土拉弗朗西斯菌致病机制研究进展

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作者 董译滟 王聪 +2 位作者 任晨洋 文雪霞 张莹 《动物医学进展》 北大核心 2023年第12期108-112,共5页

土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,Ft)是一种可引起人畜共患的胞内病原菌,属于革兰氏阴性菌,具有多形性,无芽孢,无鞭毛,可感染多种类型的细胞。在体内,Ft主要感染巨噬细胞并在其中复制。为了在宿主体内建立有效感染,Ft已进化出多... 土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis,Ft)是一种可引起人畜共患的胞内病原菌,属于革兰氏阴性菌,具有多形性,无芽孢,无鞭毛,可感染多种类型的细胞。在体内,Ft主要感染巨噬细胞并在其中复制。为了在宿主体内建立有效感染,Ft已进化出多种策略以拮抗宿主的免疫机制,适应宿主巨噬细胞质的环境并延缓细胞凋亡。这些策略主要包括增强机体对菌体的摄取、菌体从吞噬小体中逃逸、拮抗宿主的氧化防御、抑制宿主的炎症反应和维持菌体自身的稳定等。论文主要从这些方面对Ft的致病机制研究进展进行综述,以期为该病原的研究提供参考。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 病原特征 致病机制

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土拉弗朗西斯菌FopA单抗阻断ELISA抗体检测方法的建立

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作者 崔国林 戚心怡 +4 位作者 吴村 蔡梦雷 张政钢 赵东旭 翟新国 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期850-856,共7页

目的建立一种基于FopA单抗的阻断ELISA抗体检测方法。方法以pET-32a为载体表达土拉弗朗西斯菌的FopA蛋白,并以其免疫BALB/c小鼠制备单抗,以LVS超声裂解液为包被抗原、HRP标记FopA单抗为阻断抗体,建立直接阻断ELISA方法,利用阴性血清平均... 目的建立一种基于FopA单抗的阻断ELISA抗体检测方法。方法以pET-32a为载体表达土拉弗朗西斯菌的FopA蛋白,并以其免疫BALB/c小鼠制备单抗,以LVS超声裂解液为包被抗原、HRP标记FopA单抗为阻断抗体,建立直接阻断ELISA方法,利用阴性血清平均值+2SD或3SD确定该方法临界值,测定该方法特异性、敏感性、重复性及其与平板凝集试验的符合率,并利用该方法检测攻毒小鼠血清抗体变化趋势。结果筛选获得1株稳定分泌IgG1(κ型)单抗的杂交瘤细胞,并基于该单抗建立阻断ELISA方法,包被抗原最优浓度为3μg/mL、HRP标记FopA单抗最优稀释度为1∶4000、待检血清最优稀释度为1∶10,阴性临界值为27%、阳性临界值为41%、可疑区间为27%~41%,该方法的特异性、敏感性、重复性和符合率均良好,可检出攻毒9 d后小鼠血清抗体。结论成功制备FopA单抗,并基于该单抗建立一种快速、准确和高通量抗体检测的阻断ELISA方法,为我国土拉弗朗西斯菌流调和防控提供技术支撑。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 FopA 阻断ELISA 单抗 原核表达

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陕西省部分地区土拉弗朗西斯菌病自然疫源地调查研究 被引量：9

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作者 郑龙 《西北国防医学杂志》 CAS 2018年第7期426-431,共6页

目的:调查陕西省是否存在土拉弗朗西斯菌病的自然疫源地。方法:蜱类调查采用布旗法;小型啮齿动物调查采用夜夹法,病例采用回顾性流行病学调查;血清学检测采用酶联免疫吸附实验;病原分子生物学检测采用巢式-PCR法;统计学处理应用SPSS 9.... 目的:调查陕西省是否存在土拉弗朗西斯菌病的自然疫源地。方法:蜱类调查采用布旗法;小型啮齿动物调查采用夜夹法,病例采用回顾性流行病学调查;血清学检测采用酶联免疫吸附实验;病原分子生物学检测采用巢式-PCR法;统计学处理应用SPSS 9.0统计学软件。结果:调查发现富县、陇县和南郑县硬蜱科(ixodidae)5属15种蜱类,即硬蜱属(ixodes)1种、革蜱属(dermacentor)5种、血蜱属(haemaphysalis)4种、璃眼蜱属(hyalomma)3种和扇头蜱属(rhipicephalus)2种,以革蜱和血蜱种类较多。啮齿目7科16属24种,即松鼠科(sciuridae)2属2种,鼯鼠科(pteromyidae)2属2种,跳鼠科(dipididae)1属1种,鼹形鼠科(spalacidae)1属2种,仓鼠科(cricetidae)4属5种,鼠科(muridae)5属11种,豪猪科(hystricidae)1属1种,以鼠科种类最多。检测富县、陇县和南郑县部分林区居民血清样本707份,其中土拉弗朗西斯菌病血清IgG抗体阳性49份,总阳性率为6.93%,说明当地人群中存在土拉弗朗西斯菌病的自然感染。检测蜱标本1 117只,从达吉斯坦革蜱(D.daghestanicus)、日本血蜱(H.japonica)、嗜群血蜱(H.concinna)等3个蜱种中检测出25只蜱为土拉弗朗西斯菌标本阳性,总阳性率为2.24%。其中以日本血蜱的阳性率最高,为15.39%(χ2=20.91,P=0.01),说明当地蜱体中存在土拉弗朗西斯菌的自然感染。当地分布的达乌尔黄鼠(S.dauricus)、花鼠(T.sibiricus)、黑线姬鼠(A.agrarius)、小家鼠(M.musculus)和褐家鼠(R.norvegicus)等小型兽类,在周边省区已被学者证实为土拉弗朗西斯菌病的保菌宿主和传播者,提示富县、陇县和南郑县部分林区存在土拉弗朗西斯菌的保菌宿主啮齿目小型兽类。从25份阳性标本中选取10份进行序列测序,获得核酸序列与土拉弗朗西斯菌B亚种菌株序列AF247690.2 100%同源;对阳性标本进行SSTR9区域扩增,共有6种不同的拷贝数,其中拷贝数为9的居多(40.00%);利用MEGA 4.0软件进行聚类分析显示20份标本主要分为两大群。结论:陕西省富县、陇县和南郑县部分林区存在土拉弗朗西斯菌病的自然疫源地。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌病 土拉弗朗西斯菌 自然疫源地 陕西省

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TaqMan探针实时荧光定量PCR快速检测土拉弗朗西斯菌 被引量：3

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作者 赵素慧 王春晖 +6 位作者 周莹 韦耀 韩桂圆 钮红岺 赵卫 张其威 万成松 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期602-606,共5页

目的建立TaqMan探针实时荧光定量PCR方法(QF-PCR),快速检测土拉弗朗西斯菌。方法针对土拉弗朗西斯菌的外膜蛋白fopA基因,利用Primer 5.0设计引物及TaqMan探针,人工合成fopA基因保守片段,克隆到载体作为阳性标准品,进行荧光定量检测,制... 目的建立TaqMan探针实时荧光定量PCR方法(QF-PCR),快速检测土拉弗朗西斯菌。方法针对土拉弗朗西斯菌的外膜蛋白fopA基因,利用Primer 5.0设计引物及TaqMan探针,人工合成fopA基因保守片段,克隆到载体作为阳性标准品,进行荧光定量检测,制作定量标准曲线,并以合成fopA基因为模板,PF、PR为引物,研究其灵敏度、特异性和准确性。结果构建了含fopA基因的重组质粒,以不同浓度的重组质粒制作标准曲线,在103～107拷贝数之间有较好的线性关系。灵敏度试验表明,该方法可检测到30.6个拷贝数的重组质粒,比普通PCR灵敏度高;特异性试验表明,能选择性检测土拉弗朗西斯菌,而与其他病原菌无交叉反应,与普通菌落PCR结果一致;重复性试验表明,拷贝数为3.06×106样品5次平行试验,标准差为0.201,变异系数为0.88%。结论本研究建立了TaqMan探针QF-PCR快速检测技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好等特点,可用于快速、实时、定量检测土拉弗朗西斯菌,为快速检测生物战剂级微生物建立了一种人工合成特异基因TaqMan探针实时荧光定量PCR新方法。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 TAQMAN探针 fopA基因 荧光定量PCR

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应用TaqMan荧光定量PCR检测土拉弗朗西斯菌 被引量：8

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作者 史清海 曲识 +3 位作者 周冬生 郭兆彪 翟俊辉 杨瑞馥 《生物技术通讯》 CAS 2009年第6期806-809,共4页

目的:利用Roche LightCycler实时定量PCR系统建立一种快速、灵敏、特异的检测土拉弗朗西斯菌的方法。方法:基于TaqMan荧光探针实时定量PCR技术,选择土拉弗朗西斯菌染色体上的特异序列[醇醛酮还原酶(AKR)和外膜蛋白FopA基因]作为检测靶序... 目的:利用Roche LightCycler实时定量PCR系统建立一种快速、灵敏、特异的检测土拉弗朗西斯菌的方法。方法:基于TaqMan荧光探针实时定量PCR技术,选择土拉弗朗西斯菌染色体上的特异序列[醇醛酮还原酶(AKR)和外膜蛋白FopA基因]作为检测靶序列,建立土拉弗朗西斯菌实时定量PCR检测方法;评价该检测方法的特异性和灵敏性;采用克隆菌株污染环境土壤来模拟实际样品,评价该检测方法在快速检测与现场检测等实际应用中的表现。结果:优化筛选基因组中的FT-AKR和FT-fopA片段作为检测靶序列,所建立的土拉弗朗西斯菌实时定量PCR检测方法检测克隆菌株质粒的灵敏度均为10个拷贝/每个反应体系;以其他非土拉弗朗西斯菌为模板未出现非特异扩增;模拟环境土壤样品检测灵敏度2个引物对分别为440和960CFU/g土壤;盲测实验结果显示对于灵敏度范围内的阳性样本均能正确识别,并能正确检测出不同浓度的阳性样本。以FT-fopA片段为靶序列的扩增效率不及基于FT-AKR引物对的扩增。结论:基于FT-AKR片段的引物对扩增效率高,检测土拉弗朗西斯菌具有特异、灵敏的特点,对临床诊断、环境污染监测、防治生物突发事件等具有重要意义。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 荧光定量PCR TAQMAN探针 定量检测

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肌动蛋白结合脂筏促进巨噬细胞摄入土拉弗朗西斯菌 被引量：2

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作者 潘欣 曾思良 +3 位作者 蔡家麟 吴鉴今 杨光 黄通来 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期31-35,共5页

观察土拉弗朗西斯菌LVS借助脂筏以肌动蛋白为动力被鼠巨噬细胞摄入的过程。细胞胆固醇用菲律平Ⅲ染色,结合神经节苷酯GM1的霍乱毒素B亚基用键合了Alexa 594的兔抗霍乱毒素B亚基二抗显色;肌动蛋白用键合了Alexa 594的鬼笔环肽显色。免疫... 观察土拉弗朗西斯菌LVS借助脂筏以肌动蛋白为动力被鼠巨噬细胞摄入的过程。细胞胆固醇用菲律平Ⅲ染色,结合神经节苷酯GM1的霍乱毒素B亚基用键合了Alexa 594的兔抗霍乱毒素B亚基二抗显色;肌动蛋白用键合了Alexa 594的鬼笔环肽显色。免疫荧光显微镜观察到脂筏成分中的胆固醇、神经节苷酯GM1均可与细菌共定位;胆固醇可与肌动蛋白共定位。随着感染时间的延长,细菌可离开脂筏。离开脂筏的细菌囊泡可与肌动蛋白共定位。这些发现提示肌动蛋白与脂筏结合,在弗朗西斯菌早期进入巨噬细胞期间发挥重要作用。 展开更多

关键词 巨噬细胞 土拉弗朗西斯菌 脂筏 胆固醇 肌动蛋白

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宝鸡某医院临床医生对土拉弗朗西斯菌病相关知识掌握情况调查 被引量：3

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作者 李莉莉 韩雪玲 +2 位作者 张爱勤 雷韫睿 何蓓 《西北国防医学杂志》 CAS 2018年第1期45-47,共3页

目的:了解宝鸡某医院临床医生对土拉弗朗西斯菌病相关知识的掌握情况。方法:随机抽取宝鸡某医院60名临床医生,采用问卷调查表对其进行土拉弗朗西斯菌病相关知识调查,限时匿名上交。结果:发放问卷60份,有效回收率100%。60名临床医生对土... 目的:了解宝鸡某医院临床医生对土拉弗朗西斯菌病相关知识的掌握情况。方法:随机抽取宝鸡某医院60名临床医生,采用问卷调查表对其进行土拉弗朗西斯菌病相关知识调查,限时匿名上交。结果:发放问卷60份,有效回收率100%。60名临床医生对土拉弗朗西斯菌病相关知识掌握情况欠佳,总知晓率仅为38.50%,其中知晓率最高的是"土拉弗朗西斯菌病流行的基本环节"(80.00%),知晓率最低的是"陕西省有无土拉弗朗西斯菌病的分布"(25.00%)。结论:宝鸡某医院临床医生对土拉弗朗西斯菌病相关知识掌握欠佳,呼吁有关部门加强对土拉弗朗西斯菌病相关知识的普及教育。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌病 医院 临床医生 问卷调查

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土拉弗朗西斯菌与巨噬细胞膜的早期相互作用 被引量：2

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作者 潘欣 祁建城 +1 位作者 李广波 贾文凯 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期1-5,共5页

评估土拉弗朗西斯菌LVS在感染鼠巨噬细胞早期与细胞膜的相互作用。用表达GFP的土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞J774A.1。结合单抗的小窝蛋白-1或转铁蛋白受体-1分别用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色。土拉弗朗西斯菌疫苗株LVS可以诱... 评估土拉弗朗西斯菌LVS在感染鼠巨噬细胞早期与细胞膜的相互作用。用表达GFP的土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞J774A.1。结合单抗的小窝蛋白-1或转铁蛋白受体-1分别用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色。土拉弗朗西斯菌疫苗株LVS可以诱导宿主细胞膜伸出伪足,将细菌吸收进入巨噬细胞。分布在细胞膜上的小窝蛋白-1和转铁蛋白受体-1参与巨噬细胞对弗朗西斯菌的摄入。这些发现说明,弗朗西斯菌进入巨噬细胞需要细胞膜微结构域和小窝蛋白;在感染早期转铁蛋白受体-1参与了细菌的摄入,这可能与弗朗西斯菌获取铁以利在胞内生存有关。 展开更多

关键词 巨噬细胞 土拉弗朗西斯菌 微膜结构域 小窝蛋白-1 转铁蛋白受体-1

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金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌 被引量：3

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作者 张宏刚 陈苏红 +2 位作者 张敏丽 赵素莲 王升启 《生物技术通讯》 CAS 2011年第3期415-418,共4页

目的:建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的方法,评价其灵敏度、特异性、重复性及其应用。方法:以小鼠抗土拉菌脂多糖单克隆抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜、兔抗土拉菌多克隆抗体作为检测抗体标记胶体金,通过金标银... 目的:建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的方法,评价其灵敏度、特异性、重复性及其应用。方法:以小鼠抗土拉菌脂多糖单克隆抗体作为捕获抗体包被硝酸纤维素膜、兔抗土拉菌多克隆抗体作为检测抗体标记胶体金,通过金标银染技术放大检测信号,建立金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌体系;评价该方法的灵敏度、特异性和重复性;以经荧光定量PCR定量的土拉弗朗西斯菌为检测对象,比较金标银染免疫渗滤法和免疫层析法。结果:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌的最小检出量为1.0×103 CFU/mL,灵敏度高于免疫层析法;检测大肠杆菌、炭疽芽孢杆菌、布鲁菌和鼠疫耶尔森菌的结果均为阴性;密封保存的检测卡80 d内重复性良好,100 d后反应强度略有降低。结论:金标银染免疫渗滤法检测土拉弗朗西斯菌敏感性高、特异性强、重复性好,且方便快捷,不需要仪器设备,可作为快速检测土拉弗朗西斯菌的首选方法。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 免疫渗滤法 金标银染

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重组土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的融合表达及抗原性分析 被引量：2

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作者 何斌 端青 《生物技术通讯》 CAS 2010年第1期32-34,共3页

目的:探索一种大量表达功能性土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的方法。方法:采用SignalP 3.0 Server进行信号肽预测,将土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA信号肽的基因序列(75bp)去除,将1107bp的核心序列克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21... 目的:探索一种大量表达功能性土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA的方法。方法:采用SignalP 3.0 Server进行信号肽预测,将土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA信号肽的基因序列(75bp)去除,将1107bp的核心序列克隆至原核表达载体pET32a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。结果:构建了pET32a-fopA载体,重组蛋白FopA表达量约占菌体总蛋白量60%,Western blot分析显示重组FopA蛋白有较好的抗原性。结论:获得了高效表达FopA的pET32a-fopA表达载体,为下一步土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 重组土拉弗朗西斯菌外膜蛋白FopA 融合表达 抗原性

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细胞膜微结构域中胆固醇对小鼠巨噬细胞摄取土拉弗朗西斯菌的作用

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作者 潘欣 李广波 +3 位作者 瞿旻 赵子夜 李晗 戚中田 《微生物与感染》 2009年第4期223-227,共5页

本文旨在探讨细胞膜微结构域中胆固醇在小鼠巨噬细胞摄取土拉弗朗西斯菌LVS株中的作用。用电穿孔法将穿梭质粒pFNLTP6gro-gfp导入土拉弗朗西斯菌LVS株;细胞胆固醇用菲律平Ⅲ染色,结合单克隆抗体的小窝蛋白-1用键合了Alexa594的羊抗鼠二... 本文旨在探讨细胞膜微结构域中胆固醇在小鼠巨噬细胞摄取土拉弗朗西斯菌LVS株中的作用。用电穿孔法将穿梭质粒pFNLTP6gro-gfp导入土拉弗朗西斯菌LVS株;细胞胆固醇用菲律平Ⅲ染色,结合单克隆抗体的小窝蛋白-1用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色;用Z轴电动聚焦的荧光显微镜分析土拉弗朗西斯菌LVS株感染;用甲基-β-环糊精干扰富含脂质的胞膜,损耗胆固醇,以评估膜微结构域的损伤对土拉弗朗西斯菌入侵的影响,菲律平Ⅲ用于检测胆固醇损耗的效果。结果显示,细胞胆固醇在早期与摄取的土拉弗朗西斯菌疫苗株共定位,膜微结构域相关成分小窝蛋白-1与两者接触密切;土拉弗朗西斯菌入侵巨噬细胞需要胆固醇丰富的膜结构域。结果提示,胆固醇丰富的膜微结构域和小窝蛋白-1在土拉弗朗西斯菌早期进入巨噬细胞过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 巨噬细胞 土拉弗朗西斯菌 膜微结构域 小窝蛋白-1 胆固醇

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转铁蛋白受体在土拉弗朗西斯菌LVS入侵巨噬细胞期间的作用

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作者 潘欣 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期376-379,383,共5页

评估转铁蛋白受体-1在土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞期间的作用。用表达GFP的土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞J774A.1。结合单抗的转铁蛋白受体-1分别用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色,用小干扰RNA下调转铁蛋白受体-1的表达,进而... 评估转铁蛋白受体-1在土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞期间的作用。用表达GFP的土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞J774A.1。结合单抗的转铁蛋白受体-1分别用键合了Alexa594的羊抗鼠二抗显色,用小干扰RNA下调转铁蛋白受体-1的表达,进而用土拉弗朗西斯菌LVS分别感染转铁蛋白受体-1表达下调的细胞和转染无关siRNA的细胞,并进行细菌计数。分布在细胞膜上的转铁蛋白受体-1参与巨噬细胞对弗朗西斯菌的摄入。免疫印迹结果表明小干扰RNA对转铁蛋白受体-1的表达下调了大约75%。细菌入侵试验显示,在感染1 h时,转铁蛋白受体-1表达下调的细胞内细菌数量等同于对照(F=1.06,P=0.3265);而在感染24 h时,Tfr1下调样本中的细菌数量明显低于对照样本(F=24.12,P=0.0006)。这些发现说明在感染早期转铁蛋白受体-1参与了细菌的摄入,这可能与弗朗西斯菌获取铁以利在胞内生存有关。转铁蛋白受体-1的下调不影响细菌的入侵,但抑制细菌在细胞内的增殖。 展开更多

关键词 巨噬细胞 土拉弗朗西斯菌 铁蛋白受体-1 小干扰RNA

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土拉弗朗西斯菌病的特征与防治 被引量：3

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作者 霍坚 高永利 +3 位作者 郑龙 易伟国 韩雪玲 刘增加 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2021年第2期182-186,共5页

土拉弗朗西斯菌病为一种自然疫源性急性传染病,分布广泛。本文较系统地阐述了土拉弗朗西斯菌病的病原学和流行病学特征、发病机理与病理改变、临床表现与分型、实验室检测技术、临床诊断与治疗和预防控制措施,为我国深入研究与防治提供... 土拉弗朗西斯菌病为一种自然疫源性急性传染病,分布广泛。本文较系统地阐述了土拉弗朗西斯菌病的病原学和流行病学特征、发病机理与病理改变、临床表现与分型、实验室检测技术、临床诊断与治疗和预防控制措施,为我国深入研究与防治提供了参考依据。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 流行病学 防治

原文传递

土拉弗朗西斯菌的研究现况 被引量：2

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作者 苏超 吴鹤松 +1 位作者 杨桂荣 宋志忠 《微生物前沿》 2019年第3期130-138,共9页

土拉热,是由土拉弗朗西斯菌引起的一种人兽共患病。该病最早于1919年由E. Francis在美国的土拉县发现,因此被命名为土拉热。我国在1959年的黑龙江省报道了第一起人间感染。因其致病性强、易于传播的特点,被美国CDC列为A类生物恐怖病原体... 土拉热,是由土拉弗朗西斯菌引起的一种人兽共患病。该病最早于1919年由E. Francis在美国的土拉县发现,因此被命名为土拉热。我国在1959年的黑龙江省报道了第一起人间感染。因其致病性强、易于传播的特点,被美国CDC列为A类生物恐怖病原体,因此对本病的深入研究具有重要的现实意义。本文从土拉弗氏菌的发现史、病原学特征、致病及传播机制、常见检测方法、疾病的诊断、临床表现及治疗、疫苗研究等几个方面进行了综述。 展开更多

关键词 土拉热 土拉弗朗西斯菌 研究现况 综述

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FTN0109蛋白对土拉弗朗西斯菌致病力的影响

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作者 崔国林 李冰心 +3 位作者 张寒琪 王俊 戚心怡 苏敬良 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期337-345,共9页

土拉弗朗西斯菌是一种重要的人畜共患性病原菌,目前对该菌的毒力因子及分子致病机制尚不完全清楚。本研究旨在分析未知功能蛋白FTN0109在土拉弗朗西斯菌中的分布,探讨其对细菌致病力的影响。通过生物信息学软件预测FTN0109的生物学功能... 土拉弗朗西斯菌是一种重要的人畜共患性病原菌,目前对该菌的毒力因子及分子致病机制尚不完全清楚。本研究旨在分析未知功能蛋白FTN0109在土拉弗朗西斯菌中的分布,探讨其对细菌致病力的影响。通过生物信息学软件预测FTN0109的生物学功能,并利用超速离心法检测其亚细胞定位;利用同源重组技术构建FTN0109基因缺失株及其反式回补株,分析其对三种来源小鼠巨噬细胞的入侵和细胞内增殖能力,并检测其对BALB/c小鼠的致病力和在其体内的繁殖动态。结果显示,FTN0109蛋白被预测为一种脂蛋白,主要分布于土拉弗朗西斯菌的内膜;与野毒株相比,FTN0109缺失株在小鼠巨噬细胞中不能增殖,对BALB/c小鼠的LD50提高104以上,在感染小鼠肝和脾中的载量呈不断下降趋势且均显著低于野毒株(P<0.05)。结果提示,FTN0109是一种内膜脂蛋白,它的缺失可严重降低土拉弗朗西斯菌在小鼠巨噬细胞和体内的生存能力,降低其对小鼠的致病力。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 内膜蛋白 致病力 FTN0109

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质膜微区对土拉弗朗西斯菌LVS感染鼠巨噬细胞的影响(英文) 被引量：2

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作者 潘欣 祁建城 +3 位作者 李广波 贾文凯 瞿旻 赵子夜 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期833-837,共5页

目的评估土拉弗朗西斯菌LVS入侵鼠巨噬细胞过程中质膜微区的作用。方法用电穿孔法将穿梭质粒pFNLTP6 gro-gfp导入土拉弗朗西斯菌LVS。细胞膜用FM4-64染色,结合单抗的微囊蛋白-1用键合了Alexa594荧光素的羊抗鼠二抗显色。用Z轴电动聚焦... 目的评估土拉弗朗西斯菌LVS入侵鼠巨噬细胞过程中质膜微区的作用。方法用电穿孔法将穿梭质粒pFNLTP6 gro-gfp导入土拉弗朗西斯菌LVS。细胞膜用FM4-64染色,结合单抗的微囊蛋白-1用键合了Alexa594荧光素的羊抗鼠二抗显色。用Z轴电动聚焦的荧光显微镜分析土拉弗朗西斯菌LVS感染。用甲基-β-环式糊精干扰富含脂质的胞膜损耗胆固醇,以评估质膜微区的损伤对弗朗西斯菌入侵的影响。菲律平Ⅲ用以检测胆固醇损耗的效果。结果土拉弗朗西斯菌疫苗株可以诱导膜结构域伸出伪足将细菌吸收进入巨噬细胞。质膜微区相关成分微囊蛋白-1与含有弗朗西斯菌的囊泡一同进入宿主。弗朗西斯菌入侵巨噬细胞需要胆固醇丰富的膜结构域。结论胆固醇丰富的质膜微区和微囊蛋白-1在弗朗西斯菌早期进入巨噬细胞期间发挥重要作用。 展开更多

关键词 巨噬细胞 土拉弗朗西斯菌 质膜微区 微囊蛋白-1 胆固醇

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土拉弗朗西斯菌检测研究进展 被引量：8

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作者 王振东 景滢滢 王静 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第14期2763-2765,共3页

土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)是土拉菌病(Tularemia)的致病菌,是最具传染性的致病菌之一,在自然界中已发现一百种以上的动物感染此菌。因其传播途径多样,易扩散、毒性强而被美国疾病控制预防中心列入A类生物恐怖制剂。土拉... 土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)是土拉菌病(Tularemia)的致病菌,是最具传染性的致病菌之一,在自然界中已发现一百种以上的动物感染此菌。因其传播途径多样,易扩散、毒性强而被美国疾病控制预防中心列入A类生物恐怖制剂。土拉菌病是一种人畜共患病,致死率高,及时、准确的检测土拉菌对于土拉菌病患者及时治疗和防止扩散具有重要的意义。土拉菌检测方法很多,如菌培养,微凝集实验、酶联免疫吸附、快速检测试纸条、生物传感器、PCR、核酸杂交检测、质谱分析、基因芯片等。但到目前为止还没有一种成熟的用于土拉菌检测方法,其主要原因在于土拉菌致病性强,且不易分离培养。本文综述了土拉菌细菌学、免疫学、分子生物学方法检测的最新研究进展。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 人蓄共患病 检测 诊断技术

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在辽宁省长角血蜱中检测出土拉弗朗西斯菌 被引量：4

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作者 王艳华 毛玲玲 +5 位作者 彭遥 孙英伟 王子江 张家勇 张稷博 田疆 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2016年第6期529-532,共4页

目的检测辽宁省长角血蜱中弗朗西斯菌属及其内共生体的携带情况。方法 2013年7月,在辽宁省采集长角血蜱357只共分成38组,进行土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的特异培养和弗朗西斯菌属及其共生体16S r RNA的巢式PCR检测。对有目的片段扩增的PCR... 目的检测辽宁省长角血蜱中弗朗西斯菌属及其内共生体的携带情况。方法 2013年7月,在辽宁省采集长角血蜱357只共分成38组,进行土拉弗朗西斯菌(土拉菌)的特异培养和弗朗西斯菌属及其共生体16S r RNA的巢式PCR检测。对有目的片段扩增的PCR产物进行测序和同源性比对,并与网上已公布的弗朗西斯菌属和弗朗西斯菌属(类)内共生体的序列进行系统进化分析。结果有测序结果的13组蜱中,5组为土拉菌,8组为弗朗西斯菌属(类)内共生体。由此推算,河栏镇长角血蜱对于土拉菌的最小携带率为2.12%。系统进化分析显示,5组蜱和土拉菌聚在一个分支上,其余8组和弗朗西斯菌属(类)内共生体聚在一个主干分支上。结论首次发现辽宁省长角血蜱携带土拉菌及弗朗西斯菌属(类)内共生体,对于提醒当地卫生部门做好土拉热防控具有一定意义。 展开更多

关键词 弗朗西斯菌属 土拉弗朗西斯菌 长角血蜱 聚合酶链反应

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土拉弗朗西斯氏菌PCR-EIA检测技术的研究 被引量：9

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作者 张敏丽 郭兆彪 +1 位作者 汪晓辉 杨瑞馥 《解放军预防医学杂志》 CAS 北大核心 1999年第4期264-266,共3页

目的：建立操作简便、结果客观的微孔板杂交－ 酶联显色检测土拉弗朗西斯氏菌 Ｐ Ｃ Ｒ 产物的技术。方法：将 Ｐ Ｃ Ｒ 产物或产物的克隆作为捕获探针包被聚乙烯微孔板， Ｐ Ｃ Ｒ 引物５′末端生物素标记，扩增后用作探针杂交，通过... 目的：建立操作简便、结果客观的微孔板杂交－ 酶联显色检测土拉弗朗西斯氏菌 Ｐ Ｃ Ｒ 产物的技术。方法：将 Ｐ Ｃ Ｒ 产物或产物的克隆作为捕获探针包被聚乙烯微孔板， Ｐ Ｃ Ｒ 引物５′末端生物素标记，扩增后用作探针杂交，通过比较影响微孔板杂交的包被、杂交和显色等因素，建立 Ｐ Ｃ Ｒ－ Ｅ Ｉ Ａ 技术。结果：通过比较包被缓冲液发现镁离子及其离子强度是影响 Ｄ Ｎ Ａ 包被的重要因素；包被的 Ｄ Ｎ Ａ 以线型质粒较佳，每孔包被３００ ｎｇ 左右的 Ｄ Ｎ Ａ 杂交效果最好；杂交液中加和不加甲酰胺对杂交影响不大；用链霉亲和素化的辣根过氧化物酶显色均能达到检测杂交体的目的，结论：我们确定了 Ｐ Ｃ Ｒ－ Ｅ Ｉ Ａ 技术的最佳包被、杂交和显色的条件，该方法的建立为 Ｐ Ｃ Ｒ 真正用于临床实验奠定了基础。 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 聚合酶链反应 酶联显色 微孔板

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中国土拉弗朗西斯菌holarctica亚种的遗传多样性 被引量：2

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作者 王艳华 彭遥 夏连续 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1410-1414,共5页

目的 研究国内外土拉弗朗西斯菌的遗传进化关系.方法 选择17个单核苷酸多态性、4个插入/缺失和12个可变数目串联重复,采用单核苷酸多态性和插入/缺失、多位点可变数目串联重复分析方法单独和组合起来对39株土拉菌（10株中国土拉菌和29... 目的 研究国内外土拉弗朗西斯菌的遗传进化关系.方法 选择17个单核苷酸多态性、4个插入/缺失和12个可变数目串联重复,采用单核苷酸多态性和插入/缺失、多位点可变数目串联重复分析方法单独和组合起来对39株土拉菌（10株中国土拉菌和29株已公布测序的土拉菌）进行系统进化分析.结果 组合分析显示,3株中国土拉菌和日本的FSC022被分配到B5;剩余3株中国土拉菌和瑞典的FSC200被分配到B1;3株和美国的OSU18被分配到B2;1株和法国的FTNF002-00、德国的F92与美国的OR96246一起被分配到B4.10株中国土拉菌分为4种亚型,研究表明中国土拉菌具有广泛的遗传多样性.结论 本研究针对土拉菌B型建立了一套简易高效的分型方法,并以此为基础得出土拉菌B型的起源可能是亚洲地区. 展开更多

关键词 土拉弗朗西斯菌 土拉热 系统进化 单核苷酸多态性 插入/缺失 多位点可变串联重复分析

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