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圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因——sanH和sanI的研究 被引量:4
1
作者 陈蔚 田宇清 +1 位作者 杨海花 谭华荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期598-604,共7页
通过反向遗传学方法克隆到圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因簇中约 7 0kb的DNA片段。该片段除含有尼可霉素生物合成基因sanF外 ,对sanF上游约 2 2kb的BglⅡDNA片段进行序列测定及分析表明 ,还含有两个完整的开放阅读框 (ORF)。ORF1... 通过反向遗传学方法克隆到圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因簇中约 7 0kb的DNA片段。该片段除含有尼可霉素生物合成基因sanF外 ,对sanF上游约 2 2kb的BglⅡDNA片段进行序列测定及分析表明 ,还含有两个完整的开放阅读框 (ORF)。ORF1由 1 2 33个核苷酸组成 ,ORF2由 1 95个核苷酸组成 ,它们分别编码由 41 0个氨基酸残基和 64个氨基酸残基组成的蛋白质 ,依次命名为sanH和sanI。蛋白序列数据库比较结果表明 ,SanH和SanI与浅灰链霉菌 (Streptomycesgriseolus)中共转录的细胞色素P450 (cytochromeP450 )和铁氧还蛋白 (ferredoxin)有较高的同源性 ,一致性分别为 46%和 56% ,相似性分别为 62 %和70 %。基因功能研究表明 ,sanH基因的破坏虽不影响圈卷产色链霉菌产生的尼可霉素的生物活性 ,但该基因可能参与了尼可霉素羟基化反应的生物合成。 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 尼可霉素生物合成基因 sanH
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圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因—sanL的结构与功能 被引量:2
2
作者 聂丽平 张集慧 谭华荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期59-64,共6页
利用染色体步移策略 ,以尼可霉素生物合成相关的基因片段为探针 ,从圈卷产色链霉菌中克隆到了一个大约 1 0kb的DNA片段。序列分析表明此片段中除含有sanK外 ,在sanK的上游还有一个完整开放阅读框———sanL。sanL与sanK的转录方向相同 ... 利用染色体步移策略 ,以尼可霉素生物合成相关的基因片段为探针 ,从圈卷产色链霉菌中克隆到了一个大约 1 0kb的DNA片段。序列分析表明此片段中除含有sanK外 ,在sanK的上游还有一个完整开放阅读框———sanL。sanL与sanK的转录方向相同 ,具有 1 2 81个核苷酸 ,起始密码子为 345位的ATG ,终止密码子为 1 62 3位的TGA。利用Blastx程序进行的分析揭示 ,此基因可能编码一个赖氨酸 2 氨基转移酶。基因功能研究表明 ,该基因是圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成所必需的。 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 尼可霉素 生物合成 赖氨酸-2-氨基转移酶 抗生素
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圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因──sanJ的克隆及功能研究 被引量:1
3
作者 聂丽平 田宇清 谭华荣 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第2期188-195,共8页
以尼可霉素生物合成相关的基因片段为探针,从圈卷产色链霉菌cosmid基因文库中筛选到1个大约7.5kb的DNA片 段,将此DNA片段克隆到载体pBluescripM13-的Kpn I位点,得到了重组质粒pNL2200。对pNL2200中外源DNA片段进行了一系列的亚克隆... 以尼可霉素生物合成相关的基因片段为探针,从圈卷产色链霉菌cosmid基因文库中筛选到1个大约7.5kb的DNA片 段,将此DNA片段克隆到载体pBluescripM13-的Kpn I位点,得到了重组质粒pNL2200。对pNL2200中外源DNA片段进行了一系列的亚克隆及部分核苷酸序列分析,结果表明,2.3kb的Sal I-BamH DNA片段中含有1个完整的开放阅读框,起始密码子为271位的GTG,终止密码子为1954位的TGA,该基因的大小为1 686bp,编码1个大小为561个氨基酸的蛋白质产物。利用blastx程序在蛋白质数据库中进行同源比较,结果揭示此基因产物与腺苷酸形成酶超家族的连接酶有44%的一致性。此外,该基因的破坏导致圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成能力的丧失,证明它是尼可霉素生物合成所必需的,命名其为sanJ。 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 尼可霉素 生命合成 腺苷酸形成酶 基因 克隆
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圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因-sanK的克隆及功能研究 被引量:1
4
作者 聂丽平 李文利 谭华荣 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期667-670,共4页
利用染色体步移策略 ,以尼可霉素生物合成相关的基因片段为探针 ,从圈卷产色链霉菌中克隆到了一个大约 10kb的DNA片段。对其中 1 8kb的PvuII SacII片段进行了序列分析 ,结果表明 :此片段中含有一个具有1170个核苷酸的完整开放阅读框 ,... 利用染色体步移策略 ,以尼可霉素生物合成相关的基因片段为探针 ,从圈卷产色链霉菌中克隆到了一个大约 10kb的DNA片段。对其中 1 8kb的PvuII SacII片段进行了序列分析 ,结果表明 :此片段中含有一个具有1170个核苷酸的完整开放阅读框 ,起始密码子为 44 7位的ATG ,终止密码子为 16 14位的TGA ,推测其编码一个389个氨基酸的蛋白质产物。利用BLASTX程序进行的分析揭示 ,此基因编码一个肌氨酸单体氧化酶。基因功能研究结果表明 ,此基因与圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成直接相关 ,命名为sanK。 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 尼可霉素 生物合成
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圈卷产色链霉菌分化相关基因——saw1的结构和功能
5
作者 谭华荣 杨海花 +2 位作者 田宇清 马文勃 刘钢 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期428-434,共7页
用双脱氧链终止法进行了分化基因——saw1的双链测序.结果表明在1500bp的DNA片段中有一个完整的开读框架(ORF),其编码区是在419bp至1252bp处.其产物与已知的天蓝色链霉菌whiG的氨基酸序列有89%的同源性.当把1500bp的saw1DNA片段插入到... 用双脱氧链终止法进行了分化基因——saw1的双链测序.结果表明在1500bp的DNA片段中有一个完整的开读框架(ORF),其编码区是在419bp至1252bp处.其产物与已知的天蓝色链霉菌whiG的氨基酸序列有89%的同源性.当把1500bp的saw1DNA片段插入到链霉菌表达质粒载体pIJ702后,构建的重组质粒转化天蓝色链霉菌孢子形成缺陷突变株C71,可使C71形成孢子和灰色色素.用基因破坏的策略进一步研究了该基因的生物学功能,结果表明saw1在圈卷产色链霉菌气生菌丝到孢子形成的发育转变中有重要作用,是分化中控制孢子发育起始的一个重要基因. 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 分化基因 序列分析 saw1
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圈卷产色链霉菌分化关键基因——saw1的克隆及酶切分析
6
作者 谭华荣 王垒 +1 位作者 田宇清 杨海花 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期393-396,共4页
链霉菌是现代生物学研究中一种重要的微生物,它有两个突出的特征:其一,有无与伦比的合成次生代谢产物的能力,世界上所知数千种抗生素的70%由其产生。其二,有一个复杂的发育分化的生命周期,是微生物分化研究的一个最好的模式材料。链霉... 链霉菌是现代生物学研究中一种重要的微生物,它有两个突出的特征:其一,有无与伦比的合成次生代谢产物的能力,世界上所知数千种抗生素的70%由其产生。其二,有一个复杂的发育分化的生命周期,是微生物分化研究的一个最好的模式材料。链霉菌分化主要为形态分化和生理分化,两者彼此独立又相互关联,构成复杂的分化调控网络,研究分化基因的调控不但有重要的理论意义,而且可用于控制抗生素的生物合成,因此弄清合成途径的分子机制,也有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 真菌 霉菌 圈卷产色链霉菌 分化基因 saw1基因
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Tn4560在圈卷产色链霉菌中的转座及其在尼可霉素生物合成相关基因克隆中的应用
7
作者 曾洪梅 谭华荣 李季伦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期11-18,共8页
采用常规转化方法用来自天蓝色链霉菌J1 5 0 1的质粒pUC1 1 6 9(pMT6 6 0∷Tn45 5 6∷vph)多次转化尼可霉素产生菌圈卷产色链霉菌野生型 71 0 0的原生质体 ,均未得到转化子。采用限制性热衰减法于 5 0℃ ,3 0min溶菌制备 71 0 0的原生质... 采用常规转化方法用来自天蓝色链霉菌J1 5 0 1的质粒pUC1 1 6 9(pMT6 6 0∷Tn45 5 6∷vph)多次转化尼可霉素产生菌圈卷产色链霉菌野生型 71 0 0的原生质体 ,均未得到转化子。采用限制性热衰减法于 5 0℃ ,3 0min溶菌制备 71 0 0的原生质体 ,获得了转化子 ,但转化频率极低 ,只有 0 4个转化子 μgDNA。用来自 71 0 0的pUC1 1 6 9再转化不含pUC1 1 6 9的 71 0 0原生质体 ,转化频率提高 1 0 3 ~ 1 0 4 倍。于 3 9℃ ,MM Vio条件下培养携带有pUC1 1 6 9的 71 0 0孢子 ,Tn45 6 0发生转座 ,筛选到 40 6 8个转座菌落 ,并从中得到 8株尼可霉素阻断突变株 ;对这 8株突变株的总DNA进行Southern杂交分析表明 ,Tn45 6 0至少在 4个不同的位点插入到 71 0 0的染色体上。用实验室已获得的与尼可霉素生物合成有关的 3 0kbDNA片段为探针和经不同酶切的 8株突变株的总DNA进行Southern杂交 ,结果表明 ,除阻断突变株Nik5有杂交信号且杂交信号大小均同野生型 71 0 0外 ,其余 7株突变株均无任何杂交信号。HPLC分析表明 ,8株突变株在产生尼可霉素方面可分为两种类型 ,Nik5为 1种类型 ,其余 7株为另一种类型。初步推测这 7株突变株基因组DNA与尼可霉素生物合成有关的部分发生了大片断的缺失。以Tn45 6 0为探针 ,构建Nik5的部分? 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 Tn4560 转座突变 尼可霉素 生物合成基因 基因克隆
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圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶的分离纯化及酶学性质
8
作者 张集慧 马文勃 谭华荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期587-593,共7页
圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶基因naoA在大肠杆菌中获得了成功表达 ,从含有重组质粒pNA1 0 1 (pET2 3b∷naoA)的工程菌株BL2 1 (DE3 )中分离纯化了硝基烷类氧化酶 ,SDS PAGE检测为均一。对纯酶进行了酶学性质及动力学研究。底物为 1 ... 圈卷产色链霉菌硝基烷类氧化酶基因naoA在大肠杆菌中获得了成功表达 ,从含有重组质粒pNA1 0 1 (pET2 3b∷naoA)的工程菌株BL2 1 (DE3 )中分离纯化了硝基烷类氧化酶 ,SDS PAGE检测为均一。对纯酶进行了酶学性质及动力学研究。底物为 1 硝基丙烷、2 硝基丙烷和硝基乙烷时 ,在 0 4mol L的磷酸缓冲液中 ,酶的最适反应pH值为 7~ 8,最适反应温度为48℃~ 5 6℃。室温保存 6d后 ,酶的活性保持了 43 3 % ,但对 6 0℃以上的高温敏感。硫醇化合物如巯基乙醇、还原型谷胱甘肽不同程度地抑制酶活性 ,特别是NADH ,其浓度为 1mmol L时 ,酶活性几乎全部丧失。以 1 硝基丙烷为底物时 ,NaoA的Km 为 3 5 7mmol L ,Vmax 为0 1 99μmol (μg .min) 。 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 硝基烷类氧化酶 分离纯化 酶学性质
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圈卷产色链霉菌7100分化相关基因——sawE的结构与功能
9
作者 徐健勇 刘钢 谭华荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期48-55,共8页
以天蓝色链霉菌的whiB基因为探针 ,从圈卷产色链霉菌 71 0 0的总DNA部分文库中克隆了含有whiB同源序列的 2 8kbDNA片段 ,并对其中的 1 4kb片段进行了序列测定。序列分析表明 ,该片段含有一个完整的开放阅读框—sawE。预测的蛋白质结... 以天蓝色链霉菌的whiB基因为探针 ,从圈卷产色链霉菌 71 0 0的总DNA部分文库中克隆了含有whiB同源序列的 2 8kbDNA片段 ,并对其中的 1 4kb片段进行了序列测定。序列分析表明 ,该片段含有一个完整的开放阅读框—sawE。预测的蛋白质结构及同源性分析显示 ,sawE与天蓝色链霉菌孢子形成早期的关键基因whiB高度同源 ,编码产物为一个调控蛋白。sawE的破坏使圈卷产色链霉菌 71 0 0的分化终止在气生菌丝阶段 ,在延长培养时间的情况下仍保持白色的表型 ,菌丝不能分隔 ,不能形成成熟的灰色孢子 ,结果表明sawE基因是一个与圈卷产色链霉菌分化有关的重要基因。 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌7100 分化相关基因 sawE 结构 功能 形态分化
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圈卷产色链霉菌分化早期基因──samfR的研究
10
作者 田宇清 刘钢 +2 位作者 聂丽平 贾君永 谭华荣 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S3期359-359,共1页
关键词 圈卷产色链霉菌 早期基因 微生物研究所 中国科学院 天蓝霉菌 基因功能研究 发育分化 氨基酸类 次生代谢 序列测定及分析
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圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因-sanA的克隆、结构和功能
11
作者 贾君永 李文利 +2 位作者 陈蔚 聂丽平 谭华荣 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S3期382-383,共2页
关键词 圈卷产色链霉菌 尼可霉素 生物合成基因 生物合成途径 微生物研究所 转化子 中国科学院 抑制作用 开放阅读框架 基因簇
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圈卷产色链霉菌尼克霉素生物合成相关基因-sanF克隆和结构分析
12
作者 陈蔚 贾君永 +2 位作者 田宇清 杨海花 谭华荣 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S3期383-384,共2页
关键词 圈卷产色链霉菌 生物合成途径 结构分析 相关基因 微生物研究所 中国科学院 几丁质 抗真菌抗生素 农用抗生素 基因文库
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与圈卷产色链霉菌分化有关的一个新基因──sawD的研究
13
作者 刘钢 田宇清 +1 位作者 陈蔚 谭华荣 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S3期360-360,共1页
关键词 圈卷产色链霉菌 新基因 霉菌分化 微生物研究所 中国科学院 丝氨酸蛋白酶 气生菌丝 发育分化 开放阅读框 翻译起始
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圈卷产色链霉菌尼可霉素生物合成基因sanB的克隆、结构和功能
14
作者 李文利 贾君永 +2 位作者 胡永松 王忠彦 谭华荣 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第13期1409-1414,共6页
从圈卷产色链霉菌 7100中克隆到 6 kb与尼可霉素合成有关的 DNA片段,对其中的部分片段进行了序列分析,其中 1.9 kb的 Tthl111I片段含有一个 1740 bp的完整可读框,起始密码子为100 bp处的 GTG... 从圈卷产色链霉菌 7100中克隆到 6 kb与尼可霉素合成有关的 DNA片段,对其中的部分片段进行了序列分析,其中 1.9 kb的 Tthl111I片段含有一个 1740 bp的完整可读框,起始密码子为100 bp处的 GTG,终止密码子为 1840 bp处的 TGA,编码一个由 580个氨基酸残基组成的蛋白质该基因命名为sanB.蛋白序列数据库同源性比较结果表明,sanB的编码产物与天蓝色链霉菌中组氨酸磷酸氨基转移酶有31%的一致性和47%的相似性.采用基因破坏策略研究了sanB的功能,发现sanB基因的破坏导致野生型菌株失去合成尼可霉素的能力,结果揭示sanB是尼可霉素生物合成中一个新的重要基因. 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 尼可霉素 生物合成 基因 克隆
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圈卷产色链霉菌san7324和san7324L基因阻断对形态分化和尼可霉素产生的影响
15
作者 孙军 李敬敬 +3 位作者 李月 王川 蔡原 谭华荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期235-246,共12页
【目的】圈卷产色链霉菌全局性调控基因wblA阻断突变后,尼可霉素不再产生。RNA-seq和转录分析表明san7324基因在野生型菌株中可以正常转录,而在wblA阻断突变株(ΔwblA)中不能转录,为此本文旨在揭示san7324与尼可霉素产生的关系。【方法... 【目的】圈卷产色链霉菌全局性调控基因wblA阻断突变后,尼可霉素不再产生。RNA-seq和转录分析表明san7324基因在野生型菌株中可以正常转录,而在wblA阻断突变株(ΔwblA)中不能转录,为此本文旨在揭示san7324与尼可霉素产生的关系。【方法】利用同源双交换策略对san7324进行基因阻断,而后通过基因遗传回补及对尼可霉素生物合成相关基因的转录分析等方法研究san7324的功能。【结果】在相同培养条件下,阻断突变株Δsan7324与野生型菌株相比失去了合成尼可霉素的能力。我们通过同源比对发现圈卷产色链霉菌中还存在一个与san7324同源的基因san7324L,该基因的阻断导致尼可霉素产量降低。当san7324和san7324L两个基因同时被阻断后,得到的突变株Δsan7324-san7324L生长稀疏而且不能正常发育分化形成灰色表型的孢子或孢子链,只能形成白色表型的气生菌丝,同时也丧失了合成尼可霉素的能力。当这两个基因(san7324-san7324L)回补双突变株后,则恢复了野生型的表型(能形成孢子链并恢复尼可霉素的产生)。进一步的研究初步表明san7324和san7324L的阻断主要影响了尼可霉素生物合成基因簇中途径特异性调控基因sanG的转录水平,从而影响圈卷产色链霉菌的发育分化和尼可霉素的产生。【结论】该结果为链霉菌形态分化与生理代谢关系的研究提供了更多的证据,同时为多效调控基因wblA作用机制的阐明奠定了基础。 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 基因阻断 形态分化 尼可霉素
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图卷产色链霉菌分化基因-sawB的结构与功能
16
作者 聂丽平 王韫恂 +2 位作者 贾君永 田宇清 谭华荣 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S3期381-382,共2页
关键词 天蓝霉菌 分化基因 突变株 圈卷产色链霉菌 微生物研究所 转录调控 中国科学院 基因克隆 结构与功能
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天蓝色链霉菌分化调控基因-scrX的功能研究
17
作者 杨海花 田宇清 +2 位作者 贾君永 谭华荣 K.F.Chater 《云南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1999年第S3期384-385,共2页
关键词 天蓝霉菌 分化调控 稀有密码子 基因整合 微生物研究所 发育分化 中国科学院 基因破坏 原核生物 圈卷产色链霉菌
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尼可霉素生物合成基因簇的改造及其异源表达 被引量:3
18
作者 王璐 杜德尧 +4 位作者 李金娥 田宇清 刘浩 牛国清 谭华荣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期707-718,共12页
【目的】异源表达尼可霉素生物合成基因簇,为尼可霉素核苷和肽基缩合机制研究以及尼可霉素与其它核苷类抗生素的组合生物合成奠定基础。【方法】以含有尼可霉素生物合成基因簇的pNIK为出发质粒,通过PCR-targeting的方法,将基因簇中san G... 【目的】异源表达尼可霉素生物合成基因簇,为尼可霉素核苷和肽基缩合机制研究以及尼可霉素与其它核苷类抗生素的组合生物合成奠定基础。【方法】以含有尼可霉素生物合成基因簇的pNIK为出发质粒,通过PCR-targeting的方法,将基因簇中san G和san F的启动子替换为组成型hrd B启动子,构建重组质粒pNIKm。通过接合转移的方法分别将pNIK和pNIKm导入天蓝色链霉菌M1146中,获得异源表达菌株M1146-NIK和M1146-NIKm,并通过RT-PCR检测基因簇的表达情况。最后通过抗菌活性实验和产物的分离鉴定,比较M1146-NIK和M1146-NIKm的抗菌活性和尼可霉素的产生情况。【结果】pNIK和pNIKm在异源宿主天蓝色链霉菌M1146成功表达;M1146-NIK和M1146-NIKm均有明显的抗菌活性;M1146-NIK和M1146-NIKm均能产生少量的尼可霉素X、Z和假尼可霉素Z;M1146-NIK大量积累尿苷,而M1146-NIKm大量积累尿苷、核糖基-4-甲酰-4-咪唑-2-酮和吡啶同型苏氨酸。【结论】尼可霉素生物合成基因簇成功异源表达,并分离鉴定了尼可霉素产物及其生物合成中间体。本研究将为尼可霉素核苷和肽基缩合的酶学机制研究以及尼可霉素与其它核苷类抗生素组合合成新型杂合抗生素提供理论依据和指导。 展开更多
关键词 圈卷产色链霉菌 尼可霉素 生物合成基因簇 异源表达 抗菌活性 物鉴定
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Assembly and features of secondary metabolite biosynthetic gene clusters in Streptomyces ansochromogenes 被引量:2
19
作者 ZHONG XingYu TIAN YuQing +1 位作者 NIU GuoQing TAN HuaRong 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 2013年第7期609-618,共10页
A draft genome sequence of Streptomyces ansochromogenes 7100 was generated using 454 sequencing technology. In combination with local BLAST searches and gap filling techniques, a comprehensive antiSMASH-based method w... A draft genome sequence of Streptomyces ansochromogenes 7100 was generated using 454 sequencing technology. In combination with local BLAST searches and gap filling techniques, a comprehensive antiSMASH-based method was adopted to assemble the secondary metabolite biosynthetic gene clusters in the draft genome of S. ansochromogenes. A total of at least 35 putative gene clusters were identified and assembled. Transcriptional analysis showed that 20 of the 35 gene clusters were expressed in either or all of the three different media tested, whereas the other 15 gene clusters were silent in all three different media. This study provides a comprehensive method to identify and assemble secondary metabolite biosynthetic gene clusters in draft genomes of Streptomyces, and will significantly promote functional studies of these secondary metabolite biosynthetic gene clusters. 展开更多
关键词 secondary metabolite gene cluster ASSEMBLE FEATURES draft genome
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