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副溶血性弧菌外膜蛋白BamA重组表达及其免疫原性分析 被引量：1
1
作者 刘建欣 刘蕾 +2 位作者 郭珊珊 袁倩云 王文彬 《江苏农业科学》 北大核心 2022年第15期43-50,共8页
副溶血性弧菌外膜蛋白BamA是β-桶组装BAM复合物的核心成分,参与细胞外膜蛋白运送和安装过程,是潜在的新型靶标抗原,目前其在免疫检测抗原和疫苗中的潜在价值尚未有研究报道。本研究通过生物信息学软件SnapGene和Protean分析BamA的序列... 副溶血性弧菌外膜蛋白BamA是β-桶组装BAM复合物的核心成分,参与细胞外膜蛋白运送和安装过程,是潜在的新型靶标抗原,目前其在免疫检测抗原和疫苗中的潜在价值尚未有研究报道。本研究通过生物信息学软件SnapGene和Protean分析BamA的序列并筛选出多肽,采用PCR扩增出外膜蛋白BamA的基因片段,构建重组质粒pET-28a(+)-BamA;经大肠杆菌BL21诱导表达BamA重组蛋白(90ku);多肽与BSA偶联,制备的抗原免疫BALB/c小鼠制备了血清。采用酶联免疫分析(ELISA)和蛋白质印迹法(Westernblot)测定BamA蛋白及多肽免疫血清对24株弧菌的交叉反应。ELISA测定结果表明,免疫血清对BamA蛋白的效价在121K以上,对副溶血性弧菌等弧菌的效价较弱(0.5K);免疫印迹结果显示,BamA蛋白血清与副溶血性弧菌CICC21617、CICC21618、杀岩龙虾弧菌和非O1型霍乱弧菌等弧菌属细胞裂解物中90ku左右的蛋白可发生特异性反应,而对费氏另类弧菌、嗜水气单胞菌和迟缓爱德华氏菌等非弧菌属无交叉反应。弧菌外膜蛋白BamA具有弧菌属保守性并可以诱导产生弧菌特异性抗体,多肽在菌体表面的暴露性可能受到其他抗原的影响,这给后续弧菌诊断抗原和疫苗抗原研究提供了依据。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 外膜蛋白bama 重组表达 免疫原性 ELISA 免疫印迹
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