目的构建基于坏死性凋亡相关的长链非编码RNAs(necroptosis-related long non-coding RNAs,NRLs)的肝细胞癌预后模型。方法从TCGA数据库下载肝细胞癌的转录本数据和临床信息。采用LASSO-Cox模型构建预后预测模型,受试者工作特征曲线(rec...目的构建基于坏死性凋亡相关的长链非编码RNAs(necroptosis-related long non-coding RNAs,NRLs)的肝细胞癌预后模型。方法从TCGA数据库下载肝细胞癌的转录本数据和临床信息。采用LASSO-Cox模型构建预后预测模型,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)和校准曲线评估该模型的预测价值,并进行基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)和免疫浸润分析。qRT-PCR验证4个NRLs在肝细胞癌细胞Huh7和正常肝细胞MIHA中的差异表达。结果本研究构建了基于AL117336.2、MKLN1-AS、FOXD2-AS1、LINC01224等4个NRLs的肝细胞癌风险预后模型。基于训练集构建的风险评分是预后的独立影响因素(HR=1.275,P<0.001)。在训练集中,风险模型预测1、3、5年OS的AUC分别为0.816、0.747、0.752,在测试集中分别为0.713、0.621、0.626,且校准曲线显示模型有较好的一致性。根据中位风险评分将患者划分为高、低风险组,训练集和测试集中高风险组的总存活率均低于低风险组(均P<0.05)。此外,不同风险组中免疫细胞浸润程度和免疫检查点分子的表达差异有统计学意义(均P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,4个NRLs在肝细胞癌细胞Huh7中的表达水平均高于正常肝细胞MIHA(均P<0.05)。结论本研究成功构建了预测肝细胞癌患者预后的NRLs模型,对指导临床治疗具有潜在的价值。展开更多
目的 考察坏死性凋亡抑制剂及分子量为4 000的聚乙二醇(PEG-4000)对小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1表面一水草酸钙(COM)晶体黏附沉积的影响。方法 分别用400、800μg/m L COM作用于TCMK-1细胞,或先用受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RIP...目的 考察坏死性凋亡抑制剂及分子量为4 000的聚乙二醇(PEG-4000)对小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1表面一水草酸钙(COM)晶体黏附沉积的影响。方法 分别用400、800μg/m L COM作用于TCMK-1细胞,或先用受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RIPK) 3抑制剂GSK-872预处理后再加入400、800μg/m L COM处理TCMK-1细胞,37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况,用CCK-8法检测细胞增殖活性,2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞氧化应激水平,蛋白质印迹法检测坏死性凋亡相关蛋白RIPK1、RIPK3、磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白(p-MLKL)的表达,电感耦合等离子体发射光谱法(ICP)检测细胞表面晶体黏附量。将TCMK-1细胞分为3组,分别用800μg/m L COM、先用PEG-4000溶液再加入800μg/m L COM、先用800μg/m L COM再加入PEG-4000溶液处理细胞,37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况,CCK-8法检测细胞增殖活性、DCFH-DA探针法检测细胞氧化应激水平,ICP检测细胞表面晶体黏附量。结果 400μg/m L COM作用时,与COM处理组相比,GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量减少、细胞增殖活性增强(P<0.05)、氧化应激水平降低(P<0.05);800μg/m L COM作用时,与COM处理组相比,GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量无明显变化、细胞增殖活性增强(P<0.05)、氧化应激水平降低(P<0.05)、RIPK3和p-MLKL表达减少(P<0.05)。与COM处理组相比,PEG-4000预处理组TCMK-1细胞晶体黏附量明显减少、细胞增殖活性增强、氧化应激水平降低(P均<0.05),而后加入PEG-4000组与COM处理组相比晶体黏附量、细胞增殖活性、氧化应激水平均无明显变化(P均>0.05)。结论 用GSK-872抑制坏死性凋亡可以一定程度减少COM在细胞表面黏附沉积,但在较高的晶体负荷下晶体可在细胞表面聚集形成不定型沉淀。在培养基中使用PEG-4000预处理能够使COM微晶粒在悬液中保持悬浮稳定,减少晶体聚集沉积及细胞黏附和细胞氧化应激损伤;但充分接触COM晶体后的TCMK-1细胞再加入PEG-4000不能逆转晶体细胞黏附聚集沉淀。展开更多
文摘目的构建基于坏死性凋亡相关的长链非编码RNAs(necroptosis-related long non-coding RNAs,NRLs)的肝细胞癌预后模型。方法从TCGA数据库下载肝细胞癌的转录本数据和临床信息。采用LASSO-Cox模型构建预后预测模型,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)和校准曲线评估该模型的预测价值,并进行基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)和免疫浸润分析。qRT-PCR验证4个NRLs在肝细胞癌细胞Huh7和正常肝细胞MIHA中的差异表达。结果本研究构建了基于AL117336.2、MKLN1-AS、FOXD2-AS1、LINC01224等4个NRLs的肝细胞癌风险预后模型。基于训练集构建的风险评分是预后的独立影响因素(HR=1.275,P<0.001)。在训练集中,风险模型预测1、3、5年OS的AUC分别为0.816、0.747、0.752,在测试集中分别为0.713、0.621、0.626,且校准曲线显示模型有较好的一致性。根据中位风险评分将患者划分为高、低风险组,训练集和测试集中高风险组的总存活率均低于低风险组(均P<0.05)。此外,不同风险组中免疫细胞浸润程度和免疫检查点分子的表达差异有统计学意义(均P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,4个NRLs在肝细胞癌细胞Huh7中的表达水平均高于正常肝细胞MIHA(均P<0.05)。结论本研究成功构建了预测肝细胞癌患者预后的NRLs模型,对指导临床治疗具有潜在的价值。
文摘目的 考察坏死性凋亡抑制剂及分子量为4 000的聚乙二醇(PEG-4000)对小鼠肾小管上皮细胞TCMK-1表面一水草酸钙(COM)晶体黏附沉积的影响。方法 分别用400、800μg/m L COM作用于TCMK-1细胞,或先用受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RIPK) 3抑制剂GSK-872预处理后再加入400、800μg/m L COM处理TCMK-1细胞,37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况,用CCK-8法检测细胞增殖活性,2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞氧化应激水平,蛋白质印迹法检测坏死性凋亡相关蛋白RIPK1、RIPK3、磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白(p-MLKL)的表达,电感耦合等离子体发射光谱法(ICP)检测细胞表面晶体黏附量。将TCMK-1细胞分为3组,分别用800μg/m L COM、先用PEG-4000溶液再加入800μg/m L COM、先用800μg/m L COM再加入PEG-4000溶液处理细胞,37℃孵育12 h后在倒置相差显微镜下观察细胞表面晶体黏附情况,CCK-8法检测细胞增殖活性、DCFH-DA探针法检测细胞氧化应激水平,ICP检测细胞表面晶体黏附量。结果 400μg/m L COM作用时,与COM处理组相比,GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量减少、细胞增殖活性增强(P<0.05)、氧化应激水平降低(P<0.05);800μg/m L COM作用时,与COM处理组相比,GSK-872预处理组中TCMK-1细胞晶体黏附量无明显变化、细胞增殖活性增强(P<0.05)、氧化应激水平降低(P<0.05)、RIPK3和p-MLKL表达减少(P<0.05)。与COM处理组相比,PEG-4000预处理组TCMK-1细胞晶体黏附量明显减少、细胞增殖活性增强、氧化应激水平降低(P均<0.05),而后加入PEG-4000组与COM处理组相比晶体黏附量、细胞增殖活性、氧化应激水平均无明显变化(P均>0.05)。结论 用GSK-872抑制坏死性凋亡可以一定程度减少COM在细胞表面黏附沉积,但在较高的晶体负荷下晶体可在细胞表面聚集形成不定型沉淀。在培养基中使用PEG-4000预处理能够使COM微晶粒在悬液中保持悬浮稳定,减少晶体聚集沉积及细胞黏附和细胞氧化应激损伤;但充分接触COM晶体后的TCMK-1细胞再加入PEG-4000不能逆转晶体细胞黏附聚集沉淀。
