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大肠杆菌表达系统的研究进展 被引量：43
1
作者 戎晶晶 刁振宇 周国华 《药物生物技术》 CAS CSCD 2005年第6期416-420,共5页
近年来利用基因调控、融合表达、共表达以及代谢工程、定向进化等策略对大肠杆菌系统的载体和宿主进行了合理的改进,使目的基因的表达水平以及产物蛋白的活性大大提高,尤其是对长期以来有关真核基因在原核细胞中表达所存在的糖基化、二... 近年来利用基因调控、融合表达、共表达以及代谢工程、定向进化等策略对大肠杆菌系统的载体和宿主进行了合理的改进,使目的基因的表达水平以及产物蛋白的活性大大提高,尤其是对长期以来有关真核基因在原核细胞中表达所存在的糖基化、二硫键形成等翻译后加工问题的研究取得了突破,使得大肠杆菌表达系统在研究和生产中的应用范围得到进一步拓宽。文章从表达载体和宿主细胞两个方面对大肠杆菌表达系统的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 表达载体 宿主细胞 重组蛋白
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大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展 被引量：33
2
作者 祁浩 刘新利 《安徽农业科学》 CAS 2016年第17期4-6,52,共4页
由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶... 由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制剂等是近年来发酵工业的新型领域。原核和真核表达系统是近年来研究和应用最广泛和最成熟的外源基因表达系统。对近年来关于大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 表达载体 外源基因 宿主菌株
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大肠杆菌表达系统的研究进展 被引量：68
3
作者 解庭波 《长江大学学报（自科版）（下旬）》 CAS 2008年第3期77-82,共6页
随着蛋白组时代的到来,近年来对蛋白质结构以及功能的研究进一步深入,重组蛋白技术的应用范围也越来越广泛。大肠杆菌表达系统以其成本低廉、生产率高、操作简单等优点备受青睐,常常作为表达重组蛋白的首选表达系统。但是,如何选择合适... 随着蛋白组时代的到来,近年来对蛋白质结构以及功能的研究进一步深入,重组蛋白技术的应用范围也越来越广泛。大肠杆菌表达系统以其成本低廉、生产率高、操作简单等优点备受青睐,常常作为表达重组蛋白的首选表达系统。但是,如何选择合适的表达系统来高效的表达目的蛋白还需要考虑多方面的因素,包括表达载体、表达宿主菌、表达条件等。综述了常用的大肠杆菌表达系统的组成以及影响外源基因表达的相关因素。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 原核表达 重组蛋白
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大肠杆菌和酵母表达系统的研究进展 被引量：18
4
作者 张云鹏 温彤 姜伟 《生物技术进展》 2014年第6期389-393,共5页
20世纪70年代以来,分子生物学及基因组学迅猛发展,其在生物及医学领域发挥着越来越重要的作用。在发酵工业中,分子生物学技术广泛应用于菌种的遗传改造和基因工程菌株的构建,以期提高发酵产物的产量并丰富发酵产物的类型。其中,利用原... 20世纪70年代以来,分子生物学及基因组学迅猛发展,其在生物及医学领域发挥着越来越重要的作用。在发酵工业中,分子生物学技术广泛应用于菌种的遗传改造和基因工程菌株的构建,以期提高发酵产物的产量并丰富发酵产物的类型。其中,利用原核及真核表达系统进行外源基因的扩增、表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和酶制剂等是近十年来发酵工业的新兴领域。本文从表达载体和宿主菌改造两方面综述近些年来大肠杆菌及酵母表达系统的新进展与新技术。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 酵母表达系统 表达载体 宿主菌改造
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大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中应用的研究进展 被引量：4
5
作者 张部昌 李凌凌 +1 位作者 贺秉坤 马清钧 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第5期381-384,共4页
大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中的应用面临着许多难题 :聚酮合成酶中ACP的后修饰、6_dEB生物合成前体供应、大环内酯糖基化修饰等。通过向大肠杆菌中转入枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因sfp ,使大肠杆菌中合成的ACP得以后修饰 ;6_... 大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中的应用面临着许多难题 :聚酮合成酶中ACP的后修饰、6_dEB生物合成前体供应、大环内酯糖基化修饰等。通过向大肠杆菌中转入枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因sfp ,使大肠杆菌中合成的ACP得以后修饰 ;6_dEB生物合成前体丙酰CoA和丙二酰CoA可通过Pfeifer途径和Dayem途径提供 ;目前 ,在大肠杆菌体内已可以合成 6_dEB。利用大肠杆菌系统合成新的大环内酯化合物、对大环内酯糖基化修饰和提高大肠杆菌系统合成大环内酯类抗生素产量将是今后研究的重点。 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 红霉素 基因工程 研究进展
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白细胞介素-2在大肠杆菌中的可溶性表达研究
6
作者 王春梅 徐敏 +1 位作者 王建辉 谢君 《生物化工》 2024年第6期80-83,共4页
白细胞介素-2(IL-2)在临床上主要用于抗肿瘤、抗感染的治疗。重组白细胞介素-2最早是由大肠杆菌表达的,由于表达形式是包涵体蛋白,后续需要进行变性、复性等一系列复杂的生产工艺,周期长且操作烦琐。本研究构建一系列聚肽,将白细胞介素-... 白细胞介素-2(IL-2)在临床上主要用于抗肿瘤、抗感染的治疗。重组白细胞介素-2最早是由大肠杆菌表达的,由于表达形式是包涵体蛋白,后续需要进行变性、复性等一系列复杂的生产工艺,周期长且操作烦琐。本研究构建一系列聚肽,将白细胞介素-2和聚肽融合白细胞介素-2在大肠杆菌BL21(DE3)中分别表达,并进行电泳检测。结果显示,聚肽融合白细胞介素-2的可溶性表达量大大提高,且具有较好的细胞活性。本研究可为实验室中快速获得有活性的可溶性蛋白提供新的途径。 展开更多
关键词 白细胞介素-2 大肠杆菌表达系统 可溶性表达 聚肽
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生长抑素基因在大肠杆菌pThioHis表达系统中的克隆与表达 被引量：3
7
作者 刘永庆 潘杰彦 +5 位作者 陈溥言 杜念兴 赵国屏 褚仲海 邓芳 杨胜利 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第1期19-23,共5页
目的　在大肠杆菌表达系统中高效表达生长抑素 (SS)基因。方法　以天然SS的氨基酸和基因序列为标准 ,将大肠杆菌使用频率较低的密码子分别更换成了使用频率较高的密码子 ,在SS基因的两端加上了合适的酶切位点 ,头部 :KpnI和NcoI;尾部 :P... 目的　在大肠杆菌表达系统中高效表达生长抑素 (SS)基因。方法　以天然SS的氨基酸和基因序列为标准 ,将大肠杆菌使用频率较低的密码子分别更换成了使用频率较高的密码子 ,在SS基因的两端加上了合适的酶切位点 ,头部 :KpnI和NcoI;尾部 :PstI(这一酶切位点可与NsiI的切口互补 )。克隆至pThioHisA质粒的KpnI/PstI酶切位点后 ,再克隆至pThioHisA质粒的KpnI/NsiI酶切位点 ,使SS基因分别位于多克隆位点的尾部和前部。结果　重组质粒经酶切鉴定和基因序列测定证明 ,基因完全正确 ,在大肠杆菌TOP10中均得到较好的表达 ,IPTG诱导后 4h表达量基本达到最高 (37℃ ) ;在A60 0 0 .4～ 1.5之间用IPTG诱导均可获得到较好的表达 ,但以 0 .6左右为最佳诱导时机 ;在LB、TB和 2YT培养基中表达量依次为 :TB >LB >2YT ;表达的SS融合蛋白基本为水溶性的 ,具有良好的SS抗原性和免疫原性。 展开更多
关键词 基因克隆 基因序列测定 SS融合蛋白 生长抑素基因 大肠杆菌pThioHis表达系统
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利用大肠杆菌表达系统制备抗VEGF螺旋-环-螺旋多肽及其纯化的研究
8
作者 庹有朋 王刚 +5 位作者 叶正茂 藤井郁雄 万玉军 罗丽娟 李楠臻 岳晓敏 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期224-229,共6页
VEGF (血管内皮生长因子)是一种诱导肿瘤血管形成的作用最强、特异性最高的血管生长因子。本实验利用抗VEGF螺旋-环-螺旋多肽的基因M49,通过PCR技术扩增获得目的基因,构建原核表达pET-32a(+),转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21进行表... VEGF (血管内皮生长因子)是一种诱导肿瘤血管形成的作用最强、特异性最高的血管生长因子。本实验利用抗VEGF螺旋-环-螺旋多肽的基因M49,通过PCR技术扩增获得目的基因,构建原核表达pET-32a(+),转入大肠杆菌(Escherichia coli) BL21进行表达,并对目的蛋白进行诱导表达及纯化。结果表明PCR扩增得到186 bp基因片段,诱导表达后得到一个约为22 kD融合蛋白,并进一步使用SUMO蛋白酶切除标签,得到约3.5 kD目的蛋白,通过小鼠(Mus musculus)给药实验验证了目的蛋白的功能性。这将为下一步VEGF螺旋-环-螺旋多肽靶向药的研制提供了必要的条件。 展开更多
关键词 抗VEGF多肽 大肠杆菌表达系统 多肽纯化
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大肠杆菌中重组蛋白可溶性表达的研究进展及展望 被引量：15
9
作者 余波 程安春 汪铭书 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2008年第10期19-21,共3页
关键词 大肠杆菌表达系统 可溶性表达 重组蛋白 展望 基因工程 包涵体
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人白细胞介素-2突变体在大肠杆菌中的克隆表达与鉴定 被引量：4
10
作者 宋小双 聂盼 +1 位作者 马永鹏 刘堰 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期93-97,共5页
根据GenBank报道的人白细胞介素-2(hIL-2)基因分析设计并合成引物,以本室构建的pPIC9K/IL-2突变体(编码125位半胱氨酸→丙氨酸、18位亮氨酸→蛋氨酸、19位亮氨酸→丝氨酸)为模板,PCR扩增出突变型人白细胞介素-2基因.用EcoRI和BamHⅠ对... 根据GenBank报道的人白细胞介素-2(hIL-2)基因分析设计并合成引物,以本室构建的pPIC9K/IL-2突变体(编码125位半胱氨酸→丙氨酸、18位亮氨酸→蛋氨酸、19位亮氨酸→丝氨酸)为模板,PCR扩增出突变型人白细胞介素-2基因.用EcoRI和BamHⅠ对目的基因进行双酶切后,插入大肠杆菌表达载体pBV220,转化宿主菌JM109,经菌落PCR筛选阳性重组子、酶切鉴定,DNA序列分析证实,重组质粒pBV220/IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放阅读框.经42℃热诱导表达,SDS-PAGE电泳显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为15kD的外源蛋白产生,经Western印迹证明为rhIL-2.成功建立了突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因的大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础. 展开更多
关键词 大肠杆菌表达系统 白细胞介素-2突变体 克隆 表达载体pBV220
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突变型人白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达
11
作者 左爱军 梁东春 +2 位作者 刘新宇 郭刚 张镜宇 《天津医药》 CAS 北大核心 2005年第11期719-721,共3页
目的:建立突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础。方法:自人胎盘组织中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增突变型人IL-2基因cDNA,通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸(C125)的密码子... 目的:建立突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础。方法:自人胎盘组织中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增突变型人IL-2基因cDNA,通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸(C125)的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT。构建表达型重组质粒pBV-IL-2熏温度诱导表达,表达产物行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及WesternBlot鉴定。结果:DNA序列分析证实,重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架。SDS-PAGE显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16.5ku的外源蛋白产生,经Western印迹(WesternBlot)证明为rhIL-2。结论:成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统,表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中。 展开更多
关键词 突变 白细胞介素2 大肠杆菌 基因表达 白细胞介素-2基因 大肠杆菌表达系统 突变型 WESTERNBLOT SDS-PAGE 人白细胞介素-2
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人工合成人表皮生长因子在大肠杆菌中的表达
12
作者 余榕捷 林剑 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2002年第2期1-6,共6页
目的 :在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子 (hEGF) ,并探索提高外源基因在pET - 3c :BL(DE3)表达系统的表达水平的途径。方法 :根据大肠杆菌对密码的偏爱性 ,合成编码 5 3个氨基酸的hEGF基因 ,分别以非融合蛋白和融合蛋白两种方式表达... 目的 :在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子 (hEGF) ,并探索提高外源基因在pET - 3c :BL(DE3)表达系统的表达水平的途径。方法 :根据大肠杆菌对密码的偏爱性 ,合成编码 5 3个氨基酸的hEGF基因 ,分别以非融合蛋白和融合蛋白两种方式表达。计算机分析两者mRNA的翻译起始区 (translationinitiationregion ,TIR)的结构。结果 :融合蛋白表达产量为 2 7%,非融合蛋白的表达用SDS -PAGE检测不到 ,两者均具有促细胞增殖的活性。融合蛋白mRNA的TIR的ΔG值较非融合蛋白的高。结论 :在pET - 3c :BL2 1(DE3)大肠杆菌表达系统中 ,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子 ,表达效率高且不影响其活性。此外 ,mRNA的TIR的结构可能是影响外源基因在本研究的表达系统的表达效率的一个重要因素。 展开更多
关键词 人表皮生长因子 融合蛋白 非融合蛋白 大肠杆菌表达系统
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大肠杆菌表达病毒样颗粒的研究进展 被引量：5
13
作者 李生军 张海霞 冯若飞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1526-1532,共7页
病毒样颗粒是由结构蛋白组装而成,形态结构与天然病毒高度相似的一种多聚蛋白纳米结构,但不包含任何遗传物质,因此是一种理想的疫苗形式。大肠杆菌表达系统因具有良好的安全性、生产周期短、易于放大培养等优点,被广泛应用于基因工程药... 病毒样颗粒是由结构蛋白组装而成,形态结构与天然病毒高度相似的一种多聚蛋白纳米结构,但不包含任何遗传物质,因此是一种理想的疫苗形式。大肠杆菌表达系统因具有良好的安全性、生产周期短、易于放大培养等优点,被广泛应用于基因工程药物的生产,在病毒样颗粒疫苗应用上具有良好前景。本文综述了利用大肠杆菌系统表达的病毒样颗粒及其组装、表位结构特征和临床试验结果等研究进展,以期为病毒样颗粒疫苗的生产提供可靠的数据支持和设计思路。 展开更多
关键词 疫苗 病毒样颗粒 大肠杆菌表达系统
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大肠杆菌可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原的制备及应用 被引量：2
14
作者 陈春野 刘剑 +7 位作者 朱瑞 李姝璇 叶江辉 王玮 潘德全 徐飞海 程通 夏宁邵 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期252-258,共7页
旨在建立基于大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原(SCCAg)方法,获得具有较好活性的重组SCCAg抗原并应用于建立抗原检测方法。基于pGEX-6P-1载体和大肠杆菌E.coliER2566菌株开展重组SCCAg抗原可溶性表达纯化方法研究,... 旨在建立基于大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原(SCCAg)方法,获得具有较好活性的重组SCCAg抗原并应用于建立抗原检测方法。基于pGEX-6P-1载体和大肠杆菌E.coliER2566菌株开展重组SCCAg抗原可溶性表达纯化方法研究,评价纯化抗原活性,筛选特异性单克隆抗体,初步建立并评价SCCAg抗原检测方法。结果显示,pGEX-6P-1载体和E.coliER2566菌株可用于建立较高效的可溶性表达和纯化SCCAg抗原的方法,获得了具有较高纯度和活性的重组SCCAg抗原,筛选获得特异性单克隆抗体并初步建立了SCCAg管式化学发光检测方法。建立了有效的基于大肠杆菌表达系统的可溶性表达和纯化SCCAg的方法。 展开更多
关键词 人鳞状上皮细胞癌抗原 大肠杆菌表达系统 可溶性表达 单克隆抗体
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人源溶菌酶在大肠杆菌中的表达与复性研究 被引量：2
15
作者 张春晨 胡双艳 阮海华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期153-161,共9页
人源溶菌酶(Human lysozyme,HLZ)是一种糖苷水解酶,具有抗菌消炎的作用,其作为抗生素的替代品,已经被广泛应用于食品业、畜牧业和医疗等领域。如何获得高产量、高活性、高纯度的人源溶菌酶一直是亟待解决的技术问题。优化人源溶菌酶编... 人源溶菌酶(Human lysozyme,HLZ)是一种糖苷水解酶,具有抗菌消炎的作用,其作为抗生素的替代品,已经被广泛应用于食品业、畜牧业和医疗等领域。如何获得高产量、高活性、高纯度的人源溶菌酶一直是亟待解决的技术问题。优化人源溶菌酶编码基因密码子,提高其在大肠杆菌中的适应度和表达量;将优化的基因克隆至大肠杆菌表达质粒pET21a,并将其在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中诱导表达;利用8 mol/L尿素溶液对包涵体进行溶解变性后,探究一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式以及复性液中谷胱甘肽氧化还原对(GSSG/GSH)、精氨酸、甘油等复性物的浓度对重组人源溶菌酶复性的效果,获得最佳的复性方案。研究结果表明:37℃诱导温度下,利用0.5 mmol/L IPTG成功诱导了分子量约为14.7 kD的重组人源溶菌酶的表达,包涵体表达量约为380 mg/L(湿重)。包涵体经一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式复性后,测得比活力值分别为147 U/mg、335 U/mg、176 U/mg,表明最佳复性方法为梯度透析复性法。进一步探索了复性液中GSSG/GSH比值、精氨酸浓度、甘油浓度对人源溶菌酶复性效果的影响,表明当复性液中同时添加浓度比为1∶2的GSSG/GSH、4 mmol/L精氨酸和6%甘油时,复性后人源溶菌酶的最佳比活力值为1170 U/mg,显著高于3种复性物均不加时溶菌酶335 U/mg的比活力值,但低于溶菌酶标准品1732 U/mg的比活力值。成功地将人源溶菌酶基因在大肠杆菌中表达,并通过包涵体复性体系成功获得高活性重组人源溶菌酶。 展开更多
关键词 人源溶菌酶 大肠杆菌表达系统 包涵体 包涵体体外复性 溶壁微球菌
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大肠杆菌胞内的共表达策略 被引量：2
16
作者 余波光 林键 吴文言 《现代临床医学生物工程学杂志》 2006年第4期376-378,共3页
关键词 大肠杆菌表达系统 表达策略 胞内 外源蛋白 系统工具 可溶蛋白 融合表达 蛋白表达量
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抗虫蛋白Cry1Ie在大肠杆菌中的表达、纯化及等同性
17
作者 张小霞 严卫星 徐海滨 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第A03期324-325,共2页
关键词 Cry1Ie蛋白 大肠杆菌表达系统 等同性
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大肠杆菌中外源蛋白高效表达的影响因素及策略研究的新进展 被引量：20
18
作者 卢晟晔 王丽颖 《中国实验诊断学》 2006年第9期1100-1103,共4页
关键词 大肠杆菌表达系统 基因高效表达 外源蛋白 影响因素 高密度发酵 原核表达系统 基因工程产品 重组大肠杆菌
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改良的幽门螺杆菌噬菌体裂解酶在大肠杆菌和毕赤酵母中表达的活性差异 被引量：3
19
作者 徐登圆 赵珊珊 +5 位作者 窦俊 方宏清 徐晓峰 支艳艳 李晓稳 文良柱 《生物技术通讯》 CAS 2020年第6期641-647,共7页
目的:改良型幽门螺杆菌噬菌体裂解酶由具有穿透外膜作用的疏水多肽和幽门螺杆菌噬菌体编码的裂解酶和穴蛋白构成,比较其在大肠杆菌和毕赤酵母中表达活性的差异。方法:构建的重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和毕赤酵母X33,经过表达纯... 目的:改良型幽门螺杆菌噬菌体裂解酶由具有穿透外膜作用的疏水多肽和幽门螺杆菌噬菌体编码的裂解酶和穴蛋白构成,比较其在大肠杆菌和毕赤酵母中表达活性的差异。方法:构建的重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和毕赤酵母X33,经过表达纯化得到改良型裂解酶,体外通过滤纸片法和液体法比较不同表达系统所表达的改良型裂解酶的活性差异。结果:体外抑菌实验表明,大肠杆菌表达的改良型裂解酶的溶菌效果明显强于毕赤酵母表达的改良型裂解酶。结论:2种表达系统各有优势,就活性而言,大肠杆菌表达系统更佳,毕赤酵母表达系统对外源蛋白的糖基化修饰影响改良型裂解酶活性。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 噬菌体裂解酶和穴蛋白 大肠杆菌表达系统 毕赤酵母表达系统 抑菌活性
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植物交替氧化酶(AOX)在大肠杆菌中优化表达 被引量：2
20
作者 王雅英 Moore A L +1 位作者 杨盛昌 田惠桥 《云南植物研究》 CSCD 北大核心 2007年第1期74-78,共5页
植物交替氧化酶(Alternative Oxidase,AOX)位于高等植物线粒体内膜,从细胞色素途径的辅酶Q分岔,催化4个电子还原氧分子形成水的另一终端氧化酶。分离纯化有活性的AOX比较困难。本文研究AOX原核表达,选择pFLAG-1分泌表达载体,用异丙基硫... 植物交替氧化酶(Alternative Oxidase,AOX)位于高等植物线粒体内膜,从细胞色素途径的辅酶Q分岔,催化4个电子还原氧分子形成水的另一终端氧化酶。分离纯化有活性的AOX比较困难。本文研究AOX原核表达,选择pFLAG-1分泌表达载体,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导AOX优化表达,pFLAG-1-AOX大肠杆菌优化表达条件为:宿主DH5α、温度37℃、细胞密度OD600=0.6、IPTG浓度0.2mmol/L,诱导后60min收获细胞;获得少量可溶的细胞外周质AOX和大量不溶的AOX,为深入研究AOX打下基础,同时为研究膜蛋白原核表达提供依据。 展开更多
关键词 交替氧化酶(AOX) 大肠杆菌pFLAG-1表达系统 超量表达
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