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M1磁珠富集联合重组酶介导的聚合酶链式反应技术检测肺炎克雷伯菌
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作者 张盼盼 帖彦清 《中国科技期刊数据库 医药》 2024年第8期0147-0152,共6页
一直以来,人类健康都在承受着病原微生不同程度的威胁,其中肺炎克雷伯菌是常见的条件致病菌之一,当机体免疫力低下时,容易发生炎性病变,从而引起肺炎、尿路感染和败血症等院内感染。综合分析肺炎克雷伯菌的致病特征,认为快速、准确地从... 一直以来,人类健康都在承受着病原微生不同程度的威胁,其中肺炎克雷伯菌是常见的条件致病菌之一,当机体免疫力低下时,容易发生炎性病变,从而引起肺炎、尿路感染和败血症等院内感染。综合分析肺炎克雷伯菌的致病特征,认为快速、准确地从患者血液中检出病原菌,对感染患者进行及时的治疗具有重要意义。方法 传统病原微生物的检测有培养法、免疫检测或者生化鉴定等方法,随着分子生物学技术不断发展,使病原微生物的快速和灵敏检测成为了可能,结合我们新型的聚合酶链式反应技术,产生新的实验方法,探讨分析M1磁珠富集联合重组酶介导的聚合酶链式反应技术检测的可行性以及临床样本中病原菌核酸的最优提取方法。结果 在已经建立的PCR方法中的引物作为内引物的基础上,根据RAA的引物设计原则设计RAA反应过程的外引物,筛选出最优引物对,建立RAP的方法和检测技术,预期核酸扩增特异性达到100%,检测下限达到10CFU/mL。结论 分析肺炎克雷伯菌的病原学特征、基因的特点,建立了这套灵敏度高、特异性强、反应迅速可靠的M1磁珠富集联合重组酶介导的聚合酶链式反应技术,使得检测血液样本中的肺炎克雷伯菌更具特异性,有助于发现早期细菌感染患者并给予其及时的治疗,为今后肺炎克雷伯菌的准确诊断提供了新的选择。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 M1磁珠 重组介导 聚合链式反应 (polymerase CHAIN reaction pcr)
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应用多聚酶链式反应(PCR)技术检测和定量分析柑桔黄龙病病原 被引量:93
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作者 田亚南 柯穗 柯冲 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期243-250,共8页
应用多聚酶链式反应(PCR)技术对柑桔黄龙病病原进行检测和定量分析。研究结果表明:PCR技术能准确、快速地检测出田间和温室内罹病的柑桔、长春花以及带菌柑桔木虱样本中的柑桔黄龙病病原(BLO),而健康植株和柑桔木虱样本... 应用多聚酶链式反应(PCR)技术对柑桔黄龙病病原进行检测和定量分析。研究结果表明:PCR技术能准确、快速地检测出田间和温室内罹病的柑桔、长春花以及带菌柑桔木虱样本中的柑桔黄龙病病原(BLO),而健康植株和柑桔木虱样本则呈阴性反应。采用的PCR引物(Primers)是根据柑桔黄龙病病原亚洲株系的DNA序列(In-2.6,基因库号码:M9491)设计的。应用竞争性定量多聚酶链式反应(Q-PCR)方法能测定病原在不同样品中的含量。该技术关键在于:病原DNA和浓度系列稀释后的竞争物DNA,在同一试管中进行DNA扩增反应时,共用相同的引物。由于彼此互相竞争反应引物的结果,病原的PCR产物和竞争物的PCR产物在数量上呈反向线性相关。因竞争物的浓度为已知,便可从线性关系中推算出病原的含量。 展开更多
关键词 柑桔 黄龙病 多聚链式反应 柑桔类果树
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用逆转录多聚酶链式反应从凡纳对虾中检出传染性皮下组织和造血器官坏死病毒 被引量:13
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作者 刘荭 高隆英 +1 位作者 史秀杰 江育林 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期185-188,共4页
A reverse transcription polymerase chain reaction (RT PCR) was used for detection of infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus (IHHNV) from the gills and subcutaneous tissue of Penaeus vannamei (10-15cm ... A reverse transcription polymerase chain reaction (RT PCR) was used for detection of infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus (IHHNV) from the gills and subcutaneous tissue of Penaeus vannamei (10-15cm in body size) without clinical signs. With primers 77012R and 77353F, a fragment of 356bp of IHHNV was amplified in RT PCR. The amplified product was sequenced and showed more than 98% homologue with the sequences of other IHHNV strains in Gene Bank. 展开更多
关键词 传染性 皮下组织 造血器官 坏死病毒 凡纳对虾 逆转录多聚 链式反应 高密度养殖 核酸抽取 pcr产物
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多聚酶链式反应检测海南槟榔黄化病 被引量:17
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作者 罗大全 陈慕容 +1 位作者 叶沙冰 刘志昕 《热带农业科学》 2002年第6期13-16,共4页
应用多聚酶链式反应(PCR)技术检测海南槟榔黄化病。结果表明:槟榔黄化型黄化病病株样品分别用2组植原体(Phytoplasmas)通用引物(R16mF/R16mR2、R16mF2/R16R2和1067/1068)测定,均出现特异的PhytoplasmasDNA谱带,呈阳性结果;而健康植株相... 应用多聚酶链式反应(PCR)技术检测海南槟榔黄化病。结果表明:槟榔黄化型黄化病病株样品分别用2组植原体(Phytoplasmas)通用引物(R16mF/R16mR2、R16mF2/R16R2和1067/1068)测定,均出现特异的PhytoplasmasDNA谱带,呈阳性结果;而健康植株相应组织样品(对照)和其它样品则均未出现上述谱带,呈阴性反应。因此,黄化型的槟榔黄化病病株组织内存在植原体,植原体是导致槟榔发生黄化型黄化病的病原菌。 展开更多
关键词 多聚链式反应 海南槟榔 黄化病 检测 pcr 植原体
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PCR(聚合酶链式反应)仪温度特性的实验研究与分析 被引量:4
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作者 程远霞 魏燕 +3 位作者 刘宝林 华泽钊 陈颖 鲍彩丽 《仪表技术与传感器》 CSCD 北大核心 2009年第1期31-34,共4页
该文的目的是测量PCR温度的精确性和PCR仪上孔间以及不同循环和不同次测量的温度均一性。PCR程序:95℃(变性),30 s;55℃(退火),40 s;72℃(延伸),50 s;6个循环。孔和管内的温度重复性都很好;变性阶段,孔和管内液体温度与程序温度偏差较大... 该文的目的是测量PCR温度的精确性和PCR仪上孔间以及不同循环和不同次测量的温度均一性。PCR程序:95℃(变性),30 s;55℃(退火),40 s;72℃(延伸),50 s;6个循环。孔和管内的温度重复性都很好;变性阶段,孔和管内液体温度与程序温度偏差较大,孔及管内的温度均一性和重复性均很好;孔内温度不能达到通常所需的温度(90℃以上)的比例为22.2%。退火和延伸阶段孔和管内的温差较小;有2个孔不能达到通常需要的温度。实际温度在各阶段停留的时间分别占设定时间的90%的比例较低。这些缺陷可能导致扩增结果假阳性或假阴性。 展开更多
关键词 聚合链式反应 pcr 临床检验 温度偏差 温度均一性
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序列特异性引物多聚酶链式反应(PCR-SSP)检测粒细胞Fc受体Ⅲb上的粒细胞特异性抗原和中国南方汉族基因频率的研究
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《中国输血杂志》 CAS CSCD 2001年第S1期111-,共1页
关键词 多聚 聚合 基因频率 pcr-SSP Fc 粒细胞 白细胞 链式反应 受体 汉族 民族 SSP 中华人民共和国
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应用多聚酶链式反应快速分析FMR-1基因突变 被引量:2
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作者 叶志纯 蔡建光 +3 位作者 李辉 赵蕊 贺新玉 倪斌 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第1期92-94,共3页
为了建立一种在先天性智力低下患儿中快速分析脆性X综合征智力低下基因1(Fragile X mentaI retardation gene 1, FMR-1)突变的方法,对先天性智力低下儿童进行脆性X综合征的大面积筛查和诊断,应用复式多聚酶链式反应一次性扩增FMR-1基因... 为了建立一种在先天性智力低下患儿中快速分析脆性X综合征智力低下基因1(Fragile X mentaI retardation gene 1, FMR-1)突变的方法,对先天性智力低下儿童进行脆性X综合征的大面积筛查和诊断,应用复式多聚酶链式反应一次性扩增FMR-1基因的(CGG)n的重复区,分析CGG重复序列的大小,判断FMR-1基因状态(正常、突变前、突变后),对脆性X综合征可疑患儿快速筛查。在113例不明原因的先天性智力低下患儿中,分析有脆性X综合征携带者(FMR-1基因前突变者)7例(2男5女),脆性X综合征患者(FMR-1基因突变者)5例。应用多聚酶链式反应可以对脆性X综合征可疑患儿进行大面积初筛,确定携带者和患者。 展开更多
关键词 多聚链式反应 FMR-1 基因突变 脆性X综合征 脆性X综合征智力低下基因1 先天性智力低下
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多聚酶链式反应扩增日本血吸虫基因组DNA重复序列 被引量:1
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作者 何纳 姜庆五 +4 位作者 赵根明 刘建翔 韦建国 赵春琳 Joseph Hamburger 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1284-1285,共2页
目的 探索日本血吸虫基因组内是否存在DNA重复序列。方法 分别根据曼氏血吸虫基因组特异的DNA重复序列单位Sm1- 7和埃及血吸虫基因组特异的DNA重复序列单位TheDraIRepeat设计并合成了寡核苷酸引物 ,然后以日本血吸虫基因组DNA为模板 ... 目的 探索日本血吸虫基因组内是否存在DNA重复序列。方法 分别根据曼氏血吸虫基因组特异的DNA重复序列单位Sm1- 7和埃及血吸虫基因组特异的DNA重复序列单位TheDraIRepeat设计并合成了寡核苷酸引物 ,然后以日本血吸虫基因组DNA为模板 ,用自备的多达 12种的反应缓冲液进行多聚酶链式反应 (PCR)优化扩增。结果 分别成功地从日本血吸虫基因组中扩增出与曼氏血吸虫基因组“特异的”DNA重复序列单位Sm1- 7和埃及血吸虫基因组“特异的”DNA重复序列单位TheDraIRepeat同源的DNA重复序列。PCR反应提示该两种重复序列在日本血吸虫基因组内的拷贝数均较低。同时 ,日本血吸虫与曼氏血吸虫表现出较好的同源性。结论 日本血吸虫基因组内可能存在着长度为 12 1bp的DNA重复序列 。 展开更多
关键词 多聚链式反应 DNA重复序列 血吸虫 基因组
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常用聚合酶链式反应(PCR)技术概述 被引量:3
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作者 谢德平 廖宇静 《生物学教学》 北大核心 2009年第2期8-10,共3页
聚合酶链式反应(PCR)技术在过去20多年中,经过不断改良以及与其他研究手段相结合,如今已发展为有数十种之多研究方法的一套技术手段。本文对较常用的几种PCR技术手段的原理、优点、缺点和应用等作了概述。
关键词 聚合链式反应 pcr技术 生物学 扩增
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聚合酶链式反应(PCR)用于蚊虫分类鉴定的研究概况 被引量:2
10
作者 杨东升 邓兵 夏耕田 《医学动物防制》 2002年第6期317-319,共3页
在蚊虫分类中,长期以来都是以形态特征作为分类的依据,然而世界上重要的媒介蚊虫几乎都属于由几个甚至十几个近缘种组成的复合体,它们虽然外部形态相似,但其生态习性、分布区域和媒介效能等却可能有很大差异,所以对其进行正确鉴别具有... 在蚊虫分类中,长期以来都是以形态特征作为分类的依据,然而世界上重要的媒介蚊虫几乎都属于由几个甚至十几个近缘种组成的复合体,它们虽然外部形态相似,但其生态习性、分布区域和媒介效能等却可能有很大差异,所以对其进行正确鉴别具有重要的流行病学意义。然而许多复合体的相继发现,亲缘种的存在,使得单纯的形态分类学无法对其进行正确鉴别。虽然有些学者已经应用遗传杂交、同工酶、多线染色体及气相层析分析昆虫体表碳水化合物组分等方法对近缘种进行了分类研究,但都难以对亲缘种做出可靠鉴定或在流行病学调查中推广应用。 近30年来分子生物学技术迅速发展,显示其在蚊类鉴别应用中的极大潜力,为蚊虫分类学研究提供了许多新思路新方法。其中PCR技术由于原理简单,方法简便,敏感性高,标本材料极省,蚊类虫期、性别不限等优点,被广泛应用于蚊虫近缘种的分类鉴定中。Paskewitz等首先应用PCR技术,对冈比亚按蚊(An.gambiae)和阿拉伯按蚊(An.arbiebsis)进行分类鉴定。Porter和Collins对佛氏按蚊(An.freeborni)和赫氏按蚊(An hermsi)的rD-NA/ITS2区使用PCR法作蚊种鉴别,其他一些国内外学者在此方面也进行了一些研究,本文就该领域的研究现状及PCR技术应用于蚊虫分类的特点进行简要的概述。 展开更多
关键词 聚合链式反应 pcr 蚊虫分类鉴定 DNA
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聚合酶链式反应(PCR)技术在植物病害诊断中的应用 被引量:2
11
作者 邓晓东 刘志昕 郑学勤 《热带农业科学》 1998年第4期48-53,共6页
PCR技术是一项崭新的体外扩增基因的技术 ,已广泛应用于与生命相关的学科的研究。本文从植物病害检测的角度 ,探讨如何应用PCR技术来进行植物病害的检测。
关键词 植物病害 检测 pcr技术 聚合链式反应
全文增补中
多聚酶链反应(PCR)在法医生物学检材鉴定中应用及前景 被引量:1
12
作者 王抒 孟庆媛 +3 位作者 郭梦凡 金玉珍 高祥亭 袁德新 《黑龙江医药科学》 2004年第3期98-98,共1页
目的 :把多聚酶链反应 (PCR)应用在法医生物学检材中进行遗传标志的分型检测。方法 :运用体外 DNA扩增技术 ,选择不同的耐热 DNA聚合酶 ,改进缓冲液成分及循环条件等。结果 :已达到接近个体绝对认定。结论 :如果找到一种能停留在模板 DN... 目的 :把多聚酶链反应 (PCR)应用在法医生物学检材中进行遗传标志的分型检测。方法 :运用体外 DNA扩增技术 ,选择不同的耐热 DNA聚合酶 ,改进缓冲液成分及循环条件等。结果 :已达到接近个体绝对认定。结论 :如果找到一种能停留在模板 DNA链上相对更长时间、合成速度更快的 DNA聚合酶 ,将进一步推动 (PCR)的发展。 展开更多
关键词 多聚反应 pcr DNA聚合 法医学
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肺炎支原体快速聚合酶链式反应(PCR)法检测 被引量:2
13
作者 糜祖煌 李迎伟 《中国优生与遗传杂志》 1994年第2期4-5,共2页
本文根据Bernei设计的肺炎支原体PCR引物,采用国产的耐热DNA聚合酶,建立了双温循环肺炎支原体PCR快速检测法。40例儿童肺炎咽拭子标本中,8例呈阳性结果。
关键词 肺炎支原体 聚合链式反应 pcr) 咽拭子 阳性结果 标本 DNA聚合 pcr引物 循环
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多聚酶链式反应随机引物扩增的DNA多态指模技术在幽门螺杆菌菌株鉴别中的应用 被引量:1
14
作者 陈旻湖 曾志荣 胡品津 《现代消化病及内镜杂志》 1996年第4期285-288,共4页
本文利用多聚酶链式反应随机引物扩增的DNA(RAPD)多态指模技术研究其在HP菌株鉴别的应用。对47例株HP进行RAPD多态指模分析。结果发现:①40株由不同病人分离的HP菌株有不同的DNA指模;②同一菌株多次培养后其DNA指模无改变;③HP根除疗法... 本文利用多聚酶链式反应随机引物扩增的DNA(RAPD)多态指模技术研究其在HP菌株鉴别的应用。对47例株HP进行RAPD多态指模分析。结果发现:①40株由不同病人分离的HP菌株有不同的DNA指模;②同一菌株多次培养后其DNA指模无改变;③HP根除疗法后3个月4例、6个月1例(分离的HP菌株分与治疗前相同,提示可能是HP复发;④HP根除疗法后6个月及24个月各1例)与治疗前分离的菌株DNA指模不同,提示可能是HP再感染。结果提示RAPD多态指模技术对HP菌株的鉴别有价值。 展开更多
关键词 多聚链式反应 随机引物扩增 DNA多态指模技术 幽门螺杆菌 菌株鉴别 RAPD 菌株
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多聚酶链式反应技术及其在感染性疾病中的应用前景
15
作者 郭林生 张永源 郝连杰 《国外医学(儿科学分册)》 北大核心 1990年第5期225-228,共4页
多聚酶链式反应(PCR)技术是新近建立起来的分子生物学技术。利用特异性引物(Primef)引导特异性 DNA 酶进行扩增,使敏感性提高百万倍,并且快速、特异、易于自动化。因此,它对于早期诊断、传染源筛选、低含量病源感染、病源基因组监测和... 多聚酶链式反应(PCR)技术是新近建立起来的分子生物学技术。利用特异性引物(Primef)引导特异性 DNA 酶进行扩增,使敏感性提高百万倍,并且快速、特异、易于自动化。因此,它对于早期诊断、传染源筛选、低含量病源感染、病源基因组监测和高效克隆化等将有突出贡献。本文对其方法、原理、特征及在感染性疾病中的应用现状和前景作一综述。 展开更多
关键词 多聚 链式反应技术 感染性疾病
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多聚酶链式反应技术及其在畜牧兽医领域的应用
16
作者 陈怀青 陆承平 《中国兽医科技》 CSCD 1991年第12期46-47,共2页
近20年来,随着一系列新技术的出现及改进,分子生物学领域已发生了一场深刻的革命。这些新技术包括用各种DNA修饰酶(如DNA限制性内切酶及DNA连接酶)对DNA进行切割和连接,用质粒、病毒等作载体对特异性的DNA进行克隆和大量扩增,DNA顺序分... 近20年来,随着一系列新技术的出现及改进,分子生物学领域已发生了一场深刻的革命。这些新技术包括用各种DNA修饰酶(如DNA限制性内切酶及DNA连接酶)对DNA进行切割和连接,用质粒、病毒等作载体对特异性的DNA进行克隆和大量扩增,DNA顺序分析,核酸杂交及DNA化学合成等。新近又产生了多聚酶链式反应技术(polyme-rase chain reaction,PCR)。该技术自1985年首次报道以来,到目前为止采用它进行的研究已超过600项。本文将介绍该技术的原理,主要过程及在畜牧兽医领域的应用前景。 展开更多
关键词 多聚 链式反应 畜牧 兽医 应用
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多聚酶链式反应在法医学中的应用
17
作者 张武扬 《法医学杂志》 CAS CSCD 1990年第2期32-35,39,共5页
多聚酶链式反应(Polymerasa Chain reaction,PCR)是分子生物学中新近发展起来的一种先进的DNA片段体外扩增技术,只需有合适的试剂和普通的实验室设备,可以在几小时之内,将特定的DNA片段扩增几百万倍,使极微量的DNA扩增到检测分析... 多聚酶链式反应(Polymerasa Chain reaction,PCR)是分子生物学中新近发展起来的一种先进的DNA片段体外扩增技术,只需有合适的试剂和普通的实验室设备,可以在几小时之内,将特定的DNA片段扩增几百万倍,使极微量的DNA扩增到检测分析所需要的量。该法操作简便,易于普及。所以自Mullis创建此法以来,很快得到重视和发展。多聚酶链式反应在法医工作中对检测分析微量检材内的DNA颇为有利,故综合介绍如下。 展开更多
关键词 多聚链式反应 法医学 DNA片段 体外扩增技术 检测分析 CHAIN 分子生物学 实验室设备 DNA扩增 pcr) 微量
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多聚酶链式反应在血液病诊断与监测中的应用
18
作者 欧英贤 《西北国防医学杂志》 CAS 1993年第2期77-79,共3页
多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术由美国Cetus公司Mullis等于1985年建立.它是一种在体外将特异性DNA序列进行高效扩增的方法.不仅被广泛用于遗传性疾病及其产前诊断、感染性疾病病原的检测,而且用于各种类型肿瘤基因... 多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术由美国Cetus公司Mullis等于1985年建立.它是一种在体外将特异性DNA序列进行高效扩增的方法.不仅被广泛用于遗传性疾病及其产前诊断、感染性疾病病原的检测,而且用于各种类型肿瘤基因的研究.PCR作为一个“无细胞基因扩增系统”,其基础理论及应用研究主要用于从基因组DNA中产生大量特异DNA片段用于序列分析或分子克隆.从已知两端序列的双链DNA中产生特异性片段作为分子探针.通过选择性扩增cDNA的特殊片段进行cDNA克隆。 展开更多
关键词 多聚链式反应 克隆基因 分子克隆 序列分析 血液病诊断 肿瘤基因 DNA 产前诊断 POLYMERASE 分子探针
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多聚酶链式反应
19
作者 毛裕民 《生命科学》 CSCD 1989年第5期26-26,共1页
1985年以前进行遗传病的产前诊断一般都用羊膜穿刺术取羊水中的胎儿脱落细胞,抽提DNA,然后用分子杂交等方法进行检测。一次检测需要几天时间,这方法不能用于早期胎儿,操作既复杂且较不安全。1985年美国Cetus公司人类遗传学研究室首创多... 1985年以前进行遗传病的产前诊断一般都用羊膜穿刺术取羊水中的胎儿脱落细胞,抽提DNA,然后用分子杂交等方法进行检测。一次检测需要几天时间,这方法不能用于早期胎儿,操作既复杂且较不安全。1985年美国Cetus公司人类遗传学研究室首创多聚酶链式反应(PCR)方法,把待检测的少量DNA先行扩增然后检测,这样可以提高灵敏度100倍以上,每次检测可以在10小时内完成,又适用于两周的胎儿,手续简便而安全。扩增前先要合成两个小片段引物,分别互补于待扩增DNA片段的两个互补单链的两端。 展开更多
关键词 多聚链式反应 羊膜穿刺术 产前诊断 人类遗传学 脱落细胞 DNA 分子杂交 检测需要 复制周期 嗜温细菌
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聚合酶链式反应(PCR)技术鉴定啤酒腐败菌的最新进展 被引量:9
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作者 徐岩 张丽苹 顾国贤 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期71-74,共4页
综述了PCR技术在啤酒腐败细菌鉴定方面的应用及最新进展 ;介绍了 3种PCR技术 ,特别讲述了利用这些技术对啤酒中乳酸菌的鉴定 ;并分析了PCR技术的局限性 ,对其应用前景进行了展望。
关键词 聚合 链式反应技术 腐败菌 鉴定 啤酒 pcr技术
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