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黄芩苷对多杀性巴氏杆菌感染猪巨噬细胞后炎症因子表达及信号通路影响的研究
1
作者 刘静 周红蕾 +4 位作者 戈文 徐一天 张一多 王丽华 安东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期78-83,共6页
为研究不同浓度黄芩苷对多杀性巴氏杆菌(Pm)HN-13株感染的猪巨噬细胞(HD11)内炎症因子表达的影响及与炎症信号通路的相互作用关系,本研究采用western blot检测HN-13株感染(0、30 min、60 min、90 min)HD11细胞中促分裂原活化蛋白激酶(MA... 为研究不同浓度黄芩苷对多杀性巴氏杆菌(Pm)HN-13株感染的猪巨噬细胞(HD11)内炎症因子表达的影响及与炎症信号通路的相互作用关系,本研究采用western blot检测HN-13株感染(0、30 min、60 min、90 min)HD11细胞中促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路3个关键蛋白(p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK)的表达水平;采用ELISA和荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)分析检测低浓度剂量黄芩苷(L组,20μmol/L)、中浓度剂量黄芩苷(M组,40μmol/L)和高浓度剂量黄芩苷(H组,60μmol/L)对Pm感染的猪巨噬细胞内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β分泌水平及其m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)和模型组(HN-13);利用抑制剂SCH772984阻断ERK通路,采用ELISA和RT-qPCR检测黄岑苷对Pm感染的HD11细胞内炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达及m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)、模型组(HN-13)、抑制组(HN-13+抑制剂)。结果显示:与HN-13株处理0 min组相比,随着感染时间的延长,HN-13株感染HD11细胞中p-ERK/ERK的蛋白表达量逐渐升高(P<0.01),而p-p38/p38和p-JNK/JNK蛋白表达量均未发生显著变化(P>0.05),表明,HN-13株可使HD11细胞炎症相关ERK通路蛋白表达增强,且与作用时间呈正相关。与模型组(HN-13)相比,3个浓度剂量的黄芩苷均显著抑制TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌水平及m RNA转录水平(P<0.05),且抑制作用随着黄芩苷浓度升高而增强。与抑制组相比,黄芩苷与抑制剂共处理组可以显著抑制HN-13感染的HD11细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌及m RNA转录水平(P<0.05)。综上所述,黄芩苷可以抑制Pm感染的HD11细胞中ERK通路相关蛋白的表达和分泌,进而发挥抗炎作用。本研究为研制防治Pm引起的猪肺疫的新药提供了思路。 展开更多
关键词 黄芩苷 多杀性巴氏杆菌 猪巨噬细胞 炎症表达 MAPK信号通路
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鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
2
作者 郭伟娜 王紫苇 +1 位作者 马佰贺 王旋 《安徽科技学院学报》 2024年第1期1-6,共6页
目的:从疑似禽霍乱的4只病死鸭的病料中分离并鉴定多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),并通过药敏试验筛选敏感药物用于治疗。方法:无菌采集肝脏组织病料,接种至普通营养琼脂、麦康凯及血琼脂培养基上进行病原菌的培养、分离纯化... 目的:从疑似禽霍乱的4只病死鸭的病料中分离并鉴定多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm),并通过药敏试验筛选敏感药物用于治疗。方法:无菌采集肝脏组织病料,接种至普通营养琼脂、麦康凯及血琼脂培养基上进行病原菌的培养、分离纯化;对纯化后的分离菌进行革兰染色、镜检,提取其核酸作为模板,进行16S rRNA基因的PCR鉴定;圆纸片扩散试验测定分离菌株对18种抗菌药物的敏感程度。结果:在血琼脂培养基上分离菌株表现为稍微隆起、表面光滑、湿润、灰白色、露珠样、半透明的圆形菌落,但在普通营养琼脂和麦康凯培养基上不生长。革兰染色镜检显示分离菌为一种革兰染色阴性、菌体两端着色深、中间着色较浅的球状短小杆菌。PCR扩增16S rRNA出现1 500 bp的目的条带,其序列分析与Pm菌株Q的16S rRNA基因的相似性为99.86%;药敏试验表明,分离菌株对米诺环素敏感性最高,抑菌圈直径达19 mm,对四环素、强力霉素、庆大霉素、氨苄西林、头孢哌酮表现中度敏感,其他药物均为耐药。结论:本研究从一例疑似禽霍乱的病死鸭中分离鉴定出1株多杀性巴氏杆菌,分离菌株对米诺环素较为敏感,建议用于临床治疗。 展开更多
关键词 鸭源 多杀性巴氏杆菌 分离 鉴定 药敏试验
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绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌的生物学特性及2种候选疫苗的免疫效果评价
3
作者 汪阳 张凌 +8 位作者 金映红 汪萍 薛晶 梁芊芊 李晓卓 郑启铭 刘文锴 韩翔舒 夏俊 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第4期108-116,共9页
旨在研究新疆绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌(PmD)的生物学特性,探索其灭活疫苗与OmpH重组疫苗对小鼠的免疫保护效果,为防控新疆地区绵羊巴氏杆菌病提供参考。采用细菌分离鉴定、PCR鉴定、药敏试验、耐药与毒力基因检测、致病性试验... 旨在研究新疆绵羊源荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌(PmD)的生物学特性,探索其灭活疫苗与OmpH重组疫苗对小鼠的免疫保护效果,为防控新疆地区绵羊巴氏杆菌病提供参考。采用细菌分离鉴定、PCR鉴定、药敏试验、耐药与毒力基因检测、致病性试验等方法初步明确PmD的生物学特性;并通过最佳灭活条件和佐剂筛选、安全性试验、原核表达等方法制备PmD灭活疫苗与PmD-OmpH重组疫苗,采取小鼠攻毒保护试验评价2种疫苗的免疫效力。结果:从绵羊肺脏中分离出1株PmD,药敏试验显示,该菌为7重耐药菌,未检测到耐药基因;毒力基因检测显示,该菌具有12种毒力基因(exbB、exbD、hgbA、tonB、fimA、Oma87、OmpH、Psl、sodA、sodC、tbpA、toxA);致病性较强,对小鼠的最小致死菌量为2.2×105 CFU;灭活疫苗和重组疫苗对相同血清型菌株攻毒的保护率分别为80%和10%;灭活疫苗对血清型A、F和未知菌株攻毒保护率分别为0、20%和0,而重组疫苗的保护率则全为0。本研究发现1株强耐药、强毒力的绵羊源PmD,灭活疫苗对同种血清型菌株的保护性远高于重组疫苗,发病地区羊场可采用同种血清型灭活疫苗进行预防和控制绵羊巴氏杆菌病,对多价疫苗和新型疫苗的研制还有待进一步发掘。 展开更多
关键词 绵羊 荚膜血清D型 多杀性巴氏杆菌 生物学特性 灭活疫苗 OmpH蛋白 重组疫苗
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肉鸡圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌混合感染的检测与分析
4
作者 庄丽云 雷天宇 +8 位作者 戴婷婷 吴玲玲 朱金玲 廖悦辰 牛群 包银莉 黄翠琴 戴爱玲 郑新添 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期18-23,共6页
为查明福建省龙岩市某鸡场肉鸡消瘦、呼吸困难、病死率升高原因,对发病鸡进行细菌分离鉴定、16S rDNA鉴定、荚膜分型检测、药物敏感试验等分析;以及进行病毒核酸PCR检测、遗传进化分析。结果显示,从病鸡中分离的细菌在血平板上形成圆形... 为查明福建省龙岩市某鸡场肉鸡消瘦、呼吸困难、病死率升高原因,对发病鸡进行细菌分离鉴定、16S rDNA鉴定、荚膜分型检测、药物敏感试验等分析;以及进行病毒核酸PCR检测、遗传进化分析。结果显示,从病鸡中分离的细菌在血平板上形成圆形、微突起、表面光滑、奶油状的菌落;分离菌16S rDNA核苷酸序列与GenBank中公布的多杀性巴氏杆菌的同源性达到99.9%以上,菌株荚膜为A型;该菌对哌拉西林、头孢氨苄、庆大霉素等药物均表现为高度敏感;从病鸡中检测出圆圈病毒3型(GyV3)VP2基因,与GenBank(登录号MK089248)GyV3同源性最高(99.9%)。结果表明,该鸡场发生圆圈病毒3型和A型多杀性巴氏杆菌引起的混合感染病例。 展开更多
关键词 圆圈病毒3型 多杀性巴氏杆菌 混合感染 病原学分析
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禽多杀性巴氏杆菌检验用菌种的研究
5
作者 冯妍 张一帜 +4 位作者 王秀丽 王甲 刘燕 姚文生 任小侠 《中国兽药杂志》 2024年第1期13-17,共5页
为研究禽多杀性巴氏杆菌类兽用生物制品效力评价用菌株,制备了一批禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株,并对菌种的形态、生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分及毒力等进行检定,进一步评估了冻干菌菌数的稳定性,对冻干菌... 为研究禽多杀性巴氏杆菌类兽用生物制品效力评价用菌株,制备了一批禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株,并对菌种的形态、生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分及毒力等进行检定,进一步评估了冻干菌菌数的稳定性,对冻干菌与新鲜培养菌液的毒力进行了比较。试验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二○○○版菌种标准的规定。冻干菌菌数保持稳定,并且与新鲜培养的攻毒菌液相比,毒力并无差异。本研究为禽多杀性巴氏杆菌类兽用生物制品效力评价用菌株的制备和检定提供参考依据。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌CVCC44801株 毒力 效力评价
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广东鹅源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定、耐药表型和耐药基因的检测及相关性分析
6
作者 苏文楠 杨智灿 +5 位作者 张美琳 钟嘉诚 陈亦杏 陈济铛 张溢珊 张济培 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期121-127,共7页
为了解广东地区鹅源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行情况、药物敏感性、耐药基因的携带情况以及耐药表型与耐药基因的相关性,本实验对2019年~2022年从广东地区采集的193份疑似感染Pm病鹅的心脏血液和肝脏组织划线接种于不同的培养基分离细菌,... 为了解广东地区鹅源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行情况、药物敏感性、耐药基因的携带情况以及耐药表型与耐药基因的相关性,本实验对2019年~2022年从广东地区采集的193份疑似感染Pm病鹅的心脏血液和肝脏组织划线接种于不同的培养基分离细菌,对分离菌纯化后采用PCR扩增分离菌的KMT1基因并测序,采用多重PCR扩增分离菌的5个荚膜基因及8个脂多糖基因,分析分离菌的荚膜分型与脂多糖(LPS)分型。结果显示分离到83株鹅源Pm,其中82株为荚膜A型,1株无法通过荚膜定型;LPS分型为L1型。采用K-B纸片扩散法检测分离菌的药物敏感性;通过PCR检测分离菌7类药物的15种耐药基因,包括β-内酰胺类(bla_(CTX-M)、bla_(TEM)、bla_(OXA))、氨基糖苷类(aadA1、aph(3’)Ila)、喹诺酮类(qnrA、qnrB、qnrS)、酰胺醇类(floR)、四环素类(tetM、tetX)、大环内酯类(ermF、ereD)、磺胺类(sul1、sul3)耐药基因。采用统计学软件SPSS22中的完全随机设计两样本率的卡方检验分析分离菌的耐药表型和相应耐药基因的相关性。药敏试验结果显示,83株鹅源Pm对多种药物敏感性较高,其中对喹诺酮类的环丙沙星和氧氟沙星、氨基糖苷类的丁胺卡那和大观霉素、β-内酰胺类的头孢曲松、磺胺类的复方新诺明、大环内酯类的阿奇霉素敏感的菌株占比均在63%以上;对氨基糖苷类的链霉素和卡那霉素耐药的菌株占比高于50%,对氨基糖苷类的新霉素和四环素类的四环素耐药的菌株分别占49.40%(41/83)和46.99%(39/83)。耐药基因的检测结果显示,分离菌检出耐药基因qnrB、sul3、blaTEM、aadA1、aph(3’)Ila、ereD、ermF、tetM、floR,检出率分别为9.63%(8/94)、27.71%(23/83)、28.92%(24/83)、48.19%(40/83)、14.46%(12/83)、49.40%(41/83)、3.61%(3/83)、1.20%(1/83)、32.53%(27/83),未检出耐药基因qnrA、qnrS、sul1、tetX、bla_(CTX-M)、bla_(OXA)。相关性分析结果显示,aadA1基因与Pm对新霉素、链霉素、卡那霉素、大观霉素的耐药性具有极显著的相关性(P<0.001);bla_(CTX-M)基因、floR基因分别与Pm对头孢拉定、氟苯尼考的耐药性具有显著相关性(P<0.05)。上述结果表明,广东地区鹅源Pm主要为A∶L1基因型,对多种药物敏感,耐药基因携带率不高,部分药物的耐药表型与耐药基因具有相关性。本研究为广东地区鹅源Pm病的监测和防治提供参考依据,为Pm耐药机制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 药物敏感性试验 耐药基因
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异丙氧苯胍与黏菌素联用对多杀性巴氏杆菌的体内外抗菌作用
7
作者 薛雅茜 谯薇美 +4 位作者 洪晓欣 金宇航 陆毅兴 彭险峰 曾振灵 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期820-828,共9页
[目的]研究异丙氧苯胍与黏菌素联用对多杀性巴氏杆菌的体内外抗菌作用,为开发有效的新型黏菌素增效剂及临床防治多杀性巴氏杆菌病提供数据支持。[方法]通过微量肉汤稀释法测定异丙氧苯胍与黏菌素对多杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度,再通过... [目的]研究异丙氧苯胍与黏菌素联用对多杀性巴氏杆菌的体内外抗菌作用,为开发有效的新型黏菌素增效剂及临床防治多杀性巴氏杆菌病提供数据支持。[方法]通过微量肉汤稀释法测定异丙氧苯胍与黏菌素对多杀性巴氏杆菌的最小抑菌浓度,再通过棋盘法联合药敏试验和时间杀菌曲线评价异丙氧苯胍与黏菌素联用对多杀性巴氏杆菌的体外抗菌作用,并进一步通过建立小鼠肺部感染多杀性巴氏杆菌模型来评价两者联用的体内抗菌效果。[结果]药敏试验结果显示,异丙氧苯胍对多杀性巴氏杆菌无抗菌作用(MIC>256μg/mL),黏菌素对受试菌株的最小抑菌浓度范围为1~8μg/mL。联合药敏试验结果显示,异丙氧苯胍与黏菌素联用时能增强黏菌素的抗菌活性(分级抑菌浓度指数在0.094~0.313),表现出良好的协同抗菌作用。体外时间杀菌曲线结果进一步表明,联合用药组可显著降低细菌数量,当亚抑菌浓度(0.5μg/mL)的黏菌素与异丙氧苯胍联用时即可达到杀菌效果。在小鼠肺部感染模型中,与黏菌素或异丙氧苯胍单药组相比,异丙氧苯胍与黏菌素联合组能显著或极显著降低小鼠肺部多杀性巴氏杆菌的载菌量(P<0.05或P<0.01)。HE染色观察小鼠肺脏病理组织切片发现,异丙氧苯胍与黏菌素联合组小鼠肺脏的肺泡结构正常,肺泡腔清洁,优于异丙氧苯胍和黏菌素单独用药组。[结论]异丙氧苯胍与黏菌素联合使用可增强黏菌素对多杀性巴氏杆菌的体内外抗菌效果,有望进一步开发成为新型抗菌增效剂。 展开更多
关键词 异丙氧苯胍 黏菌素 联合用药 多杀性巴氏杆菌 抗菌作用
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牛源多杀性巴氏杆菌与支原体双重PCR 检测方法的建立
8
作者 冯明祥 姜玲玲 +3 位作者 周景瑞 冉江 余波 李蓉蓉 《上海畜牧兽医通讯》 2024年第2期17-23,共7页
为建立一种快速、准确、简便的多杀性巴氏杆菌与牛支原体双重PCR检测方法,参照GenBank中多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列和牛支原体oppD/F基因序列设计2对引物,以2种病原的单重PCR的扩增体系和条件为基础,对双重PCR的退火温度、引物用量、... 为建立一种快速、准确、简便的多杀性巴氏杆菌与牛支原体双重PCR检测方法,参照GenBank中多杀性巴氏杆菌kmt1基因序列和牛支原体oppD/F基因序列设计2对引物,以2种病原的单重PCR的扩增体系和条件为基础,对双重PCR的退火温度、引物用量、模板用量进行优化,分析所建立的双重PCR方法的特异性、敏感性和重复性,并将其应用于屠宰场273份疑似多杀性巴氏杆菌、牛支原体感染牛的肺脏组织样品验证。结果表明:所建立的双重PCR检测方法对多杀性巴氏杆菌和牛支原体具有特异性;双重PCR体系混合质粒的最低检测质量浓度为1.25×10-6 ng/μL,敏感性高;间隔2周的2次检测结果一致,重复性好;273份屠宰场样品的双重PCR检测结果与单重PCR检测结果符合率为100%。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 牛支原体 双重PCR 检测
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1株羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及病原特性研究
9
作者 张蕾 陈亮 +13 位作者 金振华 冯万宇 苗艳 兰世捷 秦平伟 沈思思 李丹 张备 董佳强 黄宣凯 李旭业 江波涛 王洪宝 史同瑞 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期347-356,共10页
【目的】确定齐齐哈尔市某羊场育成绵羊发病和死亡的病原菌,并探究其病原学特性,为该病的有效防治提供科学依据。【方法】无菌采集病死羊肺脏组织,结合临床病征进行实验室诊断,分离培养病原菌。通过形态学观察、生化试验、16S rRNA PCR... 【目的】确定齐齐哈尔市某羊场育成绵羊发病和死亡的病原菌,并探究其病原学特性,为该病的有效防治提供科学依据。【方法】无菌采集病死羊肺脏组织,结合临床病征进行实验室诊断,分离培养病原菌。通过形态学观察、生化试验、16S rRNA PCR扩增并测序、kmtⅠ基因鉴定、荚膜血清分型、毒力基因检测、药敏试验、耐药基因检测和小鼠致病性试验对分离菌进行鉴定和病原特性分析。【结果】致病菌株为多杀性巴氏杆菌,分离菌在血平板上长出表面光滑、灰白色的圆形凸起菌落,革兰染色可见聚集成线状或散在单个的革兰阴性短杆菌。生化试验结果显示,该菌能发酵麦芽糖、阿拉伯糖、蔗糖、木糖、葡萄糖、果糖、海藻糖、甘露醇、尿素酶、山梨醇和β-半乳糖苷酶,精氨酸、靛基质试验呈阳性。荚膜血清分型结果显示,分离株为多杀性巴氏杆菌荚膜D型。药敏试验结果显示,分离株对恩诺沙星、杆菌肽和洛美沙星3种药物耐药,对新霉素等4种药物表现为中介,对氨苄西林等16种药物敏感。分离株携带14种毒力基因和6种耐药基因。小鼠感染分离菌后全部死亡。【结论】本研究成功分离到1株D型多杀性巴氏杆菌菌株,其携带多种毒力基因和耐药基因,对小鼠具有较强致病性,研究结果为探究羊源多杀性巴氏杆菌的生物学信息和病原学特征提供了数据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 分离鉴定 毒力基因 耐药性 致病性
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宁夏地区肉牛和滩羊多杀性巴氏杆菌流行调查分析
10
作者 郭亚男 王建东 +2 位作者 张正刚 马科 陈建银 《动物医学进展》 北大核心 2024年第5期126-131,共6页
为了掌握宁夏地区肉牛和滩羊主要养殖区多杀性巴氏杆菌(P.multocida)流行情况,采集了宁夏同心县、盐池县、原州区等8个县(区)24个规模化养殖场共计382份肉牛和滩羊鼻拭子,通过病原分离及分子生物学检测鉴定病原体,并采用Taq Man实时荧... 为了掌握宁夏地区肉牛和滩羊主要养殖区多杀性巴氏杆菌(P.multocida)流行情况,采集了宁夏同心县、盐池县、原州区等8个县(区)24个规模化养殖场共计382份肉牛和滩羊鼻拭子,通过病原分离及分子生物学检测鉴定病原体,并采用Taq Man实时荧光定量PCR检测方法进行荚膜血清分型分析。结果显示,共分离和鉴定到77株P.multocida,总阳性率为20.2%(77/382),各地区阳性率在12.7%~34.3%之间,其中灵武市阳性率最高(34.3%),同心县阳性率最低(12.7%)。分型结果显示,荚膜血清A型44株(57%),荚膜血清B型29株(38%),荚膜血清D型4株(5%)。在不同月龄之间肉牛和滩羊多杀性巴氏杆菌发病主要集中在3~8月龄,感染率13%以上。研究结果为宁夏地区肉牛和滩羊P.multocida的预防和治疗提供了基础数据。 展开更多
关键词 肉牛 滩羊 多杀性巴氏杆菌 流行 调查
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多杀性巴氏杆菌耐药机制研究进展
11
作者 车笑吟 闫满 沙万里 《家畜生态学报》 北大核心 2024年第3期88-91,共4页
多杀性巴氏杆菌属于革兰氏阴性杆菌,能感染多种宿主,可引起禽霍乱、猪萎缩性鼻炎、猪肺疫、牛羊及兔的出血性败血症。随着抗生素的广泛使用,该病原菌的耐药性也在逐年增加。近几年的研究中更是经常发现部分病原菌会对β-内酰胺类、大环... 多杀性巴氏杆菌属于革兰氏阴性杆菌,能感染多种宿主,可引起禽霍乱、猪萎缩性鼻炎、猪肺疫、牛羊及兔的出血性败血症。随着抗生素的广泛使用,该病原菌的耐药性也在逐年增加。近几年的研究中更是经常发现部分病原菌会对β-内酰胺类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类、氯霉素类、磺胺类抗生素产生较强的耐药性。本文就多杀性巴氏杆菌对6类抗生素的药物敏感性及耐药机制进行了总结,为新药的研究以及新型疗法的建立提供理论依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 耐药性 耐药机制
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鸭多杀性巴氏杆菌抗体检测胶体金试纸条的研制及应用 被引量：3
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作者 程龙飞 陈红梅 +6 位作者 傅光华 江南松 傅秋玲 万春和 黄瑜 刘荣昌 施少华 《动物医学进展》 北大核心 2023年第6期65-69,共5页
为建立快速检测鸭血清多杀性巴氏杆菌抗体的方法,将兔抗鸭IgG标记胶体金,喷涂金标垫,用浓度为0.2 mg/mL的荚膜和0.2 mg/mL羊抗兔IgG抗体分别作为检测线和质控线,制备了检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条(D-CGTS)。特异性试验显示... 为建立快速检测鸭血清多杀性巴氏杆菌抗体的方法,将兔抗鸭IgG标记胶体金,喷涂金标垫,用浓度为0.2 mg/mL的荚膜和0.2 mg/mL羊抗兔IgG抗体分别作为检测线和质控线,制备了检测鸭多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条(D-CGTS)。特异性试验显示,仅鸭抗多杀性巴氏杆菌血清检测为阳性,阴性血清、鸭抗大肠埃希氏菌、鸭抗鸭疫里默氏菌、鸭抗沙门氏菌和鸭抗金黄色葡萄球菌血清的检测结果均为阴性,表明D-CGTS的特异性良好。敏感性试验结果显示,对效价1∶16(琼脂扩散试验)的鸭抗多杀性巴氏杆菌血清1∶320倍稀释后采用制备的试纸条检测结果仍为阳性,表明D-CGTS的敏感性较高。重复性试验结果显示,同批次的不同试纸条和不同批次的试纸条,检测阴性血清和鸭抗多杀性巴氏杆菌血清的结果相同,表明D-CGTS的重复性好。对92份鸭血清采用D-CGTS和ELISA进行检测,结果显示,阳性符合率为94.03%,阴性符合率为100%,总符合率为95.65%。结果表明,制备的D-CGTS操作简单,具有较强的特异性、较高的敏感性和较好的重复性,适合在兽医临床推广应用。 展开更多
关键词 鸭 多杀性巴氏杆菌 胶体金试纸条 荚膜
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兔源F型多杀性巴氏杆菌荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：1
13
作者 王锦祥 林松华 +5 位作者 陈冬金 孙世坤 陈岩锋 高承芳 桑雷 谢喜平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期156-160,共5页
为建立特异性强且敏感性高的兔源F型多杀性巴氏杆菌(Pm)快速检测方法,本实验根据F型Pm fcbD基因的保守序列设计特异性引物和探针,经反应条件优化,建立了检测兔源F型Pm的荧光定量PCR方法。利用该方法检测兔源F型Pm、兔源A和D型Pm、支气... 为建立特异性强且敏感性高的兔源F型多杀性巴氏杆菌(Pm)快速检测方法,本实验根据F型Pm fcbD基因的保守序列设计特异性引物和探针,经反应条件优化,建立了检测兔源F型Pm的荧光定量PCR方法。利用该方法检测兔源F型Pm、兔源A和D型Pm、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、魏氏梭菌和金黄色葡萄球菌等临床常见兔源病原菌,结果显示,该方法仅对兔源F型Pm检测为阳性,其余病原菌均为阴性,特异性强。利用该方法分别检测10倍倍比稀释(1×10^(8)拷贝/μL~1×10^(0)拷贝/μL)的兔源F型Pm基因组DNA,进行敏感性试验,结果显示该方法的检测限为10拷贝/μL,敏感性分别是已报导的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的100倍和10倍,敏感性高。利用该方法对不同稀释度的质粒标准品进行批内和批间重复性试验,结果显示,批内和批间变异系数均小于3%,重复性好。利用该方法检测64份已知结果的临床样品,结果显示该方法的检测结果与已报导的双重PCR方法和环介导等温扩增方法检测结果的符合率均为100%,准确性高。本研究首次以fcbD为靶基因建立兔源F型Pm的荧光定量PCR检测方法,为兔源F型Pm的检测提供了有力的技术手段。 展开更多
关键词 兔 F型多杀性巴氏杆菌 fcbD基因 荧光定量PCR方法
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兔源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量：3
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作者 郭伟娜 赵霞 路振香 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期59-62,共4页
为了对疑似感染巴氏杆菌的病死兔进行病原的分离、鉴定并分析其耐药情况,本试验对送检的病死兔进行剖检,结合传统分离培养及16S rRNA和荚膜抗原A(capA)基因的PCR扩增等鉴定病原菌,PCR方法扩增其23个毒力基因,最后进行药敏试验。结果显示... 为了对疑似感染巴氏杆菌的病死兔进行病原的分离、鉴定并分析其耐药情况,本试验对送检的病死兔进行剖检,结合传统分离培养及16S rRNA和荚膜抗原A(capA)基因的PCR扩增等鉴定病原菌,PCR方法扩增其23个毒力基因,最后进行药敏试验。结果显示,分离菌在血琼脂培养基的菌落特征为光滑、湿润、半透明、灰白色、圆形、露珠状,染色镜检可观察到革兰阴性、两端染色较深的红色短杆菌。PCR扩增及测序结果显示,该分离菌株的16S rRNA和capA基因与多杀性巴氏杆菌Q菌株(GenBank登录号:CP033597)同源性分别为99.86%和100%。23个毒力基因中仅pfhA、oma 87、fur、pmHAS基因检测出目的条带,其余19个毒力基因均未检出。该分离菌株对环丙沙星、氧氟沙星、头孢拉定、氨苄西林、卡那霉素、阿米卡星、庆大霉素、红霉素和多黏菌素B共9种药物敏感,对四环素、复方新诺明和克林霉素等耐药。结果表明本试验从病死兔中分离鉴定出1株荚膜血清A型的多杀性巴氏杆菌,可选用环丙沙星和红霉素等进行治疗。该结果可为临床巴氏杆菌病的治疗提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 兔 多杀性巴氏杆菌 分离和鉴定 耐药性
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多杀性巴氏杆菌毒素中保护性抗原肽的筛选
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作者 王怡涤 庞碧寒 +4 位作者 宋吉健 关丽君 薛云 司丽芳 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1279-1286,共8页
为筛选产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其编码基因toxA分为1个全长片段和7个子片段(N端2个、C端5个),设计相应引物,分别经PCR扩增后克隆至pET-28a载体中构建... 为筛选产毒素多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其编码基因toxA分为1个全长片段和7个子片段(N端2个、C端5个),设计相应引物,分别经PCR扩增后克隆至pET-28a载体中构建各重组质粒,分别利用原核表达系统,诱导表达后经SDS-PAGE和western blot检测各重组蛋白的表达情况和反应原性。SDS-PAGE结果显示,正确表达了全长蛋白rPMT,N端rPMT-N1和rPMT-N2,以及C端rPMT-C3~rPMT-C7共8个重组蛋白;各蛋白的表达量占菌体总蛋白的6.29%~33.74%,其中rPMT以可溶性形式表达,rPMT-C5以可溶性和包涵体两种形式表达,其他6个重组蛋白均以包涵体形式表达。Western blot结果显示,8个重组蛋白均具有一定的反应原性,其中PMT C端的重组蛋白rPMT-C3、rPMT-C4、rPMT-C6和rPMT-C7的反应原性较强。因此,分别制备上述PMT C端4个重组蛋白的ISA 201佐剂疫苗,分别对小鼠进行2次免疫,并分别在小鼠首免前和二免后14 d采血、分离血清,通过rPMT-ELISA方法检测各组小鼠的抗体水平;分别以4个不同致死剂量(LD100)的天然PMT对各组小鼠进行腹腔攻毒,统计各重组蛋白制备的亚单位疫苗对小鼠的攻毒保护率。rPMT-ELISA结果显示,二免后各重组蛋白免疫组小鼠的几何平均抗体效价分别为1∶445、1∶37、1∶73和1∶256。攻毒试验结果显示,ISA201佐剂对照组和PBS对照组小鼠均于攻毒后24 h内全部死亡;rPMT-C6疫苗的保护效力最强,4个攻毒剂量对小鼠的免疫保护率均为100%(4/4);其次是rPMT-C7疫苗,除最高剂量(56 LD100)攻毒组死亡1只小鼠外,其他组小鼠均全部存活;rPMT-C3和rPMT-C4疫苗的保护力较弱,在3 LD100和15 LD100攻毒剂量时对小鼠的保护率均为100%,在30 LD100和56 LD100攻毒剂量时对小鼠的保护率分别为25%(1/4)和0。本研究经原核系统表达了PMT全长片段及7个子片段(N端2个、C端5个),首次证实PMT C端重组蛋白rPMT-C6和rPMT-C7具有作为亚单位疫苗保护性抗原的潜力,该结果为T+Pm亚单位疫苗的研发提供了参考依据。 展开更多
关键词 产毒素多杀性巴氏杆菌 toxA 多杀性巴氏杆菌毒素 表达 保护效力
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检测鸡血清多杀性巴氏杆菌抗体的胶体金试纸条的研制与应用
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作者 程龙飞 陈红梅 +6 位作者 江南松 傅光华 傅秋玲 万春和 黄瑜 刘荣昌 施少华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期374-378,共5页
为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术,本研究采用胶体金标记兔抗鸡IgG,制备金标垫,将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔IgG抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结... 为建立快速检测鸡血清多杀性巴氏杆菌(Pm)抗体的胶体金免疫层析技术,本研究采用胶体金标记兔抗鸡IgG,制备金标垫,将重组脂蛋白B(rPlpB)和羊抗兔IgG抗体分别包被于硝酸纤维膜作为检测线和质控线,优化条件后组装成胶体金试纸条(CGTS)。结果显示,胶体金标记兔抗鸡IgG的最佳pH为8.5,最佳标记浓度为7μg/mL;rPlpB和羊抗兔IgG抗体的最佳使用浓度均为0.2 mg/mL。利用该方法检测SPF鸡血清,鸡Pm、鸡大肠杆菌、鸡沙门菌、鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒阳性血清,结果显示仅鸡Pm阳性血清检测为阳性,其他均为阴性,表明CGTS的特异性强。将琼脂扩散(AGP)效价为1∶16的鸡Pm阳性血清2倍倍比稀释后以CGTS检测,结果显示1∶320倍稀释仍检测为阳性,表明CGTS的敏感性较高。检测鸡Pm阳性血清和SPF鸡血清时,同批次不同试纸条之间、不同批次之间均无差异,表明该方法的重复性好。对89份鸡血清采用CGTS和间接ELISA检测,结果显示,二者阳性符合率为91.5%,阴性符合率为100%,总符合率为94.4%。禽霍乱灭活疫苗免疫后14 d,66.7%的鸡采用该方法能够检出抗体阳性,免疫后21 d,所有鸡均检出抗体阳性。本研究首次基于rPlpB建立了检测鸡血清Pm抗体的CGTS方法,该方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好,适合在基层推广,为评价禽霍乱疫苗的免疫效果提供了可行技术。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 胶体金试纸条 重组脂蛋白B
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我国部分地区屠宰生猪弓形虫和多杀性巴氏杆菌感染情况调查
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作者 孙向东 刘晓雷 +8 位作者 刘明远 姚火春 侯璐 胥小辰 赵娜 许颖 张海燕 朱茜 张旗 《中国动物检疫》 CAS 2023年第12期1-4,共4页
为了解我国屠宰生猪弓形虫和多杀性巴氏杆菌感染情况,在河北、内蒙古、广西、四川和贵州等5省份开展现场调查和样品检测。结果显示:屠宰生猪弓形虫抗体阳性率为15.2%(95%CI:7.0%~24.4%),病原学阳性率为7.0%(95%CI:1.7%~11.5%);多杀性巴... 为了解我国屠宰生猪弓形虫和多杀性巴氏杆菌感染情况,在河北、内蒙古、广西、四川和贵州等5省份开展现场调查和样品检测。结果显示:屠宰生猪弓形虫抗体阳性率为15.2%(95%CI:7.0%~24.4%),病原学阳性率为7.0%(95%CI:1.7%~11.5%);多杀性巴氏杆菌病原学阳性率为6.4%(95%CI:1.6%~10.5%)。结果表明:我国屠宰生猪中存在弓形虫和多杀性巴氏杆菌感染,弓形虫感染率更高。部分地区屠宰环节检疫工作存在驻场官方兽医人数不足、外聘人员协检、实验室检测能力待加强等问题,建议尽快改善屠宰场实验室条件,提高屠宰检疫管理水平,明确屠宰场检疫能力建设标准,加快人工智能技术应用,以保障食品安全和公共卫生安全。 展开更多
关键词 屠宰检疫 弓形虫 多杀性巴氏杆菌 感染
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牛多杀性巴氏杆菌病的诊疗措施 被引量：1
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作者 宋晓霞 《畜牧兽医科技信息》 2023年第12期130-132,共3页
牛多杀性巴氏杆菌病的发生与牛的饲养管理、季节变换等有关,并且健康牛在感染后不会立即发病。病原菌主要分布在牛的呼吸道和消化道中,使健康牛成为带菌牛,持续向外部环境中排菌,导致牛多杀性巴氏杆菌病的传播扩散。因此,诊疗该病时要... 牛多杀性巴氏杆菌病的发生与牛的饲养管理、季节变换等有关,并且健康牛在感染后不会立即发病。病原菌主要分布在牛的呼吸道和消化道中,使健康牛成为带菌牛,持续向外部环境中排菌,导致牛多杀性巴氏杆菌病的传播扩散。因此,诊疗该病时要明确牛多杀性巴氏杆菌病的类型及病症表现,结合剖检与实验室诊断手段,准确的识别该病,以便对症施治和用药,提高诊治效果。 展开更多
关键词 牛多杀性巴氏杆菌病 多杀性巴氏杆菌 牛出血性败血症 诊疗措施
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致犊牛肺炎A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及同源性分析
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作者 孟霞 王佳芸 +9 位作者 黄蓝田 朱心仪 郭佳 张宜辉 尹文兵 刘晓芳 王建辉 李建基 朱国强 王亨 《山东畜牧兽医》 2023年第8期1-6,共6页
本研究旨在对江苏某牧场引发犊牛呼吸道综合征的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定,并分析其遗传进化关系及耐药情况。首先对引起犊牛呼吸道症状致犊牛死亡案例进行剖检,发现肺脏肿大,肺门淋巴结肿胀、出血,肺部形成多处结节,然后取肺门淋巴... 本研究旨在对江苏某牧场引发犊牛呼吸道综合征的多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定,并分析其遗传进化关系及耐药情况。首先对引起犊牛呼吸道症状致犊牛死亡案例进行剖检,发现肺脏肿大,肺门淋巴结肿胀、出血,肺部形成多处结节,然后取肺门淋巴结进行细菌分离培养与鉴定,并进行16S rRNA扩增、测序分析、血清型鉴定和耐药性分析。质谱鉴定和测序分析结果显示,该菌株与A型多杀性巴氏杆菌属于同一亚群,其序列与已经发布的CQ2、CQ7菌株同源性较近。药敏结果显示,该菌株对林可霉素耐药,对其余13种常用抗生素具有高度敏感性。以上结果表明,引发该牧场犊牛肺炎的病原为A型多杀性巴氏杆菌,且与国内报道的A型多杀性巴氏杆菌同源性较高,提示A型多杀性巴氏杆菌在国内牧场具有较广泛的流行性。本研究为犊牛呼吸道综合征的病原学调查和多杀性巴氏杆菌流行病学提供数据参考。 展开更多
关键词 犊牛 多杀性巴氏杆菌 分离鉴定 药敏试验 同源性分析
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兔源A型多杀性巴氏杆菌双重PCR检测方法的建立
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作者 王锦祥 付环茹 +4 位作者 孙世坤 陈冬金 高承芳 桑雷 谢喜平 《福建畜牧兽医》 2023年第5期20-23,共4页
为建立一种特异性强且敏感性高的兔源A型多杀性巴氏杆菌快速检测方法,本研究以兔源A型多杀性巴氏杆菌kmt1和hyaD基因为目的基因,设计2对特异性引物进行双重PCR扩增,经反应条件优化,建立检测兔源A型多杀性巴氏杆菌的双重PCR方法。该方法... 为建立一种特异性强且敏感性高的兔源A型多杀性巴氏杆菌快速检测方法,本研究以兔源A型多杀性巴氏杆菌kmt1和hyaD基因为目的基因,设计2对特异性引物进行双重PCR扩增,经反应条件优化,建立检测兔源A型多杀性巴氏杆菌的双重PCR方法。该方法的最佳退火温度为57.8℃,最佳混合引物浓度为0.8μmol/L。该方法特异性强,对兔源A型多杀性巴氏杆菌为kmt1和hyaD基因双阳性,对兔源D型和F型多杀性巴氏杆菌为kmt1基因单阳性,对兔源其它细菌性病原和阴性对照则均为阴性。该方法敏感性高,对兔源A型多杀性巴氏杆菌kmt1和hyaD基因的最低检出限分别为1×10^(3)拷贝/μL和1×10^(4)拷贝/μL。该方法重复性好,且与已报道的多重PCR方法的符合率高达96.12%。本研究建立的双重PCR方法对兔源A型多杀性巴氏杆菌具有良好的特异性和敏感性,且重复性好、准确性高,为该病原的快速检测提供了有力的技术支持。 展开更多
关键词 兔 A型多杀性巴氏杆菌 kmt1基因 hyaD基因 双重PCR
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