重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性分析 被引量：5

1

作者 李晓泽 姜静 +2 位作者 李德斌 田梗 王玉成 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第3期25-28,共4页

目的:分析重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性。方法:将来源于柽柳的eIF5A基因构建到原核表达载体pET28a中,在原核表达的基础上,利用分光光度计检测重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性。结果:BL21(pET28a-eIF5A)的抗盐碱性明... 目的:分析重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性。方法:将来源于柽柳的eIF5A基因构建到原核表达载体pET28a中,在原核表达的基础上,利用分光光度计检测重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗逆性。结果:BL21(pET28a-eIF5A)的抗盐碱性明显高于对照菌株BL21(pET28a),其中重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)的抗NaCl的临界浓度为0.8mol/L,抗NaHCO3的临界浓度为0.52mol/L,不具有抗AgNO3和抗旱性。结论:重组大肠杆菌BL21(pET28a-eIF5A)具有良好的抗NaCl和NaHCO3特性,该抗性的证明为eIF5A基因在植物抗逆基因工程中的应用提供了资料。 展开更多

关键词 真核生物起始因子5A 大肠杆菌 重组大肠杆菌bl21 抗逆性

下载PDF 职称材料

一步法制备大肠杆菌BL21(DE3)菌株感受态细胞及转化条件优化 被引量：6

2

作者 张迹 李智 +1 位作者 张宇 袁巧云 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第12期529-532,共4页

大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法... 大肠杆菌BL21(DE3)菌株是大肠杆菌表达系统最常用的宿主菌株,因此人们需要1种便捷有效的感受态细胞制备和转化方法。一步法感受态细胞制备操作方便,只加1种试剂即可,更快捷稳定,转化也更方便,不需要热激。研究大肠杆菌感受态细胞一步法制备对BL21菌株的适用性,并对转化过程中的关键参数进行探索和优化。结果表明,该一步法制备的BL21菌株感受态细胞可获得106CFU/μg DNA转化效率,完全能够满足常规转化要求。转化过程中相关参数的最佳条件为冰水浴30 min,室温放置10 min,37℃、150 r/min振荡复苏40 min。 展开更多

关键词 感受态细胞制备 一步法 大肠杆菌bl21(DE3)菌株 转化条件

下载PDF 职称材料

大肠杆菌BL21生长状态的研究 被引量：1

3

作者 郭晓丽 《衡水学院学报》 2011年第1期40-41,44,共3页

以大肠杆菌菌株BL21为材料,测定其生长曲线及在不同浓度NaHCO3、NaCl处理下的生长状态.结果表明:大肠杆菌BL21具有稳定的生长状态,高浓度的胁迫条件均可抑制其生长,低浓度的NaCl抑制作用不明显,而低浓度的NaHCO3则极为敏感.

关键词 大肠杆菌bl21 生长 状态

下载PDF 职称材料

大肠杆菌BL21(DE3)lpxM突变株的构建 被引量：2

4

作者 张君 方宏清 +2 位作者 谢达平 刘志敏 陈惠鹏 《生物技术通讯》 CAS 2006年第4期489-492,共4页

目的:lpxM基因失活可以产生极低内毒素活性的脂多糖。构建大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株,并考察该突变株的生长状态和表达重组蛋白的能力。方法:构建同源臂长500bp左右的打靶载体,借助Red同源重组系统,使E.coliBL21(DE3)的lpxM基因发... 目的:lpxM基因失活可以产生极低内毒素活性的脂多糖。构建大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株,并考察该突变株的生长状态和表达重组蛋白的能力。方法:构建同源臂长500bp左右的打靶载体,借助Red同源重组系统,使E.coliBL21(DE3)的lpxM基因发生插入失活,再导入编码FLP位点特异性重组酶的质粒pCP20去除抗性基因。PCR鉴定发生插入突变的菌株,应用SDS-PAGE分析突变前后的脂多糖,考查对重组蛋白表达的影响。结果:PCR鉴定结果说明lpxM基因发生了插入突变。与出发株比较,突变株的脂多糖电泳图谱发生了明显变化,但其生长状态与表达重组蛋白的能力与出发株基本一致。结论:大肠杆菌BL21(DE3)的lpxM突变株可以用于重组蛋白的表达。 展开更多

关键词 大肠杆菌bl21(DE3) lpxM基因 Red同源重组系统

下载PDF 职称材料

基于重组工程法高转化效率的大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株构建 被引量：2

5

作者 张飞飞 石牡丹 尚广东 《安徽农业科学》 CAS 2015年第20期29-31,72,共4页

[目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持... [目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持一致的LS1928菌株。[结论]获得的LS1928菌株可能会作为获得催化用酶的关键材料,进而在蛋白质工程等研究领域有着重要的作用。 展开更多

关键词 重组工程 基因敲除 双链断裂修复 大肠杆菌bl21(DE3)

下载PDF 职称材料

基因工程大肠杆菌BL21产β-甘露聚糖酶的代谢流研究

6

作者 黄聪 李啸 +4 位作者 许超群 张小龙 叶晗 程奔 伍业旭 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第2期42-46,共5页

该研究基于化学计量平衡建立重组大肠杆菌(Escherichia coli)BL21产β-甘露聚糖酶的代谢流模型,通过比较模型预测的CO2释放通量值和实验测定的CO_2释放通量值验证该模型的可靠性,分析菌体合成通量和β-甘露聚糖酶合成通量分别最大时的... 该研究基于化学计量平衡建立重组大肠杆菌(Escherichia coli)BL21产β-甘露聚糖酶的代谢流模型,通过比较模型预测的CO2释放通量值和实验测定的CO_2释放通量值验证该模型的可靠性,分析菌体合成通量和β-甘露聚糖酶合成通量分别最大时的极端代谢流分布,并对代谢网络节点(葡萄糖-6-磷酸、丙酮酸)进行分析。结果表明,模型预测的CO_2释放通量值和实验测定的CO_2释放通量值无显著差异(P>0.05),模型可靠;通过极端代谢流分析得出,最大菌体合成通量为9.39 h^(-1),最大β-甘露聚糖酶合成通量为0.18 mmol/(g·h);通过代谢网络节点分析得出,葡萄糖-6-磷酸为柔性节点,丙酮酸为刚性节点,为提高β-甘露聚糖酶的生产能力提供理论依据。 展开更多

关键词 基因工程 大肠杆菌bl21 发酵 Β-甘露聚糖酶 代谢流分析

下载PDF 职称材料

氨基酸对大肠杆菌BL21生长影响的研究

7

作者 李凤辰 段纪甫 宫衡 《工业微生物》 CAS CSCD 2013年第3期29-31,共3页

研究了14种氨基酸对大肠杆菌BL21生长的影响。研究表明,在以氨基酸为唯一氮源的培养基中,氨基酸对菌体生长的影响可分为三类:(1)能完全被利用的氨基酸:谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸;(2)部分被利用对菌体生长有限制的氨基酸:谷氨酸、丙氨... 研究了14种氨基酸对大肠杆菌BL21生长的影响。研究表明,在以氨基酸为唯一氮源的培养基中,氨基酸对菌体生长的影响可分为三类:(1)能完全被利用的氨基酸:谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸;(2)部分被利用对菌体生长有限制的氨基酸:谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、精氨酸和亮氨酸;(3)不能被利用的氨基酸:苯丙氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、赖氨酸和苏氨酸。而在无机氮源存在时,单一氨基酸对大肠杆菌生长的影响可分为两类:(1)能完全被利用的氨基酸:谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸;(2)对生长有一定促进作用的氨基酸:精氨酸、亮氨酸、组氨酸、赖氨酸等。 展开更多

关键词 氨基酸 利用 生长 大肠杆菌bl21

下载PDF 职称材料

rimJ基因缺失不影响大肠杆菌BL21(DE3)生长的温度敏感性

8

作者 颛孙丹丹 方宏清 +3 位作者 戴红梅 李树龙 谢迟 陈惠鹏 《生物技术通讯》 CAS 2010年第4期505-508,共4页

目的:研究rimJ基因对大肠杆菌BL21(DE3)菌株生长的温度敏感性的影响。方法:利用SceⅠ-Red同源重组技术将大肠杆菌BL21(DE3)基因组中的rimJ基因缺失,得到rimJ缺失突变菌;比较缺失突变株和原始菌株在不同温度(25℃、37℃、42℃)下的最大... 目的:研究rimJ基因对大肠杆菌BL21(DE3)菌株生长的温度敏感性的影响。方法:利用SceⅠ-Red同源重组技术将大肠杆菌BL21(DE3)基因组中的rimJ基因缺失,得到rimJ缺失突变菌;比较缺失突变株和原始菌株在不同温度(25℃、37℃、42℃)下的最大比生长速率,利用统计学方法分析rimJ基因的缺失对BL21(DE3)菌株生长的温度敏感性是否有影响。结果:rimJ基因被成功敲除;统计分析结果表明缺失突变株和原始菌株的最大比生长速率没有明显区别。结论:rimJ基因缺失对大肠杆菌BL21(DE3)生长的温度敏感性无影响。 展开更多

关键词 rimJ基因 大肠杆菌bl21(DE3) 比生长速率 SceⅠ-Red同源重组 温度敏感性

下载PDF 职称材料

时间与功率对BL21大肠杆菌超声破碎效果的影响

9

作者 鄢树枫 王钰坪 +2 位作者 吴珊涛 王晓媛 戴心如 《三明学院学报》 2023年第3期77-82,共6页

以BL21大肠杆菌为实验宿主菌,研究时间与功率对BL21大肠杆菌超声破碎效果的影响,设置不同时间和功率梯度对大肠杆菌BL21进行超声破碎,并获取其胞内蛋白质,通过蛋白质浓度检测及考马斯亮蓝(Bradford法)测定蛋白质含量,进而评价大肠杆菌B... 以BL21大肠杆菌为实验宿主菌,研究时间与功率对BL21大肠杆菌超声破碎效果的影响,设置不同时间和功率梯度对大肠杆菌BL21进行超声破碎,并获取其胞内蛋白质,通过蛋白质浓度检测及考马斯亮蓝(Bradford法)测定蛋白质含量,进而评价大肠杆菌BL21的超声破碎效果。研究结果表明,菌液体积100 mL,菌液浓度为3.772×10^(9) cfu/mL(OD600_(nm)=1.886)时,超声功率对大肠杆菌BL21破碎效果有明显影响;破碎功率固定为5%时,破碎效果与破碎时间呈正比;破碎时间固定为1 min时,破碎功率在1%、3%和9%时其超声破碎效果逐渐提升,证明破碎效果与破碎功率呈线性关系。 展开更多

关键词 bl21大肠杆菌 超声破碎 功率 时间 蛋白质浓度

下载PDF 职称材料

大肠杆菌BL21(DE3)膜组分相关基因的敲除对重组蛋白胞外分泌的影响

10

作者 朱芸 周有治 +1 位作者 储建林 何冰芳 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1551-1559,共9页

【目的】探究Escherichia coli BL21(DE3)中膜组分相关的脂多糖合成基因waa F或msb B的敲除对重组蛋白胞外分泌的影响。【方法】运用Red重组技术将E.coli BL21(DE3)染色体上的基因waa F或msb B敲除,构建敲除菌株E.coli BL21(Δwaa F)、E... 【目的】探究Escherichia coli BL21(DE3)中膜组分相关的脂多糖合成基因waa F或msb B的敲除对重组蛋白胞外分泌的影响。【方法】运用Red重组技术将E.coli BL21(DE3)染色体上的基因waa F或msb B敲除,构建敲除菌株E.coli BL21(Δwaa F)、E.coli BL21(Δmsb B)。将本实验室保存的带有β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,β-FFase)、青霉素G酰化酶(penicillin G acylase,PGA)基因的重组质粒p ET-ffase、p ET-pga分别转入敲除菌株及出发菌株中,构建工程菌株E.coli BL21(Δmsb B)/p ET-ffase、E.coli BL21(Δwaa F)/p ET-ffase、E.coli BL21(DE3)/p ET-ffase、E.coli BL21(Δmsb B)/p ET-pga、E.coli BL21(Δwaa F)/p ET-pga、E.coli BL21(DE3)/p ET-pga。最后通过摇瓶发酵研究敲除菌株对β-FFase、PGA胞外分泌的影响。【结果】当诱导表达4 h,以出发菌株E.coli BL21(DE3)为宿主时,β-呋喃果糖苷酶β-FFase的胞外分泌量占总表达量的2.6%,以敲除菌株Δmsb B为宿主时,胞外分泌量达到19.7%,而以敲除菌株Δwaa F为宿主时,胞外分泌量达到50.9%。另外,当诱导表达24 h,以敲除菌株Δwaa F为宿主时,青霉素G酰化酶PGA的胞外酶活是出发菌株中的4.1倍,达到1708 U/L。【结论】本研究成功构建了敲除菌株Δmsb B和Δwaa F,Δmsb B能明显增强β-FFase的胞外分泌,而Δwaa F对β-FFase和PGA的胞外分泌均有显著的强化作用。 展开更多

关键词 大肠杆菌bl21(DE3) 膜脂 基因敲除

原文传递

大肠杆菌BL21(DE3)氨基葡萄糖代谢调控相关基因的敲除及glmS在其中的表达研究 被引量：3

11

作者 涂宇鹏 何京桦 +1 位作者 乐科易 严维耀 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期796-802,共7页

氨基葡萄糖(Glucosamine,GlcN)是一类广泛使用的保健品,对于人类软骨再生及关节炎的临床治疗都具有良好的疗效.为构建以代谢工程为基础的氨基葡萄糖生产菌株,采用λRed同源重组系统将大肠杆菌BL21(DE3)中甘露糖—磷酸转移酶系统操纵子(m... 氨基葡萄糖(Glucosamine,GlcN)是一类广泛使用的保健品,对于人类软骨再生及关节炎的临床治疗都具有良好的疗效.为构建以代谢工程为基础的氨基葡萄糖生产菌株,采用λRed同源重组系统将大肠杆菌BL21(DE3)中甘露糖—磷酸转移酶系统操纵子(manXYZ)和乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)转运和代谢特异性系统操纵子(nagBACD-nagE)进行双剔除.随后构建含新型氨基葡萄糖合成酶基因(glmS)的表达载体pETG,并将它转化该双操纵子剔除菌株.结果表明,改造后的菌株不能以GlcN或GlcNAc作为碳源进行代谢生长.表达GlmS菌株的上清液经Ni-NTA亲和层析纯化,其酶活性达8.63U/mg,表明该菌株已具备发酵生产GlcN的初步特性. 展开更多

关键词 大肠杆菌bl21(DE3) 氨基葡萄糖 λRed同源重组 氨基葡萄糖合成酶 代谢工程

下载PDF 职称材料

重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性 被引量：2

12

作者 李睿 王革 +1 位作者 钱秋娟 王秉翔 《微生物学免疫学进展》 2012年第4期1-5,共5页

目的通过菌株传代方法观察携带致死因子(lf)基因的重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性。方法将重组菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那霉素的LB培养基中连续传代至100代,比较第1、10、20、50、100代菌株的菌落形态、细菌形态、生... 目的通过菌株传代方法观察携带致死因子(lf)基因的重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性。方法将重组菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那霉素的LB培养基中连续传代至100代,比较第1、10、20、50、100代菌株的菌落形态、细菌形态、生化特性、质粒保有率、生长速度等的差异;取各代次菌株提取质粒DNA且分别进行双酶切及PCR鉴定、DNA测序;诱导表达各代次菌株,比较各代次菌株的重组rLF蛋白的表达水平及免疫反应性。结果各代次菌株菌落形态、生化特性、生长速度等方面与原始种子库无明显差异;在传至100代时的质粒保有率为76%;各代次菌株重组质粒电泳图谱、酶切图谱、PCR图谱未改变,未见lf基因变异;各代次菌株的总蛋白电泳图谱r、LF蛋白表达量r、LF蛋白的免疫反应性与原始种子库无明显差异。结论重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21具有较好的传代稳定性。 展开更多

关键词 重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/bl21 传代稳定性

下载PDF 职称材料

肠道病毒71型外壳蛋白VP1在大肠杆菌中的表达 被引量：7

13

作者 周世力 李琳琳 何雅青 《分析科学学报》 CAS CSCD 2007年第2期157-159,共3页

将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导... 将扩增得到的肠道病毒71型外壳蛋白VP1基因克隆到测序载体pGEM-T,测序验证该序列为目的片段后,将目的基因克隆到原核表达载体pGEX-5x-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析和Western blot验证。结果表明,在经IPTG诱导的BL21中检测到分子量与预期大小相符的大约60 kDa的融合蛋白。利用表达产物作为抗原,对EV71感染病人阳性血清的检测初步证实,重组蛋白VP1可以作为检测EV71感染的检测用抗原。 展开更多

关键词 肠道病毒71型 VP1 大肠杆菌bl21

下载PDF 职称材料

GAPC2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1

14

作者 田霞 代其林 +4 位作者 龚元亚 孙英坤 谢琳 杨娟 王劲 《吉林农业（学术版）》 2011年第4期63-64,共2页

研究采用PCR法以拟南芥cDNA为模板扩增GAPC2基因片段,克隆至原核表达载体PET28a(+)上,经0.25、0.5mM IPTG分别在37℃和20℃诱导后,再使用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的表达水平。结果表明:原核表达载体PET28a(+)-GAPC2构建正确,并且能在... 研究采用PCR法以拟南芥cDNA为模板扩增GAPC2基因片段,克隆至原核表达载体PET28a(+)上,经0.25、0.5mM IPTG分别在37℃和20℃诱导后,再使用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白的表达水平。结果表明:原核表达载体PET28a(+)-GAPC2构建正确,并且能在大肠杆菌BL21中成功表达,其融合蛋白分子量为37KD。 展开更多

关键词 GAPC2 大肠杆菌bl21 IPTG 融合蛋白

下载PDF 职称材料

基因工程大肠杆菌合成γ-聚谷氨酸 被引量：5

15

作者 马婕 王丹 +2 位作者 李强 邢建民 刘会洲 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期791-795,共5页

利用PCR方法,从自身不合成γ-聚谷氨酸(γ-PGA)的Bacillussubtilis168菌的基因组DNA中扩增出γ-PGA合成基因ywsC,ywtA和ywtB,测序并对该基因编码区进行序列分析,比对结果表明,扩增的ywsC,ywtA和ywtB与文献报道的相似度为100%.将3个基因... 利用PCR方法,从自身不合成γ-聚谷氨酸(γ-PGA)的Bacillussubtilis168菌的基因组DNA中扩增出γ-PGA合成基因ywsC,ywtA和ywtB,测序并对该基因编码区进行序列分析,比对结果表明,扩增的ywsC,ywtA和ywtB与文献报道的相似度为100%.将3个基因连接到pTrcHisA载体后转化至E.coliTOP10及E.coliBL21(DE3)宿主菌表达,结果宿主菌细胞均具备了γ-PGA生物合成能力,产量最高达到0.134g/L. 展开更多

关键词 Γ-聚谷氨酸 枯草芽孢杆菌B.subtilis168 大肠杆菌TOP10 大肠杆菌bl21(DE3)

下载PDF 职称材料

高密度培养大肠杆菌表达人角质细胞生长因子 被引量：3

16

作者 卓山龄 孙金鹏 +3 位作者 陈溥 傅成龙 凌雪萍 卢英华 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期82-87,共6页

角质细胞生长因子(KGF)是成纤维生长因子家族(FGF)成员,与上皮细胞增殖、组织胚胎发育、创伤修复等过程密切相关.在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆KGF基因,并进行诱导表达条件的优化.使用合成培养基,应用底物反馈流加策略将糖浓度控制在较低水... 角质细胞生长因子(KGF)是成纤维生长因子家族(FGF)成员,与上皮细胞增殖、组织胚胎发育、创伤修复等过程密切相关.在大肠杆菌BL21(DE3)中克隆KGF基因,并进行诱导表达条件的优化.使用合成培养基,应用底物反馈流加策略将糖浓度控制在较低水平,在发酵罐中高密度培养,细胞干质量浓度可以达到46 g/L.发酵罐培养的大肠杆菌在对数生长期经过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在可溶性和不溶性产物中都得到了具有免疫学活性的GST-KGF融合蛋白,经过ELISA检测,发酵液中可溶性表达的KGF产率达到108μg/L.该研究为利用原核表达系统生产活性KGF建立了优化工艺,有利于将大规模生产用于创伤修复的KGF. 展开更多

关键词 角质细胞生长因子 大肠杆菌bl21(DE3) 表达 高密度培养

下载PDF 职称材料

牛凝乳酶原基因在大肠杆菌中的高效表达及活性检测 被引量：3

17

作者 张俊瑞 马夏吟 +1 位作者 张红星 郝彦玲 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2012年第3期4-6,共3页

以实验室保存的携带凝乳酶原前体基因的重组载体pMD 19-T/bPPC为模板克隆凝乳酶原基因,经双酶切后与载体pET-30a连接得到重组载体pET-30a/bPC,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况。重组蛋白经变性/... 以实验室保存的携带凝乳酶原前体基因的重组载体pMD 19-T/bPPC为模板克隆凝乳酶原基因,经双酶切后与载体pET-30a连接得到重组载体pET-30a/bPC,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,采用SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况。重组蛋白经变性/复性、DEAE-Sepharose Fast Flow纯化和自催化后检测凝乳活性。结果表明,重组凝乳酶原基因在大肠杆菌中高效表达,表达量占菌体总蛋白的68%,采用Arima K方法检测,其凝乳活力达到80 SU/mL。因此,通过大肠杆菌表达系统大量制备具有生物活性的重组牛凝乳酶原的策略是可行的,研究结果为弥补国内天然牛凝乳酶的短缺提供一种途径。 展开更多

关键词 牛凝乳酶原 高效表达 大肠杆菌bl21(DE3) 凝乳活性

下载PDF 职称材料

家蚕凋亡蛋白酶(caspase-1)基因在大肠杆菌中的表达 被引量：2

18

作者 王海霞 王文兵 +1 位作者 李兵 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期129-132,共4页

为了研究家蚕凋亡蛋白酶(caspase-1)的原核表达及剪切方式,用PCR法扩增出家蚕caspase-1基因的cD-NA,然后插入pET28a载体,得到阳性质粒pET28a-caspase-1,并转化感受态细胞BL21,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导了caspase-1蛋白的表... 为了研究家蚕凋亡蛋白酶(caspase-1)的原核表达及剪切方式,用PCR法扩增出家蚕caspase-1基因的cD-NA,然后插入pET28a载体,得到阳性质粒pET28a-caspase-1,并转化感受态细胞BL21,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导了caspase-1蛋白的表达。应用SDS-PAGE和Western blot分析对其性质作检测,诱导3 h后caspase-1蛋白得到剪切,5 h开始降解。研究结果表明,caspase-1基因可在大肠杆菌BL21中诱导表达,并且能够进行自我剪切。 展开更多

关键词 凋亡蛋白酶基因 表达 剪切 家蚕 大肠杆菌bl21

下载PDF 职称材料

重组大肠杆菌表达双功能谷胱甘肽合成酶的发酵工艺研究 被引量：2

19

作者 张松 王德正 +2 位作者 李娓 李志敏 叶勤 《化学与生物工程》 CAS 2013年第8期43-46,共4页

对重组表达双功能谷胱甘肽合成酶(GshF)的大肠杆菌进行了5L罐的发酵工艺探索,分别考察了不同培养基、诱导剂种类、诱导时机、诱导温度、补料流加碳源类型等对菌体生长、GshF蛋白表达及其酶活的影响。结果表明,采用葡萄糖进行补料流加,... 对重组表达双功能谷胱甘肽合成酶(GshF)的大肠杆菌进行了5L罐的发酵工艺探索,分别考察了不同培养基、诱导剂种类、诱导时机、诱导温度、补料流加碳源类型等对菌体生长、GshF蛋白表达及其酶活的影响。结果表明,采用葡萄糖进行补料流加,在优化工艺条件下,GshF表达量达到1.94g.L-1。 展开更多

关键词 重组大肠杆菌bl21 双功能谷胱甘肽合成酶 发酵工艺 蛋白表达

下载PDF 职称材料

常见电子介体对大肠杆菌微生物燃料电池产电性能的影响 被引量：1

20

作者 刘海霞 李雪明 +1 位作者 宋天顺 谢婧婧 《生物加工过程》 CAS 2019年第5期474-480,共7页

采用平板涂布研究电子介体中性红、亚甲基蓝和甲基紫精对大肠杆菌BL21(DE3)细胞生长的抑制情况。通过微生物燃料电池技术(MFC)研究同一浓度下上述电子介体对大肠杆菌BL21(DE3)产电性能的影响。结果表明:甲基紫精对大肠杆菌BL21(DE3)的... 采用平板涂布研究电子介体中性红、亚甲基蓝和甲基紫精对大肠杆菌BL21(DE3)细胞生长的抑制情况。通过微生物燃料电池技术(MFC)研究同一浓度下上述电子介体对大肠杆菌BL21(DE3)产电性能的影响。结果表明:甲基紫精对大肠杆菌BL21(DE3)的生长抑制最强,中性红对大肠杆菌BL21(DE3)的生长抑制作用较弱;添加亚甲基蓝对于大肠杆菌BL21(DE3)MFC产电性能的提高显著;添加0.06g/L亚甲基蓝对大肠杆菌BL21(DE3)MFC产电性能的加强效果最好。 展开更多

关键词 微生物燃料电池 大肠杆菌bl21(DE3) 电子介体 中性红 亚甲基蓝 甲基紫精 产电性能

下载PDF 职称材料