嗜热厌氧产乙醇杆菌乙醇代谢途径的初步研究 被引量：7

1

作者 蒋宇 邵蔚蓝 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期69-73,共5页

以乙醇产量和细胞密度的提高为目标,从碳源和氮源入手,对嗜热厌氧产乙醇杆菌Therm oanaerobact-er ethanolicusJW 200的培养基作了初步优化以提高乙醇代谢途径中的关键酶的得率,便于提纯.葡萄糖浓度的提高对乙醇的产生有明显的诱导作用... 以乙醇产量和细胞密度的提高为目标,从碳源和氮源入手,对嗜热厌氧产乙醇杆菌Therm oanaerobact-er ethanolicusJW 200的培养基作了初步优化以提高乙醇代谢途径中的关键酶的得率,便于提纯.葡萄糖浓度的提高对乙醇的产生有明显的诱导作用,但当葡萄糖浓度高于2%,乙醇产量反而下降.酵母粉对乙醇产量没有促进作用,单纯提高酵母粉浓度对细胞密度无显著影响,而同时提高葡萄糖和酵母粉浓度至2.0%,OD600最高可达2.0.2%葡萄糖,0.5%酵母粉对单位细胞乙醇产量的诱导效果最佳.T.ethanolicusJW 200粗酶液中未检测到丙酮酸脱羧酶的活性,经亲和柱C ibacron B lue-3GA部分纯化,在NAD洗脱蛋白中检测到辅酶A依赖型乙醛脱氢酶的活性,表明辅酶A依赖型乙醛脱氢酶是该菌乙醇代谢途径中的关键酶,它和乙醇脱氢酶共同作用,将乙酰辅酶A转化成乙醇. 展开更多

关键词 嗜热厌氧产乙醇杆菌 辅酶A依赖型乙醛脱氢酶 葡萄糖 酵母粉 乙醇

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嗜热乙醇杆菌中醇脱氢酶E的功能与调控 被引量：1

2

作者 彭惠 毛忠贵 +1 位作者 武国干 邵蔚蓝 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期84-87,共4页

对嗜热乙醇杆菌中的醇脱氢酶E(alcohol dehydrogenase E,AdhE)进行了克隆、表达和鉴定,证明先前报道的醛脱氢酶其实是AdhE。对AdhE在乙醇代谢中的功能与调控进行了研究。通过分析测定AdhE的酶学性质、AdhE在嗜热乙醇杆菌的不同生长时期... 对嗜热乙醇杆菌中的醇脱氢酶E(alcohol dehydrogenase E,AdhE)进行了克隆、表达和鉴定,证明先前报道的醛脱氢酶其实是AdhE。对AdhE在乙醇代谢中的功能与调控进行了研究。通过分析测定AdhE的酶学性质、AdhE在嗜热乙醇杆菌的不同生长时期的表达情况以及AdhE高表达时嗜热乙醇杆菌产乙醇/乙酸的比率变化,证明了AdhE的主要生理功能是促使乙醇产生。分析了嗜热乙醇杆菌在山梨糖(强还原性碳源)、葡萄糖(氧化还原性居中的碳源)和葡糖醛酸(强氧化性碳源)诱导培养下的AdhE表达量,证明氧化还原力是AdhE的表达调控信号之一。 展开更多

关键词 嗜热乙醇杆菌 醇脱氢酶E 功能 调控

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嗜热乙醇杆菌中醛/醇脱氢酶的双启动子分析 被引量：1

3

作者 彭惠 毛忠贵 +1 位作者 武国干 邵蔚蓝 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期727-730,共4页

克隆了嗜热乙醇杆菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)中乙醇代谢的关键酶之一醛/醇脱氢酶(alcohol/acetaldehydedehy drogenase,AdhE)基因的上游假定启动子序列,并进行了结构分析。结果表明,adhE的上游序列是启动子,能启动报告基因在... 克隆了嗜热乙醇杆菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)中乙醇代谢的关键酶之一醛/醇脱氢酶(alcohol/acetaldehydedehy drogenase,AdhE)基因的上游假定启动子序列,并进行了结构分析。结果表明,adhE的上游序列是启动子,能启动报告基因在大肠杆菌中持续表达。首次发现adhE的启动子序列中存在两个独立的启动子(P172和P37)和核糖体结合位点(SD172和SD37),分别都具有完整功能,但其活性均低于完整的启动子序列。由此推测嗜热乙醇杆菌中adhE的表达受这两个启动子协同调控。 展开更多

关键词 启动子 醛/醇脱氢酶 报告基因系统 嗜热乙醇杆菌

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嗜热厌氧杆菌乳酸脱氢酶敲除对乙醇发酵的影响

4

作者 蔡友华 赖超凤 +4 位作者 梁泽鑫 李平 王菊芳 朱明军 梁世中 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第12期140-144,共5页

为提高乙醇产率,通过同源重组的方式敲除嗜热厌氧杆菌乳酸支路中的乳酸脱氢酶基因,得到了嗜热厌氧代谢工程菌Δldh突变株.应用葡萄糖、木糖、葡萄糖/木糖混合糖3种碳源,分别对Δldh突变株与野生菌进行分批补料发酵产乙醇的研究.结果表明... 为提高乙醇产率,通过同源重组的方式敲除嗜热厌氧杆菌乳酸支路中的乳酸脱氢酶基因,得到了嗜热厌氧代谢工程菌Δldh突变株.应用葡萄糖、木糖、葡萄糖/木糖混合糖3种碳源,分别对Δldh突变株与野生菌进行分批补料发酵产乙醇的研究.结果表明,与野生菌相比,Δldh突变株不仅显著提高了乙醇产率,而且提高了糖的消耗速率;Δldh突变株与野生菌都能以葡萄糖和木糖为基质生长,而与木糖为单一碳源相比,在葡萄糖/木糖共发酵时,木糖消耗速率有所降低;在以葡萄糖为单一碳源时,Δldh突变株的乙醇质量浓度和产率达到最高,分别为25.93 g/L和0.39 g/(L.h). 展开更多

关键词 嗜热厌氧杆菌 发酵 乙醇 木糖 乳酸脱氢酶

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有机氮源添加对嗜热厌氧杆菌产乙醇的影响 被引量：2

5

作者 任梦梦 傅宏鑫 +1 位作者 马毅 王菊芳 《生物化工》 2019年第5期5-9,共5页

嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterium aotearoense SCUT27Δldh)能利用葡萄糖与木糖发酵,是纤维素乙醇生产的理想菌株。为进一步改善菌株在不同底物(葡萄糖、木糖和混合糖)条件下的乙醇发酵性能,本文探究了有机氮源对嗜热厌氧杆菌发酵... 嗜热厌氧杆菌(Thermoanaerobacterium aotearoense SCUT27Δldh)能利用葡萄糖与木糖发酵,是纤维素乙醇生产的理想菌株。为进一步改善菌株在不同底物(葡萄糖、木糖和混合糖)条件下的乙醇发酵性能,本文探究了有机氮源对嗜热厌氧杆菌发酵产乙醇的影响。结果表明,4 g/L 酵母提取物和2 g/L 胰蛋白胨为最佳的有机氮源组成,在不同底物条件下菌株生物量、底物利用率、乙醇浓度和生产强度与对照相比,分别提升41%~ 109%、50%~ 56%、53%~ 76%和91%~ 111%。此外,本研究还证实了充足的有机氮源供给对于T. aotearoense SCUT27Δldh 的葡萄糖和木糖高效共利用起到重要的作用。 展开更多

关键词 嗜热厌氧杆菌 乙醇 氮源

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嗜热厌氧乙醇杆菌α-葡萄糖苷酶基因的表达及酶学性质的研究

6

作者 王月宏 段作营 +1 位作者 邵蔚蓝 李华钟 《工业微生物》 CAS CSCD 2010年第6期60-64,共5页

用PCR方法从嗜热厌氧乙醇杆菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)JW200中扩增出编码a-葡萄糖苷酶的基因,将其克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pTrc99A上并获得表达a-葡萄糖苷酶的大肠杆菌重组菌。重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAG... 用PCR方法从嗜热厌氧乙醇杆菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)JW200中扩增出编码a-葡萄糖苷酶的基因,将其克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pTrc99A上并获得表达a-葡萄糖苷酶的大肠杆菌重组菌。重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测出蛋白相对分子量约89kDa,经阴离子交换层析和凝胶层析纯化后的a-葡萄糖苷酶最适反应温度为70℃,最适反应pH为5～5.5,且在pH 5.5～6.5之间有较高的稳定性。重组a-葡萄糖苷酶在70℃下105 min后酶活仍达到80%。 展开更多

关键词 嗜热厌氧乙醇杆菌 Α-葡萄糖苷酶 重组表达 酶学性质

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一株高乙醇耐受的嗜热细菌Anoxybacillus sp.WP06的性质研究 被引量：5

7

作者 彭惠 高毅 肖亚中 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1117-1120,共4页

厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)的菌株WP06是一株兼性厌氧的嗜热细菌,能利用木糖、阿拉伯糖和葡萄糖等产生乙醇。不像绝大多数嗜热细菌,WP06菌株在高温下表现出极高的乙醇耐受力,60oC时在8%的乙醇胁迫下才出现生长抑制现象,15%的乙醇胁... 厌氧芽孢杆菌属(Anoxybacillus)的菌株WP06是一株兼性厌氧的嗜热细菌,能利用木糖、阿拉伯糖和葡萄糖等产生乙醇。不像绝大多数嗜热细菌,WP06菌株在高温下表现出极高的乙醇耐受力,60oC时在8%的乙醇胁迫下才出现生长抑制现象,15%的乙醇胁迫下仍能生长,是目前已知的乙醇耐受力最高的嗜热细菌。WP06菌株突破了人们对高温下细菌耐受乙醇浓度的极限认识,是研究高温下乙醇耐受机制的良好出发菌株。 展开更多

关键词 嗜热细菌 乙醇耐受 厌氧芽孢杆菌属 菌株

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响应面法优化嗜热厌氧代谢工程菌发酵产乙醇的培养基 被引量：1

8

作者 柯志 王红 +3 位作者 蔡友华 梁泽鑫 梅志刚 王菊芳 《中国酿造》 CAS 北大核心 2011年第5期59-62,共4页

利用响应面法优化嗜热厌氧代谢工程菌产乙醇的培养基,在单因素实验基础上,采用Plackett-Burman设计对影响嗜热厌氧代谢工程菌发酵产乙醇的重要培养基组分进行了筛选,确定主要影响因子为葡萄糖、木糖和酵母提取物。再用最陡爬坡实验逼近... 利用响应面法优化嗜热厌氧代谢工程菌产乙醇的培养基,在单因素实验基础上,采用Plackett-Burman设计对影响嗜热厌氧代谢工程菌发酵产乙醇的重要培养基组分进行了筛选,确定主要影响因子为葡萄糖、木糖和酵母提取物。再用最陡爬坡实验逼近最大响应区域。最后用中心组合设计和响应面分析法,确定了主要影响因子的浓度。优化后的培养基组成为葡萄糖13.07g/L,木糖9.58g/L,酵母提取物3.78g/L,其他组分浓度同MTC培养基,不添加一水半胱氨酸盐酸盐和二盐酸吡哆氨。在此培养基条件下,乙醇产量和乙醇得率分别为(6.102±0.21)g/L和(0.38±0.012)g/g,是优化前产量的1.46倍。 展开更多

关键词 嗜热厌氧杆菌 发酵 乙醇 响应面

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嗜热厌氧杆菌X514生长及代谢的初步研究

9

作者 凌小芳 谢天 杨静 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期131-136,共6页

嗜热厌氧杆菌X514(Thermoanaerobactersp.X514)是纤维素乙醇生产中最具潜力的菌株之一。对X514在3种培养基中的生长及代谢特征进行分析后发现,培养基1190比GS-Ⅱ和2473更适合运用于X514的代谢研究及乙醇发酵。其次,分别在1190培养基中... 嗜热厌氧杆菌X514(Thermoanaerobactersp.X514)是纤维素乙醇生产中最具潜力的菌株之一。对X514在3种培养基中的生长及代谢特征进行分析后发现,培养基1190比GS-Ⅱ和2473更适合运用于X514的代谢研究及乙醇发酵。其次,分别在1190培养基中添加不同浓度的酵母提取物和葡萄糖,对X514的生长及代谢作进一步研究。结果表明,在0.5-2 g/L范围内,酵母提取物浓度的增加有助于提高X514的生物量,乙醇等产物的产量及乙醇产率,说明酵母提取物对X514生长及乙醇发酵有促进作用;在2-10 g/L范围内,葡萄糖浓度的增加可提高乙醇等产物的产量而不会改变各产物的产率;糖消耗量并不随着初始底物浓度的增加而线性增长,而是在一定阶段趋于消耗最大值。反映了X514在底物充分的条件下,只有通过改进其他制约条件,才有可能提高底物的利用率及产物的产率。 展开更多

关键词 嗜热厌氧杆菌 生物乙醇 1190培养基 酵母提取物

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嗜热厌氧乙醇杆菌调控因子P_(adhE)-1的分离、重组表达及其与adhE基因启动子的结合

10

作者 裴建军 周庆 +1 位作者 曲威 邵蔚蓝 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1501-1505,共5页

嗜热厌氧乙醇杆菌发酵是生产纤维素乙醇的有效途径,而嗜热厌氧乙醇杆菌醛/醇脱氢酶(AdhE)是其乙醇代谢途径中的关键酶。以adhE启动子区域的DNA序列(TRRadhE)作为诱饵,通过制备核酸亲和层析柱,利用调控因子与DNA特异性结合的特点,得到调... 嗜热厌氧乙醇杆菌发酵是生产纤维素乙醇的有效途径,而嗜热厌氧乙醇杆菌醛/醇脱氢酶(AdhE)是其乙醇代谢途径中的关键酶。以adhE启动子区域的DNA序列(TRRadhE)作为诱饵,通过制备核酸亲和层析柱,利用调控因子与DNA特异性结合的特点,得到调控因子PadhE-1。经过蛋白测序和NCBI数据库的比对,发现其N端序列与Thermoanaerobacter pseudethanolicus39E的LacI家族转录调控因子(GenBank accession No.YP_001665770)有90%的同源性。根据同源性设计引物,从嗜热厌氧乙醇杆菌JW200基因组中通过PCR扩增得到调控因子PadhE-1的基因,并克隆到表达载体pET-28a得到重组质粒pET-PadhE。转化大肠杆菌JM109(DE3),经IPTG诱导表达,Ni2+亲和柱纯化,得到重组表达的调控因子PadhE-1。体外凝胶阻滞实验证实PadhE-1能与TRRadhE特异性结合。这将有助于我们了解嗜热厌氧乙醇杆菌的乙醇代谢调控机理。 展开更多

关键词 嗜热乙醇杆菌jw200 亲和层析 调控因子 凝胶阻滞

原文传递

木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达及表达蛋白的纯化 被引量：12

11

作者 薛业敏 曹建平 +1 位作者 毛忠贵 邵蔚蓝 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2003年第3期57-61,共5页

热海栖热袍菌Thermotogamaritima是一个嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的耐高温和热稳定性的木聚糖酶B具有很好的工业应用前景.利用PCR技术将嗜热产乙醇菌T.maritima编码高度热稳定性木聚糖酶的基因克隆至原核表达载体pET-20b,使之与组氨... 热海栖热袍菌Thermotogamaritima是一个嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的耐高温和热稳定性的木聚糖酶B具有很好的工业应用前景.利用PCR技术将嗜热产乙醇菌T.maritima编码高度热稳定性木聚糖酶的基因克隆至原核表达载体pET-20b,使之与组氨酸标签融合,并在大肠杆菌JM109(DE3)中得到了高效表达.最后采用金属Ni2+螯和层析柱对基因表达产物进行了纯化. 展开更多

关键词 木聚糖酶 基因表达 大肠杆菌 纯化 热海栖热袍菌 嗜热产乙醇菌T.maritima 基因克隆

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高温厌氧条件下纤维素的直接乙醇发酵 被引量：2

12

作者 贺延龄 丁友昉 隆言泉 《微生物学杂志》 CAS CSCD 1990年第3期1-6,共6页

本文介绍了出分解纤维素的嗜热厌氧菌Clostridium celluloflavus sp.nov.直接发酵纤维素产乙醇的初步研究、发酵于60℃下进仃,其主要产物为乙醇、乙酸、氢气和二氧化碳。文中介绍了间歇发酵的若干特征与影响发酵的因素,1％纤维素发酵至... 本文介绍了出分解纤维素的嗜热厌氧菌Clostridium celluloflavus sp.nov.直接发酵纤维素产乙醇的初步研究、发酵于60℃下进仃,其主要产物为乙醇、乙酸、氢气和二氧化碳。文中介绍了间歇发酵的若干特征与影响发酵的因素,1％纤维素发酵至120小时,大约有70％纤维素被分解;乙醇的转化率约为0.36g/g降解纤维素;发酵液中乙醇浓度达到56至61mM。发酵中乙醇与乙酸浓度的比值因发酵时间与其它发酵条件的不同而不同。 展开更多

关键词 乙醇发酵 纤维素 厌氧 嗜热 梭状芽孢杆菌

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