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嗜热栖热菌的发酵工艺优化及菌剂制备
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作者 乔鹏阔 吕周亚 +5 位作者 彭霞 邓兵 蒋思文 陈子豪 刘会胜 张子越 《中南农业科技》 2024年第3期60-64,共5页
通过16S rRNA基因序列测定、序列比对和系统发育树的构建确定嗜热栖热菌的分类学地位,并命名该菌株为Thermus thermophilus strain Q1。对该菌进行生长特性和生理生化特性研究,并对其发酵条件以及发酵培养基进行优化,最后利用不同载体... 通过16S rRNA基因序列测定、序列比对和系统发育树的构建确定嗜热栖热菌的分类学地位,并命名该菌株为Thermus thermophilus strain Q1。对该菌进行生长特性和生理生化特性研究,并对其发酵条件以及发酵培养基进行优化,最后利用不同载体确定该菌最适介质并制作超高温发酵菌剂。结果表明,该菌为G^(-)好氧菌,V-P试验、硝酸盐还原试验、过氧化氢酶试验结果为阳性;吲哚试验、明胶穿刺试验以及H_2S试验结果为阴性;该菌具有降解油脂和固氮的能力,不能降解纤维素、蛋白质和淀粉;该菌的最适培养条件是以嗜热栖热菌培养基为基础,分别添加1%的乳糖、水解酪合蛋白、Mg^(2+)作为菌株生长的碳源、氮源和无机盐离子,初始pH为7,接种量为4%,摇床转速为180 r/min,装液量为10%,发酵温度75℃;以生物炭作为发酵菌剂载体,48 h培养OD_(600 nm)可达1.23。 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 发酵工艺 优化 剂制备
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蚕丝丝肽嗜热栖热菌发酵液对皮肤抗炎抗衰功效的增效作用
2
作者 方婷欢 郑婷 +2 位作者 蒋晴 李晓霞 唐礼荣 《日用化学工业(中英文)》 CAS 北大核心 2023年第9期1057-1064,共8页
为研究嗜热栖热菌发酵的蚕丝丝肽在皮肤抗炎抗衰功效上的增效作用,以脂多糖(LPS)诱导的角质形成细胞(HaCaT细胞)和双氧水(H2O2)诱导的成纤维细胞(HDF细胞)为研究模型,通过比色法、酶联免疫吸附(ELISA)等方法检测蚕丝丝肽、嗜热栖热菌发... 为研究嗜热栖热菌发酵的蚕丝丝肽在皮肤抗炎抗衰功效上的增效作用,以脂多糖(LPS)诱导的角质形成细胞(HaCaT细胞)和双氧水(H2O2)诱导的成纤维细胞(HDF细胞)为研究模型,通过比色法、酶联免疫吸附(ELISA)等方法检测蚕丝丝肽、嗜热栖热菌发酵液和蚕丝丝肽发酵液对细胞活力、炎症因子白介素1β(IL-1β)和白介素6(IL-6)的含量、屏障保湿相关蛋白水通道蛋白3(AQP3)和丝聚蛋白(FLG)的含量、衰老相关标志物超氧化物歧化酶(SOD)、晚期糖基化终产物(AGEs)和人1型胶原蛋白(Col-1)的含量变化的影响。结果表明,蚕丝丝肽发酵液能够显著降低IL-1β,IL-6,AGEs含量,显著促进FLG,AQP3,SOD和Col-1表达,且相较于蚕丝丝肽能更显著抑制IL-6和AGEs表达,更显著促进HDF细胞迁移和SOD合成,而相较于嗜热栖热菌发酵液能更显著降低IL-1β,IL-6和AGEs表达,更显著促进AQP3表达、HDF细胞迁移和SOD的合成,即认为蚕丝丝肽发酵液相较于单一的蚕丝丝肽和嗜热栖热菌发酵液具备抗炎、屏障保湿及抗衰功效的增效作用。 展开更多
关键词 蚕丝丝肽 嗜热栖热菌 蚕丝丝肽发酵液 抗炎 抗衰 增效
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从嗜热栖热菌中提取超氧物歧化酶的研究 被引量:17
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作者 屠幼英 倪福弟 陆应钰 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期18-20,共3页
嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)ATCC 27634是一种适于75—80℃高温中生长的微生物。该菌超氧物歧化酶为一胞内酶,分子量为80000,由181个氨基酸组成。本试验对其发酵、破菌、RNasel酶解、硫酸铵盐析、滤除小分子物质、上DE-32Ⅰ、DE-3... 嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)ATCC 27634是一种适于75—80℃高温中生长的微生物。该菌超氧物歧化酶为一胞内酶,分子量为80000,由181个氨基酸组成。本试验对其发酵、破菌、RNasel酶解、硫酸铵盐析、滤除小分子物质、上DE-32Ⅰ、DE-32Ⅱ柱分离等条件进行了一系列研究,提取到了热稳定性较商的Mn^(2+)-SOD,比活力为3000u/mg,回收率达78.0%。 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 提取 超氧化歧化酶
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嗜热栖热菌海藻糖合酶的分子改造及其应用 被引量:6
4
作者 宿玲恰 张悦 吴敬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1-5,共5页
对前期获得的Thermus thermophilus海藻糖合酶进行了分子改造以提升其催化制备海藻糖的性能。利用定点突变技术,将第251位Pro突变为Leu,得到突变体P251L,并于E.coli BL21(DE3)中重组表达,重组菌在摇瓶中发酵酶活为6.9 U/m L。以突变体... 对前期获得的Thermus thermophilus海藻糖合酶进行了分子改造以提升其催化制备海藻糖的性能。利用定点突变技术,将第251位Pro突变为Leu,得到突变体P251L,并于E.coli BL21(DE3)中重组表达,重组菌在摇瓶中发酵酶活为6.9 U/m L。以突变体催化制备海藻糖的研究表明,当以0.3 g/m L麦芽糖为底物,初始反应p H为7.5,温度为50℃,加酶量为20 U/g麦芽糖时,转化率达到最高值62.0%,比天然酶高出13.0%。 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 海藻糖合酶 分子改造 海藻糖
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嗜热栖热菌α-葡萄糖苷酶基因的表达及酶学性质研究 被引量:5
5
作者 刘军 周成 +1 位作者 马延和 谭天伟 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期232-235,共4页
用PCR方法从嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)HB27中扩增出编码α-葡萄糖苷酶基因hbg,将其克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET28a(+)上,电击转化E.coliBL21(DE3),获得高效表达hbg基因的大肠杆菌重组菌。重组菌经IPTG诱导表达... 用PCR方法从嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)HB27中扩增出编码α-葡萄糖苷酶基因hbg,将其克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET28a(+)上,电击转化E.coliBL21(DE3),获得高效表达hbg基因的大肠杆菌重组菌。重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达蛋白相对分子质量约为59kD,与预期分子量相符。经镍柱和阴离子交换柱纯化的重组表达的α-葡萄糖苷酶HBG最适温度为95℃,最适pH值为5.0。 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 Α-葡萄糖苷酶 重组表达
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嗜热栖热菌重组锰超氧化物歧化酶的性质 被引量:2
6
作者 李鹤宾 席守民 +1 位作者 杨五彪 叶子坚 《台湾海峡》 CAS CSCD 2012年第1期53-57,共5页
嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)wl的超氧化物歧化酶基因在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,采用Ni-NTA agarose亲和层析获得重组超氧化物歧化酶,比活力达565 U/mg.重组酶的相对分子质量为110.9 kDa,亚基相对分子质量为28.3 kDa... 嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)wl的超氧化物歧化酶基因在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,采用Ni-NTA agarose亲和层析获得重组超氧化物歧化酶,比活力达565 U/mg.重组酶的相对分子质量为110.9 kDa,亚基相对分子质量为28.3 kDa,该酶为同聚四聚体蛋白.重组酶对氯仿-乙醇和SDS敏感,对H2O2不敏感,并且它的紫外最大吸收波长位于279 nm,判断其属于锰超氧化物歧化酶类型.1.0 mmol/dm3Mn2+对重组酶有激活作用,同浓度的其他金属离子Mg2+、Ca2+、Ba2+、Co2+、Cu2+、Zn2+和Fe2+对重组酶活力都有抑制作用,其中以Co2+的作用最强,抑制了约64%的酶活性.重组酶在70℃下处理1 h,保持原有活力的60%,即使在90℃下处理1 h,仍保持原有活力的35%.在pH值为4.0~11.0的缓冲液中25℃下处理1 h,保持65%以上的原始活力.由此可见,重组锰超氧化物歧化酶具有高的热稳定性和宽pH稳定性,在工业上具有巨大的应用潜力. 展开更多
关键词 海洋生物学 锰超氧化物歧化酶 稳定 嗜热栖热菌wl
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嗜热栖热菌HB 8耐热α-葡萄糖苷酶的提纯和性质 被引量:4
7
作者 杨寿钧 张树政 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期23-29,共7页
嗜热栖热菌 HB 8(Thermus thermophilus HB 8)的耐热α-葡萄糖苷酶(α-glucosidaseEC.3.2.1.20)经硫酸铵分步沉淀、DEAE-纤维素柱层析和垂直板制备凝胶电泳提纯,经盘状凝胶电泳鉴定为单一区带,比活提高17倍。酶作用最适温度80℃,最适 pH... 嗜热栖热菌 HB 8(Thermus thermophilus HB 8)的耐热α-葡萄糖苷酶(α-glucosidaseEC.3.2.1.20)经硫酸铵分步沉淀、DEAE-纤维素柱层析和垂直板制备凝胶电泳提纯,经盘状凝胶电泳鉴定为单一区带,比活提高17倍。酶作用最适温度80℃,最适 pH5.8,分子量67000,等电点 pI 为4.5。该酶能够水解对硝基酚-α-D-葡萄糖苷(PNPG)、蔗糖和麦芽糖,但不水解纤维二糖、蜜二糖、可溶性淀粉。酶作用于 PNPG 的米氏常数(K_m)为0.4mmol/L,最大反应速度 V_(max)为0.29umol·min^(-1)·mg^(-1)。金属离子 Mg^(2+)、Mn^(2+)、Ca^(2+)和 Ba^(2+)对酶有激活作用,Hg^(2+)和 Cu^(2+)有强烈抑制作用。酶表现出极好的热稳定性,在90℃保温10小时后,仍保留90%的原始酶活力,在95℃的失活半寿期(t_(1/2)为108分钟,经蛋白质侧链化学修饰研究表明,羧基和组氨酸残基为其表现活力所必需。 展开更多
关键词 Α-葡萄糖苷酶 嗜热栖热菌
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利用重组嗜热栖热菌尿苷-胞苷激酶生产尿苷酸 被引量:1
8
作者 范晓光 贾子樊 +5 位作者 李国梁 韩洪军 高立栋 张顺棠 李燕军 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期7-12,共6页
尿苷-胞苷激酶(Uridine/cytidine kinase,UCK)作为生物体核苷酸代谢补偿途径中的重要催化剂,可以催化尿苷和胞苷磷酸化成为尿苷酸(5'-uridine monophosphate,5'-UMP)和胞苷酸(5'-cytidine monophosphate,5'-CMP)。利用... 尿苷-胞苷激酶(Uridine/cytidine kinase,UCK)作为生物体核苷酸代谢补偿途径中的重要催化剂,可以催化尿苷和胞苷磷酸化成为尿苷酸(5'-uridine monophosphate,5'-UMP)和胞苷酸(5'-cytidine monophosphate,5'-CMP)。利用大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)分别成功克隆表达了来源于嗜热栖热菌(Thermus thermophilus HB8)以及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis 168)的尿苷-胞苷激酶。对比分析了不同重组尿苷-胞苷激酶的催化特性发现,来源于嗜热栖热菌的尿苷-胞苷激酶能以鸟苷三磷酸(Guanosine 5'-triphosphate,GTP)或者腺苷三磷酸(Adenosine 5'-triphosphate,ATP)作为磷酸供体催化尿苷生成尿苷酸,而来源于枯草芽孢杆菌的尿苷-胞苷激酶只有以GTP作为磷酸供体时的催化效果较好。在优化的反应条件下,使用来源于嗜热栖热菌的尿苷-胞苷激酶,6 h可催化10 mmol/L的尿苷和10 mmol/L的ATP生成8.74 mmol/L尿苷酸。研究结果表明,以ATP作为磷酸供体的尿苷-胞苷激酶可作为一种新型的催化剂用于尿苷酸的研制与生产。 展开更多
关键词 尿苷酸 尿苷-胞苷激酶 嗜热栖热菌 枯草芽孢杆 大肠杆
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嗜热栖热菌热稳漆酶在大肠杆菌中的高效表达 被引量:1
9
作者 郑志强 李华钟 邵蔚蓝 《工业微生物》 CAS CSCD 2013年第4期1-8,共8页
通过对漆酶成熟肽编码序列的N端(G1n^2-Val^(84))及中部一富含GC碱基区域(Gly^(278)-Pro^(303)进行密码子优化,成功实现嗜热细菌嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB27胞内产极耐热漆酶在大肠杆菌宿主内的超量表达,热激诱导表达后细胞提... 通过对漆酶成熟肽编码序列的N端(G1n^2-Val^(84))及中部一富含GC碱基区域(Gly^(278)-Pro^(303)进行密码子优化,成功实现嗜热细菌嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB27胞内产极耐热漆酶在大肠杆菌宿主内的超量表达,热激诱导表达后细胞提取液中漆酶活性从(20.7±1.5)U/L升高到(1790.2±81.6)U/L,重组蛋白表达水平提高了86倍。利用全蛋白的极端耐热性,采用两步纯化方法(85℃热预处理和疏水柱层析),获得电泳纯的重组酶蛋白,比酶活为14 U/mg,最终收率为62%。这是首次报道采用pHsh热激表达系统实现该极耐热性细菌漆酶在大肠杆菌宿主体内的高效表达。 展开更多
关键词 大肠杆 漆酶 选择性密码子优化 嗜热栖热菌
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嗜热栖热菌的支链淀粉酶
10
作者 乃用 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期58-58,共1页
关键词 嗜热栖热菌 支链淀粉酶 酶活性
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重组嗜热栖热菌海藻糖合酶制备海藻糖的工艺条件优化 被引量:6
11
作者 宿玲恰 张悦 吴敬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1461-1467,共7页
海藻糖具有独特的生物活性,在多种行业应用广泛。海藻糖合酶能够专一性催化麦芽糖一步生成海藻糖。本文通过PCR扩增获得了来源于Thermus thermophilus ATCC33923的海藻糖合酶基因Tre S,构建了基因工程菌E.coli BL21(DE3)/p ET-24a(+)-Tr... 海藻糖具有独特的生物活性,在多种行业应用广泛。海藻糖合酶能够专一性催化麦芽糖一步生成海藻糖。本文通过PCR扩增获得了来源于Thermus thermophilus ATCC33923的海藻糖合酶基因Tre S,构建了基因工程菌E.coli BL21(DE3)/p ET-24a(+)-Tre S。工程菌在摇瓶中发酵28 h时,胞内海藻糖合酶酶活达到最高值为6.4 U/m L。进一步研究了该重组酶制备海藻糖的影响因素,发现当以10%麦芽糖为底物,初始反应p H 7.5,加酶量为15 U/g麦芽糖,40℃,150 r/min反应24 h,转化率达到最高值,为49.0%。当底物浓度提高至20%~40%时,转化率为45.4%~46.2%。 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 海藻糖合酶 海藻糖 克隆表达
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嗜热栖热菌发酵液延缓衰老及促进修复功效评价研究 被引量:2
12
作者 郑雅方 颜贵卉 +1 位作者 姚雨辰 章鹏坤 《中国化妆品》 2021年第3期116-121,共6页
嗜热栖热菌具有促进细胞生长、延缓衰老、阻抗日光对皮肤的损害和修复皮肤的能力。本文采用高温发酵制备嗜热栖热菌发酵液(Thermus thermophilus fermentation broth),从细胞层面对其安全性、延缓衰老、防晒和创伤修复能力进行评价。结... 嗜热栖热菌具有促进细胞生长、延缓衰老、阻抗日光对皮肤的损害和修复皮肤的能力。本文采用高温发酵制备嗜热栖热菌发酵液(Thermus thermophilus fermentation broth),从细胞层面对其安全性、延缓衰老、防晒和创伤修复能力进行评价。结果表明,积分数≤10%的嗜热栖热菌发酵液对人永生化表皮细胞(HACAT)和人皮肤成纤维细胞(HSF)都是安全无毒的,并具有促进细胞增殖的作用, UVB光紫外照射损伤修复模型中,体积分数为1%~10%的嗜热栖热菌发酵液均有较强的防晒能力和促进细胞生长能力,且具有延缓细胞衰老的功效, 在细胞创伤修复模型中,体积分数为1%~10%的嗜热栖热菌发酵液具有不同程度的创伤修复能力。 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 紫外照射 创伤修复 延缓衰老 功效评价 防晒 人皮肤成纤维细胞 细胞衰老
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重组极耐热木聚糖酶和重组极耐热漆酶协同漂白麦草浆
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作者 郑志强 李华钟 邵蔚蓝 《工业微生物》 CAS CSCD 2014年第3期1-6,共6页
利用来自海栖热袍茵的重组极耐热木聚糖酶XynB和来自嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB27的重组极耐热漆酶Tth-laccase对麦草浆进行协同漂白。结果表明,当未漂浆经XL漂序处理(X:重组木聚糖酶用量20 U/g绝干浆,pH 5.8,温度90℃,浆浓8%,... 利用来自海栖热袍茵的重组极耐热木聚糖酶XynB和来自嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB27的重组极耐热漆酶Tth-laccase对麦草浆进行协同漂白。结果表明,当未漂浆经XL漂序处理(X:重组木聚糖酶用量20 U/g绝干浆,pH 5.8,温度90℃,浆浓8%,处理时间2 h;L:重组漆酶用量3 U/g绝干浆,pH 4.5,温度90℃,浆浓8%,处理时间1.5 h),可获得最佳漂白效果。与对照浆比较,XL处理使浆料白度提升11.5%ISO,卡伯值降低6.9。双酶协同处理在改善浆料可漂性的同时,对纸浆纤维强度无负面影响。在后续过氧化氢漂白段中,当漂终白度相近时,XL预处理浆可节省约50%H_2O_2消耗量。 展开更多
关键词 木聚糖酶 漆酶 麦草浆 漂白 嗜热栖热菌
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嗜热木糖异构酶在大肠杆菌中的表达、纯化及性质研究 被引量:1
14
作者 许伟 丁莉 +1 位作者 严明 许琳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期65-70,共6页
为获得具有高热稳定性的木糖异构酶,运用基因工程技术,从嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB8中克隆到嗜热木糖异构酶基因xylA。测序结果表明,该基因与GenBank数据库中相比271位的碱基A突变为G,导致氨基酸序列中N91D突变。将该基因克隆... 为获得具有高热稳定性的木糖异构酶,运用基因工程技术,从嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB8中克隆到嗜热木糖异构酶基因xylA。测序结果表明,该基因与GenBank数据库中相比271位的碱基A突变为G,导致氨基酸序列中N91D突变。将该基因克隆到载体pET22b(+),并在E.coli BL21(DE3)中进行高效表达。通过热变性和强阴离子交换两步对该酶进行纯化,并对酶学性质进行了研究。结果表明,该酶最适温度为80℃,最适pH为8.0,80℃下半衰期为225 min。在60℃,pH7.5该酶的Km为15.20 mmol/L,Vmax为69.54μmol/min,kcat为50.62/s,kcat/Km为3.33L/s·mmol。研究结果为嗜热木糖异构酶的进一步工业应用奠定了基础。 展开更多
关键词 木糖异构酶 嗜热栖热菌 表达 纯化 酶学性质
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Thermus thermophilus木糖异构酶与木糖醇的分子对接及模型分析 被引量:1
15
作者 许伟 蔡萍 +2 位作者 严明 许琳 欧阳平凯 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第5期971-973,共3页
Xylose isomerase from Thermus thermophilus is widely used in the production of high-fructose corn syrup and the construction of xylose via recombinant strains. In this paper, the positions of Mg ions and xylitol in 1B... Xylose isomerase from Thermus thermophilus is widely used in the production of high-fructose corn syrup and the construction of xylose via recombinant strains. In this paper, the positions of Mg ions and xylitol in 1BXB were established by structure analysis, molecular docking and computing. The Complex of 1BXB with xylitol was modeled and analyzed. Comparing the structure of 1BXB complex with 1S5N, it was found that the overall structure of them showed a high similarity. The residues around xylitol were highly conserved in xylose isomerase, and the orientation and positions of xylitol were very similar in both structures. The coordination bonds formed between Mg1 and O2 or O4 of xylitol stabilized the conformation of xylitol at the active site of 1BXB. 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 木糖异构酶 木糖醇 分子对接
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Tth DNA聚合酶基因的分段PCR克隆及其表达载体构建 被引量:3
16
作者 蒋永强 蒙健宗 +1 位作者 黄鲲 黄日波 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 1999年第1期33-38,共6页
利用计算机软件对取自GenBank的嗜热栖热菌ThermusthermophilusHB-8的DNA聚合酶基因(Tth)进行分析,并设计了两组引物进行PCR,分段克隆该基因。将两个PCR产物同时连接到另一个克隆载体上... 利用计算机软件对取自GenBank的嗜热栖热菌ThermusthermophilusHB-8的DNA聚合酶基因(Tth)进行分析,并设计了两组引物进行PCR,分段克隆该基因。将两个PCR产物同时连接到另一个克隆载体上,使之成为完整基因,最后将完整基因克隆到表达载体上,构建了Tth基因的表达质粒,使之适合在以大肠杆菌为寄主的细胞中进行表达。 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 DNA聚合酶 基因克隆 表达载体
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Thermus thermophilus木糖异构酶复合物模型的建立与分析(英文) 被引量:2
17
作者 许伟 严明 +2 位作者 丁莉 李艳 许琳 《计算机与应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期531-534,共4页
Thermus thermophilus木糖异构酶在高果糖浆的工业生产及木糖发酵重组菌的构建方面具有极其广阔的应用前景.本文主要运用结构分析和分子对接及计算软件,确定了Mg^2及木糖异构酶天然底物D-木糖在1BXB晶体结构中的定位,构建出1BXB复合物... Thermus thermophilus木糖异构酶在高果糖浆的工业生产及木糖发酵重组菌的构建方面具有极其广阔的应用前景.本文主要运用结构分析和分子对接及计算软件,确定了Mg^2及木糖异构酶天然底物D-木糖在1BXB晶体结构中的定位,构建出1BXB复合物模型并进行评价与分析.通过对1BXB复合物模型1与1XIC的结构进行比较,发现所构建模型中D-木糖周围的残基在木糖异构酶中高度保守,并且D-木糖的定位与取向与1XIC中底物分子基本一致. 展开更多
关键词 嗜热栖热菌 木糖异构酶 结构 对接
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