寡糖的立体选择性合成策略 被引量：11

1

作者 陈朗秋 赖端 +2 位作者 宋志伟 赵兴俄 孔繁祚 《有机化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第5期627-642,共16页

研究寡糖及缀合物的生物活性日益显现出重要的生物学意义,采用化学合成方法研究特定的α或β糖苷键的构建对复杂寡糖及缀合物的合成极其重要.到目前为止,寡糖及其缀合物化学偶联立体选择性设计与合成策略是糖化学领域中十分活跃和引人... 研究寡糖及缀合物的生物活性日益显现出重要的生物学意义,采用化学合成方法研究特定的α或β糖苷键的构建对复杂寡糖及缀合物的合成极其重要.到目前为止,寡糖及其缀合物化学偶联立体选择性设计与合成策略是糖化学领域中十分活跃和引人注目的热点,受到特别的关注.综述了多年来高立体选择性寡糖的合成的研究进展. 展开更多

关键词 寡糖合成 立体选择性 邻基参与作用 分子内配体传递法

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糖苷合成酶——一类新型的寡糖高效合成工具 被引量：7

2

作者 卢丽丽 肖敏 +2 位作者 赵晗 王鹏 钱新民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第4期310-320,共11页

寡糖是哺乳动物细胞表面糖蛋白和糖脂以及微生物来源的生理活性物质的要素之一,其应用于医药的巨大潜能至今还没有得到充分体现,主要原因是合成足够于临床使用的寡糖非常困难.传统的化学法和酶法在大规模合成寡糖方面都有一定局限性.近... 寡糖是哺乳动物细胞表面糖蛋白和糖脂以及微生物来源的生理活性物质的要素之一,其应用于医药的巨大潜能至今还没有得到充分体现,主要原因是合成足够于临床使用的寡糖非常困难.传统的化学法和酶法在大规模合成寡糖方面都有一定局限性.近年来,分子生物学技术大大推动了糖苷酶合成寡糖的研究,将糖苷酶催化中心亲核体氨基酸定点突变为非亲核体氨基酸,导致酶的原有水解活性丧失,只催化糖苷键合成反应,寡糖产量最高可达99%,人工产生了一类新酶——糖苷合成酶(glycosynthases),随后又产生了硫代糖苷酶(thioglycoligases)和硫代糖苷合成酶(thioglycosynthases).糖苷合成酶的高通量筛选可用双质粒系统和酵母三杂交系统进行,其活性的进一步改进可通过亲核体氨基酸位点不同氨基酸取代、其他位点氨基酸突变、反应条件优化等方法进行,其区域选择性的改变或增强可通过改变糖基受体分子达到.糖苷合成酶作为一种新型高效的生物催化剂,对寡糖的工业化合成有着重要意义,它的出现对糖生物学的发展必将起到巨大的推动作用. 展开更多

关键词 寡糖合成 糖苷酶 糖苷合成酶 高通量筛选 性质改进

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硫矿硫化叶菌麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因的克隆与表达 被引量：3

3

作者 陈晓斌 林建平 +1 位作者 金志华 岑沛霖 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第10期2393-2396,共4页

引言海藻糖（α-D-葡糖基-[1,1]-α-D葡糖苷）是一种广泛存在于低等植物、藻类、细菌、真菌、酵母、昆虫等的非还原性二糖.在自然界中,海藻糖既是一种贮藏性糖类,又是应激代谢的重要产物,具有保护生物细胞和生物活性物质在脱水、干旱、... 引言海藻糖（α-D-葡糖基-[1,1]-α-D葡糖苷）是一种广泛存在于低等植物、藻类、细菌、真菌、酵母、昆虫等的非还原性二糖.在自然界中,海藻糖既是一种贮藏性糖类,又是应激代谢的重要产物,具有保护生物细胞和生物活性物质在脱水、干旱、高温、冷冻、高渗透压及有毒试剂等不良环境条件下活性免遭破坏的功能. 展开更多

关键词 麦芽寡糖基海藻糖合成酶 海藻糖 淀粉 稀有密码子

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鸡日粮中的天然和合成寡糖

4

作者 武书庚 郑君杰 赵发根 《饲料世界》 2001年第4期6-9,共4页

本文以棉子糖系列寡糖为代表综述了天然和合成寡糖对肉鸡生产性能的影响，研究表明天然寡糖对动物健康和生产性能有负作用，但合成寡糖相反，这与寡糖的化学结构，添加量以及动物所处生理阶段有关，饲料中需要合成寡糖，但在深入了解其... 本文以棉子糖系列寡糖为代表综述了天然和合成寡糖对肉鸡生产性能的影响，研究表明天然寡糖对动物健康和生产性能有负作用，但合成寡糖相反，这与寡糖的化学结构，添加量以及动物所处生理阶段有关，饲料中需要合成寡糖，但在深入了解其分子结构基础上，充分合理利用天然寡糖的有益片段，除去有害片段，合理使用天然寡糖或其廉价合成品，更具实际应用价值。 展开更多

关键词 肉鸡 天然寡糖 合成寡糖 化学性质 生产性能

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鸡日粮中的天然和合成寡糖

5

作者 武书庚 郑君杰 等 《饲料世界》 2001年第5期3-5,共3页

关键词 鸡 日粮 天然寡糖 合成寡糖 调控机理 生产性能 饲料添加剂

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Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909麦芽寡糖基海藻糖合成酶在Bacillus subtilis中的重组表达和发酵优化 被引量：5

6

作者 韩唱 宿玲恰 吴敬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期162-168,共7页

为实现Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909来源的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)基因tre Y在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的重组表达,以质粒p ET-24a(+)-tre Y为模板PCR扩增得到目的基因,并与表达载体pHY300PLK连接,转入表达... 为实现Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909来源的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)基因tre Y在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的重组表达,以质粒p ET-24a(+)-tre Y为模板PCR扩增得到目的基因,并与表达载体pHY300PLK连接,转入表达宿主Bacillus subtilis CCTCC M 2016536中,重组菌在TB培养基中培养48 h后MTSase酶活达到17.5 U/m L;在此基础上对重组菌发酵条件进行优化,通过单因素实验(氮源种类、氮源复配、氮源浓度、碳源种类、葡萄糖浓度、初始pH、诱导温度)和正交实验(氮源浓度、葡萄糖浓度、初始pH、诱导温度)确定其摇瓶发酵产酶的最适培养基和培养条件为:氮源(工业蛋白胨∶棉籽粉=3∶1)48.0 g/L、葡萄糖为10.0 g/L、培养基初始pH为7.0,最适培养温度为30℃;在此条件下,MTSase的酶活可达41.5 U/m L,是优化前的2.4倍。 展开更多

关键词 麦芽寡糖基海藻糖合成酶 枯草芽孢杆菌 重组表达 发酵优化

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谷氨酸棒杆菌麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因的克隆与表达 被引量：2

7

作者 张文德 乔宇 丁宏标 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2009年第1期68-72,共5页

采用PCR方法从谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)基因组中分离得到2.4 kb的麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因(TreY),将其插入原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS获得重组基因工程菌。经IPTG诱导表达得到约90 kDa的目... 采用PCR方法从谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)基因组中分离得到2.4 kb的麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因(TreY),将其插入原核表达载体pET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS获得重组基因工程菌。经IPTG诱导表达得到约90 kDa的目的蛋白,可溶性蛋白占细胞总蛋白的45.3%。重组酶作用于麦芽糊精,可使其DE值降低,得到麦芽寡糖基海藻糖的混合物。 展开更多

关键词 麦芽寡糖基海藻糖合成酶 麦芽糊精 谷氨酸棒杆菌 重组表达

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发菜中麦芽寡糖基海藻糖合成酶的抗体制备及鉴定

8

作者 沈蓉蓉 章秀 +2 位作者 吴双秀 何靓 王全喜 《上海师范大学学报（自然科学版）》 2009年第6期639-644,共6页

通过PCR法从发菜总DNA中克隆到编码麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因前645bp的催化位点保守序列的片段,将该基因片段在大肠杆菌中表达,得到符合预期大小的重组蛋白.将该重组蛋白纯化回收用于制备该酶的特异性抗体.检测表明抗体具有较高效价.... 通过PCR法从发菜总DNA中克隆到编码麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因前645bp的催化位点保守序列的片段,将该基因片段在大肠杆菌中表达,得到符合预期大小的重组蛋白.将该重组蛋白纯化回收用于制备该酶的特异性抗体.检测表明抗体具有较高效价.利用该抗体检测干旱胁迫下发菜藻丝体中该酶的表达量表明干旱胁迫条件下该酶的表达量增加,且与海藻糖积累量呈正相关,可能参与发菜的抗逆性保护作用. 展开更多

关键词 发菜 麦芽寡糖基海藻糖合成酶 抗体 干旱胁迫

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易错PCR技术提高源于Sulfolobus acidocaldarius麦芽寡糖基海藻糖合成酶活性

9

作者 姚锴琳 宿玲恰 吴敬 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期16-23,共8页

利用易错PCR技术结合高通量筛选技术对源于Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909的MTSase进行定向进化,获得一个酶活提高的突变体酶D-6。基因分析表明,突变体酶发生了2个位点突变:G432D/G586D,其中突变位点G586D位于Aβ8与AEα14的loo... 利用易错PCR技术结合高通量筛选技术对源于Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909的MTSase进行定向进化,获得一个酶活提高的突变体酶D-6。基因分析表明,突变体酶发生了2个位点突变:G432D/G586D,其中突变位点G586D位于Aβ8与AEα14的loop环上。将野生型MTSase和突变体酶D-6进行蛋白质纯化后,测定其酶学性质,结果表明:突变体酶D-6的比活力为野生型MTSase的1.22倍;野生型的Km值为4.74 mmol/L,而突变体D-6为2.77 mmol/L,表明其对底物亲和性较野生型有所提高。 展开更多

关键词 麦芽寡糖基海藻糖合成酶 嗜酸热硫化叶菌 易错PCR

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E．coli O86 O-Antigen全保护五糖重复单元的化学简易合成 被引量：2

10

作者 程水红 魏国华 杜宇国 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第5期919-922,共4页

以5个单糖组分为原料,经过7步,以21%的总产率得到E.coliO86抗原全保护的五糖重复单元.在合成路线中,充分利用糖基化反应的立体选择性原则,结合HClO4-SiO2固体催化剂和"IP"策略,大大提高了合成的效率.整个合成路线设计操作简单... 以5个单糖组分为原料,经过7步,以21%的总产率得到E.coliO86抗原全保护的五糖重复单元.在合成路线中,充分利用糖基化反应的立体选择性原则,结合HClO4-SiO2固体催化剂和"IP"策略,大大提高了合成的效率.整个合成路线设计操作简单,选择性高,消耗低,产率高,可以用于快速高效地合成其它一些具有生物活性的寡糖分子. 展开更多

关键词 大肠杆菌O86型O-抗原 B血型抗原 寡糖合成

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质粒复制原点在地衣芽孢杆菌中的功能鉴定及理性设计

11

作者 张高阳 李由然 +1 位作者 肖丰旭 石贵阳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第18期1-8,共8页

食品安全级工业微生物地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)与模式微生物相比,严重缺乏质粒载体等合成生物学标准化遗传工具,导致其研究与应用受到限制。该研究首先建立了质粒特性在地衣芽孢杆菌中的评价方法,由此鉴定获得了高效复制... 食品安全级工业微生物地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)与模式微生物相比,严重缺乏质粒载体等合成生物学标准化遗传工具,导致其研究与应用受到限制。该研究首先建立了质粒特性在地衣芽孢杆菌中的评价方法,由此鉴定获得了高效复制原点。在此基础上进一步解析了复制原点中茎环结构影响质粒拷贝数和稳定性的分子机制,并理性设计了系列人工复制原点。结果表明,枯草芽孢杆菌来源的复制原点ORIT5拷贝数是pHY300内源复制原点的2.15倍(达到40.2),同时具有更高的稳定性。3′端增加1个motif为TCCGCC茎环的人工复制原点pT1,拷贝数进一步提升至62.2,稳定性提高36%。以麦芽寡糖基海藻糖合成酶为报告蛋白,携带pT1复制原点的重组菌发酵最高酶活力达到8726.7 U/mL,比出发菌株提高了43.9%。人工复制原点的开发与应用为地衣芽孢杆菌表达系统的改进和完善奠定了基础。 展开更多

关键词 复制原点 地衣芽孢杆菌 茎环 麦芽寡糖基海藻糖合成酶

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ABO(H)血型抗原及其蛋白缀合物的合成

12

作者 庞伟 丁华帅 +3 位作者 云中厚 钟昊璇 杜欣军 曹鸿志 《中国海洋药物》 CAS CSCD 2024年第5期69-75,共7页

目的 通过化学酶法策略合成人ABO(H)寡糖抗原,寡糖抗原通过连接臂与载体蛋白质偶联合成糖蛋白缀合物。方法 化学法合成半乳糖苷GalβProN_(3)受体底物,运用模块化酶法组装策略合成人ABO(H)血型表面抗原决定簇。寡糖抗原中的叠氮基团经... 目的 通过化学酶法策略合成人ABO(H)寡糖抗原,寡糖抗原通过连接臂与载体蛋白质偶联合成糖蛋白缀合物。方法 化学法合成半乳糖苷GalβProN_(3)受体底物,运用模块化酶法组装策略合成人ABO(H)血型表面抗原决定簇。寡糖抗原中的叠氮基团经催化氢化还原为氨基后与双琥珀酰亚胺戊二酸酯连接臂的一端偶联,所得中间体中连接臂的另一端活化酯与载体蛋白质氨基酸残基的氨基偶联得到目标糖蛋白缀合物。结果 利用化学酶法合成策略快速、高效地合成了人ABO血型H抗原二糖和A、B抗原三糖。A、B抗原三糖分别与牛血清蛋白(BSA)偶联,所得糖蛋白缀合物经MALDI-TOF-MS质谱检测,分别确定了A、B抗原蛋白缀合物的相对分子质量及糖蛋白缀合物中糖抗原的偶联数。 展开更多

关键词 血型抗原 化学酶法 寡糖合成 糖缀合物

原文传递

四氯邻苯二甲酰基保护的氨基葡萄糖糖基化行为的初步研究

13

作者 秦致辉 蔡孟深 李中军 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第S1期38-38,共1页

关键词 氨基葡萄糖 糖基化反应 甲酰基 氨基保护基 邻苯 北京医科大学 药学院 寡糖合成 国家自然科学基金 应用实例

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β-N-乙酰氨基己糖苷酶及其合成寡糖的研究进展 被引量：2

14

作者 陈晓迪 王凤山 肖敏 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1189-1205,共17页

β-N-乙酰氨基己糖苷酶(EC.3.2.1.52)是一类重要的糖苷水解酶,在自然界中催化简单的β-N-乙酰氨基己糖苷或复杂的寡糖链、多糖链中末端N-乙酰己糖苷键的水解,在微生物、植物和动物中广泛分布,具有重要的生物学功能。某些种类的β-N-乙... β-N-乙酰氨基己糖苷酶(EC.3.2.1.52)是一类重要的糖苷水解酶,在自然界中催化简单的β-N-乙酰氨基己糖苷或复杂的寡糖链、多糖链中末端N-乙酰己糖苷键的水解,在微生物、植物和动物中广泛分布,具有重要的生物学功能。某些种类的β-N-乙酰氨基己糖苷酶在一定的人为条件下水解β-N-乙酰氨基己糖苷键的同时还具有转糖基作用,能将β-N-乙酰氨基己糖基转移到不同的羟基化合物上,合成β-N-乙酰氨基己糖苷化合物,在糖链合成上具有应用的潜力。本文综述了β-N-乙酰氨基己糖苷酶的结构和催化机制、酶的生物学功能以及酶在β-N-乙酰氨基己糖苷化合物合成中的应用,以促进β-N-乙酰氨基己糖苷酶的进一步研究和开发应用。 展开更多

关键词 β-N-乙酰氨基己糖苷酶 催化机制 生物学功能 转糖基作用 寡糖合成

原文传递

褐藻胶寡糖甘露糖醛酸二糖的合成 被引量：1

15

作者 杨克宝 李春霞 +2 位作者 王坤 管华诗 于广利 《中国海洋药物》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1-9,共9页

目的通过化学合成的手段进行褐藻胶中甘露糖醛酸二糖的合成。方法以甘露糖为起始原料,利用α-甘露糖基三氟甲磺酸酯中间体经SN2亲核取代反应直接构建β-甘露糖苷键,然后选择性的氧化6-位羟基得到甘露糖醛酸二糖苷。结果利用4,6位苄叉保... 目的通过化学合成的手段进行褐藻胶中甘露糖醛酸二糖的合成。方法以甘露糖为起始原料,利用α-甘露糖基三氟甲磺酸酯中间体经SN2亲核取代反应直接构建β-甘露糖苷键,然后选择性的氧化6-位羟基得到甘露糖醛酸二糖苷。结果利用4,6位苄叉保护的甘露糖硫苷5作为糖基供体,高立体选择性的构建了β-(1,4)-甘露糖苷键,然后利用TEMPO/BAIB选择性的氧化6-位羟基得到了β-D-(1,4)-甘露糖醛酸二糖甲基苷15。结论该研究为下一步合成聚合度更高的系列褐藻胶寡糖及其衍生物提供了有效的合成策略和方法。 展开更多

关键词 褐藻胶 甘露糖醛酸二糖 寡糖合成

原文传递

肝素寡糖的合成及其对血管生成的调节作用研究进展 被引量：2

16

作者 邵萌 刘纯慧 《药物生物技术》 CAS 2018年第3期263-267,共5页

肝素作为抗凝药物应用于临床已达80年,至今发挥着无可替代的重要作用。另一方面,肝素及其衍生物显著的抗肿瘤作用亦受到越来越多的关注和重视,其对血管生成的抑制作用被认为是主要机制之一,但微观结构的高度不均一性是研究肝素影响血管... 肝素作为抗凝药物应用于临床已达80年,至今发挥着无可替代的重要作用。另一方面,肝素及其衍生物显著的抗肿瘤作用亦受到越来越多的关注和重视,其对血管生成的抑制作用被认为是主要机制之一,但微观结构的高度不均一性是研究肝素影响血管生成结构基础不得不面对的一个巨大挑战。近年涌现出的新的寡糖合成策略使制备结构确定且多样化的肝素寡糖成为可能。该文简要总结了目前已经发展的肝素寡糖合成的策略,以及肝素与血管生成相关因子相互作用的结构基础,以期为发现靶向血管生成的肝素类肿瘤治疗药物提供有价值的借鉴。 展开更多

关键词 肝素 寡糖合成 血管生成 相互作用 结构单元 抗肿瘤作用

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硫矿硫化叶菌MTSase和MTHase基因的克隆与表达 被引量：5

17

作者 陈晓斌 林建平 +1 位作者 金志华 岑沛霖 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期54-58,共5页

从嗜热硫矿硫化叶菌(Sulfolobussolfataricus)ATCC35092的基因组中用PCR方法扩增得到编码MTSase和MTSase的基因,分别将其插入原核表达载体pTrc99a中,并转入大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达。MTSase和MTHase酶活产率达到了31·3U/g(w... 从嗜热硫矿硫化叶菌(Sulfolobussolfataricus)ATCC35092的基因组中用PCR方法扩增得到编码MTSase和MTSase的基因,分别将其插入原核表达载体pTrc99a中,并转入大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达。MTSase和MTHase酶活产率达到了31·3U/g(wetcell)和403U/g(wetcell)。在75℃,pH5·0条件下,两酶联合作用转化淀粉生产海藻糖,当淀粉浓度为15%,DE值为10时,海藻糖转化率最高为53·6%。 展开更多

关键词 麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase) 麦芽寡糖基海藻糖海藻糖水解酶(MTHase) 海藻糖 淀粉

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3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸寡糖的合成研究进展 被引量：2

18

作者 庄丽琴 邓妤 +2 位作者 曾铮 楼琦欣 杨友 《药学进展》 CAS 2020年第7期521-534,共14页

3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸是一种非哺乳动物来源的高碳糖,普遍存在于细菌的脂多糖和荚膜多糖中,被认为是研发抗菌疫苗和诊断工具的潜在靶标。按照3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸给体的类型,综述了3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸糖苷化反应的最新进... 3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸是一种非哺乳动物来源的高碳糖,普遍存在于细菌的脂多糖和荚膜多糖中,被认为是研发抗菌疫苗和诊断工具的潜在靶标。按照3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸给体的类型,综述了3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸糖苷化反应的最新进展,着重介绍了这些糖苷化方法在一些代表性的复杂3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸寡糖合成中的应用。 展开更多

关键词 3-脱氧-D-甘露-2-辛酮糖酸 高碳糖 糖基化 寡糖合成 糖类疫苗

原文传递

重组Athrobacter ramosus S34MTSase和MTHase的酶学性质及其制备海藻糖的应用条件优化 被引量：6

19

作者 王魁 宿玲恰 +1 位作者 吴敬 陈晟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1-6,共6页

以淀粉为底物,通过麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltosyltrehalose synthase,MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltosyltrehalose hydrolase,MTHase)的共同作用生产海藻糖是一种经济高效的方法。对Arthrobacter ramosus S34来源并分别在E.c... 以淀粉为底物,通过麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltosyltrehalose synthase,MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(maltosyltrehalose hydrolase,MTHase)的共同作用生产海藻糖是一种经济高效的方法。对Arthrobacter ramosus S34来源并分别在E.coli BL21(DE3)中表达的MTSase和MTHase的酶学性质进行研究,发现MTSase的最适温度为45℃,最适pH为7.0,MTHase的最适温度为55℃,最适pH为6.0。随后用2种酶共同作用生产海藻糖,优化反应条件,考查反应温度、初始pH、底物DE值、加酶量以及底物浓度等因素对酶转化过程中海藻糖产率的影响。最佳酶转化条件为反应温度45℃、初始pH5.5,底物DE值8.5,加酶量分别为MTSase最小加量15.75 U/g淀粉,MTHase最小加量7.5 U/g淀粉。 展开更多

关键词 海藻糖 麦芽寡糖基海藻糖合成酶(maltosyltrehalose SYNTHASE MTSase) 麦芽寡糖基海藻糖水解酶(mal-tosyltrehalose HYDROLASE MTHase) 酶学性质 酶转化

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MTSase和MTHase在Brevibacillus brevis中的克隆表达及应用研究 被引量：3

20

作者 吴世雄 宿玲恰 +2 位作者 姚锴琳 吴敬 吴丹 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期838-844,共7页

为实现将来源于嗜酸热硫化叶菌(Sulfolobus acidocaldarius)ATCC 33909的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)在短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)中的重组表达,分别以重组质粒pET-24a(+)-treY和pET-24a(... 为实现将来源于嗜酸热硫化叶菌(Sulfolobus acidocaldarius)ATCC 33909的麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)在短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)中的重组表达,分别以重组质粒pET-24a(+)-treY和pET-24a(+)-treZ为模板PCR扩增得到MTSase和MTHase基因片段,通过与表达载体pSVN连接得到重组质粒,电转化表达宿主Brevibacillus brevis,成功构建重组菌Brevibacillus brevis/pSVN-treY和Brevibacillus brevis/p SVN-treZ。重组菌在TM培养基中发酵48 h,胞内酶活力分别达到MTSase 630.0 U/g(wet cell)、MTHase 170.0 U/g(wet cell)。对重组MTSase和MTHase进行酶转化实验,结果表明,当以质量浓度为100 g/L马铃薯淀粉为底物,酶转化温度为60℃,pH为5.5,加酶量为MTSase 80 U/g淀粉、MTHase 20 U/g淀粉,普鲁兰酶5 U/g淀粉和环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)15 U/g淀粉,反应48 h,海藻糖转化率达到80.2%。 展开更多

关键词 麦芽寡糖基海藻糖合成酶 麦芽寡糖基海藻糖水解酶 短短芽孢杆菌 酶活力 海藻糖

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