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并评价其检测效能。方法利用重组表达的Der f 2作为包被抗原,分别建立检测Der f 2血清特异性IgE的间接ELISA法和亲和素-生物素复合(ABC)-ELISA法,采用...目的建立粉尘螨变应原第2组分(Der f 2)血清特异性IgE的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并评价其检测效能。方法利用重组表达的Der f 2作为包被抗原,分别建立检测Der f 2血清特异性IgE的间接ELISA法和亲和素-生物素复合(ABC)-ELISA法,采用正交试验筛选两种方法的最优检测条件。分别采用上述两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE阳性标准血清,绘制两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE的标准曲线;同时以Pharmacia Uni Cap系统检测结果为金标准,计算两种ELISA法检测46例哮喘患者血清Der f 2特异性IgE的结果符合率。结果间接ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为10μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000。ABC-ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为15μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,生物素标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000,HRP标记的链霉和素稀释倍数为1∶2 000。间接ELISA和ABC-ELISA法的灵敏度值分别为0. 72 U/ml和0. 69 U/ml。间接ELISA和ABC-ELISA检测哮喘患者的符合率分别为93. 5%和95. 7%。结论成功建立基于重组表达Der f 2的ELISA法,其对Der f 2特异性IgE具有较好的检测效能。展开更多
目的:利用生物信息学方法对热带无爪螨第1组分变应原(Blo t 1)特征进行分析。方法:采用SignalP 4.1服务器用于分析Blo t 1的信号肽序列,ProtScale tools对Blo t 1的理化性质进行分析,NetPhos3.1服务器预测分析Blo t 1的磷酸化位点。采用...目的:利用生物信息学方法对热带无爪螨第1组分变应原(Blo t 1)特征进行分析。方法:采用SignalP 4.1服务器用于分析Blo t 1的信号肽序列,ProtScale tools对Blo t 1的理化性质进行分析,NetPhos3.1服务器预测分析Blo t 1的磷酸化位点。采用SOPMA服务器预测其二级结构。结果:Blo t 1是一种亲水蛋白,其第1-18位氨基酸为Blo t 1的信号肽序列,磷酸化位点预测显示:Blo t 1含有16个丝氨酸激酶、12个苏氨酸激酶及16个酪氨酸激酶,没有跨膜结构域;Blo t 1的二级结构中包含α螺旋(氨基酸占比28.56%),β转角(氨基酸占比7.95%),延伸链(氨基酸占比19.05%)和无规则卷曲(氨基酸占比44.44%)。Blo t 1的B细胞表位有5个肽序列(38-43,115-118,125-130,156-159,204-212),T细胞表位预测得到3个肽序列(89-109,134-154,247-267)。结论:对Blo t 1的表位分析,为Blo t 1基于表位的疫苗和肽-ELISA的研发奠定理论基础。展开更多
文摘目的建立粉尘螨变应原第2组分(Der f 2)血清特异性IgE的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并评价其检测效能。方法利用重组表达的Der f 2作为包被抗原,分别建立检测Der f 2血清特异性IgE的间接ELISA法和亲和素-生物素复合(ABC)-ELISA法,采用正交试验筛选两种方法的最优检测条件。分别采用上述两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE阳性标准血清,绘制两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE的标准曲线;同时以Pharmacia Uni Cap系统检测结果为金标准,计算两种ELISA法检测46例哮喘患者血清Der f 2特异性IgE的结果符合率。结果间接ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为10μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000。ABC-ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为15μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,生物素标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000,HRP标记的链霉和素稀释倍数为1∶2 000。间接ELISA和ABC-ELISA法的灵敏度值分别为0. 72 U/ml和0. 69 U/ml。间接ELISA和ABC-ELISA检测哮喘患者的符合率分别为93. 5%和95. 7%。结论成功建立基于重组表达Der f 2的ELISA法,其对Der f 2特异性IgE具有较好的检测效能。
文摘目的:利用生物信息学方法对热带无爪螨第1组分变应原(Blo t 1)特征进行分析。方法:采用SignalP 4.1服务器用于分析Blo t 1的信号肽序列,ProtScale tools对Blo t 1的理化性质进行分析,NetPhos3.1服务器预测分析Blo t 1的磷酸化位点。采用SOPMA服务器预测其二级结构。结果:Blo t 1是一种亲水蛋白,其第1-18位氨基酸为Blo t 1的信号肽序列,磷酸化位点预测显示:Blo t 1含有16个丝氨酸激酶、12个苏氨酸激酶及16个酪氨酸激酶,没有跨膜结构域;Blo t 1的二级结构中包含α螺旋(氨基酸占比28.56%),β转角(氨基酸占比7.95%),延伸链(氨基酸占比19.05%)和无规则卷曲(氨基酸占比44.44%)。Blo t 1的B细胞表位有5个肽序列(38-43,115-118,125-130,156-159,204-212),T细胞表位预测得到3个肽序列(89-109,134-154,247-267)。结论:对Blo t 1的表位分析,为Blo t 1基于表位的疫苗和肽-ELISA的研发奠定理论基础。
