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多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对视网膜血管内皮细胞IGF-1／VEGF信号通路的抑制作用 被引量：13
1
作者 田芳 东莉洁 +8 位作者 吉洁 周玉 李文博 白伶伶 王飞 漆晨 苏畅 张晓敏 李筱荣 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期11-16,共6页
背景视网膜新生血管（RNV）是多种眼底血管疾病的共同表现，研究证实胰岛素样生长因子（IGF-1）能够刺激血管内皮细胞的增生，从而促进新生血管的形成，而多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）在IGF-1信号转导的过程中发挥转录抑制... 背景视网膜新生血管（RNV）是多种眼底血管疾病的共同表现，研究证实胰岛素样生长因子（IGF-1）能够刺激血管内皮细胞的增生，从而促进新生血管的形成，而多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）在IGF-1信号转导的过程中发挥转录抑制的作用。但PSF在RNV形成过程中的作用尚不清楚。目的研究PSF对IGF-1／血管内皮生长因子（VEGF）信号通路的调控作用。方法将猕猴视网膜血管内皮细胞RF／6A进行培养后分为Pegfp-C2-PSF质粒转染组、pGenesil．PSF-RNAi质粒转染组及各自的对照组，分别在细胞中转人真核质粒Pegfp—C2-PSF、pGenesil—PSF—RNAi及相应的空白质粒。各组细胞培养液中分别添加或不添加胰岛素样生长因子1（IGF-1）以刺激细胞生长，采用MTT法检测各组RF／6A细胞的增生率并筛选各组最适PSF剂量，用于进一步的实验。采用逆转录PCR法测定和比较不同PSF转染组间用或不用U0126处理组间RF／6A细胞中VEGFmRNA的表达；采用Westernblot法验证PSF对IGF-1诱导的细胞外调节蛋白激酶（ERK）活化的促进作用。结果IGF-1刺激后Pegfp．C2．PSF质粒转染组以0．50IxgPSF为最适剂量，其RF／6A细胞的增生率为0．220±0．020，细胞中VEGFmRNA相对表达量为0．79±0．07，分别低于其对照组的0．260±0．006和未转染组的1．26±0．19，差异均有统计学意义（P=0．040、0．016）；IGF-1刺激后pGenesil—PSF—RNAi质粒转染组以1．00IxgPSF作为最适剂量，其RF／6A细胞增生率为0．35±0．02，VEGFmRNA相对表达量为2．29＋0．43，分别高于其对照组的0．210-4-0．019和未转染组的1．26±0．19，差异均有统计学意义（P=0．003、0．019）。IGF-1刺激后1、3、6hPegfp-C2-PSF质粒转染组细胞中pERK蛋白表达量均明显低于未转染组，差异均有统计学意义（P=0．017、0．000、0．000）。Pegfp-C2-PSF质粒转染组U0126’处理后细胞中VEGFmRNA的相对表达量为0．93±0．21，明显低于未转染组的1．32±0．08，差异均有统计学意义（P=0．037），同时明显低于Pegfp—C2-PSF质粒转染组无U0126处理的细胞中VEGFmRNA的相对表达量1．23±0．09，差异有统计学意义（P=0．002）。结论PSF可抑制IGF-1诱导的RF／6A细胞中的ERK信号通路的活化，下调VEGF在RF／6A细胞中的表达，进而抑制RF／6A细胞的增生。 展开更多
关键词 多聚嘧啶序列结合蛋白 RNA剪切 胰岛素样生长因子 细胞系 内皮细胞/药物作用 视网膜血管/细胞学 血管内皮生长因子 细胞外调节蛋白激酶
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探讨多聚胞嘧啶结合蛋白E2诱骗RNA对32D-BCR／ABL细胞增殖的影响 被引量：5
2
作者 王雅珍 曾建明 +7 位作者 袁颖 魏容 彭智 肖青 刘钉宾 黄世峰 陈新敏 冯文莉 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期518-522,共5页
目的:在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)由慢性期向急性期的过渡阶段伴随有多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的异常表达。本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA(decoy RNA)对32D-BCR/ABL细胞增殖... 目的:在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)由慢性期向急性期的过渡阶段伴随有多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的异常表达。本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA(decoy RNA)对32D-BCR/ABL细胞增殖的影响及其可能的分子机制。方法:用电转染方法将hnRNP E2诱骗RNA野生序列和突变序列的表达载体(pGD和pGM)转入32D-BCR/ABL细胞,用G418筛选出稳定表达诱骗RNA的细胞。锥虫蓝染色法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力。FCM分析细胞周期,RT-PCR和Western印迹法检测下游CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-bindingproteinα,C/EBPα)和c-Myc的表达。结果:筛选出稳定表达野生型和突变型诱骗RNA的32DP210-pGD细胞和32DP210-pGM细胞。野生型32DP210-pGD细胞与未转染32D-BCR/ABL细胞相比,其细胞增殖抑制率为(69.48±5.21)%,克隆形成能力明显减弱,细胞周期由G0/G1期向S期进展受阻;C/EBPαmRNA水平无改变,但在蛋白水平上42 ku-C/EBPα的表达增加(43.83±4.91)%;c-Myc mRNA水平下降(35.67±6.64)%,蛋白水平降低(30.91±3.84)%。突变型32DP210-pGM细胞与未转染32D-BCR/ABL的细胞相比,其上述各指标无明显差异。结论:hnRNP E2诱骗RNA能够抑制32D-BCR/ABL细胞的增殖,其机制可能是诱骗RNA阻断hnRNP E2和C/EBPαmRNA的结合,引起42 ku-C/EBPα表达增加,进而引起其下游靶基因c-Myc下调。 展开更多
关键词 白血病 髓样 慢性 多聚嘧啶区结合蛋白质 CCAAT增强子结合蛋白α 细胞增殖 诱骗RNA
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多聚胞嘧啶结合蛋白E2诱骗RNA对DP210细胞小鼠致瘤能力的影响
3
作者 王雅珍 曾建明 +4 位作者 魏容 李春莉 肖青 陈新敏 冯文莉 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期561-565,共5页
目的:慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)急变中伴随着多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的表达异常。本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA对DP210细胞在动物体内致白血病的作用。方法:分别将稳定表... 目的:慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)急变中伴随着多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的表达异常。本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA对DP210细胞在动物体内致白血病的作用。方法:分别将稳定表达hnRNP E2诱骗RNA野生序列的DP210-pGD细胞、表达突变序列的DP210-pGM细胞以及对照组DP210细胞通过尾静脉注射CH3小鼠,观察各组小鼠的一般情况以及生存期;外周血白细胞计数(white blood count,WBC)并行外周血涂片及骨髓涂片检查;观察各组小鼠肝、脾和肺组织病理组织学变化。结果:各组小鼠注射不同细胞20 d后,DP210-pGD组小鼠毛色依然发亮,活动力和生长状况较良好,WBC为(8.36±2.81)×109/L,外周血涂片中仅见少量白血病细胞;DP210和DP210-pGM组小鼠的WBC分别为(40.52±12.89)×109/L和(38.73±8.26)×109/L(P<0.01),外周血涂片均可见较多的幼稚白血病细胞。与DP210组和DP210-pGM组小鼠相比,DP210-pGD组小鼠骨髓增生不明显,仍可见许多成熟的粒细胞,肝、脾和肺组织的病理学结构改变较少,白血病细胞浸润程度较低,且生存期明显延长(P<0.01),但最终66 d时全部死亡。结论:hnRNP E2诱骗RNA能延缓DP210细胞对小鼠的致瘤能力。 展开更多
关键词 白血病 髓样 慢性 RNA干扰 多聚嘧啶区结合蛋白质 小鼠 转基因 DP210细胞
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重组腺相关病毒-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对氧诱导视网膜新生血管形成的抑制作用 被引量：13
4
作者 田芳 东莉洁 +3 位作者 周玉 王飞 张晓敏 李筱荣 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期504-508,共5页
目的 观察重组腺相关病毒（rAAV）-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用.方法 7日龄C57BL/6J小鼠18只,随机分为正常组、rAAV-PSF注射组、rAAV注射组,各组均6只.蛋白免疫印迹法（Western blot）检... 目的 观察重组腺相关病毒（rAAV）-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用.方法 7日龄C57BL/6J小鼠18只,随机分为正常组、rAAV-PSF注射组、rAAV注射组,各组均6只.蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠视网膜组织中PSF的表达.7日龄C57BL/6J小鼠48只随机分为正常组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组,各组均为12只.除正常组外,其余各组小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为（75±2）％的氧箱内饲养5d后转移至正常环境中饲养5d,建立OIR模型.12日龄时,OIR rAAV-PSF治疗组小鼠玻璃体腔注射病毒滴度为5×10^13pfu/ml的rAAV-PSF重组载体2μI; OIR rAAV治疗组小鼠玻璃体腔注射相同病毒滴度的单纯rAAV载体2μl.OIR模型组小鼠出氧箱后不作任何处理.石蜡切片苏木精-伊红染色并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核;Western blot检测视网膜中VEGF蛋白表达含量.结果 正常组小鼠视网膜PSF蛋白表达与rAAV-PSF注射组比较,差异有统计学意义（F=16.05,P=0.001）,与rAAV注射组比较,差异无统计学意义（F=16.05,P=0.890）.正常组、OIR模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组突破内界膜的视网膜新生血管内皮细胞核数比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义（F=101.00,P=0.007）;rAAV-PSF治疗组与OIR模型组差异有统计学意义（F=101.00,P=0.002）;OIR rAAV治疗组与OIR模型组差异无统计学意义（F=101.00,P=0.550）.各组视网膜VEGF蛋白表达比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义（F=13.20,P=0.005）,OIR模型组与OIR rAAV-PSF治疗组差异有统计学意义（F=13.20,P=0.001）;OIR模型组与OIR rAAV组差异无统计学意义（F=13.20,P=0.071）.结论 rAAV-PSF玻璃体腔注射可以抑制OIR小鼠视网膜VEGF表达,从而抑制其新生血管生成. 展开更多
关键词 视网膜新生血管化/预防和控制 多聚嘧啶区结合蛋白质/药物作用 动物实验
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多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对体外培养的视网膜色素上皮细胞磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶信号通路的调控作用 被引量：12
5
作者 漆晨 东莉洁 +5 位作者 乐毅 张晓敏 李筱荣 郭如如 茹玉莎 苏畅 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期363-367,共5页
目的：观察多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）对体外培养的视网膜色素上皮（RPE）细胞磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路的调控作用。方法将体外培养的 RPE 细胞分为 PSF 高表达组、PSF 高表达对照... 目的：观察多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）对体外培养的视网膜色素上皮（RPE）细胞磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路的调控作用。方法将体外培养的 RPE 细胞分为 PSF 高表达组、PSF 高表达对照组、PSF 低表达组、PSF 低表达对照组及假转染组。应用脂质体2000将上调 PSF 表达的真核质粒增强型绿色荧光蛋白（pEGFP）-C2-PSF、下调 PSF 表达的真核质粒 pGenesil-PSF-RNAi 以0.25、0.50、1.00μg 的递增量分别转染至 PSF 高表达组及 PSF 低表达组细胞。PSF 高表达对照组细胞转染 pEGFP-C2空载质粒。PSF 低表达对照组细胞转染 pGenesil-scramble-siRNA 质粒。假转染组仅做转染处理,不加入任何表达质粒。采用水溶性四氮唑法检测胰岛素样生长因子1（IGF-1）刺激条件下 PSF 对 RPE 细胞增生的影响。应用脂质体2000将0.50μg 真核质粒pEGFP-C2-PSF、1.00μg 真核质粒 pGenesil-PSF-RNAi 及 pEGFP-C2空载质粒转染细胞分别作为 PSF 高表达组、PSF 低表达组、对照组,采用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测 PSF 对 IGF-1诱导的 RPE 细胞内血管内皮生长因子（VEGF）mRNA 表达的影响。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 PSF 对 IGF-1诱导的磷酸化 Akt （pAkt）蛋白表达的影响。在 IGF-1刺激后,将 RPE 细胞分为单纯渥曼青霉素（Wortmannin）处理组、单纯 PSF 高表达组、渥曼青霉素联合 PSF 高表达处理组,并以未经渥曼青霉素处理的常规体外培养的 RPE 细胞为对照组,采用实时定量 PCR 检测各组 VEGF 的表达。结果IGF-1刺激后,PSF 高表达组、PSF 高表达对照组及假转染组之间 RPE 细胞增生率比较,差异有统计学意义（F =29.728,P 〈0.05）；PSF 低表达组、PSF 低表达对照组及假转染组之间 RPE 细胞增生率比较,差异有统计学意义（F =14.121,P〈0.05）。PSF 高表达组 RPE 细胞中 VEGF mRNA 表达较对照组明显降低,差异有统计学意义（P =0.0003）；PSF 低表达组 RPE 细胞中 VEGF mRNA 表达较对照组明显提高,差异有统计学意义（P =0.0309）。Western blot 检测结果显示,IGF-1刺激可上调 pAkt 蛋白表达水平,PSF 高表达可明显下调 pAkt 蛋白表达水平。IGF-1刺激后,渥曼青霉素联合 PSF 高表达处理组 VEGF 表达较单纯渥曼青霉素处理组明显降低,差异有统计学意义（P 〈0.05）。结论PSF 能抑制 IGF-1刺激后体外培养的 RPE细胞中 PI3K/Akt 信号通路活化,下调 VEGF 表达。 展开更多
关键词 多聚嘧啶区结合蛋白质 视网膜色素上皮/酶学 磷酸肌醇 3-激酶类 p21 活化激酶类 信号传导
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慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子对氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管的抑制作用 被引量：8
6
作者 黄亮瑜 柯屹峰 +9 位作者 林婷婷 步绍翀 任新军 焦明菲 王勇 胡立颖 王琼 洪雅茹 李筱荣 东莉洁 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期53-59,共7页
目的观察慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子(PSF)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法5日龄C57BL/6J小鼠112只随机分为正常对照组、单纯OIR模型组、OIR模型+慢病毒空载体处理组(以下简称Vec组)及OIR模型+... 目的观察慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子(PSF)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法5日龄C57BL/6J小鼠112只随机分为正常对照组、单纯OIR模型组、OIR模型+慢病毒空载体处理组(以下简称Vec组)及OIR模型+PSF慢病毒处理组(以下简称PSF组),分别为16、32、32、32只。小鼠7日龄时,正常对照组小鼠常规环境饲养;单纯OIR模型组、Vec组及PSF组小鼠建立OIR模型。小鼠12日龄时,Vec组、PSF组小鼠玻璃体腔分别注射滴度为1×1011 TU/ml的空载体病毒或PSF慢病毒1μl。正常对照组和单纯OIR模型组小鼠不再做任何处理。小鼠17日龄时,采用HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核;作视网膜铺片,测量各组小鼠视网膜无灌注区相对面积;采用实时定量PCR检测各组小鼠视网膜中NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA相对表达量;采用Western blot检测各组小鼠视网膜中Nrf2、HO-1及PSF的蛋白相对表达量。组间比较采用单因素方差分析。结果正常对照组、单纯OIR模型组、Vec组、PSF组小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数分别为0.00、14.36±5.50、15.67±4.96、8.13±2.09个;视网膜无灌注区面积分别为0.00%、(35.71±2.81)%、(36.57±4.53)%、(15.33±4.75)%。4组间小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数及视网膜无灌注区面积比较,差异均有统计学意义(F=24.87、165.70,P<0.05)。组间两两比较,单纯OIR模型组、Vec组较正常对照组突破内界膜的血管内皮细胞核数增多,视网膜无灌注区面积增大;PSF组较单纯OIR模型组、Vec组突破内界膜的血管内皮细胞核数减少,视网膜无灌注区面积减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时定量PCR及Western blot检测结果显示,4组间小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量(F=53.66、83.54)以及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量(F=58.38、52.69、24.79)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。组间两两比较,单纯OIR模型组、Vec组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较正常对照组明显降低,PSF组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较单纯OIR模型组、Vec组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的PSF可通过上调Nrf2及HO-1的表达抑制OIR小鼠视网膜新生血管形成。 展开更多
关键词 视网膜新生血管化/预防和控制 多聚嘧啶区结合蛋白质/药物作用 慢病毒感染 NF-E2相关因子2 血红素氧化酶(脱环) 动物实验
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高表达多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对糖基化终产物诱导下视网膜Müller细胞凋亡的影响 被引量：11
7
作者 田芳 胡博杰 +6 位作者 李文博 黄亮瑜 高美子 苏睿虹 张晓敏 李筱荣 东莉洁 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期70-75,共6页
目的高表达多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对糖基化终产物(AGEs)诱导下视网膜Müller细胞凋亡的影响。方法实验研究。体外培养的人Müller细胞分为正常细胞组(N组)、空白对照组(N+AGEs组)、空载体对照组(Vec+AGEs组)及... 目的高表达多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对糖基化终产物(AGEs)诱导下视网膜Müller细胞凋亡的影响。方法实验研究。体外培养的人Müller细胞分为正常细胞组(N组)、空白对照组(N+AGEs组)、空载体对照组(Vec+AGEs组)及PSF高表达组(PSF+AGEs组)。N组为常规培养的Müller细胞;N+AGEs组仅做转染处理并联合AGEs诱导;Vec+AGEs组、PSF+AGEs组利用转染试剂脂质体2000分别将增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)空载体、pEGFP-PSF真核表达质粒导入Müller细胞并联合AGEs诱导。细胞转染24h后应用AGEs(150μg/ml)诱导72h,采用HE、Hoechst33258染色观察各组细胞形态;分别采用MTT比色法、ELISA细胞凋亡试剂盒及2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯法检测N+AGEs组、Vec+AGEs组、PSF+AGEs组细胞生存力、细胞凋亡值及细胞内ROS水平。结果N组细胞形态饱满,胞浆染色均一;N+AGEs组、Vec+AGEs组细胞体积缩小,胞质致密浓缩、嗜酸性染色增强;PSF+AGEs组细胞形态尚饱满,胞浆染色较均匀,胞核染色均一。N+AGEs组、Vec+AGEs组、PSF+AGEs组细胞生存力分别为0.42±0.11、0.35±0.12、0.68±0.12;细胞凋亡值分别为1.08±0.16、0.96±0.20、0.44±0.08;细胞内ROS水平分别为28833.67±3550.06、28356.67±4854.81、18616.00±3382.54。与N+AGEs组、Vec+AGEs组比较,PSF+AGEs组细胞生存力明显提高(F=20.65,P=0.000),细胞凋亡值(F=43.43,P=0.000)及细胞内ROS水平(F=18.86,P=0.000)明显降低,差异均有统计学意义。结论高表达PSF通过抑制ROS产生来缓解AGEs诱导下人Müller细胞凋亡,从而发挥对Müller细胞的保护作用。 展开更多
关键词 多聚嘧啶区结合蛋白质 糖基化终产物 高级 细胞凋亡 MÜLLER细胞
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多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对缺氧诱导人视网膜微血管内皮细胞功能的影响 被引量：6
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作者 徐嫚鸿 王林妮 +9 位作者 林婷婷 任新军 柯屹峰 胡立颖 焦明菲 王勇 王琼 洪雅茹 李筱荣 东莉洁 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期135-142,共8页
目的观察多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)功能的影响。方法采用三质粒系统构建慢病毒颗粒(LV)-PSF。LV-PSF体外感染hRMECs后通过流式细胞计数法测定其感染效率。应用实时定量PCR(RT-P... 目的观察多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)功能的影响。方法采用三质粒系统构建慢病毒颗粒(LV)-PSF。LV-PSF体外感染hRMECs后通过流式细胞计数法测定其感染效率。应用实时定量PCR(RT-PCR)检测经LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA表达水平。将实验分为体内和体外两部分。体内实验:7日龄健康C57B/L6小鼠20只,采用随机数字表法分为正常组、氧诱导视网膜病变(OIR)组、OIR+LV-空载体(Vec)组和OIR+LV-PSF组,每组5只。除正常组外,其余3组构建OIR模型。OIR组除缺氧刺激外,不做其余处理。OIR+LV-Vec组和OIR+LV-PSF组小鼠分别玻璃体腔注射LV-Vec或LV-PSF。观察LV-PSF对视网膜新生血管(RNV)形成的影响。体外实验:将hRMECs分为正常组、缺氧组、空载组、PSF高表达组。正常组为正常体外培养的hRMECs;缺氧组为缺氧刺激3 h恢复正常培养条件24 h的hRMECs;空载组、PSF高表达组分别为用LV-Vec、LV-PSF感染48 h,再用缺氧刺激3 h恢复正常培养条件24 h的hRMECs。采用MTT比色法观察PSF对细胞增生能力的影响。采用细胞划痕实验和Transwell迁移实验观察PSF对缺氧刺激下细胞迁移能力的影响。采用RT-PCR观察各组细胞中HIF-1α、VEGF及PSF的mRNA表达。结果成功构建可稳定高表达PSF的LV-PSF,流式细胞仪测定其感染效率为97%,RT-PCR测得经LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA水平明显上调。体内实验:OIR组、OIR+LV-Vec组小鼠RNV面积较正常组明显增加(t=18.31、43.71),OIR+LV-PSF组小鼠RNV面积较OIR组(t=11.30)、OIR+LV-Vec组(t=15.47)明显减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。体外实验:MTT比色法检测结果显示,缺氧组hRMECs增生能力较正常组明显增强(t=2.57),PSF高表达组hRMECs增生能力较正常组、缺氧组、空载组明显降低(t=5.26、5.46、3.73),差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,缺氧刺激3 h恢复正常条件24 h或48 h均可刺激缺氧组与空载组细胞明显迁移(t=8.35、13.84,P<0.05);而与缺氧组与空载组比较,PSF高表达组细胞迁移不明显(t=10.99、18.27、9.75、8.93、26.94、7.01,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,正常组和空载组微孔膜上染色的细胞数较多,而PSF高表达组微孔膜上染色的细胞数明显减少(t=9.33、6.15,P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,缺氧组、空载组hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表达明显增加(t=15.23、21.09,P<0.05),PSF mRNA表达无明显变化(t=0.12、2.15,P<0.05);与缺氧组、空载组比较,PSF高表达组hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表达明显下降(t=10.18、13.10,P<0.05),PSF mRNA表达明显增加(t=65.00、85.79,P<0.05)。结论PSF可减少OIR模型小鼠RNV面积。PSF可能通过HIF-1α/VEGF信号通路抑制缺氧诱导的hRMECs增生和迁移。 展开更多
关键词 多聚嘧啶区结合蛋白质 视网膜新生血管化 缺氧 视网膜血管/细胞学 内皮细胞/生理学 细胞 培养的
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聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子高表达对糖基化终末产物诱导下人视网膜微血管内皮细胞氧化损伤的作用 被引量：2
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作者 徐嫚鸿 漆晨 +5 位作者 刘勋 林婷婷 王琼 洪亚茹 李筱荣 东莉洁 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期633-640,共8页
目的观察探讨聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子(PSF)高表达对糖基化终末产物(AGEs)诱导下人视网微血管内皮细胞(hRMECs)氧化损伤的保护作用及相应分子机制。方法将hRMECs分为正常组、空载组、PSF组、锌原卟啉(ZnPP)组及PSF+ZnPP组进行实验。... 目的观察探讨聚嘧啶束结合蛋白相关剪接子(PSF)高表达对糖基化终末产物(AGEs)诱导下人视网微血管内皮细胞(hRMECs)氧化损伤的保护作用及相应分子机制。方法将hRMECs分为正常组、空载组、PSF组、锌原卟啉(ZnPP)组及PSF+ZnPP组进行实验。正常组细胞使用含有10%胎牛血清、青霉素/链霉素的DMEM培养基,置于37°C、95%空气、5%CO2的密闭恒温培养箱中培养。空载组细胞采用空载慢病毒感染。PSF组细胞采用过表达PSF慢病毒感染。ZnPP组细胞采用ZnPP(10 mol/L)处理2 h。PSF+ZnPP组细胞采用过表达PSF慢病毒感染后,再用ZnPP(10 mol/L)预处理2 h。后四组细胞辅以AGEs刺激,HE、Hoechst33258染色法和流式细胞法观察PSF高表达对细胞损伤的保护作用以及ZnPP对PSF的拮抗作用。采用Western blot检测细胞中血红素氧合酶-1(HO-1)、磷酸化(p)细胞外调节蛋白激酶(ERK)、核因子2相关因子2(Nrf2)的蛋白表达。引入ERK通路的特异性拮抗剂U0126,Western blot验证U0126对PSF蛋白所诱导的HO-1表达的逆转作用。结果HE染色和Hoechst33258染色结果显示,PSF组受损细胞核数较正常组明显增加,较PSF+ZnPP组明显减少,差异均有统计学意义(F=27.5、38.7,P<0.05)。流式细胞法结果显示,PSF组细胞产生的ROS较正常组明显增加,较PSF+ZnPP组明显减少,差异有统计学意义(F=126.4,P<0.05)。Western blot检测结果显示,PSF组HO-1蛋白表达量较正常组、空载组明显增加,差异均有统计学意义(F=70.1,P<0.05);AGEs处理30、60、120、240 min时pERK的蛋白表达量与15 min时比较,差异均有统计学意义(F=474.0,P<0.05);PSF+/U0126-组HO-1、Nrf2蛋白表达量较PSF-/U0126-组明显增加,PSF+/U0126+组HO-1、Nrf2蛋白表达量较PSF+/U0126-组明显降低,差异有统计学意义(F=30.2、489.4,P<0.05)。结论PSF高表达可以通过活化ERK通路,促进Nrf2转位入核进而诱导HO-1表达,从而保护hRMECs免受AGEs诱导的氧化损伤。 展开更多
关键词 多聚嘧啶区结合蛋白质 糖基化终产物 高级 视网膜血管/细胞学 内皮细胞/生理学 细胞 培养的
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血清miR-384、PTBP3水平与妊娠期高血压疾病患者不良妊娠结局的关系
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作者 李格琳 臧密密 +2 位作者 付雪莲 王丽丽 苗艳 《临床和实验医学杂志》 2024年第15期1634-1637,共4页
目的检测妊娠期高血压疾病(HDCP)患者血清微RNA(miR)-384、多聚嘧啶区结合蛋白3(PTBP3)表达水平,研究miR-384、PTBP3与患者不良妊娠结局的关系。方法回顾性选取2020年7月至2021年7月沧州市人民医院收治的100例HDCP患者作为观察组,另选... 目的检测妊娠期高血压疾病(HDCP)患者血清微RNA(miR)-384、多聚嘧啶区结合蛋白3(PTBP3)表达水平,研究miR-384、PTBP3与患者不良妊娠结局的关系。方法回顾性选取2020年7月至2021年7月沧州市人民医院收治的100例HDCP患者作为观察组,另选取同期本院的健康孕妇50名作为对照组。根据观察组患者妊娠结局情况分为妊娠结局不良组(n=47),妊娠结局良好组(n=53)。比较各组临床资料,检测对比各组血清miR-384、PTBP3水平。采用Pearson相关性分析法分析受试者血清miR-384、PTBP3表达水平相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线评估二者对HDCP患者不良妊娠结局的预测价值;采用多因素Logistic回归分析对患者不良妊娠结局的影响因素进行分析。结果妊娠结局不良组的收缩压和舒张压分别为(162.34±14.95)、(108.11±10.01)mmHg,均高于妊娠结局良好组[(138.78±13.11)、(99.35±6.03)mmHg]和对照组[(115.25±10.22)、(73.56±4.66)mmHg],差异均有统计学意义(P<0.05)。妊娠结局不良组miR-384水平为1.56±0.14,高于妊娠结局良好组(1.23±0.11)和对照组(1.01±0.15),差异均有统计学意义(P<0.05)。妊娠结局不良组PTBP3水平为(0.67±0.23)ng/mL,低于妊娠结局良好组[(1.21±0.33)ng/mL]和对照组[(1.53±0.45)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,观察组患者血清miR-384、PTBP3表达呈负相关(r=-0.472,P=0.001)。血清miR-384、PTBP3联合预测患者发生不良妊娠结局的曲线下面积(AUC)大于血清miR-384、PTBP3单独预测的AUC(P<0.05)。患者血清miR-384高表达是患者发生不良妊娠结局的危险因素,PTBP3高表达是患者发生不良妊娠结局的保护因素(P<0.05)。结论HDCP患者血清miR-384表达升高,PTBP3表达降低,二者均与患者发生不良妊娠结局有关。 展开更多
关键词 微RNAS 妊娠期高血压疾病 多聚嘧啶区结合蛋白质 妊娠结局 子痫前期 miR-384
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