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巴斯德毕赤酵母表达体系研究及进展 被引量:60
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作者 章如安 杨晟 +1 位作者 邱荣德 袁中一 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期371-373,共3页
关键词 巴斯德毕赤酵母表达体系 真核表达体系 应用
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巴斯德毕赤酵母的基因表达系统研究进展 被引量:65
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作者 欧阳立明 张惠展 +1 位作者 张嗣良 刘志敏 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期151-154,共4页
巴斯德毕赤酵母是一种近年来广泛使用的基因表达系统 ,它具有表达率高、遗传稳定、产物可分泌、发酵工艺成熟等许多优点 .综述了该系统在载体类型、载体元件 (包括启动子、选择标记和信号肽序列 )、受体类型。
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 载体 受体
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巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展和前景展望 被引量:20
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作者 娄瑞娟 罗利龙 +2 位作者 张霞 张瑞刚 宋水山 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期73-76,共4页
巴斯德毕赤酵母经过近二十来年的发展,已经成为表达外源基因的优秀表达系统之一,成功地表达了许多重组异源蛋白。从表达菌株,表达载体等方面详细综述了毕赤酵母表达系统的优点,如:营养要求低、可高密度发酵、遗传稳定性高等;分析了可能... 巴斯德毕赤酵母经过近二十来年的发展,已经成为表达外源基因的优秀表达系统之一,成功地表达了许多重组异源蛋白。从表达菌株,表达载体等方面详细综述了毕赤酵母表达系统的优点,如:营养要求低、可高密度发酵、遗传稳定性高等;分析了可能影响巴斯德毕赤酵母表达系统的相关因素,这些因素包括外源基因的特性、基因拷贝数、产物稳定性及发酵策略等,结合这些因素和具体实践经验,就如何提高外源基因在巴斯德毕赤酵母中表达量进行了阐述;讨论了该表达系统存在的不足之处并且展望了其发展前景。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达系统 外源基因 高效表达
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巴斯德毕赤酵母表达系统优化策略 被引量:33
4
作者 李洪钊 李亮助 +1 位作者 孙强明 冮宏映 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期288-292,共5页
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达 优化策略
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纳豆激酶基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:14
5
作者 罗立新 黄志立 +2 位作者 潘力 杨汝德 梁世中 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第2期1-4,共4页
构建pPICZαA-NK重组质粒,并转化入E-coli TOP-10中,得到转纳豆激酶基因工程菌,提取重组质粒经单酶切、双酶切、PCR分析及序列测定,证明克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为纳豆激酶基因.将重组质粒pPICZαA-NK线性化后,分别转化毕赤酵... 构建pPICZαA-NK重组质粒,并转化入E-coli TOP-10中,得到转纳豆激酶基因工程菌,提取重组质粒经单酶切、双酶切、PCR分析及序列测定,证明克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为纳豆激酶基因.将重组质粒pPICZαA-NK线性化后,分别转化毕赤酵母GS115与KM71,在含ZeocinTM的选择性YEPD平板筛选到重组酵母.经检测重组酵母发酵上清液中具纳豆激酶溶纤活性,SDS-PAGE电泳结果表明外源蛋白的表达量占菌体蛋白的10%左右. 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 纳豆激酶基因 基因表达 基因工程 溶纤活性 基因克隆 重组质粒
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人p53蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:13
6
作者 邱荣德 朱建蓓 +3 位作者 王垒 吉鑫松 陆长德 袁中一 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期477-481,共5页
将人p53 基因装入 Pichia 分泌型质粒p H I L S1 中,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合,经筛选得到一高表达p53 蛋白的克隆。 S D S P A G E 显示表达量约占分泌总量的30 % 。 E L I S ... 将人p53 基因装入 Pichia 分泌型质粒p H I L S1 中,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合,经筛选得到一高表达p53 蛋白的克隆。 S D S P A G E 显示表达量约占分泌总量的30 % 。 E L I S A 验证重组人p53 存在免疫学活性。在诱导时就降低 Pichia 酵母系统水解酶活力等方面进行优化,经 F P L C 分离纯化得到约200 m g/ L 表达量。 展开更多
关键词 P53 基因表达 巴斯德毕赤酵母
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巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统及其在外源蛋白生产中的优势与应用前景 被引量:15
7
作者 马兴元 谭建华 +1 位作者 朱平 孙曼霁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期98-101,共4页
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达系统 外源蛋白生产 应用前景
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合成耐高温α-淀粉酶基因在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达 被引量:11
8
作者 韦宇拓 汪嵘 +3 位作者 杜丽琴 陆坚 黄鲲 黄日波 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期65-69,共5页
PFA是来源于Pyrococcus furious的一种耐高温α-淀粉酶,为了使PFA能够在巴斯德毕赤酵母中高效表达,根据巴斯德毕赤酵母密码子的偏好性对PFA的基因序列进行密码子优化,人工合成耐高温淀粉酶PFA基因pfa,并连接到巴斯德毕赤酵母中表达载体p... PFA是来源于Pyrococcus furious的一种耐高温α-淀粉酶,为了使PFA能够在巴斯德毕赤酵母中高效表达,根据巴斯德毕赤酵母密码子的偏好性对PFA的基因序列进行密码子优化,人工合成耐高温淀粉酶PFA基因pfa,并连接到巴斯德毕赤酵母中表达载体pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K-pfa。重组质粒线性化后转化到巴斯德毕赤酵母菌株GS115中,重组菌株在摇瓶中用甲醇诱导表达,分泌表达酶活最高为220 U/L。 展开更多
关键词 耐高温性能 Α-淀粉酶 巴斯德毕赤酵母 基因表达
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巴斯德毕赤酵母表达系统及其高水平表达策略 被引量:17
9
作者 胡世界 罗素兰 +1 位作者 张吉贞 长孙东亭 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第6期78-83,共6页
毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一,与现有的其它表达系统相比,巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分泌、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势,现已广泛用于外源蛋白的表达。该文综述了其自身的优点,表达... 毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一,与现有的其它表达系统相比,巴斯德毕赤酵母在表达产物的加工、外分泌、翻译后修饰以及糖基化修饰等方面有明显的优势,现已广泛用于外源蛋白的表达。该文综述了其自身的优点,表达载体和宿主菌的特点,以及高水平表达外源基因的策略。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 酵母表达系统 高水平表达 表达策略
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猪生长激素基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及产物的N-糖基化分析 被引量:6
10
作者 欧阳菁 杨林 +3 位作者 龙綮新 王珣章 邢珂 魏平华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期520-525,共6页
利用含有强启动子PAOX 1 和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA pST。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X 33菌中 ,并筛选Mut+ 表型的重组菌。表... 利用含有强启动子PAOX 1 和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA pST。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X 33菌中 ,并筛选Mut+ 表型的重组菌。表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大 ,而胞内的PST蛋白分子量与天然PST大小相同。将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST再次转化重组酵母细胞X 33 pPICZαA pST(Mut+ ) ,所得表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果显示 ,PST基因的表达水平明显提高 ,且表达产生的蛋白均可发生正确的抗原 抗体结合反应 ,表达量达 95 6mg L。将发酵液上清进行N 糖基化分析 ,显示rPST无N 展开更多
关键词 猪生产激素 巴斯德毕赤酵母 表达体系 基因表达 高效分泌表达 N-糖基化分析
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伪狂犬病病毒Ea株gE基因主要抗原区在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:5
11
作者 覃雅丽 陈焕春 +2 位作者 唐勇 何启盖 徐引弟 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期543-549,共7页
伪狂犬病病毒gE蛋白是一种重要的诊断抗原 ,可用于伪狂犬病根除计划中的鉴别诊断。为了获得大量的抗原 ,将编码gE主要抗原区域的基因片段插入毕赤酵母表达载体中 ,得到的重组表达载体转化GS1 1 5酵母 ,通过G41 8抗性筛选得到一株多拷贝... 伪狂犬病病毒gE蛋白是一种重要的诊断抗原 ,可用于伪狂犬病根除计划中的鉴别诊断。为了获得大量的抗原 ,将编码gE主要抗原区域的基因片段插入毕赤酵母表达载体中 ,得到的重组表达载体转化GS1 1 5酵母 ,通过G41 8抗性筛选得到一株多拷贝的重组酵母 ,经甲醇诱导表达了截短的gE蛋白 ,并分泌到胞外。Westernblotting分析显示表达的蛋白大小为3 3kD。ELISA结果表明表达蛋白具有良好的抗原性 ,重组酵母的诱导培养上清不需纯化可直接作为抗原检测gE的抗体 。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 Ea株 GE基因 抗原区 巴斯德毕赤酵母 表达
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猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:11
12
作者 杨湘越 孙树汉 +2 位作者 陈蕊雯 郭瀛军 颜宏利 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期31-33,67,共4页
目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克... 目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Westernblot证实表达产物具有天然cC1分子的免疫原性。结论 在巴斯德毕赤酵母中成功表达了猪囊尾蚴cC1抗原 。 展开更多
关键词 cC1cDNA 克隆表达 巴斯德毕赤酵母 囊虫病 猪囊尾蚴
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乙型脑炎病毒E蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:5
13
作者 吴玉水 任君萍 +6 位作者 黄庆生 丁天兵 张伟 宋建华 朱忠勇 张红毅 马文煜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期130-131,135,共3页
目的 :用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白。方法 :将JEVE蛋白基因亚克隆入真核表达载体 pPIC9K ,以电穿孔法转化酵母SMD116 8。用MD平板筛选重组子、G4 18筛选高拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达后 ,SDS PAGE和免疫印迹分析... 目的 :用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白。方法 :将JEVE蛋白基因亚克隆入真核表达载体 pPIC9K ,以电穿孔法转化酵母SMD116 8。用MD平板筛选重组子、G4 18筛选高拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达后 ,SDS PAGE和免疫印迹分析表达产物。结果 :由于糖基化不同 ,所表达产物的相对分子质量 (Mr)约为 1130 0 0和 780 0 0 ,表达量约为5 0mg/L。结论 :在巴斯德比赤酵母中成功地表达了JEVE蛋白 。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 E蛋白 基因克隆 蛋白表达 巴斯德毕赤酵母 电穿孔法
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禽流感病毒NA基因在巴斯德毕赤酵母系统中的表达 被引量:7
14
作者 冉多良 施建忠 孟庆文 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期52-55,共4页
采用PCR扩增禽流感病毒 (AIV)NA基因 ,克隆入 pMD18 T载体中 ,再亚克隆入含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPIC9k中 ,构建了重组转移载体 pPIC9kNA。经电穿孔转化酵母宿主菌GS115和筛选高拷... 采用PCR扩增禽流感病毒 (AIV)NA基因 ,克隆入 pMD18 T载体中 ,再亚克隆入含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPIC9k中 ,构建了重组转移载体 pPIC9kNA。经电穿孔转化酵母宿主菌GS115和筛选高拷贝重组转化子及筛选His+Mut+表型转化子后 ,摇瓶培养 ,10mL/L甲醇诱导表达后 ,经SDS PAGE、Western blotting、双向琼脂扩散试验、神经氨酸酶试验分析证明 ,获得了几株高效表达重组表达株 ,并且该重组NA蛋白具有免疫学活性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 巴斯德毕赤酵母 NA基因 分泌表达
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巴斯德毕赤酵母表达系统在外源基因表达中的研究进展 被引量:26
15
作者 罗竞红 游自立 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第3期75-79,共5页
巴斯德毕赤酵母是目前应用最广泛的外源蛋白表达系统。分别从的菌株、载体、外源基因整合、表达产物糖基化和外源基因高效表达等方面综述了毕赤酵母表达系统的研究进展。
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达系统 外源基因 糖基化 高效表达
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巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 被引量:10
16
作者 王黎明 王琦 梅汝鸿 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期42-45,共4页
巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱... 巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统是近年来发展的一种优秀的真核表达系统 ,与传统的大肠杆菌和酿酒酵母表达体系相比 ,其具有的诸多优势使之研究价值及应用价值不断体现。综述了其在生物学特性、表达载体、基因整合、外源蛋白的分泌、诱导表达及发酵等方面的基础研究及新近研究进展。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 基因表达系统 外源蛋白 生物学特性 表达载体 基因整合 真核表达系统
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巴斯德毕赤酵母表达系统的特点及应用 被引量:13
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作者 王清路 李俏俏 +4 位作者 薛金艳 窦烨 王红艳 张玉军 张杰 《生物技术通讯》 CAS 2006年第4期640-643,共4页
本文介绍了来源于野生型石油酵母Y11430的巴斯德毕赤酵母的3种宿主菌的不同之处,并介绍了其甲醇诱导型基因AOX,同时说明了酵母菌体内微体对合成蛋白质的作用。从启动子类型、启动强弱、终止子及信号肽等方面对整合型载体做了详细的介绍... 本文介绍了来源于野生型石油酵母Y11430的巴斯德毕赤酵母的3种宿主菌的不同之处,并介绍了其甲醇诱导型基因AOX,同时说明了酵母菌体内微体对合成蛋白质的作用。从启动子类型、启动强弱、终止子及信号肽等方面对整合型载体做了详细的介绍。在外源蛋白表达方面,简要介绍了表达过程,重点讨论了如何防止外源蛋白降解,对影响毕赤酵母高效表达的因素做了扼要论述并提出了相应的解决方案。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达载体 表达蛋白
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人干燥综合征B抗原在巴斯德毕赤酵母菌中的高效分泌表达研究 被引量:5
18
作者 杨湘越 兰小鹏 +3 位作者 吴文冰 冯福英 廖剑 朱忠勇 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期976-979,共4页
目的:通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B(SS—B)抗原。方法:PCR扩增SS—B基因,与酵母菌表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选... 目的:通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B(SS—B)抗原。方法:PCR扩增SS—B基因,与酵母菌表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和免疫酶斑点法鉴定。结果:PCR产物约为1200bp,与预期1224bp接近;pPIC9k—SS-B重组阳性克隆测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确。表达产物SS-B的相对分子质量约48000,高拷贝毕赤酵母菌转化菌显著高于低拷贝的表达水平,表达量占分泌总蛋白的60%以上,产物浓度为800~900mg/L。免疫酶斑点法证实表达产物具有天然SS—B分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。结论:SS—B存巴斯德毕赤酵母菌中获得高效分泌表达,为下一步研究打下了基础。 展开更多
关键词 人干燥综合征B抗原 克隆表达 巴斯德毕赤酵母
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人白细胞介素12基因在巴斯德毕赤酵母细胞中的表达(英文) 被引量:4
19
作者 陈新华 敖敬群 +3 位作者 杨林 龙綮新 王珣章 陈曲侯 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期423-427,共5页
人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同... 人白细胞介素 12 (hIL 12 )是人体内具有多种生物学活性的免疫调节因子 ,由p4 0和p35两个亚基经多对二硫键连接而成 .根据hIL 12的结构特点 ,采用LiCl二次转化将hIL 12的p4 0和p35两亚基基因导入巴斯德毕赤酵母X33细胞中 ,并经同源交换分别插入酵母基因组AOX1区域 ,构建成含hIL 12双亚基基因的酵母工程菌PichiapastorisX33 p4 0 p35 .经 0 .5 %甲醇诱导 ,p4 0和p35两亚基在同一酵母细胞中得到了表达 ,并组装成具有生物学活性的hIL 展开更多
关键词 人白细胞介素-12基因 巴斯德毕赤酵母细胞 LiCl二次转化 活性表达
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突变型人白细胞介素-2基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:6
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作者 刘堰 胡应和 +1 位作者 欧阳克清 蔡绍皙 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期618-624,共7页
为了提高人重组白细胞介素 2的稳定性和活性以及减少毒副作用 ,有必要定向改造rhIL 2的分子结构 .用PCR法从白细胞介素 2 (IL 2 )cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段 ,并利用定点突变技术将人重组白细胞介素 2第 12 5位游离的半胱氨酸... 为了提高人重组白细胞介素 2的稳定性和活性以及减少毒副作用 ,有必要定向改造rhIL 2的分子结构 .用PCR法从白细胞介素 2 (IL 2 )cDNA全序列中扩增成熟的肽基因片段 ,并利用定点突变技术将人重组白细胞介素 2第 12 5位游离的半胱氨酸编码序列突变为丙氨酸序列 .编码 18位亮氨酸的序列突变为蛋氨酸序列 ;编码 19位亮氨酸的序列突变为丝氨酸序列 .突变型人白细胞介素 2 (MvIL 2 )基因与表达载体pPIC9K重组 ,酶切线性化后用Invitrogen转化毕赤酵母试剂盒导入酵母细胞进行整合 ,经筛选得到一高表达白介素 2的克隆 .SDS PAGE显示 ,表达量约占总量的4 5 7% .经Western印迹验证 ,重组人白介素 2有免疫活性 ;与野生型IL 2相比 ,所获得的突变型IL 2纯品的比活性为 4 0× 10 7IU mg蛋白 ,比天然型IL 2高 4~ 展开更多
关键词 突变型人白细胞介素—2基因 巴斯德毕赤酵母 表达 定点突变
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