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正交试验优化哈蟆油蛋白双酶法水解工艺 被引量:4
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作者 董颖 张鹤 +3 位作者 周光新 赵大庆 赵雨 丛德毓 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期36-39,共4页
目的:考察双酶法制备哈蟆油蛋白的最佳工艺。方法:以哈蟆油为原料,采用柠檬酸浸提和水煎煮的方法提取哈蟆油蛋白,先后加入胃蛋白酶和碱性蛋白酶进行酶解,根据酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量分布,应用单因素和正交试验确定哈蟆油蛋白酶解... 目的:考察双酶法制备哈蟆油蛋白的最佳工艺。方法:以哈蟆油为原料,采用柠檬酸浸提和水煎煮的方法提取哈蟆油蛋白,先后加入胃蛋白酶和碱性蛋白酶进行酶解,根据酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量分布,应用单因素和正交试验确定哈蟆油蛋白酶解的最佳条件。结果:最佳酶解条件为胃蛋白酶与底物比(m/m)1∶2 000、酶解时间2 h、碱性蛋白酶与底物比(m/m)1∶100、酶解时间6 h,酶解后哈蟆油蛋白相对分子质量小于5 000所占的比例为94.85%,哈蟆油蛋白中蛋白质含量为49.85%。结论:胃蛋白酶与碱性蛋白酶结合使用可以有效地降低哈蟆油蛋白的相对分子质量,利于人体吸收。 展开更多
关键词 哈蟆油蛋白 蛋白 碱性蛋白 双酶法
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哈蟆油蛋白多肽的透皮作用研究 被引量:2
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作者 张玉尧 徐云凤 +3 位作者 王涵 李香艳 荆礼 张鹤 《中国农学通报》 2021年第8期33-38,共6页
比较酶解前后哈蟆油蛋白多肽的相对分子质量、黏度和透皮情况。采用胃蛋白酶-碱性蛋白酶双酶法制备哈蟆油蛋白多肽,应用旋转粘度计测定酶解过程中黏度变化;以离体小鼠的皮肤为透皮屏障,应用透皮吸收仪测定不同透皮时间透皮液中蛋白多肽... 比较酶解前后哈蟆油蛋白多肽的相对分子质量、黏度和透皮情况。采用胃蛋白酶-碱性蛋白酶双酶法制备哈蟆油蛋白多肽,应用旋转粘度计测定酶解过程中黏度变化;以离体小鼠的皮肤为透皮屏障,应用透皮吸收仪测定不同透皮时间透皮液中蛋白多肽的透皮率和分子量分布。双酶法制备的哈蟆蛋白多肽黏度从5278.85 m Pa·s(1.0 g/100 m L)降到12.56 mPa·s(7.0 g/100 m L),分子质量1147 k Da蛋白质从75.36%降到8.83%,透皮率从4.50%增加到9.14%。透皮36 h时,透皮液中主要为分子质量小于1 kDa哈蟆油蛋白多肽约占62%,其次是分子质量2.46 kDa的蛋白多肽占13.34%。双酶法制备的哈蟆油蛋白多肽分子量低、水溶性好,易于透过皮肤吸收。 展开更多
关键词 哈蟆油蛋白多肽 双酶法 透皮作用 分子质量 黏度
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哈蟆油蛋白酶解物氨基酸组成和安全性研究 被引量:3
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作者 魏星华 张鹤 +5 位作者 庞博 潘黛安 齐滨 白雪媛 赵雨 赵大庆 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2017年第22期14-19,共6页
研究哈蟆油蛋白酶解物的氨基酸组成,通过急毒试验和30 d喂养试验对其安全性进行评价。采用柱前衍生化法测定哈蟆油蛋白酶解物中的氨基酸的相对含量;急性毒性试验以动物最大耐受剂量灌胃给药,观察急性毒性反应和死亡情况;30 d喂养试验按... 研究哈蟆油蛋白酶解物的氨基酸组成,通过急毒试验和30 d喂养试验对其安全性进行评价。采用柱前衍生化法测定哈蟆油蛋白酶解物中的氨基酸的相对含量;急性毒性试验以动物最大耐受剂量灌胃给药,观察急性毒性反应和死亡情况;30 d喂养试验按临床给药剂量的100倍、75倍、50倍灌胃给药,观察大鼠的一般行为情况、体质量、血液学指标、血清生化指标、各脏器重量及脏器比,检查大鼠各脏器病理组织。哈蟆油蛋白酶解物氨基酸组成的结果为必需氨基酸的相对含量高达45.87%,半必需氨基酸14.78%。急毒试验结果为哈蟆油蛋白酶解物以临床剂量的127倍灌胃给药,未发现毒性反应。30 d喂养试验结果,与对照组相比,哈蟆油蛋白酶解物各剂量组大鼠一般情况、体质量、血液学指标、血清生化指标、脏器重量及脏体比、病理组织学检查均无显著性差异。综上判定哈蟆油蛋白酶解物对大鼠的生长、发育、代谢及脏器无急性不良影响,并可为机体提供大量必需氨基酸。 展开更多
关键词 哈蟆油蛋白酶解物 氨基酸 急毒试验 30d喂养试验 安全性评价
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哈蟆油蛋白对骨质疏松预防及ALP,Osteocalcin,Runx-2基因表达的调节作用 被引量:8
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作者 李晓华 陈锡俊 +4 位作者 李娜 石晓征 韩冬 黄晓巍 曲晓波 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第20期138-143,共6页
目的:观察哈蟆油蛋白(ROP)的抗骨质疏松作用,并探讨其对骨生长相关基因的调节作用。方法:采用去势法建立大鼠骨质疏松模型,随机分为空白组,模型组,戊酸雌二醇组,ROP高、中、低剂量组(0.15,0.075,0.037 5 g·kg^(-1));利用X射线技术... 目的:观察哈蟆油蛋白(ROP)的抗骨质疏松作用,并探讨其对骨生长相关基因的调节作用。方法:采用去势法建立大鼠骨质疏松模型,随机分为空白组,模型组,戊酸雌二醇组,ROP高、中、低剂量组(0.15,0.075,0.037 5 g·kg^(-1));利用X射线技术测量股骨和腰椎骨密度(BMD);利用骨骼强度仪检测股骨的最大载荷量;应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测骨生长相关基因的表达。结果:与空白组比较,模型组股骨、腰椎骨密度明显降低(P<0.05,P<0.01),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP),Osteocalcin,Runx-2基因表达均显著下调(P<0.01);与模型组比较,ROP高、中剂量组腰椎BMD均有显著增加(P<0.01),ROP高剂量组ALP,Osteocalcin,Runx-2基因表达显著上调(P<0.01)。结论:ROP能显著提高大鼠BMD和最大载荷量;ROP可能通过上调ALP,Osteocalcin,Runx-2基因的mRNA表达,促进成骨分化,调节骨代谢平衡,从而发挥防治骨质疏松的作用。 展开更多
关键词 哈蟆油蛋白 骨质疏松 碱性磷酸酶 OSTEOCALCIN Runx-2
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哈蟆油蛋白对去势大鼠骨组织形态保护的实验研究 被引量:2
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作者 李晓华 罗从雷 +8 位作者 兰兴成 李肖南 隋清淳 高琳 冯乾坤 杨擎 李娜 石晓征 曲晓波 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期592-594,共3页
目的观察大鼠骨密度(BMD)、生物载荷量及股骨组织切片形态学变化,评价哈蟆油蛋白对去势大鼠骨形态的保护作用。方法利用动物骨密度仪和小动物骨骼强度测定仪测量大鼠BMD和生物载荷量;采用HE染色法观察大鼠股骨骨小梁数量变化,应用免疫... 目的观察大鼠骨密度(BMD)、生物载荷量及股骨组织切片形态学变化,评价哈蟆油蛋白对去势大鼠骨形态的保护作用。方法利用动物骨密度仪和小动物骨骼强度测定仪测量大鼠BMD和生物载荷量;采用HE染色法观察大鼠股骨骨小梁数量变化,应用免疫组化技术观察哈蟆油蛋白对ALP和BMP2表达的调节作用。结果与模型组比较,哈蟆油蛋白明显提高了大鼠的BMD(P<0.05),显著改善了股骨的最大载荷量(P<0.01);150mg·kg^(-1)哈蟆油给药组的骨小梁的排列更加有序,结构更加完整;同时低剂量和高剂量组的ALP和BMP2呈现阳性表达。结论哈蟆油蛋白能增强骨强度、降低骨脆性骨折风险,同时能保护骨小梁结构,促进ALP和BMP2的阳性表达,故哈蟆油蛋白对骨组织形态发挥一定的保护作用,可能参与骨代谢平衡,发挥防治绝经后骨质疏松的作用。 展开更多
关键词 哈蟆油蛋白 去势 骨形态 骨密度
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哈蟆油蛋白酶解物对小鼠微核、精子畸形及Ames试验的研究 被引量:3
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作者 潘黛安 张鹤 +5 位作者 魏星华 边帅 王秋 齐滨 赵雨 赵大庆 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1357-1359,共3页
目的对哈蟆油蛋白酶解物致畸毒性进行研究。方法通过小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验和Ames试验对哈蟆油蛋白酶解物进行观察研究。结果与阴性对照组相比,各剂量组小鼠的嗜多染红细胞含微核率、精子畸形率均无显著性(P<0.001)... 目的对哈蟆油蛋白酶解物致畸毒性进行研究。方法通过小鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验和Ames试验对哈蟆油蛋白酶解物进行观察研究。结果与阴性对照组相比,各剂量组小鼠的嗜多染红细胞含微核率、精子畸形率均无显著性(P<0.001),无论在加和不加S9混合液时,各剂量组均未引起试验菌株的回复突变菌落数显著增加。结论哈蟆油蛋白酶解物无毒、无致突变性。 展开更多
关键词 哈蟆油蛋白酶解物 骨髓微核 精子畸形 AMES试验
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哈蟆油蛋白酶解物对乙醇诱导的L-02细胞损伤的作用 被引量:3
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作者 张怡 郑冉 +4 位作者 于奇 焦丽丽 李波 刘达 李宜平 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第15期43-50,共8页
目的:研究哈蟆油蛋白酶解物(ORPH)对乙醇诱导的L-02细胞损伤相关通路蛋白表达影响的作用机制研究。方法:复合酶解法制备ORPH,以400 mmol·L^(-1)乙醇建立L-02肝细胞损伤模型,细胞增殖与活性检测试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;流式细... 目的:研究哈蟆油蛋白酶解物(ORPH)对乙醇诱导的L-02细胞损伤相关通路蛋白表达影响的作用机制研究。方法:复合酶解法制备ORPH,以400 mmol·L^(-1)乙醇建立L-02肝细胞损伤模型,细胞增殖与活性检测试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,JC-1/Hochest染色观察形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及细胞焦亡相关蛋白在L-02肝细胞中的表达变化,研究ORPH对乙醇所致肝细胞损伤的保护作用及机制。结果:CCK-8法结果表明400 mmol·L^(-1)乙醇可在12 h内明显引起L-02肝细胞损伤;与空白组比较,模型组L-02细胞活力显著下降(P<0.01),细胞处于G0/G1期的细胞占比显著升高(P<0.01),细胞总凋亡率显著升高(P<0.01),线粒体膜电位下降;B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),细胞色素C(Cyt C),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)凋亡相关蛋白的表达明显升高(P<0.05,P<0.01),MAPK信号通路相关蛋白c-Jun氨基末端激酶(JNK),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)明显上调(P<0.05,P<0.01),且焦亡蛋白Caspase-1,白细胞介素-1β(IL^(-1)β)表达明显增强(P<0.05),Bcl-2显著下降(P<0.01);与模型组比较,ORPH处理组细胞周期阻滞有所改善(P<0.05,P<0.01),细胞总凋亡率显著下降(P<0.01),线粒体膜电位升高,呈剂量相关性;Bax,Cyt C,Caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),MAPK信号通路相关蛋白及焦亡相关蛋白表达均呈下降趋势(P<0.05,P<0.01)。结论:ORPH可通过抑制乙醇诱导L-02肝细胞引起的氧化应激肝细胞损伤,改善恢复线粒体膜电位,降低线粒体介导的细胞凋亡通路蛋白的表达,并抑制MAPK信号通路相关蛋白、焦亡通路相关蛋白表达,从而降低乙醇诱导L-02肝细胞的线粒体功能障碍及炎症反应并减轻氧化应激,对酒精性肝损伤起到治疗作用。 展开更多
关键词 哈蟆油蛋白酶解物(ORPH) 酒精性肝细胞损伤 氧化应激 线粒体凋亡 炎症反应
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