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全自动除盐分离富集系统串联电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定食盐中7种重金属含量 被引量:2
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作者 孙家欣 何庆 +5 位作者 范孝勇 辜雨 任情 罗心雨 王峻 杨春梅 《中国无机分析化学》 CAS 北大核心 2023年第9期909-914,共6页
为了实现食盐中重金属元素的绿色分离和快速检测,建立了全自动除盐分离富集系统串联电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定食盐中7种重金属含量的方法。食盐样品经微波消解后通过全自动除盐分离富集系统使食盐中的Cd、Cu、Co、Ni、Mn、Pb... 为了实现食盐中重金属元素的绿色分离和快速检测,建立了全自动除盐分离富集系统串联电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定食盐中7种重金属含量的方法。食盐样品经微波消解后通过全自动除盐分离富集系统使食盐中的Cd、Cu、Co、Ni、Mn、Pb、Zn金属离子与亚氨二乙酸基团和乙二胺四乙酸基团混合树脂形成螯合物,经固相萃取、洗脱,实现金属离子从食盐样液中定量分离富集,最后将样液泵入ICP-MS仪进行检测。结果表明,在最佳实验条件下,所测7种重金属在0.5~15μg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数R 2均大于0.999,检出限为0.0006~0.045 mg/kg,3个浓度水平的加标回收率为89.0%~111%,相对标准偏差(RSD)在0.81%~4.6%。采用全自动除盐分离富集系统串联电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法实现了食盐中重金属的绿色前处理,方法具有灵敏度高、重复性好、结果准确的优点,适用于食盐中金属的测定。 展开更多
关键词 食盐 ICP-MS 全自动除盐分离富集系统 重金属
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基于低温冷阱富集方法的SF6分解产物富集系统研制 被引量:15
2
作者 赵颖博 李文慧 +5 位作者 秋向飞 郭歌 杨鼎革 高健 徐丹 牛博 《电网与清洁能源》 北大核心 2022年第11期80-87,共8页
SF气体绝缘开关设备内部存在潜伏性故障时,会产生微量的气体分解产物。当330 kV及以上电压等级的SF开关设备大体积气室充气量达到上百千克时,分解产物的浓度会被稀释至ppb量级,而现有检测设备检测限为ppm量级,分解产物浓度低于检测设备... SF气体绝缘开关设备内部存在潜伏性故障时,会产生微量的气体分解产物。当330 kV及以上电压等级的SF开关设备大体积气室充气量达到上百千克时,分解产物的浓度会被稀释至ppb量级,而现有检测设备检测限为ppm量级,分解产物浓度低于检测设备检测限,导致无法检测其浓度含量。为将大体积气室SF开关设备中分解产物组分含量提升至ppm量级,该文基于低温冷阱富集原理,提出低温冷阱加压富集的方法,研制了一种SF分解产物富集系统。实验表明,该系统对SO、HS、CO、CO、CF、CF、CF有良好富集效果,平均富集倍数分别可达27.1、103.2、190.8、88.4、62.7、13.1、67.7倍,重复性分别为34.25%、10.06%、6.15%、16.28%、7.80%、4.30%、16.25%,满足对330 k V及以上电压等级SF开关设备大气室中SF分解产物的检测需求。 展开更多
关键词 SF6气体开关设备 大体积气室 低温冷阱富集系统 富集倍数
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大气气溶胶富集系统探测黑碳与棕碳气溶胶及其光学特性研究
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作者 康慧慧 尚晓娜 +1 位作者 张路明 陈建民 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期799-811,共13页
作为大气细颗粒物(PM_(2.5))的重要组分,黑碳(BC)与有机碳(OC)中的棕碳(BrC)对地球能量收支和气候变化的影响一直是大气化学研究的难点,其中对BC、OC、BrC光学特性的准确探测至关重要。本文搭建了大气气溶胶浓缩富集器(VACES)与光学仪... 作为大气细颗粒物(PM_(2.5))的重要组分,黑碳(BC)与有机碳(OC)中的棕碳(BrC)对地球能量收支和气候变化的影响一直是大气化学研究的难点,其中对BC、OC、BrC光学特性的准确探测至关重要。本文搭建了大气气溶胶浓缩富集器(VACES)与光学仪器联用系统,对上海市PM_(2.5)样品中BC和BrC的光学特性进行了高精度观测,观测到2021年6月15日—7月15日(代表夏季)OC的浓度为(4.36±3.34)μg·m^(-3),BC的浓度为(1.29±0.75)μg·m^(-3),占PM_(2.5)质量浓度的19.4%;2021年12月29日—2022年1月25日(代表冬季)OC的浓度为(3.07±2.46)μg·m^(-3),BC的浓度为(1.49±1.38)μg·m^(-3),占PM_(2.5)的9.6%。尽管夏季OC和BC在PM_(2.5)中占比高,但与PM_(2.5)无相关性;而在冬季,OC和BC的浓度分布均与PM_(2.5)存在正相关(R^(2)>0.5)。夏季BrC的吸光值为(4.78±3.51) Mm^(-1),占总吸光的15%左右;冬季BrC的吸光值为夏季的3倍,达到(13.03±15.46) Mm^(-1),吸光占比增加到21%。根据OC/BC的比值推测大气颗粒物中碳的主要来源为生物质燃烧、化石燃料燃烧和机动车尾气排放,而夏季生物质燃烧排放的占比较大。 展开更多
关键词 大气气溶胶富集系统 黑碳 棕碳 光学性质 来源分析
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指数富集的配体系统进化技术研究进展及在食品检测中的应用 被引量:4
4
作者 谭建锡 陈盼 +2 位作者 莫瑾 彭梓 朱金国 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第1期80-84,共5页
核酸适配体是指能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,并均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到。近年来,在传统SE... 核酸适配体是指能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的寡核苷酸序列,可识别的靶分子范围非常广,并均可通过指数富集的配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选得到。近年来,在传统SELEX技术的基础上,新的SELEX技术不断出现。这些新技术的出现,在不断完善SELEX技术的同时,也极大地推动了适配体技术在各学科领域中的发展及应用。本文对核酸适配体的筛选方法进行了总结,并介绍了其在食品检测领域的应用现状和发展方向,为核酸适配体的筛选与应用提供了参考。 展开更多
关键词 核酸适配体 筛选方法 指数富集的配体系统进化技术 食品检测
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指数富集的配基系统进化技术及其在血管研究中的应用 被引量:1
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作者 汪江波 张慧 严鹏科 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2006年第3期267-270,共4页
指数富集的配基系统进化技术是一种生物文库技术,它利用人工合成的、容量约为10^14-10^15的随机寡核苷酸文库与靶物质结合,经过多轮筛选获得靶物质的DNA或RNA适配子,具有实用范围广、筛选过程简便、适配子有高特异性和高亲和性等特... 指数富集的配基系统进化技术是一种生物文库技术,它利用人工合成的、容量约为10^14-10^15的随机寡核苷酸文库与靶物质结合,经过多轮筛选获得靶物质的DNA或RNA适配子,具有实用范围广、筛选过程简便、适配子有高特异性和高亲和性等特点。在血管研究方面主要是针对血管内膜增生和新生血管形成开展的,在该领域发展潜力巨大。 展开更多
关键词 病理学与病理生理学 指数富集的配基系统进化技术 综述 随机寡核苷酸文库 适配子
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利用细胞-指数式富集的配体系统进化技术筛选肿瘤细胞DNA适配子
6
作者 徐发良 周琦 +3 位作者 匡毅 陈小乐 张海伟 顾长国 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1684-1688,共5页
目的建立一种通用的细胞-指数式富集的配体系统进化(Cell-SELEX)技术平台,用于筛选特异性结合于肿瘤细胞的DNA适配子。方法采用PCR法建立随机双链DNA(dsDNA)寡核苷酸文库,用卵白素包被的琼脂糖珠从dsDNA库分离单链DNA(ssDNA)文库;以体... 目的建立一种通用的细胞-指数式富集的配体系统进化(Cell-SELEX)技术平台,用于筛选特异性结合于肿瘤细胞的DNA适配子。方法采用PCR法建立随机双链DNA(dsDNA)寡核苷酸文库,用卵白素包被的琼脂糖珠从dsDNA库分离单链DNA(ssDNA)文库;以体外培养的肿瘤细胞作为正筛选的靶标,以相同组织来源的正常对照细胞作为负筛选的靶标,消减法进行Cell-SELEX筛选和PCR扩增以获取DNA适配子;流式细胞仪监测适配子的富集效率(亲和力);采用常规分子生物学技术进行适配子的克隆、测序和序列分析。结果成功建立了ssDNA库,经过12轮Cell-SELEX筛选,获得了特异性结合于肿瘤细胞的DNA适配子;挑选120个阳性克隆送测序,鉴定出21个适配子,采用NCBI网站提供的Blastn程序进行精确比对未发现相似序列。结论本实验建立的技术平台可在较短时间内获取特异性结合于特定肿瘤细胞的DNA适配子。 展开更多
关键词 细胞-指数式富集的配体系统进化 适配子 肿瘤 靶向诊断 靶向治疗
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连续流动液膜萃取—预柱在线联用富集系统
7
《科技开发动态》 2003年第3期39-39,共1页
关键词 液膜萃取 富集系统 化学分析测试仪
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复合靶指数富集的配基系统进化技术研究进展 被引量:2
8
作者 武振宁 薛书江 杨咏洁 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期947-951,共5页
核酸适配体是一类具有高度特异性和亲和力的单链寡核苷酸,被誉为"人工单抗",具有广阔的应用前景。它一般是通过指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选获得。目前SELEX技术多局限于单一、纯化的可溶性蛋白质靶标。然而,蛋白... 核酸适配体是一类具有高度特异性和亲和力的单链寡核苷酸,被誉为"人工单抗",具有广阔的应用前景。它一般是通过指数富集的配基系统进化(SELEX)技术筛选获得。目前SELEX技术多局限于单一、纯化的可溶性蛋白质靶标。然而,蛋白质的纯化过程繁琐,耗时费力,而且很多靶标(如血清中的低丰度蛋白质或细胞的膜蛋白)很难纯化获得单一纯品。复合靶SELEX技术则可以避免靶标的纯化过程,能够保持靶标的天然构象,并且可以在未明确靶标的组成及结构特性的前提下,通过高通量的盲筛获得一系列特异性核酸适配体。该文主要介绍以未纯化的各种生物样本为复合靶的SELEX技术,以期为核酸适配体的筛选提供新思路。 展开更多
关键词 复合靶 核酸适配体 指数富集的配基系统进化 筛选 综述
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指数富集的配体系统进化技术的发展及其在临床治疗中的应用 被引量:1
9
作者 龙宇鹏 任君 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2014年第2期228-232,共5页
基于作为配基的寡核苷酸的三维立体结构,指数富集的配体系统进化(SELEX)技术能够筛选获得高效、特异结合靶分子的寡核苷酸适体。该配基由于其亲和力高、特异性强、免疫原性低、筛选周期短及适用范围广等特性,在临床诊断和疾病治疗中拥... 基于作为配基的寡核苷酸的三维立体结构,指数富集的配体系统进化(SELEX)技术能够筛选获得高效、特异结合靶分子的寡核苷酸适体。该配基由于其亲和力高、特异性强、免疫原性低、筛选周期短及适用范围广等特性,在临床诊断和疾病治疗中拥有多项优势,具有被研制成新型适体药物应用于临床的巨大潜力。本文从SELEX技术的发展、配基的修饰改造、临床治疗的优势、配基作为靶蛋白功能阻断剂和药物分子靶向载体进行的临床应用等几个方面,对寡核苷酸适体在临床疾病治疗中的应用进行综述。 展开更多
关键词 指数富集的配体系统进化 寡核苷酸适体 配基 治疗
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采用Cell-SELEX技术的核酸适配体在肿瘤靶向治疗的研究进展
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作者 成志云 陈佳怡 +3 位作者 白如玉 杨会勇 MOHSAN Ullah 刁勇 《华侨大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第4期439-444,共6页
阐述细胞-配体指数富集系统进化(Cell-SELEX)技术特点,以及通过该技术筛选得到的核酸适配体在肿瘤靶向治疗中的应用进展和挑战,通过查阅近年的相关文献,综述核酸适配体作为药物及药物载体在肿瘤靶向治疗中的应用研究进展。结果表明:基于... 阐述细胞-配体指数富集系统进化(Cell-SELEX)技术特点,以及通过该技术筛选得到的核酸适配体在肿瘤靶向治疗中的应用进展和挑战,通过查阅近年的相关文献,综述核酸适配体作为药物及药物载体在肿瘤靶向治疗中的应用研究进展。结果表明:基于Cell-SELEX技术筛选得到的核酸适配体在肿瘤靶向治疗中的疗效显著,可开发成为肿瘤靶向治疗的潜力药物及良好的药物载体。 展开更多
关键词 核酸适配体 细胞-配体指数富集系统进化(Cell-SELEX)技术 肿瘤 靶向治疗
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SELEX实验中两种富集方法的比较 被引量:3
11
作者 胡承香 邸雁飞 +7 位作者 朱旭东 顾长国 李磊 吕凤林 梁华平 徐祥 罗艳 刘琛 《创伤外科杂志》 2003年第4期316-317,共2页
比较指数富集系统进化配体 (SELEX)实验中 ,液相筛选与固 液相筛选方法的差异对筛选富集库亲和力的影响。液相筛选、膜截留结合核酸的技术路线与固 液相筛选、固相中直接获取结合核酸的途径相比较 ,前一种方法更容易富集到与靶目标结... 比较指数富集系统进化配体 (SELEX)实验中 ,液相筛选与固 液相筛选方法的差异对筛选富集库亲和力的影响。液相筛选、膜截留结合核酸的技术路线与固 液相筛选、固相中直接获取结合核酸的途径相比较 ,前一种方法更容易富集到与靶目标结合的目的序列。 展开更多
关键词 指数富集系统进化配体(SELEX) 适应配体 富集 亲和力
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酵母双杂交系统的改进与研究进展 被引量:5
12
作者 张莉 黄倢 《海洋湖沼通报》 CSCD 北大核心 2006年第1期108-116,共9页
酵母双杂交系统是一种新兴的体内研究蛋白质之间相互作用以及筛选cDNA文库的技术手段,自建立以来得到了不断的改进与发展。在此基础上又相继出现了单杂交、三杂交、反向双杂交以及SOS富集系统等多种衍生系统,它们在功能基因组学、蛋白... 酵母双杂交系统是一种新兴的体内研究蛋白质之间相互作用以及筛选cDNA文库的技术手段,自建立以来得到了不断的改进与发展。在此基础上又相继出现了单杂交、三杂交、反向双杂交以及SOS富集系统等多种衍生系统,它们在功能基因组学、蛋白质组学以及药物开发研究中发挥了重要作用。本文拟就双杂交系统的原理、改进、发展及应用做一综述。 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 单杂交系统 三杂交系统 反向双杂交系统 SOS富集系统
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两种富集方法相结合对蓖麻毒素进行SELEX筛选研究 被引量:6
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作者 唐吉军 谢剑炜 +1 位作者 邵宁生 沈晓书 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第1期35-37,共3页
为了获得能特异识别具有细胞毒性的蓖麻毒素蛋白寡核苷酸适配子 ,体外构建了含 4 0个随机序列全长 87nt的随机ssDNA文库 ,采用指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术方法 ,结合微孔板和亲和树脂两种分离、富集方法 ,经过数轮筛选 ,文库与... 为了获得能特异识别具有细胞毒性的蓖麻毒素蛋白寡核苷酸适配子 ,体外构建了含 4 0个随机序列全长 87nt的随机ssDNA文库 ,采用指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术方法 ,结合微孔板和亲和树脂两种分离、富集方法 ,经过数轮筛选 ,文库与蓖麻毒素的结合率达到了 38.5 %。结果表明 ,以亲和树脂为分离介质进行筛选 。 展开更多
关键词 指数富集配基的系统进化 蓖麻毒素 随机ssDNA文库 适配子
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一种用于筛选砷(Ⅲ)适配体和检测砷(Ⅲ)的QCM生物传感器
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作者 郑楚君 钱世权 +5 位作者 李欣培 颜旭 黄海轩 王雨萱 叶煜玮 袁敏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1282-1288,共7页
开发了石英晶体微天平(QCM)-指数富集配体系统进化(SELEX)技术,用于筛选出与砷(Ⅲ)有高亲和力的适配体。设计随机单链DNA文库,以砷(Ⅲ)为靶标固定在巯基乙胺修饰的晶振片上,捕获溶液中处于游离状态的适配体,构建QCM-SELEX筛选方法。经过... 开发了石英晶体微天平(QCM)-指数富集配体系统进化(SELEX)技术,用于筛选出与砷(Ⅲ)有高亲和力的适配体。设计随机单链DNA文库,以砷(Ⅲ)为靶标固定在巯基乙胺修饰的晶振片上,捕获溶液中处于游离状态的适配体,构建QCM-SELEX筛选方法。经过6轮筛选,对次级文库进行高通量测序,通过QCM共振频率变化计算得出6S1解离系数K d值为0.36μmol/L。将6S1作为探针,构建QCM生物传感器用于检测砷(Ⅲ),该传感器在0.01μmol/L~0.2μmol/L范围内有较好的线性关系,对砷(Ⅲ)检测限为5.2 nmol/L(3σ),具有良好的选择性。 展开更多
关键词 砷(Ⅲ) 适配体 石英晶体微天平(QCM)-指数富集配体系统进化(SELEX)(QCM-SELEX) 测序
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开口毛细管的化学修饰及富集和测定水体中微量蛋白质 被引量:1
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作者 金谷 张蕾 杨健 《理化检验(化学分册)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期721-725,共5页
将聚四氟乙烯毛细管用聚乙烯醇交联涂层后,偶联上活性三嗪染料Cibacron BlueF3GA,制成一种新型的亲合染料Cibacron Blue F3GA修饰的聚四氟乙烯亲合毛细管.以牛血清白蛋白(BSA)作为模型蛋白进行在线富集和检测.方法依据亲合毛细管将低浓... 将聚四氟乙烯毛细管用聚乙烯醇交联涂层后,偶联上活性三嗪染料Cibacron BlueF3GA,制成一种新型的亲合染料Cibacron Blue F3GA修饰的聚四氟乙烯亲合毛细管.以牛血清白蛋白(BSA)作为模型蛋白进行在线富集和检测.方法依据亲合毛细管将低浓度的蛋白质溶液在线预富集后,以KSCN溶液洗脱并形成较高浓度的蛋白质溶液,用偶氮胂K光度法在线定量测定.PVA和Cibacron Blue F3GA的固载量分别为8.6 μmol·g-1和0.434 mmol·g-1.毛细管容量为0.58 mg·cm-2BSA.这种分析系统适合微量和痕量蛋白质的在线富集和分析.对常见无机离子及有机物的干扰作了试验,结果表明方法的选择性较好.BSA的线性范围为0~200μg·L-1,检出限为1.5μg·L-1,方法用于水体中蛋白质的测定,回收率在99%~102%之间. 展开更多
关键词 FI-在线富集及分析系统 光度法 蛋白质 偶合
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核酸适体的筛选及其在养殖动物病原检测中的应用进展
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作者 李鹏飞 张帅帅 +7 位作者 刘明珠 黄静 王剑 钟明兰 欧武阁 何琼玉 韦红玲 余庆 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期14-28,共15页
动物疫病的暴发不仅造成了巨大损失,也严重阻碍着人工养殖业的健康可持续发展,因此亟须针对疫病病原开发快速检测技术和病原防控技术来预防病害的暴发。核酸适体(aptamer)是针对特定靶标,利用指数富集配基系统进化技术(systematic evolu... 动物疫病的暴发不仅造成了巨大损失,也严重阻碍着人工养殖业的健康可持续发展,因此亟须针对疫病病原开发快速检测技术和病原防控技术来预防病害的暴发。核酸适体(aptamer)是针对特定靶标,利用指数富集配基系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选得到具有高亲和力和高特异性的功能性单链寡核苷酸。本文结合国内外研究,阐述了核酸适体的优势以及其在人工养殖动物病原微生物防控中的研究进展,同时重点讨论了核酸适体在应用方面的5种挑战,(1)核酸适体筛选技术的局限性;(2)核酸适体在治疗方面缺乏稳定性与安全性;(3)核酸适体在生物体内如何持续性发挥靶向治疗作用;(4)核酸适体在活体实验中的精确性有待提高;(5)核酸适体与其他检测方法能否串联,从而构建全面性的检测平台。目前核酸适体针对养殖动物病原领域的研究只是刚刚起步,在快速检测与靶向治疗方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 养殖动物 病原检测技术 核酸适体 指数富集配基系统进化技术
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基于中长期优化调度的水电富集地区丰枯期省间购售电策略优化模型研究 被引量:9
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作者 张粒子 张枫 +3 位作者 李俊 冯丽 刘波 张萌雨 《水利水电技术(中英文)》 北大核心 2021年第7期152-166,共15页
根据跨省跨区购售电合同需约定年度电量规模以及分月计划、送受电曲线的新要求,针对我国四川、重庆和云南等水电富集电力系统在未来省内电力供需"丰余枯缺"的市场形势下需要将省间中长期购售电交易与省内电力市场协同优化的问... 根据跨省跨区购售电合同需约定年度电量规模以及分月计划、送受电曲线的新要求,针对我国四川、重庆和云南等水电富集电力系统在未来省内电力供需"丰余枯缺"的市场形势下需要将省间中长期购售电交易与省内电力市场协同优化的问题,基于中长期优化调度模型,构建了水电富集地区丰枯期省间购售电策略优化模型,深入研究了其中基于未来成本函数的长期与中期优化调度模型动态嵌套耦合原理及随机对偶动态规划求解算法。仿真结果表明,与未考虑省间购售电策略的模型相比,所构建模型的综合购电成本仅为前者的3.82%;与以水电发电量最大为优化目标的模型相比,所构建模型能获得与前者相同的水电调度方案,发挥清洁能源效用。利用所构建模型能够优化水电富集地区外送、购入电能交易计划,在保障满足省内枯期和枯水年用电需求的同时,谋求省内用户购电成本最小化和外送电收益最大化。研究可为水电富集地区制定年度分月分周分峰谷平时段购售电交易策略提供理论方法。 展开更多
关键词 水电富集电力系统 中长期优化调度 省间购售电策略 动态耦合 随机对偶动态规划 水电站
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闭锁连接蛋白-1 核酸适配体的筛选与初步应用
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作者 李玉娟 张瀚文 +2 位作者 刘珊 王佳平 李勇枝 《北京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第8期870-877,共8页
基于配体指数富集系统进化技术筛选闭锁连接蛋白-1的核酸适配体,最终筛选到15条ZO-1的核酸适配体(APTZO-1).排除线性结构与相似结构后,采用酶联免疫吸附法表征了9条APTZO-1与ZO-1亲和力的大小,排序依次为:APTZO-18>APTZO-12>APTZO... 基于配体指数富集系统进化技术筛选闭锁连接蛋白-1的核酸适配体,最终筛选到15条ZO-1的核酸适配体(APTZO-1).排除线性结构与相似结构后,采用酶联免疫吸附法表征了9条APTZO-1与ZO-1亲和力的大小,排序依次为:APTZO-18>APTZO-12>APTZO-17>APTZO-113>APTZO-11>APTZO-15>APTZO-115>APTZO-112>APTZO-14.采用Cy5荧光基团标记APTZO-18(Cy5-APTZO-18),证实了其能对人结直肠腺癌细胞(Caco-2)与人脑微管内皮细胞(hCMEC/D3)的ZO-1进行荧光定位与半定量分析,且与基于ZO-1抗体法的免疫荧光与蛋白印迹实验结果基本相似.本研究首次筛选到了ZO-1的系列核酸适配体,有望为ZO-1的荧光标记与半定量分析提供一种新型的、特异性高的工具分子. 展开更多
关键词 闭锁连接蛋白-1 配体指数富集系统进化 核酸适配体 荧光标记 半定量分析
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筛选获得的血型抗原结合黏附素(BabA)适配子可阻断幽门螺杆菌(H.pylori)在小鼠胃内的定植
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作者 袁媛 李卫鹏 +2 位作者 周晓静 孙伟莉 唐晓磊 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期793-800,共8页
目的 探索核酸适配子特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)血型抗原结合黏附素(BabA)对H.pylori宿主细胞黏附的阻断作用。方法 培养H.pylori菌株并提取基因组,并设计引物PCR扩增BabA基因,扩增获得的BabA基因克隆、构建至原核表达质粒,异丙基-... 目的 探索核酸适配子特异性结合幽门螺杆菌(H.pylori)血型抗原结合黏附素(BabA)对H.pylori宿主细胞黏附的阻断作用。方法 培养H.pylori菌株并提取基因组,并设计引物PCR扩增BabA基因,扩增获得的BabA基因克隆、构建至原核表达质粒,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化后作为靶标,利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选能够特异性结合BabA的单链脱氧核苷酸(ssDNA)适配子;酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)法检测并评估候选适配子的特征;随后在体外细胞水平和小鼠感染模型中,分别采用流式细胞术和菌落计数验证ssDNA适配子阻断H.pylori黏附的效果,同时利用ELISA检测小鼠胃黏膜细胞匀浆中白细胞介素6(IL-6)、 IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-10和IL-4的水平。结果提取H.pylori ATCC 43504基因组并构建了pET32a-BabA质粒,诱导后并纯化重组蛋白相对分子质量(Mr)约为39 000;经肽指纹图谱(PMF)分析其与BabA蛋白一致;以此为靶标运用SELEX筛选获得5个候选适配子,经分析鉴定适配子A10、 A30和A42识别相同位点,A3和A16与上述三个适配子各自识别不同的位点。适配子体外能够显著阻断H.pylori的黏附,且动物模型实验证明适配子经灌胃处理后,对胃黏膜的H.pylori定植有阻断效果,且能够减轻诱导的炎症反应,适配子治疗组胃黏膜匀浆中IL-4、 IL-6、 IL-8和TNF-ɑ水平低于模型组。结论 适配子特异性结合BabA封闭H.pylori与胃黏膜上皮细胞的黏附能够阻断H.pylori在胃黏膜的定植。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 血型抗原结合黏附素(BabA) 指数富集的配体系统进化技术(SELEX) 适配子 定植
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核酸适配体筛选与亲和力评价技术主要研究方向、进展与挑战 被引量:2
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作者 贾海静 高亚菁 娄新徽 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第9期2051-2076,共26页
核酸适配体是一类具有特异性分子识别能力的单链DNA或者RNA分子,通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选得到。核酸适配体相比抗体具有热稳定性高、便于化学合成与修饰、免疫原性低等优点,在生物分析、生物医学、生物技术等众多领... 核酸适配体是一类具有特异性分子识别能力的单链DNA或者RNA分子,通过指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选得到。核酸适配体相比抗体具有热稳定性高、便于化学合成与修饰、免疫原性低等优点,在生物分析、生物医学、生物技术等众多领域引起广泛关注。高质量的核酸适配体是应用的基础,然而目前能够满足实际应用的核酸适配体数量还非常有限。如何获得高亲和力、高特异性、高体内稳定性的核酸适配体是核酸适配体领域的技术瓶颈。本文首先简单介绍了SELEX技术的基本原理和核酸库的设计、筛选过程监控、次级文库制备、测序和候选适配体筛选等关键步骤。接着归纳总结了30多年来核酸适配体筛选技术的6个主要研究方向、研究进展和局限性。这6个主要研究方向分别是提高适配体特异性的筛选方法、提高适配体稳定性(抗核酸酶降解能力)的筛选方法、快速筛选方法、复杂靶标适配体筛选方法、小分子靶标适配体筛选方法、提高适配体亲和力的筛选方法。其中快速筛选技术是长期以来持续关注的研究方向,几乎所有物理分离手段都已用于提高SELEX的筛选效率。最近,高效化学反应与SELEX技术的结合为核酸适配体的快速筛选提供了新的策略。本文随后对适合小分子靶标核酸适配体筛选的3类方法进展和存在的问题进行了重点评述。这3类方法分别是基于靶标固定的筛选技术、基于文库固定的筛选技术(捕获-SELEX,Capture-SELEX)和均相筛选技术(氧化石墨烯-SELEX,GO-SELEX)。基于靶标固定的筛选技术尽管存在空间位阻等众多问题,由于其操作的简单性,目前依然应用广泛。近年来Capture-SELEX应用广泛。结合36种靶标适配体的筛选实验条件(文库设计、正筛靶标浓度、负筛靶标的选择和浓度)和所获得的适配体的亲和力(KD,解离常数,dissociation constant)和特异性,对Capture-SELEX的实验条件与适配体性能的关系进行了讨论。统计数据表明,降低正筛靶标浓度有利于提高适配体的亲和力,但不是必要条件。负筛选是目前提高适配体特异性的主要技术手段,但适配体的特异性还不能满足实际需求。负筛选靶标及其浓度的选择差异很大,而且36种靶标中有20种靶标的适配体筛选没有进行负筛选。如何提高核酸适配体的特异性是目前小分子靶标核酸适配体所面临的难题,急需寻找新的策略。本文还列表归纳了近三年利用GO-SELEX进行的13种小分子靶标的实验条件和所获得的适配体的KD和特异性。统计数据表明,GO-SELEX比Capture-SELEX所需要的筛选轮数少,两种方法所获得的适配体的亲和力多在纳摩尔每升水平。Capture-SELEX相对较低的筛选效率应该主要由于文库的自解离问题。核酸适配体的亲和力评价是候选核酸适配体结构与性能评价的重要组成部分。常用的核酸适配体亲和力评价技术包括基于分离、基于固定、均相体系三大类十多种方法。假阳性和假阴性是各种评价技术都有可能存在的问题。本文以纳米金比色法和等温热滴定技术为例评述技术进展,讨论导致不同亲和力评价技术结果不一致性问题的根本原因。本文最后对核酸适配体筛选技术、亲和力评价技术和技术的标准化的未来发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 核酸适配体 体外适配体筛选 指数富集配体系统进化 亲和力评价技术 标准化
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