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甲氧苄啶纳米抗体噬菌体展示文库的构建及初步筛选
1
作者 刘翔宇 尹永康 +4 位作者 张红 宋茜 王玲 张启迪 梁晓 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5074-5085,共12页
【目的】构建甲氧苄啶(trimethoprim,TMP)纳米抗体(nanobody,Nb)噬菌体展示文库,制备TMP高亲和力纳米抗体,为TMP免疫分析方法的建立提供新型抗体材料。【方法】通过活性酯酶法将TMP半抗原Hapten B与牛血清白蛋白(BSA)、钥孔血蓝蛋白(KLH... 【目的】构建甲氧苄啶(trimethoprim,TMP)纳米抗体(nanobody,Nb)噬菌体展示文库,制备TMP高亲和力纳米抗体,为TMP免疫分析方法的建立提供新型抗体材料。【方法】通过活性酯酶法将TMP半抗原Hapten B与牛血清白蛋白(BSA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联制备2种免疫原,Hapten A和Hapten B与卵清白蛋白(OVA)偶联制备2种包被原。采用磺胺增效剂类药物单克隆抗体5C4,通过间接ELISA方法验证免疫原和包被原偶联效果。将免疫原与弗氏佐剂混合,先后对羊驼进行基础免疫和加强免疫,监测每次免疫后羊驼抗血清效价及对TMP的亲和力,选取效价及TMP亲和力最高的外周血作为纳米抗体基因来源,构建噬菌体展示文库。分离羊驼外周血总淋巴细胞,扩增重链抗体可变区纳米抗体基因(VHH),插入噬菌粒,电击转化大肠杆菌XL1-Blue感受态细胞构建初始噬菌体纳米抗体展示文库。经辅助噬菌体救援,采用同源包被原浓度梯度递减包被、酸洗脱、TMP浓度梯度递减洗脱筛选策略筛选TMP高亲和力噬菌体并测序,原核表达纳米抗体,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纳米抗体融合蛋白。【结果】间接ELISA检测结果显示,2种免疫原与2种包被原在稀释18000倍时D 450 nm值仍高于1.25。免疫原Hapten B-BSA 5次免疫后羊驼抗血清效价为1∶88000,对TMP的半数抑制浓度(IC 50)为12.21μg/L,但Hapten B-KLH 4次免疫后羊驼抗血清效价为1∶11000,对TMP的IC 50为30.56μg/L。以Hapten B-BSA五免后羊驼外周血为纳米抗体基因来源构建噬菌体展示文库,初始库容量为6.08×10^(7) CFU/mL,目的片段插入率为96%,噬菌体展示文库多样性良好。经4轮筛选后,获得3株TMP高亲和力噬菌体,测序分析后获得1株TMP高亲和力纳米抗体及序列。SDS-PAGE和Western blotting鉴定融合蛋白大小约为17 ku,蛋白含量80%以上。【结论】本研究成功构建TMP纳米抗体噬菌体展示文库,获得1株TMP高亲和力纳米抗体。研究结果为磺胺增效剂类药物纳米抗体的制备提供了理论依据和技术支持,为兽药等小分子新型识别材料的制备提供了新的思路。 展开更多
关键词 甲氧苄啶 纳米抗体 噬菌体展示文库
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微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库的构建 被引量：6
2
作者 姚龙泉 尹继刚 +1 位作者 张西臣 李建华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期26-28,42,共4页
目的为筛选微小隐孢子虫保护性抗原基因,构建了微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库。方法用Trizol试剂提取微小隐孢子虫总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,用EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,使形... 目的为筛选微小隐孢子虫保护性抗原基因,构建了微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库。方法用Trizol试剂提取微小隐孢子虫总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,用EcoRⅠ和HindⅢ消化接头,使形成两端分别带有EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端的双链cDNA。经Mini Column纯化,收集400bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示文库。结果经测定,库容量为1.2×107pfu/mL,重组率为96.7%,扩增后文库滴度为2.4×1010pfu/mL。对随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,92%的插入片段大于400bp。结论成功构建了微小隐孢子虫T7噬菌体展示文库。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 T7噬菌体展示文库
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新孢子虫cDNAT7噬菌体展示文库的构建及筛选 被引量：3
3
作者 王铭 高洋 +3 位作者 程子英 郑君 贾洪林 宋铭忻 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期277-280,共4页
为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白。所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3×1010pfu/mL。分别... 为筛选犬新孢子虫相关抗原,本研究利用T7噬菌体展示技术构建犬新孢子虫cDNA文库,并利用阳性血清筛选新型犬新孢子虫抗原蛋白。所构建的新孢子虫cDNA文库的原始文库重组克隆数为6×106pfu,扩增后文库滴度为3×1010pfu/mL。分别提取犬新孢子虫免疫小鼠血清和感染小鼠血清中的IgG,并利用纯化的IgG对构建的新孢子虫cDNA文库进行筛选。经过3轮筛选,共鉴定出14个不同的犬新孢子虫基因插入片段。经过分析,有7个基因编码的是功能未知蛋白,其它为蛋白质合成相关蛋白、核苷酸代谢相关蛋白、核糖体蛋白、微线体蛋白、棒状体蛋白和致密颗粒蛋白。对这些蛋白的进一步研究将有助于开发新孢子虫病的诊断试剂和疫苗。 展开更多
关键词 新孢子虫病 T7噬菌体展示文库 抗原候选基因
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家蚕中肠cDNA T7噬菌体展示文库的构建和免疫相关基因的淘选 被引量：3
4
作者 胡翠美 王菲 +1 位作者 宋亮 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期642-649,共8页
中肠是昆虫重要的免疫防御器官之一。为探究家蚕中肠的分子免疫机制,尤其是针对不同病原体的模式识别分子或结合蛋白,以家蚕5龄第3天幼虫中肠为材料,构建家蚕中肠cDNA T7噬菌体展示文库,并分别以几丁质和脂多糖为配体,通过不同方法进行... 中肠是昆虫重要的免疫防御器官之一。为探究家蚕中肠的分子免疫机制,尤其是针对不同病原体的模式识别分子或结合蛋白,以家蚕5龄第3天幼虫中肠为材料,构建家蚕中肠cDNA T7噬菌体展示文库,并分别以几丁质和脂多糖为配体,通过不同方法进行文库的生物淘选。结果共获得10个基因片段,其中在以脂多糖为配体的淘选中获得了β-1,3葡聚糖识别蛋白4,该分子是已知的模式识别受体。另外还获得了多个免疫相关候选基因,如分别编码几丁质结合蛋白、翻译控制的肿瘤蛋白、氨肽酶N、脂肪酰辅酶A结合蛋白等的几个基因。研究结果为深入开展家蚕中肠免疫功能的研究提供了重要线索。 展开更多
关键词 家蚕 中肠 T7噬菌体展示文库 淘选 模式识别分子
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流式细胞分选技术在微生物表面展示文库筛选中的应用进展 被引量：8
5
作者 辛忠涛 薛沿宁 柳川 《微生物学免疫学进展》 2003年第3期62-66,共5页
流式细胞分选技术具有测量速度快、统计学精度高、可在分析的同时把具有指定特征的细胞分选出来等特点 ,已广泛应用到微生物 (细菌、酵母、噬菌体和杆状病毒等 )表面展示文库的筛选。筛选配基的类型涵盖抗原模拟表位、特异性单链抗体或... 流式细胞分选技术具有测量速度快、统计学精度高、可在分析的同时把具有指定特征的细胞分选出来等特点 ,已广泛应用到微生物 (细菌、酵母、噬菌体和杆状病毒等 )表面展示文库的筛选。筛选配基的类型涵盖抗原模拟表位、特异性单链抗体或单链T细胞受体、酶变异体以及蛋白酶抑制剂等。 展开更多
关键词 流式细胞分选 微生物 表面展示文库
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噬菌体展示文库的筛选技术 被引量：4
6
作者 李丽芳 张映 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第4期36-38,共3页
噬菌体展示技术(PhageDisplayTechniques,PDT)是一种用于筛选和改造功能性多肽的生物技术。该技术作为筛选与多种靶分子(如抗体、酶类、细胞表面受体等)具有特异性亲和力或活性的肽的一个有效方法,自问世以来,已取得了很大的发展,并被... 噬菌体展示技术(PhageDisplayTechniques,PDT)是一种用于筛选和改造功能性多肽的生物技术。该技术作为筛选与多种靶分子(如抗体、酶类、细胞表面受体等)具有特异性亲和力或活性的肽的一个有效方法,自问世以来,已取得了很大的发展,并被广泛地应用于基因治疗、基因疫苗研究、抗原表位研究、药物设计、研究细胞信号传导等领域[1]。但该技术在两方面仍需进一步完善:(1)寻求更为有效的表达载体;(2)进一步完善筛选方法。 展开更多
关键词 噬菌体展示文库 筛选技术 肽库 抗体库 生物技术
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噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽 被引量：1
7
作者 苏林 孔燕 +2 位作者 刘长征 杨克恭 陈松森 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期351-356,共6页
目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,... 目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。 展开更多
关键词 噬菌体表面展示文库 人干细胞因子 模拟肽 筛选 酶联免疫吸附测定法
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PK15细胞cDNA T7噬菌体展示文库的构建及鉴定 被引量：1
8
作者 王国栋 邓小芸 刘书梅 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1372-1376,共5页
【目的】构建PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库，为研究猪源病毒与宿主细胞的相互作用奠定基础。【方法】分离纯化PK15细胞mRNA，先后合成第一链和第二链cDNA，经平末端修饰后，定向导入EcoR Ⅰ和HindⅢ接头，再由EcoRⅠ和HindⅢ双酶切消... 【目的】构建PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库，为研究猪源病毒与宿主细胞的相互作用奠定基础。【方法】分离纯化PK15细胞mRNA，先后合成第一链和第二链cDNA，经平末端修饰后，定向导入EcoR Ⅰ和HindⅢ接头，再由EcoRⅠ和HindⅢ双酶切消化，与噬菌体载体臂相连，然后用噬菌体包装抽提物进行体外包装，形成初级cDNAT7噬菌体展示文库，并通过滴度测定和PCR鉴定文库质量。【结果】经噬斑试验鉴定，初级文库滴度为2．0×10^5PFU／mL，扩增后滴度达6．0×10^10PFU／mL。PCR鉴定结果显示，文库的重组率为95．83％，且插入片段主要分布于500-2000bp，其中500～750bp的占21．73％，750～100bp的占21．73％，1000-2000bp的占39．13％。随机挑选20个克隆进行测序，发现均为猪源序列。【结论】构建的PK15细胞cDNAT7噬菌体展示文库具备较高库容量和重组率，质量良好，符合后续文库筛选的要求，可用于研究猪源病毒蛋白与PK15细胞的相互作用。 展开更多
关键词 PK15细胞 CDNA T7噬菌体展示文库 构建 鉴定
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T7噬菌体展示文库筛选肺癌早期检测分子标志群 被引量：2
9
作者 陈贻玲 马传亮 +1 位作者 赵晋丰 邓松华 《实用癌症杂志》 2009年第3期227-230,共4页
目的从肺癌T7噬菌体展示文库筛选出能用于肺癌早期检测的分子标志群。方法亲和筛选肺癌T7噬菌体展示文库,对纯化后的富集肺癌相关肽的文库进一步行两轮ELISA检测,PCR扩增阳性噬菌体插入片段,测序后经过NCBI上的BLAST序列比对。结果筛选... 目的从肺癌T7噬菌体展示文库筛选出能用于肺癌早期检测的分子标志群。方法亲和筛选肺癌T7噬菌体展示文库,对纯化后的富集肺癌相关肽的文库进一步行两轮ELISA检测,PCR扩增阳性噬菌体插入片段,测序后经过NCBI上的BLAST序列比对。结果筛选出13个有意义噬菌体,测序结果显示1个为未知功能的新基因,其余的均已确定与癌症相关;且13个基因中包含有三组相同的基因。结论从T7噬菌体构建的肺癌cDNA文库中筛选出的一组阳性噬菌体表达的抗原,可能是潜在的肺癌诊断分子标志群。 展开更多
关键词 T7噬菌体展示文库 肺癌 分子标志群
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噬菌体展示文库技术及在疫苗研制中的应用现状 被引量：2
10
作者 吕雪峰 任锐 +2 位作者 穆国东 苏双 许志林 《吉林畜牧兽医》 2010年第1期14-16,共3页
噬菌体展示文库技术已成为高效表达筛选功能性蛋白的新一代技术,广泛应用于药物筛选及多肽疫苗研制等研究领域。现对噬菌体展示技术及其在疫苗研制中的研究现状作简要的综述。
关键词 噬菌体 噬菌体展示文库 疫苗 应用
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抗克伦特罗单链抗体噬菌体展示文库的构建初步筛选及鉴定 被引量：1
11
作者 王弘 潘科 +2 位作者 雷红涛 杨金易 孙远明 《农产品加工（下）》 2005年第9期124-127,共4页
构建抗克伦特罗(CBL)单链抗体噬菌体展示文库(scFv phage displaylibraries),从中筛选CBL特异性噬菌体单链抗体(phage scFv).提取经CBL免疫的小鼠的脾脏总RNA,RT-PCR扩增全套抗体轻链可变区(VL)及重链可变区(VH)基因,重叠延伸法将VL、V... 构建抗克伦特罗(CBL)单链抗体噬菌体展示文库(scFv phage displaylibraries),从中筛选CBL特异性噬菌体单链抗体(phage scFv).提取经CBL免疫的小鼠的脾脏总RNA,RT-PCR扩增全套抗体轻链可变区(VL)及重链可变区(VH)基因,重叠延伸法将VL、VH片段拼接为单链抗体(scFv)基因片段.将scFv克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化感受态大肠杆菌TG1,用辅助噬菌体M13KO7进行超感染,构建噬菌体单链抗体库.对抗体库进行亲合富集后,ELISA法筛选阳性克隆.扩增出抗CBL的VL、VH基因片段并拼接为全长的scFv,抗体库库容约为1.6×104,经4轮"吸附-洗脱-扩增"的富集,ELISA筛选到6个具有CBL结合活性的phage-scFv.成功构建抗CBL单链抗体噬菌体展示库,并初步筛选到具有CBL结合活性的噬菌体scFv,特异性好,为进一步大量表达CBL单链抗体奠定了基础. 展开更多
关键词 克伦特罗 单链抗体 噬菌体 展示文库
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人源性胃癌抗体IgG1Fab噬菌体表面展示文库的构建
12
作者 韩者艺 何凤田 +6 位作者 陈宝军 乔泰东 王海燕 韩英 郑建勇 吴开春 樊代明 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第12期1061-1063,共3页
目的　利用噬菌体表面展示技术 ,构建人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .方法　从胃癌手术患者胃一级站淋巴结中提取总 RNA,反转录成 c DNA后 ,用PCR扩增人 Ig G1Fd段及κ轻链 ,并克隆至噬菌粒载体p COMB3中 ,转化宿主菌株 XL... 目的　利用噬菌体表面展示技术 ,构建人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .方法　从胃癌手术患者胃一级站淋巴结中提取总 RNA,反转录成 c DNA后 ,用PCR扩增人 Ig G1Fd段及κ轻链 ,并克隆至噬菌粒载体p COMB3中 ,转化宿主菌株 XL 1- Blue,以辅助噬菌体M13K0 7超感染噬菌粒文库 ,构建成人源性胃癌抗体 Ig G1Fab噬菌体表面展示文库 .结果　得到一个含克隆数为 1.2× 10 6 ,实际滴度约为 2 .5 6× 10 1 5 pfu· L- 1的 Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库 .结论　Ig G1Fab片段的噬菌体表面展示文库的成功构建 ,为下一步利用亲和富集筛选技术 。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤 噬菌体 胃癌 IgG1Fab 展示文库
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利用PCR扩增及基因合成构建Adnectin半随机核糖体展示文库
13
作者 郭永红 问娇 王俊红 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第4期4-7,共5页
目的构建Adnectin半随机的核糖体(mRNA)展示文库。方法分析Adnectin核糖体展示文库结构序列的编码氨基酸序列,利用无意突变建立酶切位点,使用PCR扩增和基因合成两种方法相结合,构建Adnectin半随机核糖体展示文库,通过限制性内切酶及DNA... 目的构建Adnectin半随机的核糖体(mRNA)展示文库。方法分析Adnectin核糖体展示文库结构序列的编码氨基酸序列,利用无意突变建立酶切位点,使用PCR扩增和基因合成两种方法相结合,构建Adnectin半随机核糖体展示文库,通过限制性内切酶及DNA测序证实序列正确性,对文库转化菌的滴定和插入失活蓝白菌斑筛查和计数测定计算文库的库容。结果经测序证实文库结构的正确性,文库的库容为1.54×1013/m L。结论成功构建Adnectin半随机的核糖体展示文库,方法简单,库容量大,该文库的建成为亲和各种相关蛋白的Adnectin结合序列奠定基础。 展开更多
关键词 Adnectin PCR扩增 基因合成 核糖体展示文库
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犊牛口腔黏膜上皮细胞T7噬菌体展示文库的构建
14
作者 韩岩岩 宋德光 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第5期49-52,共4页
试验旨在筛选水泡性口炎病毒的受体,构建犊牛口腔黏膜上皮细胞T7噬菌体展示文库。通过用Trizol试剂提取犊牛口腔黏膜上皮细胞总RNA,然后分离和纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,然后用EcoRⅠ和H... 试验旨在筛选水泡性口炎病毒的受体,构建犊牛口腔黏膜上皮细胞T7噬菌体展示文库。通过用Trizol试剂提取犊牛口腔黏膜上皮细胞总RNA,然后分离和纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoRⅠ/HindⅢ接头,然后用EcoRⅠ和HindⅢ酶消化双链cDNA末端接头,使双链cDNA 2端含有EcoRⅠ和HindⅢ黏性末端。所有处理后的双链cDNA,经Mini Column纯化,收集400bp以上的双链cDNA片段,将其连接带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示文库。经测定未扩增文库的滴度为1.3×107PFU/mL,重组率为95.8%,扩增后文库滴度为2.6×1010 PFU/mL。随机挑取100个噬菌斑进行PCR鉴定,95%的插入片段大于400bp。结果表明成功构建了犊牛口腔黏膜上皮细胞T7噬菌体展示文库。 展开更多
关键词 口腔黏膜上皮细胞 T7噬菌体展示文库 水泡性口炎病毒
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利用核糖体展示文库初步筛选与伤寒杆菌Ⅳ型纤毛结合的细胞受体 被引量：2
15
作者 吴红艳 章晓联 潘勤 《生物技术通讯》 CAS 2004年第4期319-322,共4页
伤寒杆菌病原毒力岛上的Ⅳ型纤毛与伤寒杆菌的致病性密切相关,但对Ⅳ型纤毛在人巨噬细胞、树突状细胞上的受体及其序列或结合的关键部位还一无所知。本研究拟用核糖体展示文库筛选伤寒杆菌结合的细胞受体。体外人工合成引物和含36个随... 伤寒杆菌病原毒力岛上的Ⅳ型纤毛与伤寒杆菌的致病性密切相关,但对Ⅳ型纤毛在人巨噬细胞、树突状细胞上的受体及其序列或结合的关键部位还一无所知。本研究拟用核糖体展示文库筛选伤寒杆菌结合的细胞受体。体外人工合成引物和含36个随机序列的寡核苷酸,通过两轮PCR构建随机DNA文库,随后在体外进行偶联的转录和翻译,得到含随机12肽的核糖体文库。利用含随机12肽的核糖体文库与体外重组表达的Ⅳ型纤毛结构蛋白(PilS蛋白)进行了初步筛选,为筛选到与伤寒杆菌毒力岛上Ⅳ型纤毛结构蛋白结合的细胞受体奠定了基础。 展开更多
关键词 核糖体展示文库 伤寒杆菌 Ⅳ型纤毛 亲和筛选 致病性
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新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库多样性的生物信息学分析
16
作者 冯亚宁 姜志强 +1 位作者 马晓玲 李江伟 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1533-1538,共6页
【目的】骆驼免疫系统中只存在重链抗体,其可变区VHH片段是最小的天然抗体片段。通过对双峰驼VHH基因进行序列分析,了解双峰驼VHH基因特征,分析VHH文库多样性组成。【方法】采用新疆双峰驼VHH特异引物扩增全部抗体基因片段,连接到M13噬... 【目的】骆驼免疫系统中只存在重链抗体,其可变区VHH片段是最小的天然抗体片段。通过对双峰驼VHH基因进行序列分析,了解双峰驼VHH基因特征,分析VHH文库多样性组成。【方法】采用新疆双峰驼VHH特异引物扩增全部抗体基因片段,连接到M13噬菌粒载体上,与p III蛋白融合表达在噬菌体表面,构建噬菌体展示文库。基因测序和菌落PCR方法,分析文库大小和阳性克隆插入率。NCBI-Ig GBLAST工具对抗体序列进行IMGT编号命名,Web Logo工具分析抗体保守序列分布频率,MEGA6软件对VHH序列进行同源性比对和系统进化树构建。【结果】利用免疫的新疆双峰驼淋巴细胞,构建了库容量为1.4×109的VHH抗体噬菌体展示文库。对91个随机挑选的文库TG1单菌落进行PCR。结果表明该文库VHH阳性插入率为97%,DNA测序表明文库多样性为97.8%。对91个克隆DNA测序结果进一步分析表明,这些基因中除2个为常规VH抗体外,其余均为重链VHH抗体。根据抗体序列中的特征氨基酸分布,将91个抗体序列划分为7个亚群。【结论】构建的新疆双峰驼VHH文库多样性较好,生物信息学分析揭示出文库中多样性克隆的分布和特征,有助于新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库的进一步构建。 展开更多
关键词 双峰驼 单域抗体 噬菌体展示文库 VHH序列 生物信息学分析
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鸡法氏囊三肽囊素阳性细胞cDNA酵母展示文库的筛选
17
作者 陶明华 廖凯 +2 位作者 张国强 谌南辉 胡松年 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期326-331,共6页
在禽类和哺乳类中存在的三肽囊素(Bursin),对禽类和哺乳类淋巴细胞具有重要的免疫调节功能及生理学活性。牛骨髓和肝脏中含有三肽囊素(Bursin)序列的前囊素(pro Bursin)的分离使我们假设:在鸟类和哺乳类中存在的三肽囊素可能是由前囊素... 在禽类和哺乳类中存在的三肽囊素(Bursin),对禽类和哺乳类淋巴细胞具有重要的免疫调节功能及生理学活性。牛骨髓和肝脏中含有三肽囊素(Bursin)序列的前囊素(pro Bursin)的分离使我们假设:在鸟类和哺乳类中存在的三肽囊素可能是由前囊素酶解而来的。为了验证这种假设我们通过提取鸡法氏囊三肽囊素阳性细胞的mRNA、构建cDNA酵母展示文库、对酵母展示文库用流式细胞仪进行三轮抗三肽囊素单克隆抗体以及FITC标记山羊抗小鼠IgM单克隆抗体的分选,最后对第3次分选得到的酵母克隆随机挑20个进行测序。这20个克隆中并没有编码三肽囊素的核酸序列,因此我们推测:在鸡法氏囊内三肽囊素不是由其前体囊素的裂解而来,而可能是由一种类似微生物体内低分子量的多肽通过非核糖体途径有多肽合成聚合酶的聚合作用合成的,这需要进一步的试验验证。 展开更多
关键词 三肽囊素cDNA展示文库 流式细胞仪 分选
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凡纳滨对虾T7噬菌体cDNA展示文库的构建
18
作者 胡文燕 朱孟凯 +1 位作者 钟理 姚翠鸾 《集美大学学报（自然科学版）》 CAS 2017年第2期11-15,共5页
以来源于多种组织的mRNA为模板,构建了一个凡纳滨对虾混合组织的T7噬菌体c DNA展示文库。结果表明:噬菌体文库容量大,达9.3×10~7pfu;文库重组率高,为97%;大于250 bp的片段占70%以上;利用液体扩增法对文库进行扩增,扩增后文库的滴度... 以来源于多种组织的mRNA为模板,构建了一个凡纳滨对虾混合组织的T7噬菌体c DNA展示文库。结果表明:噬菌体文库容量大,达9.3×10~7pfu;文库重组率高,为97%;大于250 bp的片段占70%以上;利用液体扩增法对文库进行扩增,扩增后文库的滴度为2.1×10^(12)pfu/m L。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 T7噬菌体展示文库 文库容量 重组率
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构建金葡菌N315 T7噬菌体cDNA展示文库,探索金葡菌耐药性扩散机制
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《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期I0001-I0001,共1页
耐药性的产生与广泛传播一直以来都严重干扰着金葡菌的临床防治，使得近年来金葡菌感染逐步呈现发病率高、耐药性强、治疗困难、病死率高的态势。因此，能否有效的控制耐药性产生与传播成为影响金葡菌感染防治工作的关键。耐甲氧西林金... 耐药性的产生与广泛传播一直以来都严重干扰着金葡菌的临床防治，使得近年来金葡菌感染逐步呈现发病率高、耐药性强、治疗困难、病死率高的态势。因此，能否有效的控制耐药性产生与传播成为影响金葡菌感染防治工作的关键。耐甲氧西林金葡菌（MRSA）多重耐药性的获得与其染色体上携带的葡萄球菌盒式染色体元件（SCC）密切相关。 展开更多
关键词 多重耐药性 展示文库 CDNA 耐甲氧西林金葡菌 金葡菌感染 扩散 临床防治 感染防治
原文传递
弓形虫速殖子噬菌体展示文库的构建
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作者 王春苗 卢致民 王燕 《河北北方学院学报（自然科学版）》 2019年第12期1-4,共4页
目的构建弓形虫速殖子λ噬菌体展示文库,为后期免疫筛选做准备。方法通过Trizol试剂提取弓形虫RH株速殖子总RNA,再利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA。对cDNA进行纯化后,通过Sfi I酶切消化双链cDNA并切胶回收,与λTripIEx2载体的两... 目的构建弓形虫速殖子λ噬菌体展示文库,为后期免疫筛选做准备。方法通过Trizol试剂提取弓形虫RH株速殖子总RNA,再利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA。对cDNA进行纯化后,通过Sfi I酶切消化双链cDNA并切胶回收,与λTripIEx2载体的两臂连接,最后通过λ噬菌体包装蛋白进行体外包装,以构建λ噬菌体展示文库。对文库进行滴度测定,并进行重组率检测。结果RNA提取结果良好,未扩增文库滴度为8.0×10^6 pfu·mL^-1,文库重组率为95%。随机挑取50个噬菌斑进行PCR鉴定,插入片段分布在0.5~3 kb。结论成功构建了弓形虫速殖子λ噬菌体展示文库,为后期疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 弓形虫速殖子 疫苗 λ噬菌体展示文库
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