植酸酶基因的多点突变及在毕赤酵母中的高效表达 被引量：6

1

作者 许钦坤 王红宁 李洪淼 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期22-26,共5页

根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,不改变其编码氨基酸序列,对来源于黑曲霉N25植酸酶phyA基因进行了突变,构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9kphyAm4,电击转化毕赤酵母,获得优化了密码子的重组酵母转化子。经PCR鉴定表明,植酸酶... 根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,不改变其编码氨基酸序列,对来源于黑曲霉N25植酸酶phyA基因进行了突变,构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9kphyAm4,电击转化毕赤酵母,获得优化了密码子的重组酵母转化子。经PCR鉴定表明,植酸酶基因已整合到酵母基因组中;表达产物的SDSPAGE分析表明,酶蛋白分子大小为70.15kDa。Southernblotting结果表明,phyA基因整合到酵母染色体DNA中;转化子酶活测定结果表明,经密码子优化的重组酵母PPNPm42酶活可达136900U/ml,比Arg没有优化的PPNPm8(47600U/ml)酶活高约2.8倍。 展开更多

关键词 植酸酶 多点突变 毕赤酵母 高效表达

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古核嗜热菌组蛋白基因多点突变的新方法 被引量：1

2

作者 翁梁 纪昕 +5 位作者 王智 马吉胜 李娜 曹淑桂 冯雁 刘丹 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第5期264-266,共3页

嗜热菌组蛋白基因序列中精氨酸密码子在大肠杆菌中的表达率极低,限制了组蛋白的大量获得。运用分子生物学技术,在传统PCR定点突变技术的基础上进行改进,参照古核嗜热菌组蛋白基因序列和大肠杆菌偏爱密码子表,设计了一对含有5个精氨酸突... 嗜热菌组蛋白基因序列中精氨酸密码子在大肠杆菌中的表达率极低,限制了组蛋白的大量获得。运用分子生物学技术,在传统PCR定点突变技术的基础上进行改进,参照古核嗜热菌组蛋白基因序列和大肠杆菌偏爱密码子表,设计了一对含有5个精氨酸突变密码子的单链DNA,全长为115nt,在3’端有20nt互补序列。将单链DNA在94℃变性,45℃复性,使其互补结合,72℃进行延伸反应,得到含有突变位点的组蛋白基因;再以此基因为模板设计相应的一对引物进行PCR扩增反应,得到大量组蛋白突变基因。该研究为一些序列已知,片段较小基因的多点突变提供了一种简单、易行的方法。 展开更多

关键词 古核嗜热菌组蛋白 基因多点突变 聚合链式反应

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角毛壳菌几丁质酶基因chi58多点突变及在毕赤酵母中的高效表达 被引量：2

3

作者 王艳君 杨谦 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1544-1549,共6页

应用重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,gene SOEing),简称SOE-PCR对角毛壳菌(Chaetomium cupreum)的几丁质酶基因chi58进行多点突变。依据毕赤酵母密码子偏爱性,将毕赤酵母中编码Arg使用频率几乎为0的密码子CGC... 应用重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,gene SOEing),简称SOE-PCR对角毛壳菌(Chaetomium cupreum)的几丁质酶基因chi58进行多点突变。依据毕赤酵母密码子偏爱性,将毕赤酵母中编码Arg使用频率几乎为0的密码子CGC突变为使用频率高的AGA,构建了含有正确突变的酵母表达载体pPIC9K-chi58A,电转化毕赤酵母GS115,获得的重组酵母株在诱导120h酶活力最高,平均可达101.71U/mL±3.33U/mL;其活力比未优化重组酵母株(31.83U/mL±4.85U/mL)提高了约3倍,且经10代传代培养后遗传稳定性良好。表达产物的SDS-PAGE分析表明,酶蛋白分子大小为58kD。 展开更多

关键词 角毛壳菌 几丁质酶 多点突变 毕赤酵母 高效表达

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鸡IFN-α基因的多点突变及其在毕赤酵母中的高效表达

4

作者 宋敏训 吴静 +1 位作者 史玉颖 汪明 《中国家禽》 北大核心 2008年第18期11-15,共5页

根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,在不改变其编码的氨基酸序列的前提下,对鸡IFN-α序列进行PCR介导的定点突变优化,将鸡IFN-α成熟肽序列中136～143位相近的4个Arg密码子和N端的6个稀有密码子突变为毕赤酵母高表达优越密码子,构建... 根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,在不改变其编码的氨基酸序列的前提下,对鸡IFN-α序列进行PCR介导的定点突变优化,将鸡IFN-α成熟肽序列中136～143位相近的4个Arg密码子和N端的6个稀有密码子突变为毕赤酵母高表达优越密码子,构建了含正确突变和未突变序列的克隆载体pMD-IFNm、pMD-IFN和酵母表达载体pPICZ-IFNm、pPICZ-IFN,电击转化毕赤酵母X-33菌株,经筛选、鉴定表明鸡IFN-α基因已整合到酵母基因组中。通过表达产物的抗病毒活性测定,筛选出突变与未突变高表达酵母转化子各1株。经密码子优化的突变重组酵母菌株PP-IFNm于BMMY培养基中诱导72h上清中抗病毒活性单位可达410U/mL,其活性比未优化重组酵母株PP-IFN(48.33U/mL)提高了约10倍。 展开更多

关键词 鸡IFN-α 基因 多点突变 毕赤酵母 高效表达 抗病毒活性

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基于DNA计算的RNA序列多点“突变”与首段碱基的数字编码及其运算法则 被引量：1

5

作者 李书超 许进 刘光武 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2004年第8期15-18,128,共5页

RNA序列的高维空间二进制编码有以下优点:除可以对RNA序列的碱基结构、功能基团、碱基互补、氢键强弱等性质进行编码之外,还可方便的进行数学与逻辑运算。该文研究了RNA序列高维空间数字编码的更一般、更深刻的运算法则:(1)进一步研究RN... RNA序列的高维空间二进制编码有以下优点:除可以对RNA序列的碱基结构、功能基团、碱基互补、氢键强弱等性质进行编码之外,还可方便的进行数学与逻辑运算。该文研究了RNA序列高维空间数字编码的更一般、更深刻的运算法则:(1)进一步研究RNA序列高维空间的表观维数NV,数值维数NX以及差异维数Nd,具体刻给出了当Nd=0,1,2,2n或2n+1(n=0,1,2,…)时,RNA序列的首段碱基及其数值取值范围。(2)推导出RNA序列多点“突变”(单核苷酸多态性SPN)的运算法则,将以前的结果推广到一般情形,深刻探讨了RNA序列之汉明距离、汉明值的变化及其数值变化情况。(3)利用RNA序列的定值部Xi和定位部Wi及其计算公式,从新的角度导出RNA重复序列的编码法则和运算法则,进而统一了以前的结果。 展开更多

关键词 数字编码 RNA序列 多点突变 重复序列 汉明距离

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在双链DNA上直接进行的多点突变

6

作者 朱榴琴 申同健 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1990年第6期454-456,共3页

基因的定点突变已经成为基因修饰及蛋白质工程等研究中的重要技术。在现今的定点突变方法中,以利用M13等单链DNA作模板的引物延伸法及缺口双链法最为常用。但有些基因,特别是某些较大的真核基因,在M13中常不够稳定。因此,除了改进载体... 基因的定点突变已经成为基因修饰及蛋白质工程等研究中的重要技术。在现今的定点突变方法中,以利用M13等单链DNA作模板的引物延伸法及缺口双链法最为常用。但有些基因,特别是某些较大的真核基因,在M13中常不够稳定。因此,除了改进载体性能以外, 展开更多

关键词 双链DNA 多点突变 寡核苷酸引物

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多点突变提高DhaA对芥子气的活性和热稳定性 被引量：3

7

作者 赵渊中 钟近艺 +2 位作者 郭楠 董志扬 林洁 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期714-718,共5页

为提高烷基卤脱卤酶Dha A对芥子气的活性和热稳定性,采用Autodock软件计算Dha A突变前后与芥子气的结合情况,利用重叠延伸PCR和DNA无缝拼接结合的方法,改变Dha A活性空腔进出口通道的大小,构建包含5个位点的Dha A突变体(Ile135Phe+Cys17... 为提高烷基卤脱卤酶Dha A对芥子气的活性和热稳定性,采用Autodock软件计算Dha A突变前后与芥子气的结合情况,利用重叠延伸PCR和DNA无缝拼接结合的方法,改变Dha A活性空腔进出口通道的大小,构建包含5个位点的Dha A突变体(Ile135Phe+Cys176Tyr+Val245Phe+Leu246Ile+Tyr273Phe);将Dha A及其突变体构建在p ET-28a载体上后,在Escherichia coli BL21(DE3)中进行表达,比较纯化后的野生型与突变体在酶学性质方面的变化情况.Autodock分子对接结果显示,突变后的Dha A与芥子气的结合能、结合效率和抑制常数均小于野生酶,突变体对芥子气的比活性提高了1.4倍,对10 mg/m L芥子气的降解率提高了近20%.热稳定性实验发现,Dha A突变体在50℃水浴1 h后残余酶活为76%,比野生型Dha A提高了19%.Dha A突变体的Tm值为56℃,比野生型Dha A提高了6℃.综上表明改变Dha A活性空腔内的进出口通道可以提高Dha A的热稳定性和对芥子气的催化活性. 展开更多

关键词 多点突变 进出口通道 DHA A 芥子气 催化活性 热稳定性

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碱基编辑系统及其在构建多点突变模型中的潜在应用

8

作者 陶皖豫 黄行许 《生命的化学》 CAS CSCD 2020年第11期1917-1923,共7页

DNA的点突变是遗传性疾病中最常见的突变形式,因此精确的点突变技术将有助于研究由基因突变导致的疾病模型及其致病机制。基于CRISPR/Cas9基因编辑系统的碱基编辑系统可实现胞嘧啶到胸腺嘧啶(C→T)或腺嘌呤到鸟嘌呤(A→G)的高效突变。... DNA的点突变是遗传性疾病中最常见的突变形式,因此精确的点突变技术将有助于研究由基因突变导致的疾病模型及其致病机制。基于CRISPR/Cas9基因编辑系统的碱基编辑系统可实现胞嘧啶到胸腺嘧啶(C→T)或腺嘌呤到鸟嘌呤(A→G)的高效突变。与传统的同源重组方法比较,CRISPR/Cas9基因编辑系统在效率和精确方面具有优势,目前已在植物、动物和人胚胎实现高效精准的碱基编辑。通过多条sgRNA,碱基编辑系统可实现多位点同时编辑,为模拟临床疾病多点突变提供了很好的工具。本文回顾了碱基编辑系统的发展,并对其应用做了展望,旨在为疾病模型的构建提供参考。 展开更多

关键词 碱基编辑系统 多点突变 疾病模型

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一种快速获得基因密码子偏爱性改造的方法——SOE-PCR 被引量：6

9

作者 王艳君 杨谦 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期96-99,共4页

SOE-PCR采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成重叠链,在不需要内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的拼接,能够高效、快速地实现基因的定点突变。应用SOE-PCR原理成功地实现了对几丁质酶基因chi58的5个位点的突变,构建了几丁质... SOE-PCR采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成重叠链,在不需要内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的拼接,能够高效、快速地实现基因的定点突变。应用SOE-PCR原理成功地实现了对几丁质酶基因chi58的5个位点的突变,构建了几丁质酶基因密码子偏爱性改造突变体—chi58A。实验证明,SOE-PCR具有简捷、快速、高效的优点。扩增过程中未引入其他突变,获得的chi58A突变体基因片段可以用于后续的分子克隆。 展开更多

关键词 SOE—PCR 多点突变 密码子偏爱性改造

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DNA序列高维空间数字编码运算法则的进一步结果

10

作者 李书超 许进 《自然科学进展》 北大核心 2003年第6期642-646,共5页

研究了DNA序列高维空间数字编码的更一般的运算法则:充分利用陈惟昌等人提出的DNA序列高维空间的表观维数N_V,数值维数N_X以及差异维数N_d,讨论了当N_d-01,2,2n或2n+1(n=0,1,2,…)时,具体刻画了DNA序列的首段碱基及其数值取值范围;推导... 研究了DNA序列高维空间数字编码的更一般的运算法则:充分利用陈惟昌等人提出的DNA序列高维空间的表观维数N_V,数值维数N_X以及差异维数N_d,讨论了当N_d-01,2,2n或2n+1(n=0,1,2,…)时,具体刻画了DNA序列的首段碱基及其数值取值范围;推导出DNA序列多点突变(单核苷酸多态性SNP)的运算法则;利用DNA序列的定值部X_i和定位部Q_i及其计算公式,从新的角度导出DNA重复序列的编码法则和运算法则。 展开更多

关键词 DNA序列 高维空间数字编码 运算法则 表现维数 数值维数 差异维数 多点突变 重复序列

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Studies on the relationship between the point mutation of ras oncogenes and the prognosis of patients with gastric cancer

11

作者 房殿春 罗元辉 +1 位作者 鲁荣 刘为纹 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 1997年第1期24+22-23,22-23,共3页

AIM To study the relationship between the point mutation of ras oncogenes and the prognosis of patients with gastric cancer.

关键词 Stomach neoplasms Genes ras Point mutation Polymerase chain reaction\ \ Polymorphism restriction fragment length Prognosis

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Gilbert综合征合并病毒性肝炎的基因突变模式及其与临床资料的关系探索 被引量：4

12

作者 宁会彬 靳慧鸣 +4 位作者 刘翠平 彭真 李宽 肖二辉 尚佳 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期855-860,共6页

目的研究Gilbert综合征(GS)是否合并病毒性肝炎时其基因突变情况及其与相关临床资料的关系。方法回顾性分析2013年8月至2018年12月于河南省人民医院感染科收治的GS患者资料,包括合并病毒性肝炎的患者,分析其基因突变的模式与一般资料(... 目的研究Gilbert综合征(GS)是否合并病毒性肝炎时其基因突变情况及其与相关临床资料的关系。方法回顾性分析2013年8月至2018年12月于河南省人民医院感染科收治的GS患者资料,包括合并病毒性肝炎的患者,分析其基因突变的模式与一般资料(年龄、性别等)、肝脏生物化学指标的关系,并分析是否合并病毒性肝炎情况下上述资料的差异。计量资料比较采用t检验,分类资料比较采用χ2检验,非正态分布的资料采用中位数和四分位间距表示集中和离散趋势。用秩和检验比较组间差异。结果共收集符合条件的107例GS患者资料,男女比例为4.94∶1(89∶18),发病年龄(36.36±12.51)岁。除丙氨酸转氨酶和总胆红素为正常或轻度升高外,天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶均在正常值范围。合并病毒性肝炎组49例(36例合并HBV、13例合并HCV),单纯GS组58例。两组患者总胆红素水平单纯GS组高于合并病毒性肝炎组(Z=0.035,P<0.05),在性别、年龄、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶数据间差异均无统计学意义(P值均>0.05)。107例患者均进行了GS特异性编码的尿苷二磷酸葡糖苷酸转移酶UGT1A1基因检测,突变主要发生在启动子上游PBREM-3263(-3279)(86例)和启动子TATA盒TA插入突变(71例),以及编码区外显子EXON1上的GGA-AGA Gly71Arg(57例)突变,突变形式均可表现纯合及杂合异常。基因检测数据中发生的主要突变形式组合发生率依次为A2+B2+C2(17例,25.23%)、A1+B1(17例,15.89%)、A2(11例,10.28%)、C2(10例,9.34%)、A2+B2(7例,6.54%)、A1+B2(7例,6.54%)、C1(7例,6.54%),不同突变组合在是否合并肝炎患者间差异均无统计学意义(P值均>0.05)。总数据分析结果显示单一位点突变组总胆红素水平高于多点突变组(Z=2.019,P=0.043),其他生物化学指标无影响(P值均>0.05,差异均无统计学意义)。进一步分析结果显示单纯GS组单一位点突变亚组总胆红素水平高于多点突变亚组(Z=1.999,P=0.046),与合并病毒性肝炎组差异无统计学意义(P>0.05)。不同突变组合对生物化学指标无影响,且与是否合并肝炎无关(P>0.05)。结论病毒性肝炎患者合并GS常见,其基因突变位点发生率、突变形式、生物化学指标等方面与非肝炎组无显著差异。GS突变位点的数目的增加并不会加重因尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶含量下降和活性降低而导致胆红素水平等指标的恶化,且不同突变位点组合形式也不会影响各项生物化学指标的变化,同时与是否肝炎无关。 展开更多

关键词 河南省人民医院 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 丙氨酸转氨酶 发病年龄 病毒性肝炎 天冬氨酸转氨酶 基因突变 多点突变

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