期刊文献+
共找到3,234篇文章
< 1 2 162 >
每页显示 20 50 100
鸭源肠致病性大肠杆菌的耐药特征及全基因组学分析 被引量:1
1
作者 李俊霖 胡家萌 +6 位作者 汪骆 李佳芮 刘淏天 夏静 崔敏 邹立扣 韩新锋 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期701-707,共7页
目的了解鸭源肠致病性大肠杆菌(EPEC)的耐药情况及全基因组特征,探究鸭源EPEC的致病潜力,为临床治疗提供理论基础。方法PCR鉴定出EPEC分离株,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,并对其进行全基因组测序,分析EPEC的血清型、ST型、质粒不相... 目的了解鸭源肠致病性大肠杆菌(EPEC)的耐药情况及全基因组特征,探究鸭源EPEC的致病潜力,为临床治疗提供理论基础。方法PCR鉴定出EPEC分离株,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验,并对其进行全基因组测序,分析EPEC的血清型、ST型、质粒不相容群类型及其携带的耐药基因与毒力基因。结果共鉴定出10株EPEC,血清型包括O71∶H40和O3∶H21两种;所有EPEC菌株均表现出多重耐药,对环丙沙星、链霉素、四环素、多粘菌素B最为耐药,耐药率高达100%,对头孢西丁最为敏感,对阿米卡星、亚胺培南较敏感;所有菌株均携带有四环素耐药基因tet(A),以及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)耐药基因,包括bla OXA-10、bla TEM-1A、bla TEM-1B;分离株检测到多种毒力基因,与分泌系统相关的毒力基因最多,未检测到bfp基因及perABC基因。结论鸭源EPEC分离株都为非典型EPEC(aEPEC),具有多重耐药性,检测到多种质粒不相容群,携带多种耐药基因与毒力基因,对人具有潜在致病性,需要加强对鸭源EPEC的监测以有效控制鸭源EPEC的传播,防止其对人类健康造成危害。 展开更多
关键词 肠致病性大肠杆菌 耐药性 基因组测序 耐药基因 毒力基因
下载PDF
强化厌氧表达dld基因以提高大肠杆菌工程菌发酵产L-乳酸的光学纯度
2
作者 余杰 李正 +3 位作者 王金华 王永泽 高娃 赵筱 《中国酿造》 CAS 北大核心 2024年第8期115-121,共7页
为去除廉价发酵原料中的D-乳酸从而提高发酵最终产物L-乳酸的光学纯度,该研究通过构建带有不同厌氧诱导启动子(pflBp6、pnirB、pflBp6-pnirB)的D-乳酸脱氢酶基因(dld)的表达质粒,并将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)HBUT-L,加强... 为去除廉价发酵原料中的D-乳酸从而提高发酵最终产物L-乳酸的光学纯度,该研究通过构建带有不同厌氧诱导启动子(pflBp6、pnirB、pflBp6-pnirB)的D-乳酸脱氢酶基因(dld)的表达质粒,并将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)HBUT-L,加强其在发酵产L-乳酸的同时消除外源D-乳酸的能力。通过装液量与转速的单因素试验筛选最优的质粒表达条件及菌株,并在无机盐培养基与玉米浆培养基中进行发酵验证。结果表明,在装液量为200 mL/250 mL、转速为150 r/min的条件下,含有启动子pflBp6-pnirB的表达质粒的工程菌株HBUT-L4发酵18 h时D-乳酸脱氢酶活力最高,为81.1 U/g。在此条件下进行无机盐培养基和玉米浆培养基发酵时,工程菌株HBUT-L4相对于出发菌株HBUT-L,D-乳酸消耗速率分别提高250%、217%,L-乳酸的光学纯度分别从96.32%、98.48%提升至99.95%、99.98%。在大肠杆菌工程菌发酵L-乳酸的过程中,带有厌氧诱导启动子pflBp6-pnirB的表达质粒可提高D-乳酸脱氢酶活力,强化菌株消除外源D-乳酸,进而提高L-乳酸的光学纯度的能力,具有重要的工业化应用价值。 展开更多
关键词 L-乳酸 光学纯度 启动子 D-乳酸脱氢酶基因 大肠杆菌
下载PDF
鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药性分析和耐药基因检测
3
作者 张萍 王静悦 +6 位作者 刘海侠 徐孝宙 陈晓庆 方光远 薛媚 罗万和 高修歌 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第5期44-50,共7页
为研究江苏部分地区鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药物的耐药情况和耐药基因,分析其耐药表型与耐药基因的相关性,以K-B纸片扩散法对分离的20株鸡源大肠杆菌进行11种β-内酰胺类药物的敏感性分析,PCR法检测bla_(CTX-M-1)、bla_(CTX-M-2)... 为研究江苏部分地区鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药物的耐药情况和耐药基因,分析其耐药表型与耐药基因的相关性,以K-B纸片扩散法对分离的20株鸡源大肠杆菌进行11种β-内酰胺类药物的敏感性分析,PCR法检测bla_(CTX-M-1)、bla_(CTX-M-2)、bla_(CTX-M-8)、bla_(CTX-M-9)、bla_(TEM)与bla_(SHV)等6种耐药基因携带情况。结果显示:20株鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药率较高,其中苯唑西林为100%,氨苄西林为75%,头孢呋辛为70%,对头孢哌酮、头孢曲松的耐药率最低,均为30%,且分离菌株表现为多重耐药;共检出3种耐药基因,bla_(CTX-M-1)、bla_(TEM)、bla_(SHV),检出率分别为85%、30%、30%,7株分离菌同时携带2种及以上耐药基因,占比35%(7/20);11种β-内酰胺类药物与blaCTX-M-1基因的符合率较高,均达85%以上,与bla_(SHV)基因的符合率相对低些,均在40%以下,且耐药表型与耐药基因型并不完全吻合。提示:江苏部分地区鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药问题比较严重,应加强当地鸡源大肠杆菌的耐药性监测,从而选择合适的药物防治鸡大肠杆菌病。 展开更多
关键词 大肠杆菌 耐药性 Β-内酰胺类 耐药基因
下载PDF
鸡源大肠杆菌生物被膜形成与耐药性、毒力基因的关联性分析
4
作者 陶梦珂 李苗苗 +5 位作者 石晴晴 赵恒 张鲁星 胡功政 潘玉善 刘建华 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第6期86-93,共8页
旨在了解鸡源大肠杆菌临床分离株生物被膜形成能力与耐药性、毒力基因之间的关系。通过刚果红试验、结晶紫染色法测定生物被膜形成能力;采用微量肉汤稀释法检测分离株对阿莫西林、氟苯尼考、庆大霉素等8种抗菌药的耐药性;PCR检测常见耐... 旨在了解鸡源大肠杆菌临床分离株生物被膜形成能力与耐药性、毒力基因之间的关系。通过刚果红试验、结晶紫染色法测定生物被膜形成能力;采用微量肉汤稀释法检测分离株对阿莫西林、氟苯尼考、庆大霉素等8种抗菌药的耐药性;PCR检测常见耐药、毒力基因携带情况;采用实时荧光定量PCR检测毒力基因在生物被膜阳性菌中的表达量。结果表明,在51株分离株中,生物被膜阳性菌株比例为19.61%,阳性菌株中,OD_(600)最大值为2.233±0.702,最小值为0.374±0.099,其他介于1.455~1.604之间;耐药性检测显示,生物被膜阳性菌株对头孢喹肟、氟苯尼考、庆大霉素、阿米卡星、黏菌素的耐药率均高于阴性菌株,其中对阿米卡星和黏菌素差异显著(P<0.05),但对多西环素耐药率低于阴性菌株,差异显著(P<0.05),二者对阿莫西林+克拉维酸、恩诺沙星耐药率无差异;OD_(600)值最大的E13对8种测定药物全部耐药,6株OD_(600)值介于1.455~1.604的菌株对5种及以上抗菌药产生耐药性,OD_(600)值为0.374的菌株E39为敏感菌株。PCR结果显示耐药基因bla_(CTX-M-9)、bla_(CTX-M-U)、bla_(OXA-1)、mcr-1、rmtB、floR在生物被膜阳性菌株中的检出率高于阴性菌株,菌株E13同时携带9种耐药基因;共检出16种毒力基因,其中fimH、astA、aggR、irp1、iucD、fyuA、ybtA、ompA在生物被膜阳性菌株中的检出率高于阴性菌株,且阳性菌株毒力基因型复杂;以OD_(600)值为0.374的E39菌株为对照,OD_(600)值较大的生物被膜阳性菌株中,fimH、ompA、ompA、iucD、hlyF毒力基因表达呈现上调趋势。综上,与生物被膜阴性菌株相比,大肠杆菌生物被膜阳性菌株耐药更为严重,携带毒力基因型更加复杂多样,且毒力基因表达呈现上调趋势。 展开更多
关键词 大肠杆菌 生物被膜 毒力基因 耐药基因 耐药性
下载PDF
绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因的分子特征及抗原性分析
5
作者 操义恒 贾开文 +10 位作者 党士荣 胡亚辉 王巧梅 俞杰 郭云霞 周霞 黄新 钟发钢 韩猛立 吴桐忠 张倩 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第17期58-64,共7页
为研究绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因的分子特征、抗原性及其遗传进化关系,采用PCR技术对绵羊肺源大肠杆菌XJ10菌株的cyaA基因进行扩增、克隆并测序,应用定量PCR检测cyaA基因在不同培养阶段的mRNA表达量,利用在线软件对其进行编码蛋白分子... 为研究绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因的分子特征、抗原性及其遗传进化关系,采用PCR技术对绵羊肺源大肠杆菌XJ10菌株的cyaA基因进行扩增、克隆并测序,应用定量PCR检测cyaA基因在不同培养阶段的mRNA表达量,利用在线软件对其进行编码蛋白分子特征、抗原性及其遗传进化分析。结果显示,cyaA基因全长2547 bp,编码848个氨基酸;cyaA基因在细菌对数期的mRNA表达量最高,其次是稳定期及迟缓期,在衰亡期的mRNA表达量最低;氨基酸序列分析发现,分子式为C_(4389)H_(6759)N_(1193)O_(1273)S_(30),理论分子质量为97.57 ku,理论等电点为5.82,为酸性亲水性蛋白,稳定性较低;二级结构中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-折叠所占比例分别为42.81%、39.03%、14.27%和3.89%。AC蛋白无信号肽与跨膜区,保守结构域位于1~848位氨基酸,属于腺苷酸环化酶超家族,具有14个开放阅读框,存在81个磷酸化位点。AC蛋白B细胞优势表位共16个,分别位于第44~51、61~65、248~250、259~267、296~304、355~366、436~439、456~456、476~481、489~490、540~559、589~597、634~640、717~722、766~773、806~806区段;遗传进化分析发现大肠杆菌XJ10菌株AC蛋白与志贺氏菌AC蛋白相似性最高。本试验结果为进一步研究大肠杆菌AC蛋白的功能及其作为大肠杆菌疫苗候选抗原奠定了基础。 展开更多
关键词 绵羊肺源大肠杆菌 cyaA基因 分子特征 抗原性 遗传进化
下载PDF
大肠杆菌合成2'-岩藻糖基乳糖基因组整合型菌株构建及发酵优化
6
作者 劳才文 吴金勇 +5 位作者 李忠奎 廖迎雪 王纪 袁丽霞 陈祥松 姚建铭 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2024年第1期124-131,共8页
2’-岩藻糖基乳糖(2’-Fucosyllactose,2’-FL)是一种岩藻糖化人乳低聚糖,具有预防肠道疾病、提高免疫力、促进大脑发育等重要生理功能。基于基因组水平,通过敲除大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中2’-FL合成前体物质相关代谢基因,... 2’-岩藻糖基乳糖(2’-Fucosyllactose,2’-FL)是一种岩藻糖化人乳低聚糖,具有预防肠道疾病、提高免疫力、促进大脑发育等重要生理功能。基于基因组水平,通过敲除大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中2’-FL合成前体物质相关代谢基因,如β-半乳糖苷酶基因(β-galactosidase,lac Z)、UDP-葡萄糖脂质载体转移酶基因(undecaprenyl-phosphate glucose-1-phosphate transferase,wca J)和GDP-甘露糖基水解酶基因(GDP-mannose mannosyl hydrolase,nud D),构建2’-FL合成底盘细胞;在此基础上,将外源α-1,2-岩藻糖基转移酶基因(α-1,2-Fucosyltransferase,wbg L)和磷酸甘露糖变位酶基因(phosphomannomutase,man B)、甘露糖-1-磷酸鸟苷转移酶基因(annose-1-phosphate guanylyltransferas,man C)、GDP-D-甘露糖-4,6-脱水酶基因(GDP-mannose 4,6-dehydratase,gmd)和GDP-岩藻糖合酶基因(GDP-L-fucose synthase,wca G)引入到大肠杆菌基因组中,探究在基因组水平过表达2’-FL合成基因对2’-FL产量的影响。结果表明,2’-FL在所构建菌株B-05的摇瓶含量达到了1.99 g·L^(-1)。进一步通过摇瓶发酵优化确定了最优发酵条件:IPTG诱导浓度为0.4 mmol·L^(-1)、诱导时OD600为2.4,诱导温度为28℃。在此条件下,摇瓶中2’-FL合成量达到了3.92 g·L^(-1)。最后在5 L发酵罐中,2’-FL含量达到了43.48 g·L^(-1)。研究表明通过将外源2’-FL相关合成基因导入基因组中进行过表达,实现了2’-FL高效合成,为构建整合型2’-FL菌株提供了数据支撑。 展开更多
关键词 2’-岩藻糖基乳糖 重组大肠杆菌 基因敲除 发酵优化
原文传递
抗仔猪腹泻大肠杆菌细菌素的筛选及全基因组测序分析
7
作者 陆童 王云飞 +3 位作者 蒋吕鹏 董文龙 李国江 尹柏双 《中国饲料》 北大核心 2024年第21期26-31,共6页
为筛选对大肠杆菌高效、稳定的乳酸菌细菌素,本试验从内蒙古自治区泡菜中分离鉴定一株植物乳杆菌,命名为LT-1,其所产细菌素pH为3时抑菌效果最好,且热稳定性较好,经100℃处理后,其抑菌活性略微减小,其所产细菌素对木瓜蛋白酶、胃蛋白酶... 为筛选对大肠杆菌高效、稳定的乳酸菌细菌素,本试验从内蒙古自治区泡菜中分离鉴定一株植物乳杆菌,命名为LT-1,其所产细菌素pH为3时抑菌效果最好,且热稳定性较好,经100℃处理后,其抑菌活性略微减小,其所产细菌素对木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K较为敏感。LT-1所产细菌素对大肠杆菌ATCC25922及大肠杆菌临床分离株有良好的抑菌活性。对LT-1进行全基因组测序对其细菌素编码基因簇进行预测,LT-1所产细菌素的基因簇主要编码乳球菌素、肠球菌素和细菌素免疫蛋白。本研究所筛选的细菌素具有良好的抗菌活性,为大肠杆菌替抗产品的研发奠定良好的基础。 展开更多
关键词 植物乳杆菌 大肠杆菌 仔猪腹泻 细菌素 基因组测序
下载PDF
通辽部分地区鸭源大肠杆菌耐药性检测及多重耐药菌株YA-1全基因组测序分析
8
作者 王梓 孙淼 +6 位作者 王永强 孟令浩 耿超 石金川 陈伟 邱军 刘锴 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2585-2596,共12页
【目的】大肠杆菌作为家禽最常见细菌性病原之一,其耐药性的不断增强已引起广泛关注。试验旨在了解通辽地区部分鸭场大肠杆菌的耐药性及耐药基因分布,为该地区鸭源大肠杆菌耐药性及耐药基因的研究提供参考。【方法】经16S rRNA测序、生... 【目的】大肠杆菌作为家禽最常见细菌性病原之一,其耐药性的不断增强已引起广泛关注。试验旨在了解通辽地区部分鸭场大肠杆菌的耐药性及耐药基因分布,为该地区鸭源大肠杆菌耐药性及耐药基因的研究提供参考。【方法】经16S rRNA测序、生化试验和小鼠致病性试验对送检的通辽市各旗县15份病死鸭肠道样品进行病原菌分离纯化,对分离菌株进行药敏试验及耐药基因的PCR检测,并选取多重耐药菌株进行全基因组测序。【结果】所分离的10株鸭源大肠杆菌均具有不同程度耐药性,对链霉素、环丙沙星、恩诺沙星等药物的耐药率在80%及以上,耐药基因aphA1、strB和qnrS的检出率最高,达到100%。多重耐药菌株YA-1全基因组测序证实,该菌株染色体大小为4 844 827 bp,携带3个完整的质粒,大小分别为144 776 bp(pTLYA-1)、113 584 bp(pTLYA-2)和77 544 bp(pTLYA-3)。分离菌株携带arr-3、aadA16、sul1等70个耐药基因,其中pTLYA-1中携arr-3、dfrA27、aadA16等8个可移动耐药基因,pTLYA-3中携带floR、tetA、sul2等5个可移动耐药基因,pTLYA-2中未发现耐药基因。【结论】由通辽地区部分鸭场分离的鸭源大肠杆菌存在多重耐药性,耐药水平较高,aphA1、strB和qnrS耐药基因普遍流行。 展开更多
关键词 大肠杆菌 耐药性 耐药基因 基因组测序
下载PDF
新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性、CTX-M基因携带情况与毒力基因检测
9
作者 赵耀 邢国锋 +4 位作者 苏帆帆 高攀 彭健 吴自豪 吴静 《畜牧与饲料科学》 2024年第1期94-101,共8页
[目的]了解新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性及CTX-M基因和毒力基因携带情况。[方法]从塔额垦区某牛场采集16份牛腹泻粪样,通过选择性培养、革兰染色镜检、16S rDNA PCR扩增及测序进行大肠杆菌分离鉴定。利用PCR法对牛源大... [目的]了解新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌耐药性及CTX-M基因和毒力基因携带情况。[方法]从塔额垦区某牛场采集16份牛腹泻粪样,通过选择性培养、革兰染色镜检、16S rDNA PCR扩增及测序进行大肠杆菌分离鉴定。利用PCR法对牛源大肠杆菌分离株进行分子分型(系统发育群和脂多糖核心型)以及耐药基因、CTX-M基因亚型、毒力基因检测;分别使用K-B纸片法、CTX与TCL双纸片法进行药物敏感性试验和产ESBLs大肠杆菌鉴定;采用结晶紫染色法半定量检测菌株的生物被膜形成能力。[结果]根据菌落生长特征、革兰染色特性及16S rDNA测序结果,从16份牛腹泻粪样中分离鉴定出16株大肠杆菌,分离率为100%;系统发育群主要为B1群(14/16,87.50%),脂多糖核心型多为R1型(15/16,93.75%)。分离菌株对青霉素、利福平、复方新诺明表现出较强耐药性,耐药率分别为100%、68.75%、68.75%;对多黏菌素、替加环素、美罗培南敏感,耐药率均为0;有12株(75.00%)具有多重耐药表型;有11株(68.75%)产ESBLs;有15株(93.75%)可形成生物被膜。16株大肠杆菌中共检出17种耐药基因,CTX-M、ant(6′)、sul1等8种耐药基因的检出率为100%;有14株(87.50%)为CTX-M-1G基因亚型;共检出12种毒力基因,iroN、ompA、yijP等5种毒力基因的检出率为100%。[结论]新疆维吾尔自治区塔额垦区牛源大肠杆菌CTX-M基因检出率较高,携带多种耐药基因和毒力基因,耐药性较强,对该地区牛健康养殖存在潜在威胁,应加强该地区CTX-M型大肠杆菌的流行情况监控。 展开更多
关键词 大肠杆菌 CTX-M基因 分子分型 耐药性 毒力基因
下载PDF
1株棕熊源多重耐药大肠杆菌噬菌体生物学特性及比较基因组学研究
10
作者 郭志良 朱秋艳 +10 位作者 王雪 曾君 季芳 郑迎春 左君豪 张乐怡 郭常春 王学静 徐莉莉 赵瑞利 王承民 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4510-4521,共12页
【目的】探究1株多重耐药大肠杆菌裂解性噬菌体的生物学特性及基因组特征,为多重耐药菌株的科学防控提供参考。【方法】试验以棕熊源大肠杆菌M719-6WT为宿主菌,使用双层平板法从养殖场污水中分离纯化出噬菌体,通过透射电镜观察其形态,... 【目的】探究1株多重耐药大肠杆菌裂解性噬菌体的生物学特性及基因组特征,为多重耐药菌株的科学防控提供参考。【方法】试验以棕熊源大肠杆菌M719-6WT为宿主菌,使用双层平板法从养殖场污水中分离纯化出噬菌体,通过透射电镜观察其形态,利用空斑法测定噬菌体宿主谱,并探究其生物学特性。基于噬菌体全基因组测序数据进行噬菌体生物信息学分析,采用体外、体内抑菌试验评估噬菌体抑菌效果。【结果】通过双层平板法分离并纯化得到1株大肠杆菌噬菌体,命名为pEC-M719-6WT.2,其噬菌斑边缘清晰且透亮。结合透射电镜观察和全基因组分析结果显示,噬菌体pEC-M719-6WT.2属于Tevenvirinae亚科肌尾状噬菌体。宿主谱测定结果表明,噬菌体pEC-M719-6WT.2可裂解11株大肠杆菌。该噬菌体最佳感染复数(MOI)为0.1,最适温度为25℃,最适pH为7.0,潜伏期<10 min,裂解周期为70 min,裂解量约为190 PFU/cell。基因组分析结果显示,噬菌体pEC-M719-6WT.2基因组大小为170.441 kb,未发现携带已知的耐药、溶原和毒力相关基因。受体结合试验结果显示,噬菌体pEC-M719-6WT.2可以结合宿主菌表面的脂多糖受体。体外抑菌试验结果显示,当MOI为100时,噬菌体pEC-M719-6WT.2与8μg/mL四环素联合应用,抑菌时间可延长至24 h;体内保护试验结果表明,2.8×10^(5) CFU/mL M719-6WT感染大蜡螟幼虫后,注射2×10^(7) PFU/mL噬菌体pEC-M719-6WT.2可在24和48 h内将大蜡螟幼虫存活率分别提高至100%和70%。【结论】本研究分离获得1株多重耐药大肠杆菌噬菌体,其具有良好的环境稳定性和抑菌活性,生物信息学特征明确,体内外抑菌效果较好,与抗生素联合使用可产生协同作用,具有治疗临床耐药大肠杆菌感染的潜在应用价值。 展开更多
关键词 噬菌体 大肠杆菌 多重耐药 生物学特性 比较基因组学
下载PDF
基于基因组重测序的高产尿苷大肠杆菌工程菌株的构建
11
作者 韩琳琳 武子淇 徐大庆 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期93-100,共8页
以大肠杆菌高产胞苷E.coli XD10为出发菌株,首先对其进行基因组重测序,分析其相较于野生型菌株的尿苷合成及降解相关基因变化情况。应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过依次构建T7 RNA聚合酶基因T7 gene 1、使用异源T7启动子的催化胞苷向... 以大肠杆菌高产胞苷E.coli XD10为出发菌株,首先对其进行基因组重测序,分析其相较于野生型菌株的尿苷合成及降解相关基因变化情况。应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,通过依次构建T7 RNA聚合酶基因T7 gene 1、使用异源T7启动子的催化胞苷向尿苷转化的胞苷脱氨酶基因cdd以及催化尿苷降解的核苷酸-5′磷酸核苷酶基因ppnN的敲除质粒及其同源修复供体DNA片段,将敲除质粒及相应同源修复供体共转化大肠杆菌感受态细胞,PCR和测序验证正确的转化子进行打靶质粒和pCas质粒的消除,获得基因编辑大肠杆菌工程菌株E.coli URI-1、URI-2和URI-3。半定量PCR实验结果表明,染色体敲入的T7 gene 1和cdd基因在工程菌株中均进行了有效表达。使用T7转录系统过表达cdd基因的URI-2菌株摇瓶发酵产物的HPLC检测结果显示,其发酵液中尿苷产量为8.32 g/L,而出发菌株XD10发酵液尿苷产量为0.80 g/L。进一步敲除ppnN基因的工程菌株URI-3发酵液尿苷HPLC检测产量为10.76 g/L,显著高于URI-2发酵液尿苷产量(P<0.05)。本研究获得的高产尿苷大肠杆菌工程菌株,为尿苷的工业化发酵生产提供了菌种保障。 展开更多
关键词 大肠杆菌 基因组重测序 CRISPR/Cas9基因编辑技术 尿苷生产 工程菌株
下载PDF
猪肠道非致病性且无耐药性大肠杆菌的分离鉴定、生长特性和基因组进化分析 被引量:1
12
作者 区炳明 陈晓洁 +6 位作者 李清青 陈锦洪 萧碧扬 钟炜楠 林雪 刘蕾蕾 张敏瑜 《广东农业科学》 CAS 2024年第5期115-124,共10页
【目的】从猪肠道中分离出无毒力基因且无抗生素耐药性的大肠杆菌,并分析其生长性能和遗传进化规律,以期为开发猪用微生态制剂或口服疫苗奠定基础。【方法】采集广东省2个地区养猪场的11头和15头健康成年猪的粪便样本。首先,采用培养方... 【目的】从猪肠道中分离出无毒力基因且无抗生素耐药性的大肠杆菌,并分析其生长性能和遗传进化规律,以期为开发猪用微生态制剂或口服疫苗奠定基础。【方法】采集广东省2个地区养猪场的11头和15头健康成年猪的粪便样本。首先,采用培养方法从麦康凯培养基中分离出疑似大肠杆菌的菌株,通过16S rRNA序列分析鉴定其是否为大肠杆菌菌株;然后,采用PCR方法验证所选大肠杆菌是否含有13种常见的猪致病性大肠杆菌毒力基因,并以7类(14种)抗生素进行药敏试验;最后,对筛选出的优质大肠杆菌菌株进行生长动力学分析,并提取其全基因组DNA,构建全基因组系统进化树。【结果】在260株疑似为大肠杆菌菌株中,经16S rRNA序列分析确认后有206株属于大肠杆菌。其中,107株大肠杆菌不含13种常见毒力基因,25株大肠杆菌对7类(14种)抗生素敏感。在这25株菌株中,有23株非致病性且无抗生素耐药性大肠杆菌(编号为2-9、3-2、3-4、5-1、6-1、6-2、6-9、6-10、8-2、8-9、10-5、B-4、B-6、B-7、B-10、D-10、E-2、E-10、J-1、J-4、K-6、L-6和O-9)的生长性能与大肠杆菌Nissle1917、MG1655相似,其他2株大肠杆菌(编号为6-4和5-2)的生长速度高于Nissle 1917和MG1655。此外,有10株菌株(编号为E-10、E-2、6-4、6-9、8-2、O-9、3-2、6-2、J-1、K-6)耐酸性能较好,可能适合长期定殖于猪胃肠道内。基于SNP核心基因组系统进化树分析,发现这25株菌株中有9株菌株(编号为3-2、6-10、10-5、6-1、8-9、5-2、L-6、O-9、K-6)在系统进化树开端处属于同一大类群,表明它们极可能为猪原生大肠杆菌的祖先群。【结论】综合上述大肠杆菌的抗生素敏感性、生长性能和全基因组进化树和胃液环境耐受性能分析,菌株O-9在这4个方面均具备优势,该菌株与大肠杆菌Nissle 1917、MG1655的生长动力学相似甚至更优,意味着O-9菌株可能是优质的猪肠道原生大肠杆菌,具有极大研究潜力。 展开更多
关键词 原生大肠杆菌 毒力基因 抗生素耐药性 生长特性 遗传进化
下载PDF
新疆维吾尔自治区阿克苏地区某屠宰场羊源大肠杆菌MLST分型、耐药性分析和毒力基因检测
13
作者 李广西 韩婷婷 +1 位作者 吴自豪 吴静 《畜牧与饲料科学》 2024年第2期95-102,共8页
[目的]了解新疆维吾尔自治区阿克苏地区屠宰场羊源大肠杆菌的流行情况以及耐药性和毒力基因分布特征。[方法]从阿克苏地区某屠宰场采集健康羊的淋巴结、胴体拭子、粪便样本共30份,使用选择性培养基分离大肠杆菌,然后采用大肠杆菌特异性p... [目的]了解新疆维吾尔自治区阿克苏地区屠宰场羊源大肠杆菌的流行情况以及耐药性和毒力基因分布特征。[方法]从阿克苏地区某屠宰场采集健康羊的淋巴结、胴体拭子、粪便样本共30份,使用选择性培养基分离大肠杆菌,然后采用大肠杆菌特异性phoA基因对其进行分子生物学鉴定;利用PCR扩增及测序技术对大肠杆菌分离株进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST);采用K-B纸片扩散法开展分离菌株对抗菌药物的敏感性试验;应用PCR技术检测分离菌株的耐药基因和毒力基因携带情况;使用96孔板微量肉汤法测定分离菌株的生物被膜形成能力。[结果]从30份样本中分离得到14株大肠杆菌,分离率为46.67%;14株分离株分属于10个MLST型别;对复方新诺明(100%)、青霉素(85.71%)和四环素(50.00%)耐药率较高,9株菌具有多重耐药表型(64.29%);在14株大肠杆菌中检测到blaTEM(85.71%)、aph(3′)(71.43%)、tetA(64.29%)、sul1(57.14%)和sul2(57.14%)等12种耐药基因,并且8株菌携带Ⅰ型整合子int-Ⅰ基因(57.14%);在14株大肠杆菌中检测到fimH(100%)、yijP(92.86%)、mat(92.86%)、sheA(92.86%)、stx1(35.71%)和ibeB(28.57%)等10种毒力基因;10株大肠杆菌具有生物被膜形成能力(71.43%)。[结论]该屠宰场羊源大肠杆菌种内分型丰富,具有较强的耐药性,还可形成生物被膜,并且携带多种耐药基因和毒力基因,对动物性食品安全可能存在潜在威胁。 展开更多
关键词 大肠杆菌 MLST分型 耐药性 毒力基因 生物被膜
下载PDF
1株梅花鹿源多重耐药大肠杆菌全基因组分析
14
作者 周航 杨海旺 +3 位作者 孙宏飞 霍亚迪 孙婉莹 薛原 《现代畜牧科技》 2024年第6期43-46,共4页
该试验通过对药敏试验中具有多重耐药性的1株编号为64的梅花鹿源大肠杆菌进行全基因组测序,利用GO、KEGG、VFDB、CARD等数据库对菌株进行基因功能注释;利用Circos软件绘制基因组环形图谱。测序结果显示,该菌株的基因总长度4838417 bp,G... 该试验通过对药敏试验中具有多重耐药性的1株编号为64的梅花鹿源大肠杆菌进行全基因组测序,利用GO、KEGG、VFDB、CARD等数据库对菌株进行基因功能注释;利用Circos软件绘制基因组环形图谱。测序结果显示,该菌株的基因总长度4838417 bp,GC含量50.78%,含1个质粒,长度93378 bp。预测该菌株编码基因数量4514个,总长度4268565 bp,预测出该菌株含有14个基因岛。基因功能分析显示,该菌株基因组有3208条基因与KEGG数据库相对应,其中2009个基因参与到了49条信号通路。通过数据库比对显示该菌株基因组中存在61个耐药基因,对16类抗菌药物有抗性,存在898个毒力基因。该试验结果为大肠杆菌耐药性的研究及防控提供了一定的数据参考。 展开更多
关键词 大肠杆菌 耐药性 基因组测序
下载PDF
贵州省安顺市规模化猪场猪源大肠杆菌的耐药性及耐药基因检测
15
作者 陈秀华 刘金平 +4 位作者 谭艾娟 吕世明 李龙兴 朱欣 吴小敏 《贵州畜牧兽医》 2024年第4期70-74,共5页
为了解贵州省安顺市规模化猪场猪源大肠杆菌的耐药情况,采集关岭自治县、西秀区20个规模化猪场的40份猪肛门拭子作为检测样品,采用形态学、生化试验鉴定分离菌,K-B法检测大肠杆菌的耐药性,PCR检测大肠杆菌的耐药基因tetB、tem、sul 3。... 为了解贵州省安顺市规模化猪场猪源大肠杆菌的耐药情况,采集关岭自治县、西秀区20个规模化猪场的40份猪肛门拭子作为检测样品,采用形态学、生化试验鉴定分离菌,K-B法检测大肠杆菌的耐药性,PCR检测大肠杆菌的耐药基因tetB、tem、sul 3。结果:共分离鉴定30株大肠杆菌,对土霉素、磺胺间甲氧嘧啶的耐药率较高,分别为100%、90%;对阿莫西林、多西环素的耐药率次之,分别为75%、70%;对氟苯尼考、恩诺沙星、庆大霉素、头孢噻呋、头孢喹肟的耐药率较低,分别为37.5%、42%、21%、10%、8.3%;对丁胺卡那霉素敏感,耐药率为0%。大肠杆菌耐药基因sul 3、tem、tetB检出率分别为96.7%、96.7%、93.3%。结论:安顺市规模化猪场猪源大肠杆菌的耐药率较高,仅丁胺卡那霉素敏感,且普遍携带耐药基因sul 3、tem、tetB。 展开更多
关键词 安顺市 规模化猪场 大肠杆菌 耐药性 耐药基因
下载PDF
大肠杆菌耐药基因TD-PCR检测方法的建立及应用
16
作者 潘永 王可人 +4 位作者 李婷 杨莉 李刚 张亚楠 徐景峨 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期269-277,共9页
为建立一种检测大肠杆菌主要耐药基因(ARG)的通用降落PCR(TD-PCR)方法,本研究参考大肠杆菌标准菌株K12 MG1655 yeeJ基因序列设计合成不同Tm值引物、不同产物长度引物、不同长度引物,并参考Gen Bank中登录的β-内酰胺酶、氨基糖苷类、酰... 为建立一种检测大肠杆菌主要耐药基因(ARG)的通用降落PCR(TD-PCR)方法,本研究参考大肠杆菌标准菌株K12 MG1655 yeeJ基因序列设计合成不同Tm值引物、不同产物长度引物、不同长度引物,并参考Gen Bank中登录的β-内酰胺酶、氨基糖苷类、酰胺醇类、喹诺酮类和黏菌素类部分ARG序列设计合成共29对引物。以大肠杆菌标准菌株K12 MG1655总DNA为模板,采用TD-PCR和普通PCR方法,分别利用不同Tm值引物(P1~P8)、不同产物长度引物(P9~P16)、不同长度的引物(P17~P22)分别扩增yeeJ基因,均用于检测TD-PCR方法的特异性;利用引物P5扩增yeeJ基因,根据目的条带平均亮度值,对TD-PCR方法的扩增产物量分析。不同Tm值引物的扩增结果显示,TD-PCR方法中利用8对不同Tm值引物扩增后均出现目的条带,且均无非特异性条带,而普通PCR方法仅有部分引物扩增后出现目的条带,表明以不同Tm值引物扩增时,TD-PCR方法特异性更强,且适用引物Tm值范围较广。不同产物长度扩增结果显示,TD-PCR方法中利用8对引物扩增后均出现相应目的条带,且无非特异条带,而普通PCR方法虽然均出现目的条带,但部分引物扩增后还出现了非特异性条带,表明以不同产物长度引物扩增时,TD-PCR方法的特异性更强。不同长度的引物扩增结果显示,TD-PCR方法中利用6对不同长度的引物扩增后均出现目的条带,且无非特异条带,而普通PCR方法在52℃退火温度时引物P22出现非特异性扩增,表明TD-PCR方特异性更强。扩增产物量分析结果显示,TD-PCR和普通PCR方法扩增的目的条带平均亮度值均随反应总循环数的增加而上升,但普通PCR方法扩增的产物目的条带平均亮度值始终高于TD-PCR,表明TD-PCR方法的扩增产物量低于普通PCR。以24株临床分离的鹅源大肠杆菌总DNA为模板,采用TD-PCR和普通PCR方法,分别对β-内酰胺酶、氨基糖苷类、酰胺醇类、喹诺酮类和黏菌素类共29种ARG进行检测。结果显示,TD-PCR方法对其中25种ARG的检测结果与普通PCR相同,二者符率为100%;而对另外4种ARG检测结果显示,与普通PCR相比,TD-PCR方法的非特异条带明显减少,且无假阳性。表明TD-PCR在检测ARG方面比普通PCR具有更强的特异性。本研究建立了一种特异性较强的检测大肠杆菌主要ARG的TD-PCR通用方法,为细菌耐药性的研究提供了便捷高效的检测技术手段。 展开更多
关键词 大肠杆菌 耐药基因 TD-PCR 特异性
下载PDF
鸡源大肠杆菌JC78株基因组测序与分析
17
作者 赵浪 孙嘉良 +1 位作者 李佳丹扬 吴培福 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第19期62-68,共7页
为了阐释致病性多重耐药性鸡源大肠杆菌分离株的基因组信息及其耐药和致病机制,试验通过第二代测序技术,基于Illumina Nova Seq测序平台,对大肠杆菌JC78株进行基因组测序,利用CRISPRCasFinder软件预测基因序列信息,并通过GO(gene ontolo... 为了阐释致病性多重耐药性鸡源大肠杆菌分离株的基因组信息及其耐药和致病机制,试验通过第二代测序技术,基于Illumina Nova Seq测序平台,对大肠杆菌JC78株进行基因组测序,利用CRISPRCasFinder软件预测基因序列信息,并通过GO(gene ontology)、KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)、COG(cluster of orthologous groups of proteins)、NR(non-redundant protein)、Pfam、TCDB(transporter classification database)、Swiss-Prot、碳水化合物活性酶(carbohydrate-active en ZYmes,CAZy)、病原与宿主互作(pathogen host interactions,PHI)、致病菌毒力因子综合性(virulence factors of pathogenic bacteria,VFDB)、抗生素耐药性综合(the comprehensive antibiotic resistance database,CARD)数据库进行基因功能分析。结果表明:大肠杆菌JC78株基因组大小为5316974 bp,GC含量为50.38%,预测到的蛋白质编码基因有5111个,包含4个rRNA(1个23S r RNA、1个16S rRNA、2个5S r RNA)、65个t RNA基因及80个其他RNA;预测出5个CRISPR序列,59个串联重复序列;NR、COG、Swiss-Prot、GO、KEGG、TCDB、PHI、CAZy数据库注释到5099,4577,4476,3894,3173,1260,1225,141个基因;VFDB数据库注释筛选出的毒力基因主要包括鞭毛、菌毛、K1荚膜、Ⅱ型分泌系统等;CARD数据库注释筛选出的耐药基因与链霉素、四环素、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、大环内酯类及利福平等药物相关。说明大肠杆菌JC78株具有较强毒力且为多重耐药株,并携带大量毒力基因与耐药基因。 展开更多
关键词 大肠杆菌 基因组测序 基因 功能注释
原文传递
仔猪阶段使用过抗生素的陆川猪母猪肠道和乳汁中大肠杆菌的耐药性及毒力基因分析
18
作者 区炳明 王嘉仪 +5 位作者 李清青 林雪 汤晓惠 钟炜楠 周月育 李菊琴 《广东农业科学》 CAS 2024年第9期30-40,共11页
【目的】尽管替抗减抗政策已出台多年,但为预防和治疗疾病,在仔猪早期使用抗生素仍然是集约化养殖场养殖管理的一个重要环节。研究养殖场中仔猪阶段使用过抗生素的母猪体内不同部位(肠道和乳腺)大肠杆菌的耐药性和毒力差异情况,为集约... 【目的】尽管替抗减抗政策已出台多年,但为预防和治疗疾病,在仔猪早期使用抗生素仍然是集约化养殖场养殖管理的一个重要环节。研究养殖场中仔猪阶段使用过抗生素的母猪体内不同部位(肠道和乳腺)大肠杆菌的耐药性和毒力差异情况,为集约化养殖场抗生素使用的优化提供科学依据。【方法】记录广东省湛江市某集约化陆川猪场母猪从仔猪出生后至约420日龄的抗生素使用情况,从同一批次约420日龄的健康母猪中收集初乳(分娩后2 h内)、常乳(分娩后24~72 h内)及肛门内新鲜粪便样品,通过麦康凯鉴别培养基分离出疑似大肠杆菌。通过药敏试验分析大肠杆菌耐药性和PCR检验毒力基因存在情况。【结果】通过麦康凯鉴别培养基分离出疑似大肠杆菌共704株,其中粪便大肠杆菌300株、初乳大肠杆菌220株、常乳大肠杆菌184株。药敏试验显示,粪便大肠杆菌对氨苄西林和四环素的耐药率为96.3%(289/300),对其他常规抗生素的耐药率为63.6%(7/11),总耐药率98.7%(296/300);初乳大肠杆菌对氨苄西林和四环素的耐药率为99.5%(219/220),对其他常规抗生素的耐药率为100%(1/1),总耐药率100%(220/220);常乳大肠杆菌对氨苄西林和四环素的耐药率为40.8%(75/184),对其他常规抗生素耐药率为67.9%(74/109),总耐药率81.0%(149/184)。最终鉴定出39株无耐药性的大肠杆菌。PCR检测显示,39株无耐药性的大肠杆菌中大多数不含猪致病性大肠杆菌常见毒力基因(占比89.74%,35/39)。此外,无耐药性常乳大肠杆菌中含毒力基因的菌株占比仅为2.86%(1/35),无耐药性粪便大肠杆菌中含毒力基因的菌株高达75.0%(3/4)。【结论】仔猪阶段使用过抗生素防控病害的陆川猪,到生长成初产母猪后,从其肛门和乳腺中分离的大肠杆菌菌株中仍存在少数无耐药性且无毒力基因的大肠杆菌菌株。其中,粪便中的无耐药性且无毒力基因大肠杆菌占比极少,仅为0.33%(1/300);分娩2 h内的初乳中未能分离出无耐药性且无毒力基因的大肠杆菌,占比0%(0/220);但分娩后24~72 h内的常乳中仍存在较高比例的无耐药性且无毒力基因的大肠杆菌,占比18.48%(34/184)。 展开更多
关键词 母猪 肠道 乳汁 大肠杆菌 耐药性 毒力基因
下载PDF
牛、羊源大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性及其耐药基因检测
19
作者 白崇生 刘万华 +3 位作者 王功帅 陈占莉 高艳 白永平 《中国草食动物科学》 CAS 北大核心 2024年第3期17-22,共6页
为研究陕西榆林地区牛、羊源大肠杆菌的流行特点及其对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采集746份牛、羊粪便样本进行细菌分离纯化和大肠杆菌特异性引物phoA PCR鉴定,并对鉴定得到的大肠杆菌进行氨基糖苷类抗生素耐药性试验,对5种钝化酶基因... 为研究陕西榆林地区牛、羊源大肠杆菌的流行特点及其对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采集746份牛、羊粪便样本进行细菌分离纯化和大肠杆菌特异性引物phoA PCR鉴定,并对鉴定得到的大肠杆菌进行氨基糖苷类抗生素耐药性试验,对5种钝化酶基因AadA1、AbdB、Aph(3′)-Ⅰ、Aac(6′)-Ⅰb、Aac(3′)-Ⅱ进行PCR检测和同源性序列分析。结果显示,榆林地区大肠杆菌总检出率为42.49%;牛、羊源大肠杆菌对6种氨基糖苷类药物的耐药率从高到低依次为链霉素(70.7%)、卡那霉素(64.3%)、阿米卡星(47.9%)、庆大霉素(45.1%)、新霉素(39.4%)和妥布霉素(30.3%);多重耐药率(耐3种及3种以上药物)为67.0%;耐药基因AadA1和Aph(3′)-Ⅰ的检出率分别为79.5%和83.0%。综上表明,榆林地区检出的牛、羊大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性比较强,耐药基因以AadA1、Aph(3′)-Ⅰ为主。 展开更多
关键词 牛、羊源大肠杆菌 氨基糖苷类抗生素 药敏试验 耐药基因
下载PDF
舍饲条件下藏仔猪腹泻源大肠杆菌毒力和粘附因子基因检测与耐药性分析
20
作者 李龙 谭占坤 +1 位作者 李文凤 刘锁珠 《湖北农业科学》 2024年第6期156-160,共5页
为有效预防和治疗藏仔猪腹泻,采用PCR和Kirby-Bauer纸片扩散法对西藏林芝市舍饲藏仔猪分离的102株腹泻源大肠杆菌(Escherichia coli)毒力基因、粘附因子基因和耐药性进行检测。大肠杆菌毒力基因和菌毛粘附因子基因检测结果表明,检出率... 为有效预防和治疗藏仔猪腹泻,采用PCR和Kirby-Bauer纸片扩散法对西藏林芝市舍饲藏仔猪分离的102株腹泻源大肠杆菌(Escherichia coli)毒力基因、粘附因子基因和耐药性进行检测。大肠杆菌毒力基因和菌毛粘附因子基因检测结果表明,检出率最高的菌毛粘附因子基因是F18(45.10%),其次是F4(15.69%),所有菌株均未检出F41基因;102株菌株中有37株菌株未检出菌毛粘附因子基因。毒力基因中检出率最高的是Stx2e基因(25.49%),其次为STb:EAST-1基因(21.57%)和STa:STb基因(17.65%)。大肠杆菌菌毛粘附因子基因和非菌毛粘附因子基因检测结果表明,在检出AIDA-1基因的菌株中菌毛粘附因子基因(F18、F4)的菌株占比为44.73%,在检出paa基因的菌株中菌毛粘附因子基因(F18、F4)的菌株占比为54.17%;在检出eae基因的菌株中没有检测到F4基因。大肠杆菌对氯霉素、四环素、氨苄西林和链霉素表现出高的耐药性,对3种及以上抗生素产生耐药性的大肠杆菌菌株数占总菌株数的86.27%。 展开更多
关键词 藏仔猪 腹泻源 大肠杆菌(Escherichia coli) 毒力基因 耐药性 菌毛粘附因子基因 非菌毛粘附因子基因
下载PDF
上一页 1 2 162 下一页 到第
使用帮助 返回顶部