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增加革兰阴性菌外膜囊泡产量的研究进展
1
作者 刘灿 闫晓阳 +2 位作者 曾焱 欧祥龙 廖永洪 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期100-108,共9页
外膜囊泡(OMVs)是由革兰阴性菌释放的一种囊泡状结构,在革兰阴性菌的生长、感染以及与周围环境交流等过程中发挥重要作用。由于OMVs无活性、不能复制且具有良好的免疫原性,被广泛应用于新型疫苗的研究。但天然OMVs产量低,无法达到规模... 外膜囊泡(OMVs)是由革兰阴性菌释放的一种囊泡状结构,在革兰阴性菌的生长、感染以及与周围环境交流等过程中发挥重要作用。由于OMVs无活性、不能复制且具有良好的免疫原性,被广泛应用于新型疫苗的研究。但天然OMVs产量低,无法达到规模化生产的要求,OMVs产量提升是OMVs疫苗产业化要解决的关键核心技术问题。本文主要从细菌基因改造、生长培养条件优化和OMVs生产纯化工艺优化3个方面对提升OMVs产量的研究进行综述,以期为OMVs疫苗产业化研究开发提供参考。 展开更多
关键词 外膜囊泡 疫苗开发 生物发生机制 产量增加机制
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细菌外膜囊泡结构、分泌特性及致病机制
2
作者 高远集 刘畅 +9 位作者 陈淼 陈松彪 张俊峰 李静 贾艳艳 廖成水 郭荣显 丁轲 余祖华 尚珂 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期971-983,共13页
外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)是革兰阴性菌在生长过程中释放到胞外的囊泡状结构,被认为是细菌的“远程武器”,其功能主要是攻击宿主组织并帮助细菌定植、损害宿主细胞功能、调节宿主的防御,因此OMVs在细菌致病过程中发挥着... 外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)是革兰阴性菌在生长过程中释放到胞外的囊泡状结构,被认为是细菌的“远程武器”,其功能主要是攻击宿主组织并帮助细菌定植、损害宿主细胞功能、调节宿主的防御,因此OMVs在细菌致病过程中发挥着重要作用。囊泡中的物质通过与细菌释放出的自诱导物化学信号分子结合,可以驱使细菌或者囊泡在内环境中发挥特殊功能,如群体感应、生物膜形成、获取营养、抗生素抗性、应激反应、对抗其它微生物的竞争或防御、微生物群落状态、核酸转移、水平基因转移、毒素和毒力因子的递送等,且在细菌生长周期发挥着不可或缺的作用。本文主要综述OMVs结构、分泌特性及其致病机制的最新研究进展,为深入研究细菌的致病机制以及开发新的抗菌策略提供理论指导。 展开更多
关键词 细菌 外膜囊泡 结构 分泌特性 致病机制
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伤寒沙门菌外膜囊泡通过调控铁死亡抑制结直肠癌细胞的增殖及机制初探
3
作者 戈艺潼 吉滢 +3 位作者 曾敏敏 郑学明 黄新祥 张盈 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期214-223,共10页
近年来,细菌外膜囊泡(OMVs)在抗肿瘤治疗中展现出的巨大潜力引起了广泛的关注.为探究伤寒沙门菌外膜囊泡(S.Typhi-OMVs)对人结直肠癌细胞株HT-29增殖的影响及可能的作用机制,通过超速离心法提取不同细菌的OMVs,细胞增殖实验(CCK-8)检测... 近年来,细菌外膜囊泡(OMVs)在抗肿瘤治疗中展现出的巨大潜力引起了广泛的关注.为探究伤寒沙门菌外膜囊泡(S.Typhi-OMVs)对人结直肠癌细胞株HT-29增殖的影响及可能的作用机制,通过超速离心法提取不同细菌的OMVs,细胞增殖实验(CCK-8)检测各细菌OMVs对细胞活力的影响;转录组测序(RNA-seq)分析处理后细胞基因表达水平的变化;试剂盒检测铁死亡相关标志物的含量变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(western blot)分别检测相关基因mRNA和蛋白质的表达变化.结果显示,在提取的6种细菌OMVs中,S.Typhi-OMVs对HT-29细胞的增殖产生了最明显的抑制作用,并且呈现出浓度和时间梯度依赖性;RNA-seq显示HT-29细胞可能发生了铁死亡;S.Typhi-OMVs作用后,细胞内发生了铁沉积,氧化产物增多,抗氧化剂减少,符合铁死亡生化特征;SAT1是S.Typhi-OMVs处理后HT-29胞内mRNA表达量变化最大的基因;p53-SAT1-ALOX15是铁死亡的信号通路之一,S.Typhi-OMVs处理后胞内p53、SAT1、ALOX15的mRNA与蛋白表达均增高.以上结果表明,S.Typhi-OMVs能够抑制结直肠癌细胞HT-29的增殖,其机制可能与通过p53-SAT1-ALOX15信号通路诱导HT-29发生铁死亡有关. 展开更多
关键词 铁死亡 外膜囊泡 伤寒沙门菌 结直肠癌 细胞增殖
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细菌外膜囊泡应用于肿瘤治疗
4
作者 王云锋 庄婉茹 +2 位作者 马宪彬 聂伟东 谢海燕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第2期309-327,共19页
细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是由革兰氏阴性菌分泌的纳米囊泡,主要由细菌外膜和周质成分组成,因此表面富集的病原体相关分子模式(PAMPs)使OMVs能激起强烈的免疫反应。在抗肿瘤研究中,OMVs主要被用于抗肿瘤药物的递送,... 细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是由革兰氏阴性菌分泌的纳米囊泡,主要由细菌外膜和周质成分组成,因此表面富集的病原体相关分子模式(PAMPs)使OMVs能激起强烈的免疫反应。在抗肿瘤研究中,OMVs主要被用于抗肿瘤药物的递送,不仅能增加药物的肿瘤富集还能激活免疫反应协同杀伤肿瘤;同时,OMVs也用于开发肿瘤疫苗的佐剂,可显著提高免疫响应的能力。本综述主要概括了OMVs的生物发生机理、OMVs对宿主免疫系统的影响及其在肿瘤治疗中的研究进展。 展开更多
关键词 细菌外膜囊泡 肿瘤治疗 递送载体 肿瘤疫苗
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HdeA在细菌外膜囊泡环境下的原位NMR研究
5
作者 王欢 陶志清 +4 位作者 姜国胜 张许 王冠 禾立春 刘买利 《波谱学杂志》 CAS 2024年第1期1-8,共8页
HdeA是一种定位于细菌周质的分子伴侣,在维持蛋白质稳态中起着重要的作用.以往对HdeA的研究主要是在体外条件下进行,限制了人们对HdeA在天然环境下发挥作用机制的理解.细菌外膜囊泡是细菌自发分泌到胞外环境的外膜囊泡,其内容物与周质... HdeA是一种定位于细菌周质的分子伴侣,在维持蛋白质稳态中起着重要的作用.以往对HdeA的研究主要是在体外条件下进行,限制了人们对HdeA在天然环境下发挥作用机制的理解.细菌外膜囊泡是细菌自发分泌到胞外环境的外膜囊泡,其内容物与周质环境相似.本研究将HdeA富集到细菌外膜囊泡(OMVs)中,通过核磁共振波谱研究HdeA在OMVs中的构象变化.结果表明,HdeA在其原位环境中表现出酸依赖性的构象变化.在低pH条件下HdeA主要通过S15、W16、T17、S27、T32、E36、G54、T57、C66、Q71、F74及D83等残基启动其分子伴侣功能.此外本研究也为原位研究其它周质分子伴侣的功能提供了新方法. 展开更多
关键词 原位核磁共振波谱 HdeA 外膜囊泡 分子伴侣
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细菌外膜囊泡在疫苗领域的应用研究进展
6
作者 吴娅芳 胡展驰 +1 位作者 王毅 权春善 《工业微生物》 CAS 2024年第1期100-106,共7页
细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是一种由革兰阴性菌在生长过程中分泌的纳米球状颗粒,通过释放毒力因子、调控宿主免疫反应、外排抗生素等途径参与细菌感染性疾病的发生过程。由于OMVs携带大量细菌组分,如蛋白质、脂质、遗... 细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是一种由革兰阴性菌在生长过程中分泌的纳米球状颗粒,通过释放毒力因子、调控宿主免疫反应、外排抗生素等途径参与细菌感染性疾病的发生过程。由于OMVs携带大量细菌组分,如蛋白质、脂质、遗传物质等,可以有效激活免疫系统,具有作为疫苗、疫苗佐剂以及优良外源抗原载体的潜力,可用于传染性疾病预防疫苗和肿瘤免疫治疗疫苗的开发研制过程中。随着医药和生物技术等高新产业的迅速发展,现有疫苗都被发现存在不同的缺陷,亟需一种能够同时保证安全性与有效性的疫苗,由此可见,外膜囊泡疫苗具有良好的应用前景。本文就细菌外膜囊泡的生物合成、结构组分、生物学作用及其在疫苗领域的应用等各个方面的研究进行综述分析,为进一步推动细菌外膜囊泡疫苗的研发提供了一定的理论基础和借鉴价值。 展开更多
关键词 细菌外膜囊泡 生成机制 疫苗 佐剂 药物递送
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革兰氏阴性菌外膜囊泡在抗肿瘤治疗中的应用
7
作者 徐冰洋 秦艺铭 +2 位作者 董晨欢 赵轩 林晨韬 《中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生》 2024年第3期0185-0188,共4页
外膜囊泡( outer membrane vesicle ,OMV) 是革兰氏阴性菌分泌出的一种直径为20~300 nm的球形双层膜纳米结构囊泡。由磷脂、脂多糖、肽聚糖、蛋白质和核酸等组成。近年来,OMV在抗肿瘤免疫治疗中展现了独特的机制,在肿瘤免疫、肿瘤疫苗... 外膜囊泡( outer membrane vesicle ,OMV) 是革兰氏阴性菌分泌出的一种直径为20~300 nm的球形双层膜纳米结构囊泡。由磷脂、脂多糖、肽聚糖、蛋白质和核酸等组成。近年来,OMV在抗肿瘤免疫治疗中展现了独特的机制,在肿瘤免疫、肿瘤疫苗和载药等方面具有良好前景。本文从OMV 的结构、产生与摄取机制和在抗肿瘤治疗中的应用等方面概述了OMV抗肿瘤治疗现状,讨论了该研究领域的未来方向,为将来OMV的临床应用提供参考。 展开更多
关键词 革兰氏阴性菌外膜囊泡 抗肿瘤 治疗效果
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布鲁氏菌外膜囊泡生物信息学分析及免疫原性评价 被引量：1
8
作者 徐朕宇 徐锦凤 +9 位作者 邓肖玉 王月丽 何金科 谢珊珊 王震 易继海 王勇 苗玉和 崔丽瑾 陈创夫 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2906-2914,共9页
【目的】探索布鲁氏菌外膜囊泡(OMVs)在亚单位疫苗上的应用前景,制备布鲁氏菌OMVs亚单位疫苗,评估布鲁氏菌OMVs的免疫原性。【方法】利用高速离心法制备羊种布鲁氏菌OMVs,通过透射电镜、SDS-PAGE和生物信息学分析对制备的OMVs进行形态... 【目的】探索布鲁氏菌外膜囊泡(OMVs)在亚单位疫苗上的应用前景,制备布鲁氏菌OMVs亚单位疫苗,评估布鲁氏菌OMVs的免疫原性。【方法】利用高速离心法制备羊种布鲁氏菌OMVs,通过透射电镜、SDS-PAGE和生物信息学分析对制备的OMVs进行形态和组分分析;使用纳米佐剂(LDH)和弗氏佐剂乳化OMVs后免疫小鼠,通过间接ELISA方法检测免疫后7、14、21、28和35 d小鼠血清中的特异性抗体,利用小鼠IgG ELISA检测试剂盒检测免疫后小鼠血清中IgG抗体水平,评估OMVs诱导产生的体液免疫水平;通过小鼠脾脏淋巴细胞分离与细胞因子白细胞介素4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)测定及小鼠外周血T淋巴细胞亚群的流式细胞术测定评估OMVs免疫小鼠的细胞免疫水平。【结果】成功提取并纯化了布鲁氏菌OMVs,其直径大小为20~160 nm。生物信息学分析结果显示,OMVs主要组成蛋白OMP25、OMP31、OMP16、OMP19、BP26及SOD均属于亲水性蛋白和抗原性蛋白,且存在多个B细胞和T细胞优势抗原表位。与PBS组相比,OMVs免疫小鼠后,不同佐剂组均可诱导小鼠产生高水平的特异性抗体和IgG抗体(P<0.01);同时OMVs可显著诱导小鼠脾脏淋巴细胞产生IFN-γ(P<0.05),并促进了CD4^(+)T细胞的表达(P<0.05)。【结论】本研究证实了羊种布鲁氏菌OMVs具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生强烈的体液免疫和细胞免疫反应,为布鲁氏菌新型亚单位疫苗的开发奠定了理论基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 外膜囊泡(OMVs) 免疫原性
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具核梭杆菌来源的外膜囊泡对口腔上皮细胞闭合蛋白Claudin-4表达的影响 被引量：1
9
作者 杨成龙 杨蒙 +3 位作者 王宇峰 宋晨成 杜观环 唐国瑶 《上海口腔医学》 CAS 北大核心 2023年第2期126-131,共6页
目的:探讨具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,F.n)分泌的外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)对人口腔角质形成细胞(human oral keratinocytes,HOK)闭合蛋白Claudin-4表达及其对口腔上皮屏障功能的影响。方法:厌氧条件下培养具核... 目的:探讨具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,F.n)分泌的外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)对人口腔角质形成细胞(human oral keratinocytes,HOK)闭合蛋白Claudin-4表达及其对口腔上皮屏障功能的影响。方法:厌氧条件下培养具核梭杆菌,透析法提取OMVs。采用Nanosight及透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)对提取的OMVs进行表征分析。OMVs以不同质量浓度(0~100μg/mL)刺激HOK 12 h,并以100μg/mL OMVs刺激HOK 6、12 h,采用实时转录PCR和蛋白质印迹法分析闭合蛋白Claudin-4在基因和蛋白水平的表达;倒置荧光显微镜观察HOK与OMVs共定位以及Claudin-4蛋白的定位分布。利用Transwell上室体外构建人口腔上皮屏障,采用跨膜电阻测量仪(EVOM2)检测屏障跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TER),以异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD-4)渗透率评估屏障通透性。采用GraphPad Prism 8.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与对照组相比,OMVs刺激组HOK中Claudin-4在蛋白水平和基因水平表达均显著降低(P<0.05)。免疫荧光显示,细胞间Claudin-4的荧光连续性表达被破坏。与对照组相比,OMVs刺激可降低口腔上皮屏障的TER值(P<0.05),提高FD-4的透过率(P<0.05)。结论:具核梭杆菌来源的OMVs能通过抑制闭合蛋白Claudin-4表达,损伤口腔黏膜上皮的屏障功能。 展开更多
关键词 口腔扁平苔藓 上皮屏障功能 具核梭杆菌 外膜囊泡 CLAUDIN-4
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革兰氏阴性菌外膜囊泡在抗肿瘤治疗中的研究进展
10
作者 李一帆 王丹 +6 位作者 王瑞琳 费冰 刘莹 任彦颖 郭梦雨 刘心伟 李永伟 《现代检验医学杂志》 CAS 2023年第4期201-204,共4页
革兰氏阴性菌释放的细胞外囊泡源于细胞最外层膜,被称为外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs),含有磷脂、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、外膜蛋白(outer membrane proteins,OMPs)和细菌特异性抗原等细菌外膜成分。鉴于OMVs的纳米... 革兰氏阴性菌释放的细胞外囊泡源于细胞最外层膜,被称为外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs),含有磷脂、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、外膜蛋白(outer membrane proteins,OMPs)和细菌特异性抗原等细菌外膜成分。鉴于OMVs的纳米中空结构、高度的免疫原性以及有效激活宿主免疫系统等功能,其作为免疫佐剂、肿瘤免疫治疗剂及抗肿瘤药物递送载体和肿瘤疫苗方面具有良好的应用前景。从OMVs的结构组成、形成机制和抗肿瘤应用等方面综述OMVs进行靶向和免疫治疗肿瘤的潜力,为临床上抗肿瘤治疗开发新的策略。 展开更多
关键词 外膜囊泡 肿瘤靶向治疗 肿瘤免疫 药物载体 肿瘤疫苗
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不同培养条件下伤寒沙门菌外膜囊泡对结直肠癌细胞增殖的影响
11
作者 曾敏敏 吉滢 +4 位作者 王雨柔 戈艺潼 郑学明 孟苒 黄新祥 《微生物与感染》 CAS 2023年第4期219-226,共8页
为探讨不同培养条件下伤寒沙门菌外膜囊泡(outer membrane vesicle,OMV)对结直肠癌细胞增殖的影响,本研究采用超速离心法分别提取伤寒沙门菌在正常、酸性、高渗、氧化环境LB液体培养基及LPM液体培养基中分泌的OMV,并比较其形态、粒径及... 为探讨不同培养条件下伤寒沙门菌外膜囊泡(outer membrane vesicle,OMV)对结直肠癌细胞增殖的影响,本研究采用超速离心法分别提取伤寒沙门菌在正常、酸性、高渗、氧化环境LB液体培养基及LPM液体培养基中分泌的OMV,并比较其形态、粒径及所含蛋白大小。体外培养结直肠癌HT-29、SW480及CT-26细胞,采用CCK-8实验检测OMV对结直肠癌细胞增殖的影响,并用克隆形成实验进一步验证;采用流式细胞术检测细胞周期;通过统计体重及肝、肾组织苏木精-伊红染色切片评价OMV在小鼠体内的毒性。结果显示,不同培养条件下伤寒沙门菌分泌的OMV在形态、大小方面无明显差异,高渗应激环境下分泌的OMV更多。OMV所含蛋白相对分子质量在正常和酸性环境LB液体培养基中为37×10^(3)~72×10^(3),在高渗和氧化环境LB液体培养基中为25×10^(3)~72×10^(3),在LPM液体培养基中为8×10^(3)~55×10^(3)。LPM培养条件下OMV能显著抑制SW480和CT-26细胞的增殖,将SW480细胞周期阻滞于G2/M期,且对小鼠无明显肝、肾毒性。结果表明,LPM培养条件下OMV对结直肠癌细胞SW480、CT-26增殖具有直接抑制作用,有望成为结直肠癌治疗的新方案。 展开更多
关键词 结直肠癌 伤寒沙门菌 外膜囊泡 增殖 细胞周期
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大肠埃希菌外膜囊泡对乳腺癌细胞增殖及荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
12
作者 王斓茜 马官荣 +3 位作者 姜咏竹 常秀林 方廖琼 白晋 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1245-1254,共10页
目的·分析大肠埃希菌外膜囊泡(Escherichia coli outer membrane vesicle,E.coli-OMV)在体外对小鼠4T1乳腺癌细胞增殖的影响,在体内对BALB/c-4T1荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法·从E.coli的培养上清液中收集OMV并进行表征... 目的·分析大肠埃希菌外膜囊泡(Escherichia coli outer membrane vesicle,E.coli-OMV)在体外对小鼠4T1乳腺癌细胞增殖的影响,在体内对BALB/c-4T1荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法·从E.coli的培养上清液中收集OMV并进行表征。采用荧光标记追踪法检测E.coli-OMV被4T1细胞摄入的情况。采用CCK-8法测定E.coli-OMV对4T1细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测E.coli-OMV对4T1细胞周期的影响。利用皮下接种法建立BALB/c-4T1荷瘤小鼠模型,而后将小鼠分为E.coli-OMV组与对照(Control)组(每组10只);前者于每2 d注射0.25 mg/kg E.coli-OMV,后者则注射等剂量的PBS。观察2组小鼠的体质量、40 d生存率、肿瘤体积及质量变化,采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,H-E染色)评价肿瘤组织的病理学形态,采用免疫组织化学染色法观察肿瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)与细胞周期蛋白D1 (CyclinD1)的表达情况。结果·E.coli-OMV是粒径为(216.00±18.30) nm的球形膜囊结构,可表达E.coli外膜蛋白A (outer membrane protein A,OmpA)与OmpC。荧光显微镜的观察结果显示4T1细胞可摄入E.coli-OMV。CCK-8法的结果显示,E.coli-OMV对4T1细胞的抑制作用与时间-剂量呈正相关。流式细胞术的结果显示,E.coli-OMV将4T1细胞的生长周期阻滞于G0/G1期。体内实验显示,与Control组相比,E.coli-OMV组小鼠的体质量在初期注射后稍有下降(P=0.031),而后出现回升;其40 d生存率增加(P=0.037);该组小鼠肿瘤的体积、质量的增长量均较少(P=0.041,P=0.004),其肿瘤体积抑制率达29.69%、肿瘤质量抑制率达49.81%。H-E染色的结果显示,E.coli-OMV组小鼠肿瘤组织细胞核分裂象较Control组减少(P=0.038)。免疫组织化学染色的结果显示,E.coli-OMV组小鼠肿瘤组织中的PCNA及CyclinD1阳性表达较Control组减少(P=0.031,P=0.002)。结论·体外研究与体内研究均表明,E.coli-OMV可对4T1细胞的增殖产生明显的抑制作用。 展开更多
关键词 细菌外膜囊泡 乳腺癌 细胞周期 抑瘤作用
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坏死杆菌外膜囊泡诱导羊中性粒细胞自噬和NLRP3炎性小体的研究
13
作者 毕栏 赵鹏宇 +3 位作者 王天硕 于思雯 肖佳薇 郭东华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1272-1278,共7页
为探究坏死杆菌(Fn)外膜囊泡(OMV)对羊中性粒细胞自噬及NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体激活的影响,本研究提取并纯化Fn OMV,经透射电子显微镜观察并测定纯度后,以5μg/mL的OMV刺激羊中性粒细胞1 h、2 h、4 h、6 h,以未刺激的细胞作为对... 为探究坏死杆菌(Fn)外膜囊泡(OMV)对羊中性粒细胞自噬及NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体激活的影响,本研究提取并纯化Fn OMV,经透射电子显微镜观察并测定纯度后,以5μg/mL的OMV刺激羊中性粒细胞1 h、2 h、4 h、6 h,以未刺激的细胞作为对照组,经姬姆萨染色和倒置光学显微镜观察羊中性粒细胞形态。电镜观察可见OMV为球形囊泡状结构且纯度较高。姬姆萨染色结果显示,细胞为典型的杆状核和分叶核样中性粒细胞。光学显微镜观察结果显示,对照组羊中性粒细胞为圆形,而5μg/mL OMV刺激组细胞出现细胞肿胀、体积变大变形的现象,且刺激2 h~6 h上述细胞变化更明显。采用荧光定量RT-PCR检测OMV刺激后的羊中性粒细胞中炎性小体相关基因NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18,自噬相关基因mTOR、Beclin 1、MAP1LC3B、P62 mRNA的相对转录水平。结果显示,与对照组相比,OMV刺激1 h时GSDMD mRNA的相对转录水平极显著升高(P<0.0001),其他炎性小体相关基因mRNA的相对转录水平无显著变化;刺激2 h时GSDMD mRNA的相对转录水平显著下降(P<0.05),炎性小体相关基因NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA的相对转录水平均显著升高(P<0.05);刺激4 h和6 h时GSDMD mRNA的相对转录平极显著下降(P<0.0001),NLRP3、IL-1βmRNA的相对转录水平均显著升高(P<0.05),Caspase-1、IL-18 mRNA的相对转录水平均无显著变化。自噬相关基因mTOR、Beclin 1、MAP1LC3B、P62 mRNA的相对转录水平在不同刺激时间后均显著升高(P<0.05)。上述结果表明,5μg/mL的Fn OMV刺激羊中性粒细胞2 h可激活NLRP3炎性小体;5μg/mL的Fn OMV可在基因水平上启动羊中性粒细胞自噬并形成自噬小体。本研究为Fn的致病机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 坏死杆菌 外膜囊泡 NLRP3炎性小体 自噬
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细菌外膜囊泡介导水平基因转移机制研究进展
14
作者 李俊 李倩茹 +3 位作者 吉星 何涛 魏瑞成 王冉 《国外医药（抗生素分册）》 CAS 2023年第3期178-184,共7页
细菌可以通过多种水平基因转移方式,如自然转化、转导、接合等,在微生物种群内交换遗传物质,进行细菌种内和种间交流。外膜囊泡是新发现的一种水平基因转移方式,它是细菌在自然生长过程中分泌的纳米级球状结构,可以作为载体携带核酸、... 细菌可以通过多种水平基因转移方式,如自然转化、转导、接合等,在微生物种群内交换遗传物质,进行细菌种内和种间交流。外膜囊泡是新发现的一种水平基因转移方式,它是细菌在自然生长过程中分泌的纳米级球状结构,可以作为载体携带核酸、酶、毒素和毒力因子等多种生物分子进行远距离运输。目前已有多项研究报道了细菌外膜囊泡的组成成分、生物合成和转移传播机制。本文就外膜囊泡在水平基因转移机制方面的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 细菌 外膜囊泡 生物发生 水平基因转移 耐药性 毒力
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外膜囊泡疫苗LPS减毒改造的研究进展
15
作者 闫晓阳 刘灿 +4 位作者 曾焱 欧祥龙 付利芝 杨柳 廖永洪 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1444-1452,共9页
外膜囊泡是革兰阴性菌分泌的球形纳米颗粒,丰富的抗原组分和独特的结构赋予其良好的免疫原性和佐剂活性。因此,外膜囊泡被广泛用于疫苗开发。然而,细菌培养液及外膜囊泡中含有的脂多糖会导致外膜囊泡疫苗纯化成本高且伴有炎性反应引起... 外膜囊泡是革兰阴性菌分泌的球形纳米颗粒,丰富的抗原组分和独特的结构赋予其良好的免疫原性和佐剂活性。因此,外膜囊泡被广泛用于疫苗开发。然而,细菌培养液及外膜囊泡中含有的脂多糖会导致外膜囊泡疫苗纯化成本高且伴有炎性反应引起的毒性,从而限制了其进一步的应用。随着脂多糖分子免疫识别机制的揭示和基因工程技术的进步,科学家提出遗传修饰亲本菌以实现脂多糖减毒的策略,从而降低外膜囊泡的纯化成本和副作用。文中将对外膜囊泡疫苗减毒研究中的脂多糖遗传改造思路和进展进行综述,以期为外膜囊泡疫苗的开发提供参考。 展开更多
关键词 外膜囊泡 疫苗 脂多糖 减毒
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细菌外膜囊泡调节免疫细胞功能活动的研究进展
16
作者 马东雪 石俊 +2 位作者 蒲星羽 王鑫 韩顶立 《生物医学》 CAS 2023年第2期178-183,共6页
外膜囊泡(OMV)是一种来源于革兰氏阴性菌的纳米级大小的球形蛋白脂质体。OMVS可以运输多种化学成分,包括脂类、脂多糖、膜包埋的相关蛋白和小分子、肽聚糖和核酸,特别是粘附素和毒素等毒力因子通常在OMV中富集。OMVs在细菌与宿主细胞间... 外膜囊泡(OMV)是一种来源于革兰氏阴性菌的纳米级大小的球形蛋白脂质体。OMVS可以运输多种化学成分,包括脂类、脂多糖、膜包埋的相关蛋白和小分子、肽聚糖和核酸,特别是粘附素和毒素等毒力因子通常在OMV中富集。OMVs在细菌与宿主细胞间沟通、微生物毒力和调节细菌群落内的微生物相互作用以及调节宿主免疫反应方面发挥着不同的作用。它们在细菌培养和感染过程中无处不在地产生,现在被认为在宿主与细菌的相互作用中发挥着关键作用。在这里,我们着重讨论了OMVs对宿主免疫细胞的影响作用,重点介绍它们对各类免疫细胞所做出的免疫功能调节的研究现状。 展开更多
关键词 细菌外膜囊泡 免疫应答 巨噬细胞 中性粒细胞 树突状细胞
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鲍曼不动杆菌外膜囊泡诱发人单⁃核巨噬细胞THP⁃1的炎性反应
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作者 付士祥 席月 +4 位作者 丁龙坤 闫曼 赵俊 焦玉东 吴亮 《基础医学与临床》 2023年第1期110-115,共6页
目的建立超速离心法纯化鲍曼不动杆菌外膜囊泡(OMVs),并探讨OMVs诱发人单核-巨噬细胞THP-1炎性反应能力。方法大量培养鲍曼不动杆菌标准菌株,从培养液上清中以超速离心法提纯OMVs并以透射电镜观察形态。分别以5和50μg/mL的OMVs与THP-1... 目的建立超速离心法纯化鲍曼不动杆菌外膜囊泡(OMVs),并探讨OMVs诱发人单核-巨噬细胞THP-1炎性反应能力。方法大量培养鲍曼不动杆菌标准菌株,从培养液上清中以超速离心法提纯OMVs并以透射电镜观察形态。分别以5和50μg/mL的OMVs与THP-1细胞共培养,RT-qPCR检测NOD样受体家族蛋白(NLRP3)和caspase-1表达量;ELISA检测培养液上清中IL-1β含量;蛋白质印迹法检测细胞自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1表达量;酶促动力学法检测细胞caspase-3酶活性;流式细胞测量术检测细胞活性氧表达量。结果成功提纯鲍曼不动杆菌OMVs。OMVs可以诱导THP-1细胞NLRP3炎性复合体活化,并增加自噬相关蛋白LC-3Ⅱ和Beclin-1表达量(P<0.05),以及上调凋亡关键因子caspase-3酶活性(P<0.05)。共培养1 h时,OMVs可以显著上调THP-1细胞活性氧表达(P<0.05)。结论鲍曼不动杆菌OMVs可以显著活化巨噬细胞NLRP3炎性复合体。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 外膜囊泡 炎性反应 自噬 凋亡
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革兰氏阴性病原菌外膜囊泡的生物学作用与机制研究进展
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作者 李春玲 柯海意 +4 位作者 徐民生 卞志标 张昆丽 李艳 翟少伦 《广东农业科学》 CAS 2023年第7期1-10,共10页
外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMV)是兰氏阴性菌分泌的纳米样颗粒。OMV呈球状双层膜结构,直径为20~250 nm大小。其主要由细菌的外膜成分构成,其中病原菌分泌的OMV包括与致病相关的多种成分,如非蛋白抗原脂多糖、脂质、蛋白质粘附... 外膜囊泡(Outer membrane vesicles,OMV)是兰氏阴性菌分泌的纳米样颗粒。OMV呈球状双层膜结构,直径为20~250 nm大小。其主要由细菌的外膜成分构成,其中病原菌分泌的OMV包括与致病相关的多种成分,如非蛋白抗原脂多糖、脂质、蛋白质粘附素、侵袭素、毒素等致病因子。病原菌OMV还含有细菌的DNA、RNA、sRNA和质粒等核酸,是革兰氏阴性菌的一种新型分泌系统,与致病性、耐药基因的存储和传播、细菌间及细菌-宿主间通信串扰等一系列功能紧密相关。病原菌OMV的分泌与应激反应有关。OMV作为毒力因子、耐药基因或质粒、抗原分子等生物活性物质的载体递送至宿主细胞,直接导致疫病的发生或加剧病情。在作用机制方面,OMV通过动力依赖性内吞将毒素转运至宿主细胞、介导耐药基因水平转移、通过增加分泌量减少噬菌体入侵病原菌,或保护来源菌、周围细菌免受膜活性物质侵害、影响,以及诱导细菌感染部位甚至远部组织免疫相关细胞的免疫反应、激活炎症反应通路、介导宿主细胞死亡及代谢重构等。鉴于OMV在细菌致病、耐药性产生、宿主生理屏障(肠黏膜屏障、肠血管屏障、血脑屏障)破坏及生态位失衡、免疫功能异常等方面发挥的多种生物学功能,深入了解其相关生物学作用和潜在的分子机制,对探索人和动物细菌病的致病机制、耐药机理、开展药物靶向递送系统研发及新型疫苗创制等防控新策略具有重要意义。重点对OMV在革兰氏阴性病原菌致病过程中的作用及分子机制相关研究进展进行综述,并对其应用进行展望。 展开更多
关键词 革兰氏阴性病原菌 外膜囊泡 致病性 生物学作用 分泌系统
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两种提取铜绿假单胞菌外膜囊泡的方法比较 被引量：6
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作者 张佳星 沈犁 +3 位作者 华子瑜 刘岚 周薇 姜俊如 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期279-282,共4页
目的对两种方法提取的铜绿假单胞菌(PA)的外膜囊泡(OMV)的纯度、产量及外毒素A(ETA)含量进行比较。方法分别采取超滤浓缩法和Optiprep密度梯度离心法提取PA的OMV,负染电镜检测形态及纯度;BCA法检测两种方法提取的OMV产量并用Western blo... 目的对两种方法提取的铜绿假单胞菌(PA)的外膜囊泡(OMV)的纯度、产量及外毒素A(ETA)含量进行比较。方法分别采取超滤浓缩法和Optiprep密度梯度离心法提取PA的OMV,负染电镜检测形态及纯度;BCA法检测两种方法提取的OMV产量并用Western blotting对OMV中所含ETA进行比较;建立OMV感染人肺癌上皮细胞A549模型并检测IL-8表达水平。结果超滤浓缩法提取的OMV中存在明显的细胞碎片、鞭毛等杂质,产量为21.3μg/1010个细菌,密度梯度离心提取的OMV无明显杂质存在,产量为48.7μg/1010个细菌;相比于超滤浓缩法,密度梯度离心法提取的OMV中含有更高浓度的ETA且诱导A549细胞产生更高水平的IL-8。结论 Optiripe密度梯度离心法提取的PA的OMV的产量和纯度和ETA含量以及激活宿主细胞炎性应答的能量均高于超滤浓缩法。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外膜囊泡 超滤浓缩 密度梯度离心 外毒素A IL-8
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细菌外膜囊泡(OMV)研究进展 被引量：6
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作者 周舒扬 张丕奇 +1 位作者 戴肖东 赵晓宇 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2021年第6期83-89,共7页
外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMV)是在细菌生命活动中不断从细菌细胞表面脱离而形成的功能性囊泡,其内部含有蛋白质、脂质和核酸等成分,具有多种特殊的生物学功能,在细菌-细菌和细菌-宿主相互作用中起着关键作用。虽然大多数OMV... 外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMV)是在细菌生命活动中不断从细菌细胞表面脱离而形成的功能性囊泡,其内部含有蛋白质、脂质和核酸等成分,具有多种特殊的生物学功能,在细菌-细菌和细菌-宿主相互作用中起着关键作用。虽然大多数OMV的研究都是关于动物病原菌,但最近OMV在植物-细菌相作领域的作用已逐渐被揭示。围绕OMV的发现、产生、成分,以及在发病和应激过程中,特别是OMV在植物-细菌相作中生物学功能的相关研究进展进行阐述,为细菌外膜囊泡的分子机理与应用研究提供思路,并为广泛开展微生物外膜囊泡的研究提供参考。 展开更多
关键词 外膜囊泡 外泌体 细胞间通讯 免疫反应 细菌
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