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基于实时荧光环介导等温扩增快速检测鸡肉中的大肠杆菌O157:H 被引量：15
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作者 赵远洋 王瑾 +2 位作者 林丽萍 郜彦彦 吴国平 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第3期281-288,共8页
以大肠杆菌O157:H7的VT2基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立鸡肉中大肠杆菌O157:H7实时荧光定量环介导等温扩增(Rti-LAMP)检测方法。纯培养大肠杆菌O157:H7检测灵敏度达3.5 CFU/反应,需时45 min。模拟大肠杆... 以大肠杆菌O157:H7的VT2基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立鸡肉中大肠杆菌O157:H7实时荧光定量环介导等温扩增(Rti-LAMP)检测方法。纯培养大肠杆菌O157:H7检测灵敏度达3.5 CFU/反应,需时45 min。模拟大肠杆菌O157:H7污染鸡肉样品,经37℃增菌4 h,用Whirl-pak无菌袋过滤离心得沉淀,提取样品DNA模板用于Rti-LAMP反应,检测大肠杆菌O157:H7灵敏度达140 CFU/g,整个检测流程约7 h。采用蒙脱石封闭的活性炭前处理污染鸡肉样品,不经增菌过程,结果表明:该Rti-LAMP检测方法灵敏度达12 CFU/g,整个检测耗时约4.5 h。市购鸡肉样品51份,以大肠杆菌国标检测法为对照,研究基于Rti-LAMP联合增菌或封闭活性炭预处理而不经增菌的两种方法,对比检测临床鸡肉样品大肠杆菌O157:H7污染率。结果:国标法和增菌的Rti-LAMP两种方法均检测到同一鸡肉样品为大肠杆菌O157:H7阳性,经封闭活性炭预处理而未经增菌的Rti-LAMP则检测到8份鸡肉样品大肠杆菌O157:H7阳性。研究表明,封闭活性炭预处理的Rti-LAMP检测方法较国标法更灵敏、快速、简便、特异地检测鸡肉中大肠杆菌O157:H7污染。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 鸡肉 实时环介导等温扩增 增菌 封闭的活性炭
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牛奶中活沙门氏菌BCAC-EMA-Rti-LAMP快速检测方法的研究 被引量：3
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作者 张天添 陈鹄 +3 位作者 吴国平 舒梅 林丽萍 钟婵 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1192-1199,共8页
研究以沙门氏菌的invA基因序列设计特异性引物,结合蒙脱石封闭的活性炭(BCAC)吸附、叠氮溴化乙锭(EMA)前处理牛奶样品,建立了一种基于实时荧光环介导等温扩增法(Rti-LAMP)非预增菌快速检测牛奶中低浓度活沙门氏菌的方法。以每份25 mL牛... 研究以沙门氏菌的invA基因序列设计特异性引物,结合蒙脱石封闭的活性炭(BCAC)吸附、叠氮溴化乙锭(EMA)前处理牛奶样品,建立了一种基于实时荧光环介导等温扩增法(Rti-LAMP)非预增菌快速检测牛奶中低浓度活沙门氏菌的方法。以每份25 mL牛奶样品,人工模拟不同浓度沙门氏菌污染,用4.0 g蒙脱石封闭的活性炭吸附处理样品,然后对回收精制的细菌样品用4.0μg/mL EMA终浓度作用处理,提取细菌样品DNA用于RtiLAMP扩增检测,该方法检测灵敏度为1×10^1CFU/mL活沙门氏菌,整个检测过程约5 h。以沙门氏菌国标检测法为参照,采用BCAC-EMA-Rti-LAMP检测生鲜牛奶样品27份,结果显示:2种方法均检测到同一份沙门氏菌阳性牛奶样品,而BCAC-EMA-Rti-LAMP另检测到3份牛奶样品沙门氏菌阳性。研究表明,建立的BCAC-EMARti-LAMP检测方法较国标检测法更灵敏、快速,可用于牛奶沙门氏菌污染的快速检测。 展开更多
关键词 牛奶 沙门氏菌 实时荧光环介导等温扩增法 蒙脱石封闭的活性炭 叠氮溴化乙锭
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BCAC-EMA-Rti-LAMP非预增菌快速检测鱼肉污染活的副溶血弧菌研究
3
作者 杨珺 陈鹄 +3 位作者 吴国平 舒梅 李盛艳 钟婵 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1042-1049,共8页
【目的】随着人民物质生活水平的不断提高,对食品质量要求也愈来愈高,食品安全现如今已经成为影响人类生命健康财产安全的重大公共卫生问题。食源性致病菌是引起食品安全中毒事件的主要原因,而副溶血弧菌主要污染海产品从而引起急性肠... 【目的】随着人民物质生活水平的不断提高,对食品质量要求也愈来愈高,食品安全现如今已经成为影响人类生命健康财产安全的重大公共卫生问题。食源性致病菌是引起食品安全中毒事件的主要原因,而副溶血弧菌主要污染海产品从而引起急性肠胃炎。因此,快速有效地检测筛查污染的海产品,是有效防控副溶血弧菌食源性疾病暴发的必要条件。【方法】研究以副溶血弧菌特异性tlh基因设计合成引物,以Midori Green为核酸荧光染料,构建了一种副溶血弧菌实时荧光环介导等温扩增(Rti-LAMP)检测技术,并联合蒙脱石封闭的活性炭(BCAC)、叠氮溴化乙锭(EMA)对样品前处理,建立了一种非预增菌快速检测鱼肉污染活的副溶血弧菌方法。【结果】Rti-LAMP检测纯培养副溶血弧菌灵敏度达1 CFU/反应,1 h以内完成。模拟污染1 g鱼肉样品,经4 g BCAC吸附和6μg/mL EMA终浓度处理细菌样品,提取细菌DNA用于Rti-LAMP扩增反应,最低检出限为6 CFU/g活的副溶血弧菌,整个检测过程需约5 h。对市售33份新鲜海鱼样品检测,BCAC-EMARti-LAMP检测出3份阳性样品,BCAC-Rti-LAMP为6份阳性样品,而相应国标检测法为2份阳性样品。【结论】研究表明,BCAC-EMA-Rti-LAMP可以有效检测区分样品中活的副溶血弧菌污染,较国标检测法更快速、灵敏,有望作为鱼肉副溶血弧菌污染的一种快速筛查检测方法。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 鱼肉 实时荧光环介导等温扩增 蒙脱石封闭的活性炭 叠氮溴化乙锭
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