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siRNA沉默己糖激酶-2基因对MDA-MB231细胞放疗敏感性的影响 被引量：4
1
作者 张丹 徐慧琴 +3 位作者 汪会 余文静 薛杨央 赵学峰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第1期95-99,共5页
目的观察小干扰RNA(siRNA)沉默己糖激酶-2(HK2)对乳腺癌细胞MDA-MB231放疗敏感性的影响。方法实验分为3组:空白(Control)组、阴性对照(Negative)组和转染HK2 siRNA的实验(siRNA-HK2)组。将HK2 siRNA瞬时转染于MDA-MB231细胞,用Western b... 目的观察小干扰RNA(siRNA)沉默己糖激酶-2(HK2)对乳腺癌细胞MDA-MB231放疗敏感性的影响。方法实验分为3组:空白(Control)组、阴性对照(Negative)组和转染HK2 siRNA的实验(siRNA-HK2)组。将HK2 siRNA瞬时转染于MDA-MB231细胞,用Western blot和qRT-PCR分别检测转染前后HK2蛋白和mRNA表达;CCK-8实验观察不同剂量(0、2、4、6、8 Gy)X线照射下三组细胞增殖情况;流式细胞仪检测三组细胞在4 Gy照射下细胞凋亡率,观察siRNA干扰HK2对乳腺癌细胞MDA-MB231放疗敏感性的影响。结果 siRNA-HK2组HK2的蛋白和mRNA表达量均降低。三组细胞分别给予不同剂量的X线照射后,细胞存活率呈剂量依赖性递减的趋势,且siRNA-HK2组的存活率较Control组和Negative组明显下降(P<0.05)。照射后,siRNA-HK2组细胞凋亡率明显高于Control组和Negative组(P<0.01)。结论沉默乳腺癌细胞HK2基因可增加其对放疗的敏感性。 展开更多
关键词 己糖激酶-2 SIRNA 乳腺癌 放疗敏感性
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卵巢癌组织中miR-125B-5p通过调控己糖激酶-2降低肿瘤能量代谢和抑制肿瘤细胞增殖 被引量：10
2
作者 李莉 侯志敏 《癌症》 SCIE CAS 2021年第9期394-403,共10页
背景与目的细胞内能量代谢异常是肿瘤的十大特征之一,微小RNA(microRNA,miRNA)可能通过调节有氧糖酵解相关酶的表达来介导有氧糖酵解,从而调控肿瘤细胞代谢和增殖。本研究对卵巢癌患者肿瘤组织中miR-125B-5p和己糖激酶-2(hexokinase-2,H... 背景与目的细胞内能量代谢异常是肿瘤的十大特征之一,微小RNA(microRNA,miRNA)可能通过调节有氧糖酵解相关酶的表达来介导有氧糖酵解,从而调控肿瘤细胞代谢和增殖。本研究对卵巢癌患者肿瘤组织中miR-125B-5p和己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)的表达水平与肿瘤能量代谢和增殖的关系进行了初步研究。方法采用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qRCR)法检测了10例原发性卵巢癌患者的癌组织和配对的癌旁组织中HK2的mRNA和miR-125B-5p的表达水平。采用RT-qRCR法检测了人正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌细胞SKOV3中miR-125B-5p的表达水平。采用MTT法检测转染了miR-125B-5p模拟物(miR-125B-5p mimics)或模拟对照miRNA(miR-125B-5p NC)的SKVO3细胞在不同时间点的增殖情况。采用RT-qPCR法检测转染了miR-125B-5p mimics或miR-125B-5p NC的SKVO3细胞中HK2的mRNA表达水平。采用流式细胞术分析转染了miR-125B-5p mimics或miR-125B-5p NC的SKVO3细胞的凋亡情况。检测转染了miR-125B-5p mimics或miR-125B-5p NC的SKVO3细胞中葡萄糖、乳酸和ATP水平。结果与配对的癌旁组织相比,在卵巢癌组织中miR-125B-5p表达下调,HK2的mRNA表达上调(P<0.05)。与转染miR-125B-5p NC的SKVO3细胞相比,在miR-125B-5p mimics转染12、36和72 h后,过表达miR-125B-5p的SKVO3细胞的增殖率显著降低(P<0.05),细胞活力显著降低(P<0.05),细胞凋亡升高(P<0.05),HK2的mRNA表达下调(P<0.05),葡萄糖相对消耗量、乳酸相对生成量和ATP浓度降低(P<0.05)。结论miR-125B-5p通过负调控HK2降低卵巢癌细胞的糖酵解,从而抑制肿瘤细胞生长。 展开更多
关键词 卵巢癌 miR-125B-5p 己糖激酶-2 细胞增殖 能量代谢
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己糖激酶-2的表达对肝癌根治术后患者的预后意义
3
作者 刘伟 申昌军 +1 位作者 朱帅 杜江 《河北医药》 CAS 2019年第1期28-32,共5页
目的分析己糖激酶-2(HK-2)与肝癌的关系,评价该指标预测肝癌患者不良预后的临床价值。方法选取2013年1月至2014年12月普外科住院行肝癌根治性切除术的患者182例,采用Western blot检测肝癌组织中HK-2的表达情况。通过术后患者预后情况分... 目的分析己糖激酶-2(HK-2)与肝癌的关系,评价该指标预测肝癌患者不良预后的临床价值。方法选取2013年1月至2014年12月普外科住院行肝癌根治性切除术的患者182例,采用Western blot检测肝癌组织中HK-2的表达情况。通过术后患者预后情况分为预后良好组和预后不良组。采用Kaplan-Meier方法计算并绘制患者生存曲线,并采用单多因素COX回归分析HK-2表达量及临床病理因素与肝癌根治术后患者预后的关系。建立ROC曲线分别评价潜在指标对肝癌根治术后患者预后的预测能力。结果肝癌患者术后2年内癌症复发转移及死亡的发生率为44. 5%。镜下脉管癌栓(P=0. 003)、肿瘤分期(P=0. 026)、血清AFU(P=0. 036)、HK-2蛋白表达(P=0. 001)是影响肝癌根治性切除术后2年肿瘤复发转移的独立影响因素(P <0. 05)。HK-2检测对预测患者预后的敏感性为62. 5%,特异性为83. 2%。结论预后不良组患者肝癌组织中HK-2蛋白表达量较高,HK-2表达有可能作为预测肝癌根治术后患者预后情况的一项检测指标。 展开更多
关键词 己糖激酶-2 肝癌 预后
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人前列腺癌中己糖激酶-2基因对TH1/TH2细胞的影响
4
作者 李斌 陶陶 +3 位作者 沈德赟 葛庆宇 夏开国 肖峻 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第10期1530-1534,共5页
目的探讨在前列腺癌PC3细胞系中高表达的己糖激酶-2基因(HK2基因)对与PC3细胞系共培养体系里的辅助性T细胞1和辅助性T细胞2(TH1/TH2)的影响。方法通过shRNA构建慢病毒感染PC3细胞系产生HK2基因敲低的PC3细胞系的实验组细胞(sh-HK2),同... 目的探讨在前列腺癌PC3细胞系中高表达的己糖激酶-2基因(HK2基因)对与PC3细胞系共培养体系里的辅助性T细胞1和辅助性T细胞2(TH1/TH2)的影响。方法通过shRNA构建慢病毒感染PC3细胞系产生HK2基因敲低的PC3细胞系的实验组细胞(sh-HK2),同时使用无义序列构建慢病毒感染PC3细胞系获得阴性对照细胞(NC),qPCR与Western blot验证敲低结果。培养前列腺癌细胞(NC和sh-HK2)48 h后分离癌细胞获得上清液,提取健康人外周血单个核细胞(PBMCs)。TH1空白组:PBMCs在TH1诱导条件下使用1640培养基培养48 h;TH1实验组(TH1 sh-HK2组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过稳转株的上清液共培养48 h;TH1阴性对照组(TH1 NC组):PBMCs在TH1诱导条件下使用培养过阴性对照细胞的上清液共培养48 h。TH2空白组、TH2实验组(TH2 sh-HK2组)、TH2阴性对照组(TH2 NC组)诱导条件变更为TH2诱导条件,其他不变。48 h后分光光度仪检测各共培养体系中乳酸水平。然后提取各组中PBMCs使用植物血凝素-M(PHA-M)另外培养24 h,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测TH1诱导条件下各组中PBMCs的干扰素-γ(IFN-γ)和TH2诱导条件下各组PBMCs的白介素-4(IL-4)的分泌。结果qPCR与Western blot显示HK2基因敲低结果显著,在TH1诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IFN-γ升高,在TH2诱导条件下的实验组中PBMCs分泌IL-4降低。实验组与对照组相比乳酸含量均下降。结论HK2基因在前列腺癌PC3中的高表达使肿瘤周围环境乳酸浓度升高,并使周围共培养体系中IFN-γ水平降低,IL-4水平升高,由此导致细胞免疫功能下降,而使针对肿瘤无效的体液免疫增强,促进肿瘤进展。 展开更多
关键词 己糖激酶-2 前列腺癌 人外周血单个核细胞 TH1/TH2细胞 共培养 干扰素-Γ 白介素-4
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经直肠超声联合血清EPCA-2、hK2对前列腺癌的早期诊断价值研究
5
作者 张涛 宋新浩 +1 位作者 王小兵 陈争光 《成都医学院学报》 CAS 2024年第4期633-636,共4页
目的探究经直肠超声联合血清早期前列腺癌抗原-2(EPCA-2)、己糖激酶-2(hK2)对前列腺癌的早期诊断价值。方法选取2022年6月至2023年12月在郑州大学第一附属医院确诊的98例前列腺癌患者作为试验组,另选取同期在本院确诊的72例前列腺增生... 目的探究经直肠超声联合血清早期前列腺癌抗原-2(EPCA-2)、己糖激酶-2(hK2)对前列腺癌的早期诊断价值。方法选取2022年6月至2023年12月在郑州大学第一附属医院确诊的98例前列腺癌患者作为试验组,另选取同期在本院确诊的72例前列腺增生患者为对照组。比较两组患者血清EPCA-2、hK2水平;ROC曲线分析经直肠超声联合血清EPCA-2、hK2对前列腺癌的诊断价值。结果与对照组相比,试验组的血清EPCA-2、hK2水平均明显升高(P<0.05);血清EPCA-2、hK2水平对前列腺癌早期诊断的曲线下面积(AUC)分别为0.845、0.869;经直肠超声对前列腺癌早期诊断的AUC为0.836,三者联合诊断的AUC为0.870。结论前列腺癌患者血清EPCA-2、hK2水平均明显上调,经直肠超声联合血清EPCA-2、hK2对前列腺癌早期诊断的准确率明显高于血清EPCA-2、hK2单独诊断,具有更高的诊断效能。 展开更多
关键词 前列腺癌 经直肠超声 早期前列腺癌抗原-2 己糖激酶-2 早期诊断
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麝香酮抑制低氧下胃癌细胞中HIF-1α以及HK2、VEGF的表达
6
作者 庞一丹 刘雅 +4 位作者 陈思嫒 易毅 张荆雷 曾今 安娟 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2024年第1期18-24,共7页
目的探究麝香酮在低氧状态下对胃癌细胞中缺氧诱导因子1(HIF-1α)以及己糖激酶-2(HK2)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA和蛋白表达的影响。方法通过CEPIA数据库在线分析HIF-1α、HK2、VEGF在胃癌STAD(Stomach adenocarcinoma)与癌旁组织... 目的探究麝香酮在低氧状态下对胃癌细胞中缺氧诱导因子1(HIF-1α)以及己糖激酶-2(HK2)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA和蛋白表达的影响。方法通过CEPIA数据库在线分析HIF-1α、HK2、VEGF在胃癌STAD(Stomach adenocarcinoma)与癌旁组织中的表达情况。利用KM-plotter网站的Log-rank、Breslow检验分析基因表达与胃癌预后的关系。利用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测三种基因的mRNA表达情况。用蛋白质印迹法(Western Blot)分析胃癌HGC27细胞在低氧(由CoCl_(2)形成)时,麝香酮对HIF-1α、VECF、HK2 mRNA和蛋白表达的影响。结果HIF-1α和HK2在胃癌组织呈现高表达(P<0.01),预后评估提示VECF为胃癌风险基因(P<0.05),与胃癌患者预后不良相关。qRT-PCR结果显示,用麝香酮干预低氧状态下的HGC27细胞8h后,VECF的mRNA表达量下调,24h后,HIF-1α、HK2的mRNA表达量下调;WesternBlot结果显示,用麝香酮干预低氧状态下的HCC27细胞24h后,HIF-1α蛋白表达量降低(P<0.05)。结论麝香酮可能对低氧状态下的HIF-1α、HK2和VECF的mRNA和蛋白表达产生抑制作用. 展开更多
关键词 麝香酮 胃癌 低氧 缺氧诱导因子1 己糖激酶-2 血管内皮生长因子
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缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究 被引量：2
7
作者 段晨阳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期117-123,共7页
目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况... 目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel,VDAC)结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果:缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放(P<0.05)。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytochrome C,CytC)释放(P<0.05)。缺氧后HK2-Thr473磷酸化水平减低引起的HK2线粒体分离会导致mPTP结构破坏,通过HK2 T473D点突变恢复HK2活性后,HK2与线粒体结合情况及mPTP开放情况明显改善(P<0.05)。Drp1蛋白芯片结果发现缺氧后Drp1可以与LRRK2结合并封闭其活性位点,通过Drp1 T595A点突变破坏Drp1-LRRK2结合后,HK2活性及HK2线粒体分离情况明显改善(P<0.05),mPTP开放情况明显减少(P<0.05)。结论:缺氧后线粒体Drp1通过封闭激酶LRRK2活性位点导致HK2 Thr473磷酸化水平减低及其线粒体分离,最终诱导mPTP过度开放。 展开更多
关键词 缺氧 动力相关蛋白1 富含亮氨酸重复激酶2 己糖激酶-2 线粒体 线粒体膜通透性转换通道
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鹿骨粉对卵巢摘除大鼠心肌细胞HK-2和PDHc表达的影响
8
作者 王心雪 王权 +2 位作者 毛颖 孙连坤 康劲松 《中国妇幼保健》 CAS 2015年第30期5249-5252,5294,共5页
目的探讨鹿骨粉对卵巢摘除大鼠心肌组织中HK-2和PDHc表达和心肌结构的影响。方法对Wistar大鼠行双侧卵巢摘除术后,将大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、鹿骨粉不同剂量(SBP200、400及800 mg/kg)组。术后即刻给予鹿骨粉组大鼠... 目的探讨鹿骨粉对卵巢摘除大鼠心肌组织中HK-2和PDHc表达和心肌结构的影响。方法对Wistar大鼠行双侧卵巢摘除术后,将大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、鹿骨粉不同剂量(SBP200、400及800 mg/kg)组。术后即刻给予鹿骨粉组大鼠相应剂量的鹿骨粉,每天1次,连续给药4个月后,处死各组大鼠,取出心脏,HE染色观察心肌结构,免疫组织化学染色检测HK-2和PDHc的蛋白表达情况。结果与Model组比较,SBP各组心肌组织中HK-2和PDHc蛋白表达均成增多趋势,心肌细胞核大小适中,染色较淡,细胞排列整齐,形态正常。结论鹿骨粉能够促进卵巢摘除后心肌细胞中HK-2和PDHc蛋白表达增高,维持心肌结构完整,对心脏具有保护作用。 展开更多
关键词 鹿骨粉 去卵巢大鼠 己糖激酶-2 丙酮酸脱氢酶复合体 心肌细胞结构
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