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家蝇抗菌肽Defensin基因同向串联表达载体的构建和鉴定 被引量：9
1
作者 王婷婷 金小宝 +1 位作者 朱家勇 刘雷山 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第2期3-5,共3页
目的:构建家蝇抗菌肽Defensin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法:PCR法扩增家蝇抗菌肽Defensin基因成熟肽片断,目的片断的上游5′端带有EcoRⅠ和NheⅠ位点,下游5′端带有NotⅠ和XbaⅠ位点,目的片断首先克隆... 目的:构建家蝇抗菌肽Defensin基因多拷贝串联体,并克隆到甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K上。方法:PCR法扩增家蝇抗菌肽Defensin基因成熟肽片断,目的片断的上游5′端带有EcoRⅠ和NheⅠ位点,下游5′端带有NotⅠ和XbaⅠ位点,目的片断首先克隆入pMD18-T载体,利用pMD18-T载体的NdeⅠ位点和目的片断上的一对同尾酶(NheⅠ和XbaⅠ),多次酶切连接,串联成多拷贝的Defensin成熟肽基因,再用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,最后克隆入甲醇酵母分泌表达载体pPIC9K。结果:PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明多拷贝基因重组质粒构建成功。结论:该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因,为进一步进行高效表达打下基础。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 Defensin基因 同向串联 多拷贝
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抗菌肽Aurein1.2基因的同向串联及其克隆载体的构建和鉴定 被引量：3
2
作者 栗学清 韩跃武 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第10期875-877,共3页
目的: 构建抗菌肽Aurein1 2基因多拷贝串联体,并将目的基因串联产物克隆到载体pUC18上.方法: 分别合成含相同黏性末端的Aurein1 2单拷贝基因、EcoRⅠ前接头及SalⅠ后接头.单拷贝基因分别与前、后接头连接,通过控制基因和接头加入的量及... 目的: 构建抗菌肽Aurein1 2基因多拷贝串联体,并将目的基因串联产物克隆到载体pUC18上.方法: 分别合成含相同黏性末端的Aurein1 2单拷贝基因、EcoRⅠ前接头及SalⅠ后接头.单拷贝基因分别与前、后接头连接,通过控制基因和接头加入的量及时间,可得到两侧有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的同向串联的多拷贝基因,选取合适拷贝数的基因,将其克隆到载体pUC18上.结果: PCR鉴定、酶切鉴定和DNA测序证明多拷贝基因重组质粒构建成功.结论: 该方法能方便高效地获得所需的多拷贝基因,为进一步克隆到表达载体并进行高效表达打下基础. 展开更多
关键词 抗菌肽 Aurein1.2基因 同向串联 多拷贝 克隆 分子
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丽蝇抗病毒肽Alloferon1基因串联体的构建和表达 被引量：1
3
作者 任慧子 韩跃武 +3 位作者 冯惟萍 张庆华 陈建国 卢天龙 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第8期734-736,共3页
目的:克隆和表达Alloferon1基因2串联体.方法:利用同尾酶法基因同向串联方案,在人工合成Alloferon1全基因的基础上,将Alloferon1基因由单体连接成2串联体,继而将获得的正确Alloferon1基因2串联体插入pGEX-4T-1表达载体诱导表达.结果:构... 目的:克隆和表达Alloferon1基因2串联体.方法:利用同尾酶法基因同向串联方案,在人工合成Alloferon1全基因的基础上,将Alloferon1基因由单体连接成2串联体,继而将获得的正确Alloferon1基因2串联体插入pGEX-4T-1表达载体诱导表达.结果:构建的Alloferon1基因2串联体经酶切和DNA测序分析,结果表明该基因串联体的序列与设计的序列完全相同.Alloferon1基因2串联体插入pGEX-4T-1载体后,重组菌经37℃诱导4h,SDS-PAGE分析结果显示,该串联体得到较高水平的表达.结论:Alloferon1基因2串联体的构建与表达均获得了成功. 展开更多
关键词 抗病毒肽 基因 Alloferonl 同尾酶 同向串联 大肠杆菌
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