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气单胞菌属低温淀粉酶基因改造与原核表达
1
作者 楚敏 史应武 +3 位作者 顾美英 杨红梅 霍向东 张志东 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期479-484,共6页
【目的】获取低温淀粉酶基因,分析其相关功能,为工业生产上的应用提供参考。【方法】以气单胞菌(Aeromonas)LA77为出发菌株克隆低温α-淀粉酶基因,以BL-21(DE3)为宿主菌进行克隆。分析其它已知气单胞菌属低温α-淀粉酶基因同源性,设计... 【目的】获取低温淀粉酶基因,分析其相关功能,为工业生产上的应用提供参考。【方法】以气单胞菌(Aeromonas)LA77为出发菌株克隆低温α-淀粉酶基因,以BL-21(DE3)为宿主菌进行克隆。分析其它已知气单胞菌属低温α-淀粉酶基因同源性,设计特异引物,PCR扩增获得C13片段,将其克隆到pMAL-2X,转化到BL-21(DE3)中,筛选蓝白斑,验证PCR及EcoRⅠ和HindⅢ的双酶切,获得高效表达生物工程菌株pMAL-2X-C13。设计定点突变引物,以pMAL-2X-C13为模板,获得低温淀粉酶基因突变株三株C19、C29、C43。【结果】表达蛋白的分子大小为114kD,突变菌株C19蛋白表达量均高于pMAL-2X-C13。【结论】低温淀粉酶基因突变株C19比原始菌株pMAL-2X-C13淀粉酶基因蛋白表达量更高。 展开更多
关键词 气单胞菌属 α-低温淀粉酶 基因改造 原核表达
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牛乳铁蛋白十肽的基因改造、克隆及表达 被引量：3
2
作者 姚海燕 韩跃武 +1 位作者 张雪燕 谢俊秋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第7期568-571,共4页
目的克隆并表达牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因。方法参照大肠杆菌偏爱密码子,分别针对牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,设计并合成两个具有相同黏性末端的DNA片段,同时在其基因前后分别加上天冬酰胺和甘氨酸的密码子,构成羟... 目的克隆并表达牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因。方法参照大肠杆菌偏爱密码子,分别针对牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,设计并合成两个具有相同黏性末端的DNA片段,同时在其基因前后分别加上天冬酰胺和甘氨酸的密码子,构成羟胺裂解位点,通过连接获得其二拷贝基因同向串联体。分别将该串联体克隆至载体pUC18上,经双酶切、PCR及测序鉴定后,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物纯化后,用凝血酶切割及羟胺裂解。结果获得了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2二拷贝基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出相对分子质量约29000的目的蛋白条带,纯化后的蛋白经凝血酶切割后,相对分子质量约29000的目的蛋白条带消失。结论已成功克隆并表达了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,为基因工程抗真菌肽的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白十肽 抗真菌肽 基因改造 基因克隆 表达
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α-淀粉酶的基因改造与菌种选育研究进展 被引量：1
3
作者 封棣 孟青青 +3 位作者 王玉海 杨慧敏 杨建国 王风寰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第15期381-385,共5页
α-淀粉酶是重要的工业用酶制剂之一,能在高温、低pH范围内稳定发挥作用的α-淀粉酶则具有更加广阔的应用前景。本文主要从基因改造与菌种选育两方面阐述了高温α-淀粉酶、酸性α-淀粉酶以及高温酸性α-淀粉酶的研究与开发进展。
关键词 Α-淀粉酶 基因改造 菌种选育
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基因改造、人性与人类价值——辩护一种自然主义的“人类改进”概念 被引量：10
4
作者 王凌皞 《华东政法大学学报》 CSSCI 北大核心 2019年第5期19-31,共13页
基因改进技术的迅猛进展所带来的争议需要得到道德、伦理与法律上的回应。作为回应的基础,首先必须界定妥当的"人类改进"概念。"人类改进"是对人类而言的真正改进,以基因工程技术为手段,以人类生理与心理的表观性... 基因改进技术的迅猛进展所带来的争议需要得到道德、伦理与法律上的回应。作为回应的基础,首先必须界定妥当的"人类改进"概念。"人类改进"是对人类而言的真正改进,以基因工程技术为手段,以人类生理与心理的表观性状的优化或改善为目标。这种理解体现了自然主义人性论的观点。人的生命形式设定了人的基本境况,限定了人类价值的基本内容。基于此,人类改进必须满足"人性相关性""人性完整性""全局适应性"及"帕累托改进"四个基本要求。这样一种自然主义的"人类改进"既约束了改进的范围,同时又提供了支持改进的致善主义理由,为立法与社会政策制定提供了可靠的概念基础。 展开更多
关键词 人类改进 基因改造 人性论 人性发展观 致善主义
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基因改造家兔在动脉粥样硬化研究中的应用 被引量：1
5
作者 郑振辉 田枫 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2009年第4期315-317,共3页
目前应用转基因和基因敲除小鼠的研究工作几乎成为各种国际高水平学术刊物的主流,而基因改造的家兔由于其独有的特点,在心血管研究中占有重要地位。本文从基因改造小鼠的最新研究进展着手,分析了基因修饰小鼠在动脉粥样硬化研究中的局限... 目前应用转基因和基因敲除小鼠的研究工作几乎成为各种国际高水平学术刊物的主流,而基因改造的家兔由于其独有的特点,在心血管研究中占有重要地位。本文从基因改造小鼠的最新研究进展着手,分析了基因修饰小鼠在动脉粥样硬化研究中的局限性,进而阐明基因改造家兔用于动脉粥样研究的优越性及研究近况。文章分析表明基因改造家兔技术及其应用必将在生物医学研究中发挥重要作用。 展开更多
关键词 基因改造 家兔 动脉粥样硬化 应用
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耐高温α-淀粉酶基因改造研究进展 被引量：2
6
作者 王琦 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2013年第5期133-136,共4页
耐高温α-淀粉酶是重要的工业用酶制剂之一,主要介绍耐高温α-淀粉酶的基因改造研究进展。
关键词 耐高温Α-淀粉酶 基因改造 突变
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芽孢杆菌的基因改造研究进展
7
作者 曹珊 程宝箴 +3 位作者 周士婷 李玉 李运 袁星宇 《中国皮革》 北大核心 2017年第7期39-40,共2页
介绍了芽孢杆菌的特征及其在制革工业中的应用,描述了芽孢杆菌基因改造之后的性能变化,指出通过基因工程改造可以提高芽孢杆菌产酶的热稳定性、耐酸碱性并改善底物特异性,从而改善芽孢杆菌产酶在制革中的作用效果。对芽孢杆菌基因改造... 介绍了芽孢杆菌的特征及其在制革工业中的应用,描述了芽孢杆菌基因改造之后的性能变化,指出通过基因工程改造可以提高芽孢杆菌产酶的热稳定性、耐酸碱性并改善底物特异性,从而改善芽孢杆菌产酶在制革中的作用效果。对芽孢杆菌基因改造在制革中的应用前景进行了展望,表明通过相关研究,可以建立高效可控的工艺,进一步推广酶在制革生产中的应用。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 蛋白酶 脂肪酶 制革 基因改造
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芽孢杆菌的基因改造研究进展(续)
8
作者 曹珊 程宝箴 +3 位作者 周士婷 李玉 李运 袁星宇 《中国皮革》 北大核心 2017年第8期31-35,40,共6页
介绍了芽孢杆菌的特征及其在制革工业中的应用,描述了芽孢杆菌基因改造之后的性能变化,指出通过基因工程改造可以提高芽孢杆菌产酶的热稳定性、耐酸碱性并改善底物特异性,从而改善芽孢杆菌产酶在制革中的作用效果。对芽孢杆菌基因改造... 介绍了芽孢杆菌的特征及其在制革工业中的应用,描述了芽孢杆菌基因改造之后的性能变化,指出通过基因工程改造可以提高芽孢杆菌产酶的热稳定性、耐酸碱性并改善底物特异性,从而改善芽孢杆菌产酶在制革中的作用效果。对芽孢杆菌基因改造在制革中的应用前景进行了展望,表明通过相关研究,可以建立高效可控的工艺,进一步推广酶在制革生产中的应用。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 蛋白酶 脂肪酶 制革 基因改造
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人谷草转氨酶的基因改造及高效重组表达
9
作者 王玉梅 徐超 +1 位作者 刘艳 高尚先 《中国医药生物技术》 2014年第5期341-346,共6页
目的构建人谷草转氨酶(AST)高效重组表达体系。方法优化编码人AST的核苷酸密码子,合成人AST新的基因,并将其克隆至pRSF-Duet表达载体中,转化大肠杆菌BL21,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白的表达,并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及... 目的构建人谷草转氨酶(AST)高效重组表达体系。方法优化编码人AST的核苷酸密码子,合成人AST新的基因,并将其克隆至pRSF-Duet表达载体中,转化大肠杆菌BL21,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白的表达,并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件,以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化,以SDS-PAGE电泳及蛋白质免疫印迹鉴定蛋白的性质,对重组蛋白的活性及在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的AST密码子在大肠杆菌中的使用频率均在10%以上;重组蛋白存在于上清和沉淀中,经表达优化,在IPTG终浓度为2 mmol/L、25℃、150 r/min振摇8 h诱导条件下,可增加可溶性蛋白的产率,纯化后的目的蛋白经电泳及免疫印迹鉴定为谷草转氨酶,活性可达136 000 U/L,且在含有蛋白酶抑制剂的血清中稳定存在。结论通过密码子优化,成功构建了重组AST的高效表达系统,重组蛋白可以达到作为参考物质原料的要求。 展开更多
关键词 谷草转氨酶 重组表达 基因改造 密码子 参考物质
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生长激素释放因子(GRF)的基因改造及化学合成 被引量：8
10
作者 冯立文 张永亮 +5 位作者 张玉静 欧阳红生 刘松财 岳军明 申建新 刘万臣 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期538-540,共3页
为了提高生长激素释放因子（ＧＲＦ）的体内活性，根据猪ＧＲＦ的天然序列，设计了改造后ＧＲＦ（１～３２）的基因序列（含信号肽），两端加设ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ的粘性末端，分４段由ＤＮＡ合成仪合成，每段长度分别为９５、９７... 为了提高生长激素释放因子（ＧＲＦ）的体内活性，根据猪ＧＲＦ的天然序列，设计了改造后ＧＲＦ（１～３２）的基因序列（含信号肽），两端加设ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ的粘性末端，分４段由ＤＮＡ合成仪合成，每段长度分别为９５、９７、８６、１０６ＮＴ，２条链间有１５个碱基的粘端。用尿素变性ＰＡＧＥ纯化合成片段，用Ｔ４多核苷酸激酶对合成ＤＮＡ磷酸化，混合４个片段复性，然后用Ｔ４连接酶连接。提取ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔ质粒，用ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ在Ｍｕｌｔｉｃｏｒｅｂｕｆｅｒ中酶切完全后，琼脂糖电泳，由ＧｅｎｅＥｌｕｔｅＡｇｒｏｓｅＳｐｉｎＣｏｌｕｍｓ回收酶切大片段。将该酶切片段与上述合成的ＧＲＦ基因由Ｔ４连接酶连接，并转化至氯化钙致敏的ＤＨ５α。选取重组菌落，提取质粒，用ＰＣＲ及双酶切鉴定阳性克隆。用Ｍｉｎｉｐｒｅｐ提取重组质粒，ＡＢＩ３７３自动测序仪测序。测序结果表明已克隆到合成的ＧＲＦ基因。 展开更多
关键词 生长激素 释放因子 GRF 基因改造 化学合成
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基因改造中快速PCR定点突变方法应用 被引量：5
11
作者 周赞虎 张永祥 +3 位作者 陈枝华 刘仁海 田蕴 郑天凌 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期102-103,共2页
关键词 定点突变方法 PCR定点突变 基因改造 Zn-SOD 铜锌超氧化物歧化酶 定点突变技术 密码子突变 蛋白质结构
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引起争议的“基因改造人”实验
12
作者 奇云 《发明与革新》 2001年第9期34-35,共2页
5月4日英国广播公司（BBC）披露一个惊人的消息，美国科学家“无意”中创造了世界上第一批转基因婴儿。许多科学家对此纷纷置评，进而引发了一场有关人类伦理与道德的争论。
关键词 “基因改造人”实验 转基因婴儿 DNA 基因改造技术
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欧洲议会通过基因改造生物规例议案
13
《国际市场导刊》 2003年第15期48-48,共1页
关键词 欧洲议会 基因改造生物规例议案 基因改造产品 贸易壁垒
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基因改造技术与基因改造食品的安全性
14
作者 刘学 《食品研究与开发》 CAS 2001年第5期47-50,共4页
文章综述农作物基因改造技术的基本方法,基因改造技术的特点与优势,以及基因改造育种和传统育种方式的不同。指出由于基因改造技术的应用,减少农业生产中农化产品的投入,降低环境的污染,以及该技术在改进食品品性方面的前景。并讨论应... 文章综述农作物基因改造技术的基本方法,基因改造技术的特点与优势,以及基因改造育种和传统育种方式的不同。指出由于基因改造技术的应用,减少农业生产中农化产品的投入,降低环境的污染,以及该技术在改进食品品性方面的前景。并讨论应用基因改造技术将可能导致的社会和环境的问题。在结合中国的国情和现状的基础上,吸收外来经验,提出控制基因改造技术负面影响的建议。 展开更多
关键词 基因改造技术 安全评估 食品 农作物 安全性
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小熊猫粪便中纤维素降解菌株的筛选、基因改造及生物合成聚羟基丁酸酯条件的优化
15
作者 刘童童 卢晨曦 +2 位作者 原楚妍 陈怡 吴弘 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2022年第1期45-50,共6页
为了发掘能够利用纤维素生产聚羟基丁酸酯(PHB)的菌种并获得最佳的发酵条件,用刚果红染色法从小熊猫粪便中筛选出具有纤维素降解能力的菌株,利用基因工程技术,将其改造为PHB生产菌株,利用响应面法,确定菌株发酵合成PHB的最优条件.经过... 为了发掘能够利用纤维素生产聚羟基丁酸酯(PHB)的菌种并获得最佳的发酵条件,用刚果红染色法从小熊猫粪便中筛选出具有纤维素降解能力的菌株,利用基因工程技术,将其改造为PHB生产菌株,利用响应面法,确定菌株发酵合成PHB的最优条件.经过透明圈检测和纤维素酶活力测定,分离获得1株可高效降解纤维素的细菌,结合形态学观察、生理生化特征和16S rDNA序列测定,确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).以来自罗氏真养菌(Ralstonia eutropha)的基因为模板,将PHB合成途径中的基因phaA、phaB和phaC转入到菌株中,得到重组菌株Bacillus subtilis-N8(3hb),该基因重组菌株可利用玉米秸秆生产PHB.利用响应面法确定合成PHB的最优条件:发酵温度为37.09℃,培养起始pH值为7.08,摇床转速为144.72 r/min.在此条件下,PHB产量最高,可达到15.98 g/L. 展开更多
关键词 小熊猫粪便 纤维素降解菌 枯草芽孢杆菌 基因改造 生物合成 聚羟基丁酸酯
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基因改造物爱恨交错
16
作者 王贞虎 耿国彪 《绿色中国》 2014年第18期46-49,共4页
呈金黄色的“黄金米”，结合红萝卜素及维他命A基因，是世上第一个为拯救生命而研发的基因改造食物。对富裕国家而言，转基因作物和食品“不是好东西”，但在贫穷国家却是有望解决饥荒的“好东西”。
关键词 基因改造 交错 转基因作物 金黄色 维他命 红萝卜 饥荒
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基因改造的伦理学问题研究
17
作者 刘冉婷 《网友世界》 2013年第14期68-69,共2页
随着基因技术的研究不断的深入，科学家们将触手伸向了对人类基因的改造，这引起了许多关于伦理的热议。对于基因改造的伦理学研究具有着不可忽视的社会价值，也引发了人们的思考。
关键词 基因改造 伦理问题 研究现状 社会价值
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英国培育出基因改造小鸡能下抗癌蛋
18
《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期305-305,共1页
曾培育出世界卜第一只克隆羊“多利”的英国罗斯林研究所，近日又取得了一项重大的科学突破：该研究所的科学家成功培育出世界上第一批能下“神奇鸡蛋”的小鸡。这种经过基因改造的小鸡所下的蛋能用来制造治疗癌症和其他疾病的药物。这... 曾培育出世界卜第一只克隆羊“多利”的英国罗斯林研究所，近日又取得了一项重大的科学突破：该研究所的科学家成功培育出世界上第一批能下“神奇鸡蛋”的小鸡。这种经过基因改造的小鸡所下的蛋能用来制造治疗癌症和其他疾病的药物。这一重大科学突破无疑为大规模生产药物提供了非常广阔的前景。 展开更多
关键词 基因改造 小鸡 培育 鸡蛋 英国 抗癌 大规模生产 研究所
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基因改造后的酶能用多种糖基修饰小分子
19
《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第10期439-439,共1页
经过基因工程的改造，酶能够用更多种类的糖基来修饰小分子，这是研究人员在9月号在线出版的《自然-化学生物学》（Nature Chemical Biology）期刊上报告的。
关键词 基因改造 小分子 修饰 糖基 酶 化学生物学 基因工程 研究人员
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基因改造让微藻油脂产量翻番
20
《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期209-209,共1页
6月18日英国《自然·生物技术》在线发表了一篇生物学重要成果：在使用包括CRISPR-Cas9技术在内的多种工具进行基因改造后的水藻品系,油脂产量可达其野生亲本的两倍,且能达到与后者类似的生长速度。这项新成果标志着微藻源可持续生... 6月18日英国《自然·生物技术》在线发表了一篇生物学重要成果：在使用包括CRISPR-Cas9技术在内的多种工具进行基因改造后的水藻品系,油脂产量可达其野生亲本的两倍,且能达到与后者类似的生长速度。这项新成果标志着微藻源可持续生物燃料的最终商业化向前迈进了一大步。 展开更多
关键词 微藻 基因改造 生物燃料 生物技术 生物柴油 生长速度 时可 陆地植物 产油量 穆勒
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