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应用基因表达谱芯片技术筛选XTP6基因转染细胞差异表达基因 被引量：1
1
作者 纪冬 成军 +4 位作者 郭江 杨瑗 董菁 王建军 刘妍 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2005年第1期27-30,共4页
目的　应用基因芯片技术 ,检测乙型肝炎病毒 (HBV)X蛋白 (HBxAg)反式激活基因XTP6的表达对肝母细胞瘤系HepG2基因表达谱的影响 ,进一步阐明XTP6蛋白可能的分子生物学功能。方法　设计并合成XTP6基因序列特异性的引物 ,应用聚合酶链反应 ... 目的　应用基因芯片技术 ,检测乙型肝炎病毒 (HBV)X蛋白 (HBxAg)反式激活基因XTP6的表达对肝母细胞瘤系HepG2基因表达谱的影响 ,进一步阐明XTP6蛋白可能的分子生物学功能。方法　设计并合成XTP6基因序列特异性的引物 ,应用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增XTP6基因片段 ,以常规的分子生物学技术将获得的XTP6编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列测定 ,构建真核表达载体pcDNA3 .1(-) XTP6。以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,提取mRNA ,逆转录为cDNA ,与转染空表达载体pcDNA3 .1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析。结果　构建的表达载体经过限制性内切酶分析的DNA序列测定 ,证实准确无误。提取高质量的mRNA ,逆转录为cDNA ,进行cDNA芯片分析。在 115 2个基因表达谱的筛选中 ,发现 2 1个基因表达水平显著上调 ,18个基因表达水平显著下调。结论　应用基因表达谱芯片成功筛选了XTP6转染细胞后差异表达基因 ,为进一步阐明XTP6蛋白可能的生物学功能提供依据。 展开更多
关键词 差异表达基因 肝母细胞瘤 基因转染细胞 基因表达谱芯片技术 HepG2 CDNA芯片 PCDNA3 基因表达水平 表达载体 RNA
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人B7-H4基因转染细胞株的构建及其对T细胞的作用 被引量：1
2
作者 徐慧 李玉云 +3 位作者 禹莉 房鹏 刘艳萍 顾宗江 《山西医科大学学报》 CAS 2012年第4期249-253,共5页
目的克隆人B7-H4基因,构建人B7-H4基因转染细胞株并初步研究其对T细胞的作用。方法通过RT-PCR的方法获得人B7-H4分子的基因,将目的片段双酶切(EcoRⅠ和BamHⅠ)后与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4... 目的克隆人B7-H4基因,构建人B7-H4基因转染细胞株并初步研究其对T细胞的作用。方法通过RT-PCR的方法获得人B7-H4分子的基因,将目的片段双酶切(EcoRⅠ和BamHⅠ)后与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4并进行鉴定;脂质体转染法将重组载体导入L929细胞,经G418加压筛选并通过流式细胞术和RT-PCR检测表达载体是否转入L929细胞中,通过检测活化T细胞上CD25,CD69的表达及T细胞增殖实验对B7-H4转基因细胞的生物学功能进行初步研究。结果从外周血活化单核细胞中扩增出目的基因,构建重组表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4并将其转染至L929细胞,构建了一株稳定表达人B7-H4分子的基因转染细胞株,对其生物学功能的研究显示B7-H4分子可以下调活化T细胞上CD25,CD69的表达,并且对T细胞的活化增殖起到抑制作用(P<0.05)。结论成功构建了稳定表达B7-H4分子的基因转染细胞株,为进一步研制B7-H4分子的单克隆抗体提供了有效的免疫原。 展开更多
关键词 协同刺激分子 B7-H4 基因转染细胞
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重组人生长激素基因转染细胞的基因表达、低温保存及多肽调控
3
作者 胡志强 戴钦舜 +2 位作者 杨富明 杨敏 武俏丽 《中国临床神经外科杂志》 1999年第4期44-46,共3页
目的:为了解决腺垂体移植所面临的免疫排斥反应和移植物来源问题。方法:将重组hGH基因用磷酸钙介导导入培养的人皮肤成纤维细胞内,用Northern杂交、RIA和免疫荧光染色检测基因表达。用DMSO做冷冻保护剂,在液氮中保存2个月,用RIA确定低... 目的:为了解决腺垂体移植所面临的免疫排斥反应和移植物来源问题。方法:将重组hGH基因用磷酸钙介导导入培养的人皮肤成纤维细胞内,用Northern杂交、RIA和免疫荧光染色检测基因表达。用DMSO做冷冻保护剂,在液氮中保存2个月,用RIA确定低温保存前后转染细胞的功能状态。将GHRF、SS分别加入转染细胞的培养液中,用RIA确定下丘脑多肽对转染细胞的调控情况。结果:转染细胞至少能持续表达hGH90天。低温保存前后hGH无显著差异(P>0.05)。GHRF和SS都促进转染细胞分泌hGH,SS只能部分阻断GHRF的作用。结论:hGH基因转染细胞可取代腺垂体细胞做移植物,由于SS不能抑制hGH的分泌,故移植部位以自体皮下移植为佳,以克服免疫排斥。 展开更多
关键词 基因转染细胞 低温保存 RIA GH 移植物 重组人生长激素 基因表达 调控 多肽 分泌
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人支气管上皮细胞c-Ha-ras^(V12G)基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立
4
作者 吴涛 印木泉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期54-56,共3页
目的 :建立一个新的促癌剂检测模型。 方法 :采用电穿孔法 ,将人类突变的 c- Ha- ras V1 2 G基因转入人支气管上皮细胞BEAS- 2 B中 ,将获得的 G418抗性 (G418r)单克隆细胞株用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率、锚着独立性生长及... 目的 :建立一个新的促癌剂检测模型。 方法 :采用电穿孔法 ,将人类突变的 c- Ha- ras V1 2 G基因转入人支气管上皮细胞BEAS- 2 B中 ,将获得的 G418抗性 (G418r)单克隆细胞株用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率、锚着独立性生长及血清抗性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测。 结果 :(1)在促癌剂 PMA作用下 ,BEAS- 2 B基因转染细胞发生了恶性转化 ;(2 )表达突变 ras基因的上皮细胞 ,在大剂量 PMA(>1μmol)的急性刺激 (2 4h)下 ,可诱导细胞死亡 ;(3)随着细胞恶性程度的增加 ,某些促癌剂的促细胞分化作用将减弱 ,并有生长刺激作用。 结论 :该模型可用于促癌剂的检测及促癌作用机制研究。 展开更多
关键词 基因转染细胞 佛波醇酯 促癌剂 支气管上皮细胞
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人胚肺成纤维细胞c-Ha-ras^(V12G)基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立
5
作者 吴涛 印木泉 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期306-310,共5页
为建立一个促癌剂检测模型 ,采用电穿孔法 ,将突变的c Ha rasV12G 基因转入人胚肺成纤维细胞WI 38中 ,将获得的G4 18抗性 (G4 18r)单克隆细胞株进行DNADot 印迹及RT PCR分析后 ,进一步用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率 ,锚着独... 为建立一个促癌剂检测模型 ,采用电穿孔法 ,将突变的c Ha rasV12G 基因转入人胚肺成纤维细胞WI 38中 ,将获得的G4 18抗性 (G4 18r)单克隆细胞株进行DNADot 印迹及RT PCR分析后 ,进一步用佛波醇酯 (PMA)处理 ,并选用克隆形成率 ,锚着独立性生长及裸鼠成瘤性等表型改变对受试细胞进行了恶性程度检测 .结果表明 :在促癌剂PMA作用下 ,WI38基因转染细胞发生了恶性转化 ,c Ha rasV12G基因使细胞对PMA的促癌敏感性增强 .由此可见 。 展开更多
关键词 基因转染细胞 促癌剂 佛波醇酯 检测模型 人胚肺成纤维细胞
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c-Ha-ras^(V12G)基因转染细胞系促癌剂检测模型的建立
6
作者 吴涛 印木泉 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2001年第4期267-268,共2页
关键词 c-Ha-ras^V12G 基因转染细胞系 促癌剂 检测模型
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人LGR5基因克隆及其基因转染细胞株的构建
7
作者 邓云 陆婷 +2 位作者 葛彦 居颂文 居颂光 《中国血液流变学杂志》 CAS 2013年第1期1-3,72,共4页
目的克隆人LGR5分子并构建其稳定表达的基因转染细胞株.方法提取人宫颈癌细胞株HeLa细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人LGR5全长cDNA,将人LGR5全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体... 目的克隆人LGR5分子并构建其稳定表达的基因转染细胞株.方法提取人宫颈癌细胞株HeLa细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人LGR5全长cDNA,将人LGR5全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,收集培养上清感染L929细胞,筛选构建稳定表达人LGR5分子的基因转染细胞株.结果成功克隆人LGR5全长cDNA和构建pEGZ/LGR5逆转录病毒表达载体,成功获得稳定表达人LGR5的基因转染细胞株L/LGR5.结论成功克隆了人LGR5基因并构建了稳定表达LGR5分子的基因转染细胞株,为进一步研究LGR5分子的生物学功能奠定了基础. 展开更多
关键词 LGR5 克隆 基因转染细胞株
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人PD-L1基因转染细胞株的构建及其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响 被引量：3
8
作者 宋莉 葛彦 +5 位作者 曹莎莎 徐永芳 潘建忠 谢炜 居颂文 居颂光 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2015年第2期123-127,共5页
目的:构建稳定表达人PD-L1分子的基因转染细胞株,观察其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响。方法:将编码人PD-L1分子的全长c DNA重组入反转录病毒表达载体p EGZ-Term-R,将重组载体p EGZ-Term-R/PD-L1和辅助病毒载体用脂质体法共转染2... 目的:构建稳定表达人PD-L1分子的基因转染细胞株,观察其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响。方法:将编码人PD-L1分子的全长c DNA重组入反转录病毒表达载体p EGZ-Term-R,将重组载体p EGZ-Term-R/PD-L1和辅助病毒载体用脂质体法共转染293T细胞,包装具有感染能力的完整病毒;收集含有完整重组反转录病毒的293T细胞培养上清,感染L929细胞,筛选并获得G418抗性的基因转染细胞。采用流式细胞术检测表达PDL1的基因转染细胞,命名为L929/PD-L1。采用PHA活化T细胞系来源的细胞株Jurkat,并将其与丝裂霉素预处理的L929/PD-L1细胞共培养,用细胞计数法观察L929/PD-L1细胞株对活化的Jurkat细胞增殖能力的影响,并检测其凋亡情况。结果:成功获得了稳定表达人PD-L1基因的转染细胞株L929/PD-L1。PHA可诱导Jurkat细胞活化并表达PD-1分子;L929/PD-L1与PHA刺激后的Jurkat细胞共培养,可抑制Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。结论:成功构建了稳定表达人PD-L1的细胞株,PD-L1分子抑制活化的Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。 展开更多
关键词 PD-L1 基因转染细胞株 JURKAT细胞
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人CD13基因克隆及其基因转染细胞株的构建
9
作者 杨鹏 葛彦 +5 位作者 陆婷 邓云 蒋林华 殷丽丽 居颂文 居颂光 《中国血液流变学杂志》 CAS 2012年第2期181-183,197,F0002,共5页
目的克隆人CD13全长cDNA，构建稳定表达人CD13分子的基因转染细胞株。方法提取人外周血单个核细胞总RNA，通过RT-PCR克隆人CD13基因，将人CD13基因重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。将重组逆转录病毒载体pEGZ-Term／CD13和辅助病毒... 目的克隆人CD13全长cDNA，构建稳定表达人CD13分子的基因转染细胞株。方法提取人外周血单个核细胞总RNA，通过RT-PCR克隆人CD13基因，将人CD13基因重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。将重组逆转录病毒载体pEGZ-Term／CD13和辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T，收集含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞，筛选获得Zeocin抗性的基因转染细胞。结果成功克隆人CD13基因和构建逆转录病毒载体pEGZ。Term／CD13，并成功获得稳定表达人CD13的基因转染细胞株L929／CD13。结论成功克隆了人CD13基因及其逆转录表达载体，成功制备了稳定表达人CD13的基因转染细胞株，为研究CD13生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 CD13 APN 基因转染细胞株
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叶酸受体基因转染细胞诱导后的类脂改变对叶酸摄取的影响
10
作者 唐建华 STEV.,VL 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第3期457-461,共5页
用胆固醇合成抑制剂Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ（洛伐他汀，暂译名）和神经鞘脂类合成抑制剂ＦｕｍｏｎｉｓｉｎＢ１（抑鞘脂素Ｂ１，暂译名）处理能表达糖基化磷脂酰肌醇锚定叶酸受体（ＧＰＩＦＲ）的基因转染细胞（ＦＲα·ＴＲＶＢ－... 用胆固醇合成抑制剂Ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ（洛伐他汀，暂译名）和神经鞘脂类合成抑制剂ＦｕｍｏｎｉｓｉｎＢ１（抑鞘脂素Ｂ１，暂译名）处理能表达糖基化磷脂酰肌醇锚定叶酸受体（ＧＰＩＦＲ）的基因转染细胞（ＦＲα·ＴＲＶＢ－１）３ｄ，发现前者可使细胞的胆固醇含量减少约３５％，而后者可使神经鞘脂类减少４４％以上；同时发现，处理组细胞结合叶酸的能力减少约４０％，其对５－甲基四氢叶酸的摄入率减少逾８０％．这主要是由于细胞质膜中胆固醇和神经鞘脂类含量减少，从而导致膜内ＧＰＩＦＲ结合叶酸功能降低及ＧＰＩＦＲ摄入叶酸的内化过程障碍所致． 展开更多
关键词 叶酸受体 类脂 基因转染细胞 叶酸摄取
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人B7-H4基因转染细胞的构建及其对T细胞的共刺激效应的初步研究 被引量：4
11
作者 毛一香 王勤 +5 位作者 陈洁 陈永井 施勤 杨明峰 李文香 张学光 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期609-613,共5页
目的构建含有人B7H4基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达B7H4基因的L929细胞并初步研究其对T细胞的共信号作用及可能机制。方法从含人B7H4基因的cDNA序列FLJ22418中,采用PCR扩增出B7H4全长基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZHATerm,... 目的构建含有人B7H4基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达B7H4基因的L929细胞并初步研究其对T细胞的共信号作用及可能机制。方法从含人B7H4基因的cDNA序列FLJ22418中,采用PCR扩增出B7H4全长基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZHATerm,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72h后,经Zeocin筛选出稳定表达B7H4蛋白的L929细胞株;采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析免疫分子的表达、3HTdR掺入检测细胞增殖以及ELISA测定细胞因子的水平。结果构建了含人B7H4基因的重组逆转录病毒载体和获得含有B7H4基因的重组病毒,筛选获得能稳定高表达人B7H4蛋白的L929转基因细胞;该转基因细胞对T细胞体外具有抑制增殖、活化和细胞因子分泌的作用。结论构建了稳定表达人B7H4蛋白的细胞株,B7H4分子在体外通过抑制T细胞分泌IL2和促进其凋亡作用可显著地下调T细胞功能的效应。 展开更多
关键词 B7-H4 共抑制分子 逆转录病毒 稳定表达 抑制 T细胞功能 基因转染细胞 步研究 重组逆转录病毒载体 刺激效应
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人CD48基因转染细胞株的构建 被引量：2
12
作者 田辛辛 葛彦 +8 位作者 袁桦 蔡文治 杨鹏 蒋林华 殷丽丽 张弛 孙雪薇 居颂文 居颂光 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第4期527-530,共4页
目的克隆人CD48基因,构建稳定表达CD48分子的基因转染细胞株。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人CD48基因,将人CD48基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,进而感... 目的克隆人CD48基因,构建稳定表达CD48分子的基因转染细胞株。方法提取人外周血单个核细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人CD48基因,将人CD48基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,进而感染L929细胞,构建稳定表达人CD48分子的基因转染细胞株。结果成功克隆人CD48基因和构建PGEZ/CD48逆转录病毒表达载体,进而成功获得稳定表达人CD48的基因转染细胞株L/CD48。结论成功克隆了人CD48基因及其逆转录表达载体,并构建了稳定表达CD48分子的基因转染细胞株,为探讨CD48生物学功能的研究奠定了物质基础。 展开更多
关键词 CD48 逆转录表达载体 基因转染细胞株
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用荧光定量PCR方法检测转染细胞中外源基因的拷贝数 被引量：6
13
作者 李影 何蕴韶 +1 位作者 程刚 李虎 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期8-10,共3页
【目的】探讨采用荧光定量PCR技术检测脑源性神经营养因子 (BDNF)基因转染细胞 (PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO)中BDNF的拷贝数。【方法】分别以同等质量的PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO ,PcDNA3 1(+) /CHO(空载体转染细胞 )及CHO细胞的DNA为模板 ,在P... 【目的】探讨采用荧光定量PCR技术检测脑源性神经营养因子 (BDNF)基因转染细胞 (PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO)中BDNF的拷贝数。【方法】分别以同等质量的PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO ,PcDNA3 1(+) /CHO(空载体转染细胞 )及CHO细胞的DNA为模板 ,在PE5 70 0PCR仪上进行荧光定量PCR分析。每个样本共检测 30次 ,结果采用 q检验分析。【结果】PcDNA3 1(+) /BDNF/CHO细胞、PcDNA3 1(+) /CHO和CHO细胞株中BDNF的拷贝数分别为 95 16 4± 12 ,316 2 2± 10 ,316 2 2± 11。q检验结果显示前者与后两者之间有统计学意义 ,P <0 .0 5 ,而后两者之间无统计学意义 ,即 P >0 .0 5。PcDNA 3 1(+) /BDNF/CHO细胞株中BDNF的拷贝数是后二者的 3倍 ,而后两者的拷贝数相同。【结论】BDNF转染细胞株中外源BDNF基因是以 2个拷贝的比例整合到宿主细胞基因组中去的。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 转染 拷贝数 基因转染细胞 BDNF 基因诊断
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人CD244基因转染细胞株的构建 被引量：1
14
作者 袁桦 葛彦 +6 位作者 杨鹏 蒋林华 殷丽丽 张弛 孙雪薇 居颂文 居颂光 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第4期531-534,共4页
目的构建稳定表达人CD244分子转基因细胞株。方法通过RT-PCR克隆人CD244基因,将人CD244基因重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。将重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/CD244和辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,收集含有完整重组逆... 目的构建稳定表达人CD244分子转基因细胞株。方法通过RT-PCR克隆人CD244基因,将人CD244基因重组入逆转录病毒表达载体pEGZ-Term。将重组逆转录病毒载体pEGZ-Term/CD244和辅助病毒载体用脂质体法共转染包装细胞293T,收集含有完整重组逆转录病毒颗粒的293T细胞培养上清感染L929细胞,筛选获得Zeocin抗性的基因转染细胞。结果成功克隆人CD244基因,并稳定表达人CD244的基因转染细胞株L929/CD244。结论本研究成功构建了稳定表达人CD244的基因转染细胞株,为研究CD244生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 CD244 基因转染细胞
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丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6基因转染肝癌细胞的基因表达谱芯片分析 被引量：29
15
作者 刘妍 成军 +4 位作者 李克 杨倩 陆荫英 王琳 王建军 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第4期394-398,共5页
目的:筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白基因,并对新基因转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制。方法:应用酵母双杂交技术,以HCV的核心蛋白作为“诱饵(bait)”,筛选鉴定与其... 目的:筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白基因,并对新基因转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制。方法:应用酵母双杂交技术,以HCV的核心蛋白作为“诱饵(bait)”,筛选鉴定与其结合的肝细胞中蛋白的编码基因。应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析其中筛选得到的人HCV核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)基因的全长编码序列,并构建HCBP6基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HCBP6。应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-HCBP6转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测。结果:通过酵母双杂交技术的筛选和鉴定,结合生物信息学分析,确定人的HCBP6基因由456 nt组成,编码152 aa的蛋白。基因表达谱芯片所检测的1 152条目的基因均为GenBank中登录的基因,HCBP6表达质粒转染的细胞有20条差异表达基因,其中13条基因表达增强,7条基因表达降低。这些差异表达的基因与细胞信号转导、增生、分化及生长调节密切相关。结论:酵母双杂交技术结合生物信息学技术,是克隆蛋白结合蛋白的有效方法,基因表达谱芯片技术对于初步全面探索新基因的功能提供重要的资料。本实验结果为进一步阐明HCV核心蛋白与Hcbp6相互作用后的肝细胞生物大分子变化提供了理论依据。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白结合蛋白6 基因转染肝癌细胞 肝细胞结合蛋白基因 基因表达谱 核心蛋白
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基因转染真核细胞的应用及3种常用非病毒转染方法的优化 被引量：3
16
作者 蒋惠男 严云勤 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2004年第3期63-64,共2页
关键词 转基因技术 畜牧兽医 哺乳动物细胞 DNA 磷酸钙沉淀法 电穿孔法 脂质体转染法 基因转染真核细胞
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Rspo1基因转染间充质干细胞株的构建及生物学活性鉴定
17
作者 陆婷 葛彦 +5 位作者 邓云 陈伟 宋莉 曹莎莎 居颂文 居颂光 《中国血液流变学杂志》 CAS 2013年第4期592-595,622,共5页
目的：构建稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株。方法将人Rspo1全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-Term，通过与辅助病毒载体共转染293T细胞，包装为具有感染力的完整重组病毒载体，收集培养上清感染间充质干细胞C3H10 T1/2细胞株... 目的：构建稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株。方法将人Rspo1全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-Term，通过与辅助病毒载体共转染293T细胞，包装为具有感染力的完整重组病毒载体，收集培养上清感染间充质干细胞C3H10 T1/2细胞株，筛选获得G418抗性的基因转染细胞，通过RT-PCR与流式细胞术检测感染后C3H10 T1/2细胞Rspo1分子的表达，并采用细胞计数法观察其上清对SW480结肠癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建pEGZ-Term/Rspo1逆转录病毒表达载体，获得了稳定表达人Rspo1的基因转染细胞株C3H10/Rspo1，该细胞株上清能促进SW480结肠癌细胞增殖。结论建立了稳定表达Rspo1的基因转染间充质干细胞株，为进一步利用Rspo1和间充质干细胞靶向作用于肠道干细胞救治肠上皮损伤的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Rspo1 间充质干细胞 基因转染细胞
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三种阳离子脂质体介导血管内皮细胞基因转染效率的比较 被引量：1
18
作者 童仁联 杨黎 +5 位作者 张金明 邹海燕 张璇 梁佩红 戴丽冰 李叶扬 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第33期6561-6564,共4页
目的:评价不同阳离子脂质体介导基因转染血管内皮细胞的转染效率。方法:实验于2006-12/2007-02在中山大学生化实验室及广州市创伤外科研究所完成。采用增强型绿色荧光蛋白基因为报告基因,分别采用Lipofectin、Lipofectamine、Dosper3种... 目的:评价不同阳离子脂质体介导基因转染血管内皮细胞的转染效率。方法:实验于2006-12/2007-02在中山大学生化实验室及广州市创伤外科研究所完成。采用增强型绿色荧光蛋白基因为报告基因,分别采用Lipofectin、Lipofectamine、Dosper3种不同的阳离子脂质体为载体,转染人脐静脉血管内皮细胞。在24孔板中,每孔加入人脐静脉血管内皮细胞悬液(1×106个细胞),各孔分别加入3种不同阳离子脂质体增强型绿色荧光蛋白质粒复合物,分别于培养24,48h后用荧光显微镜及流式细胞仪测定增强型绿色荧光蛋白在细胞内的表达及转染效率。结果:3种不同阳离子介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染的人脐静脉血管内皮细胞内均有绿色荧光蛋白表达,24h后明显,48h后达高峰。Dosper介导组绿色荧光细胞百分比明显高于Lipofectin介导组及Lipofectamine介导组,差异有非常显著意义(P<0.01)。结论:Dosper介导的血管内皮细胞基因转染效率较高,较适合作为血管内皮细胞的基因转染载体。 展开更多
关键词 Dosper介导的血管内皮细胞基因转染效率较高 较适合作为血管内皮细腕的基因转染载体
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转染肝细胞生长因子基因对CCl_4损伤人肝细胞株的保护作用
19
作者 何勇 周峻 +1 位作者 窦科峰 陈勇 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第3期348-349,共2页
关键词 转染肝细胞生长因子基因 CCl4损伤 肝细胞株 保护作用 四氯化碳
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5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞应激损伤的保护作用
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作者 廖曾珍 李明新 +2 位作者 王凌峰 王凯旋 陈薇 《西北药学杂志》 CAS 2019年第6期766-770,共5页
目的探究5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞(APPsw细胞)氧化应激损伤的保护作用。方法将APPsw细胞传代培养24 h后,加入不同浓度(0.01,0.1,1.0和10μmol·L^-1)的A7预处理24 h,再加入200μmol... 目的探究5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞(APPsw细胞)氧化应激损伤的保护作用。方法将APPsw细胞传代培养24 h后,加入不同浓度(0.01,0.1,1.0和10μmol·L^-1)的A7预处理24 h,再加入200μmol·L^-1过氧化氢(H 2 O 2)继续培养24 h,用MTT法检测细胞活性,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7可剂量依赖性地增加过氧化氢处理后的细胞活力,经不同浓度的A7预处理后,加过氧化氢处理组的细胞活性明显低于对应单独A7处理组的细胞活性,但均高于单独过氧化氢处理组的细胞活性,差异具有统计学意义(P<0.05)。经不同浓度A7预处理后,加过氧化氢处理组与过氧化氢组比较细胞核中荧光显著变暗。过氧化氢组细胞早凋率为42.4%,A7(0.01,0.1,1.0和10μmol·L^-1)预处理24 h后加过氧化氢处理组细胞早凋率分别为22.7%,19.9%,16.4%和15.9%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导APPsw细胞的氧化应激损伤具有保护作用,可抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7 阿尔茨海默病 转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞 氧化应激 凋亡
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